專利名稱：一種穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統及其制備方法
技術領域：
一種穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，通過超聲波、高壓均質或微 流化技術將白蛋白結合在阿霉素脂質囊胞上，可以顯著提高脂質囊胞的穩定性以及提高 藥物在脂質囊胞中的包封率，尤其是可以提高阿霉素的治療效果。
背景技術：
惡性腫瘤(癌癥)是我國僅次于心血管疾病死亡率占第二的疾病，化療是治療惡性 腫瘤的重要手段之一，阿霉素類藥物在惡性腫瘤的治療上有著重要的應用價值。由于惡 性腫瘤的發病率居高不下，以吡柔比星為代表的新的阿霉素制劑在腫瘤等疾病的治療上 受到新的肯定，今后幾年中阿霉素類藥物的仍將會在腫瘤治療藥物中占據一席之地。由 于新型高效抗腫瘤治療藥物在很長一段時間內難有突破，而阿霉素類藥物由于抗腫瘤譜 廣，療效明確，無論在用量還是金額上都將繼續占有著舉足輕重的地位。由于整個腫瘤 藥物領域競爭相對緩和，市場成長空間大，利潤較高，這為新的阿霉素類制劑占領市場 創造了良好的發展空間。
目前市售的阿霉素類藥物有多柔比星、表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊達比星 等，其中表柔比星和吡柔比星作為阿霉素類抗腫瘤藥物的代表，在抗腫瘤藥物市場中占 有舉足輕重的地位。據腫瘤科大夫反應，阿霉素類鹽酸鹽抗腫瘤藥物在臨床使用時具有 很強的刺激性，如果能從制劑上改善該類藥物的刺激性，作為一線用藥的該品種具有更 好的市場前景，必能帶來良好的經濟效益。
脂質囊胞是利用磷脂雙分子層內嵌入膽固醇所形成的囊泡包裹藥物分子而形成的制 劑，磷脂是構成脂質囊胞的主要化學成分，其中最具有代表性的是卵磷脂。卵磷脂主要 來自蛋黃和大豆，制備成本低，性質穩定，屬于中性磷脂。磷脂酰膽堿是形成許多細胞 膜的主要成分，也是制備脂質囊胞的主要原料，膽固醇也是脂質囊胞另一個重要組成成 分，它是許多天然生物膜的重要成分，本身并不形成膜結構，但是能夠以1:1甚至2:1 的摩爾比插入磷脂膜中。加入膽固醇可以改變脂膜的相變溫度，從而影響膜的通透性和 流動性。因此膽固醇具有穩定磷脂雙分子膜的作用。 .
按脂質囊胞的結構和粒徑分類，可以分為單室脂質囊胞、多室脂質囊胞和多相脂 質囊胞，按脂質囊胞電荷性可以分為中性脂質囊胞、負電性脂質囊胞、正電性脂質囊胞。
藥物包裹于脂質囊胞內，可降低在組織中擴散而緩慢向血液中釋放藥物，從而延長藥 物作用時間，脂質囊胞能選擇性