專利名稱：：蠅蛆蛋白粉在制備抗疲勞、增強免疫力的產品中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及蠅蛆蛋白粉在制備抗疲勞、增強免疫力的產品中的應用，屬于昆蟲資源利用
技術領域：
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背景技術：
：家蠅是重要的醫學昆蟲，能傳播多種人畜疾病而自身卻不患病。這一事實提示家蠅具有很強的免疫機制。對于家蠅幼蟲各種抗病機理的研究早在二十世紀中葉業已開始，并不斷深入和擴展，從微生物學、寄生蟲學、細胞免疫學、農業科學的角度將家蠅幼蟲的研究推向了多元化和高科技化。家蠅幼蟲含有蛋白質、不飽和脂肪酸、礦物質及多種維生素，是一種不可多得的優質營養蛋白。家蠅作為養殖開發的對象，國內能大規模養殖家蠅生產蠅蛆幼蟲的技術已經成熟，大多以禽畜糞便以及麥麩作為養殖飼料，所得蠅蛆幼蟲主要用于飼料添加劑及喂養家禽、水產品的優質動物蛋白，但利用蠅蛆幼蟲蛋白開發保健品或藥品方面的研究還不多。目前已開發的蛋白類保健品多為植物性蛋白類食物，營養成分單一成為植物源性蛋白作為保健品使用的一大死角。將家蠅幼蟲蛋白開發成為新一代的保健品或藥品，并不斷多元化，對人類健康具有重要的意義。
發明內容本發明的目的在于提供蠅蛆蛋白粉在制備抗疲勞、增強免疫力的產品中的應用。本發明通過動物試驗，對以茅臺酒糟飼養的工程蠅幼蟲為原料制成的蠅蛆蛋白粉進行了增強免疫和抗疲勞作用的研究，為蠅蛆蛋白粉應用于藥物或保健品領域提供了理論依據。本發明是這樣構成的蠅蛆蛋白粉在制備抗疲勞、增強免疫力的產品中的應用。所述的蠅蛆蛋白粉是將茅臺酒糟飼養的工程蠅三齡幼蟲洗凈、粉碎、烘干制成的。所述的產品為藥物或保健品。具體的說，將蠅蛆蛋白粉與適量藥用輔料按照常規方法制備成藥物制劑。例如取蠅蛆蛋白粉，加入適量淀粉、滑石粉混勻，過篩后，按常規方法制成片劑?；蛘邔⑾壡鞍追叟c其它藥用成分組合，加入適量藥用輔料，按照常規方法制備成藥物制劑。例如取蠅蛆蛋白粉1000g、大豆蛋白粉150g，加入適量輔料，混勻，烘干，滅菌，包裝，制成沖劑或膠囊劑。還可以將蠅蛆蛋白粉單獨或與其它物質組合，按照常規方法制備成保健品。例如取蠅蛆蛋白粉，過篩，烘干，滅菌后，按常規方法制成沖劑或膠囊劑?；蛘呷∠壡鞍追?000g、黃芪150g，粉碎，過篩，加入適量輔料，混勻，烘干，滅菌，制成片劑、沖劑或膠囊劑。上述藥物制劑或保健品可根據本領域已知的方法制備成可作為人用的適當的施用形式或劑量形式，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。給藥劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質體、透皮劑、口含片、檢劑、膏劑、貼劑、注射劑、凍干粉針劑等。可以是普通制劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統。制成片劑時，可以廣泛使用本領域公知的各種輔料例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、尿素、微晶纖維素等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，如干燥淀粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、氫化油等；吸收促進劑，如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，如滑石粉、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片、多層片。制成丸劑時，可以廣泛使用本領域公知的各種輔料例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氮化植物油、聚乙烯吡咯烷酮等；粘合劑如阿拉伯膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。若制成膠囊，將有效成分蠅蛆蛋白粉與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分蠅蛆蛋白粉制成微囊劑，混懸于水性介質中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應用。若制成注射用制劑，如溶液劑、乳劑、凍干粉針劑和混懸劑，可以使用本領域常用的所有稀釋劑，例如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規的助溶劑、緩沖劑、pH調節劑等。如需要，也可以向藥物制劑或保健品中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它輔料。為了驗證蠅蛆蛋白粉在增強免疫力和抗疲勞方面的作用效果，申請人進行了一系列試驗研究，具體如下一、蠅蛆蛋白粉對正常小鼠及免疫抑制小鼠的免疫功能的影響1實驗材料l.l藥物蠅蛆蛋白粉，由貴州琨恩生物工程有限公司提供。實驗臨用時用蒸餾水配成所需濃度。1.2試劑印度墨汁，IndiaInkTuachenachburri3D065。環磷酰胺(Cy)，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司生產，批號05110621。綿羊紅細胞，由貴陽醫學院實驗動物中心提供。補體3雄2雌健康豚鼠的混合血清(-2(TC保存，臨用時生理鹽水l:IO稀釋)，阿氏液(葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.80g、氯化鈉0.42g、蒸餾水100ml，無菌過濾)，都氏試劑(碳酸氫鈉l.Og、氰化鉀O.05g、高鐵氰化鉀O.2g、蒸餾水1000ml)。1.3主要儀器U—Quant掃描酶標分光光度儀美國Bio-Tek公司；數顯恒溫水浴鍋HH-2:國華電器有限公司；DJ-1000J電子天平中外合資亞太電子天平。1.4動物昆明種小鼠，雌雄各半，體重16—18g，由貴陽醫學院實驗動物中心提供。1.5統計方法用成組設計t檢驗進行數據統計學分析。2方法2.l分組及造模2.1.l蠅蛆蛋白粉對正常小鼠的影響取小鼠40只，雌雄各半，體重16—18g，隨機分為4組，每組10只，分別為空白對照組、蛋白粉低劑量組(2g/kg)、蛋白粉中劑量組(4g/kg)、蛋白粉高劑量組(6g/kg)。蠅蛆蛋白粉低、中、高劑量組灌胃蠅蛆蛋白粉，空白對照組灌胃等量蒸餾水，每天1次，連續7天。2.1.2預防性給藥取小鼠40只，雌雄各半，體重16—18g，隨機分為4組，每組10只，分別為空白對照組、Cy模型組、蠅蛆蛋白粉低(4g/kg)、高劑量組(6g/kg)。除空白對照組外，其余各組動物均ip環磷酰胺60mg/kg，每天1次，連續4天。蠅蛆蛋白粉低、高劑量組灌胃蠅蛆蛋白粉，空白對照組和Cy模型組灌胃等量蒸餾水，每天1次，連續7天。2.1.3治療性給藥小鼠隨機取10只作為空白對照組，其余20只均ip環磷酰胺60mg/kg，每天1次，連續4天。模型造成后，隨機分為Cy治療模型組、蠅蛆蛋白粉治療組(6g/kg)，每組10只。蠅蛆蛋白粉治療組每日給藥1次，空白對照組和Cy治療模型組灌胃等量蒸餾水，每天1次，連續7天。2.2免疫功能指標測定2.2.l對血清溶血素含量的影響于給藥第2天，每鼠腹腔注射20%壓積綿羊紅細胞(SRBC)生理鹽水細胞混懸液O.2ml進行免疫，繼續給藥5天，于最后一次給藥后lh，從小鼠眼眶靜脈叢取血，離心分離血清，取血清用生理鹽水稀釋500倍，然后取稀釋血清lml置試管中，加10XSRBC混懸液0.5ml，置冰浴中，再加入以生理鹽水1:10稀釋的豚鼠血清1ml混合，另設不加血清的空白對照。移置37。C恒溫水浴中保溫10min后，立即置冰浴中終止反應。用2000r/min離心10min，取上清液lml，加都氏試劑3ml，混勻放置10分鐘，取上清液用96孔板于掃描酶標分光光度儀540nm處比色，測吸光度值(OD)。另取10XSRBC混懸液0.25ml，加都氏試劑3.75ml，同上測定OD值，作為半數溶血值。血清溶血素含量以半數溶血值(HC5())表示。按下式計算HC50二樣品的OD值/SRBC半數溶血時的OD值X稀釋倍數2.2.2對碳粒廓清指數的影響分組及給藥均同上。于末次給藥lh后，每鼠尾靜脈注射稀釋的印度墨汁O.lml/10g。各鼠均分別于注射印度墨汁后2min和12min(秒表記錄)各用一次性采血管眼眶取血20yL，立即吹入盛有2m10.P/。Na2C03溶液的試管中，吹吸數次以充分洗出采血管壁附著的血液，搖勻，15min后于掃描酶標分光光度儀600nm處比色，測光密度值(OD)。并于第二次采血后，用脫頸椎法將小鼠處死，稱體重，解剖取肝、脾稱重，按公式計算小鼠吞噬指數a^VKX體重/(肝重+脾重)(其中K二(lgOD廣lgOD2)/(t2-t工)，ODh0D2分別為2和12min光密度，ti=2，t2=12)。3結果3.l蠅蛆蛋白粉對正常小鼠免疫功能的影響實驗結果表明，各劑量組小鼠HC5o均高于空白對照組，差異具有顯著性(p〈0.05)。中劑量組藥效最好，但高劑量組效果并未比低、中劑量組好，說明在低劑量時，藥效隨劑量的增加而增強，當到了一定劑量后，藥效與劑量并無依賴關系。各劑量組小鼠a均低于空白對照組，但差異無顯著性(p>0.05)。表明蠅蛆蛋白粉可顯著提高正常小鼠HC50，增強其體液免疫功能；而對正常小鼠a無影響，即對巨噬細胞的吞噬功能無影響。見表l。表l蠅蛆蛋白粉對正常小鼠免疫功能的影響(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與空白對照組比較，"p〈0.05，*、〈0.01，—Ap>0.05，以下同(3.2蠅蛆蛋白粉對免疫功能低下小鼠的影響3.2.l蠅蛆蛋白粉對免疫功能低下小鼠的預防作用實驗結果表明，模型組小鼠HC5(j、a均低于空白對照組，差異有顯著性(p〈0.01)，表明造模成功。各劑量組小鼠HC5o與模型組相比，差異無顯著性(p>0.05)。各劑量組小鼠a均高于模型組，差異具有顯著性(p〈0.05);其中，高劑量組小鼠a顯著高于模型組(p〈0.01)，且與空白對照組比較，差異無顯著性(p>0.05)。表明蠅蛆蛋白粉對免疫功能低下小鼠HC5o無影響，即對巨噬細胞的吞噬功能無影響；但可顯著提高免疫功能低下小鼠a，即對CY造成的體液免疫功能低下的小鼠有保護作用。見表2。表2蠅蛆蛋白粉對免疫功能低下小鼠的預防作用(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與模型組比較，vp〈0.05，vvp〈0.01，Ap>0.05，以下同。3.2.2蠅蛆蛋白粉對免疫功能低下小鼠的治療作用實驗結果表明，模型組小鼠HC5(j、a均低于空白對照組，差異有顯著性(p〈0.01)，表明造模成功。治療組小鼠HC5o與模型組相比，差異無顯著性(p>0.05)。治療組小鼠a低于空白對照組，差異無顯著性(p>0.05);與模型組相比，治療組小鼠a高于模型組，差異具有顯著性(p〈0.01)。表明蠅蛆蛋白粉對免疫功能低下小鼠HC5o無影響，即對巨噬細胞的吞噬功能無影響；但可顯著提高免疫功能低下小鼠a，即對CY造成的體液免疫功能低下的小鼠有治療作用。見表3。表3蠅蛆蛋白粉對免疫功能低下小鼠的治療作用(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>二、蠅蛆蛋白粉對小鼠的抗疲勞作用:實驗材料同上。實驗方法取小鼠隨機分為3組，分別為空白組、蛋白粉低劑量組(4g/kg)、蛋白粉高劑量組(6g/kg);低劑量組每日給藥l次，高劑量組每天給藥2次，連續15天；末次給藥后30min后稱小鼠體重，于鼠尾末端縛以10%體重的橡皮泥，將小鼠置于水深20cm水池內，水溫2(TC，記錄小鼠游泳時間。將結果用SPSS12.0統計軟件進行統計分析，結果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>蛋白粉低劑量組與蛋白粉高劑量組分別與空白組比較，P<0.01。表明蠅蛆蛋白粉具有明顯的抗疲勞作用。與現有技術相比，本發明所用蠅蛆蛋白粉由茅臺酒糟飼養的工程蠅幼蟲制備而得，富含各種營養成分，低脂肪、低膽固醇，營養結構合理，肉質纖維少，又易于吸收，可提高人體的免疫能力和抗衰老能力，能達到預防疾病、營養保健、康復身體等多種效果，在作為抗疲勞、增強免疫力的藥物或保健品方面具有良好的應用前景。具體實施例方式本發明的實施例l:取蠅蛆蛋白粉1000g，加入適量淀粉、滑石粉混勻，過篩后，按常規方法制成片劑。該制劑口服，2g/次，每日3次，用于免疫力低下者或其它疾病的輔助治療。本發明的實施例2:取蠅蛆蛋白粉1000g、大豆蛋白粉150g，加入適量輔料，混勻，烘干，滅菌，包裝，制成沖劑或膠囊劑。該制劑口服，2g/次，每日3次，用于免疫力低下者或其他疾病的輔助治療，有抗疲勞作用。本發明的實施例3:取蠅蛆蛋白粉1000g，過篩，烘干，滅菌后，按常規方法制成沖劑或膠囊劑。該制劑口服，1.5g/次，每日3次，用于提高機體抵抗力，防治因免疫力低下所致的疾病。本發明的實施例4:取蠅蛆蛋白粉1000g、黃芪150g，粉碎，過篩，加入適量輔料，混勻，烘干，滅菌，制成片劑、沖劑或膠囊劑。該制劑口服，1.8g/次，每日3次，用于提高機體抵抗力，防治因免疫力低下所致的疾病。權利要求1.蠅蛆蛋白粉在制備抗疲勞、增強免疫力的產品中的應用。全文摘要本發明公開了蠅蛆蛋白粉在制備抗疲勞、增強免疫力的產品中的應用，所述的蠅蛆蛋白粉是以茅臺酒糟飼養的工程蠅三齡幼蟲為原料制成的。與現有技術相比，本發明所用蠅蛆蛋白粉富含各種營養成分，低脂肪、低膽固醇，營養結構合理，肉質纖維少，又易于吸收，可提高人體的免疫能力和抗衰老能力，能達到預防疾病、營養保健、康復身體等多種效果，在作為抗疲勞、增強免疫力的藥物或保健品方面具有良好的應用前景。文檔編號A61K36/185GK101104002SQ20071020103公開日2008年1月16日申請日期2007年7月10日優先權日2007年7月10日發明者萍付,吳建偉,楊明開,覃容貴,謝明忠,陳治莉申請人:貴州琨恩生物工程有限公司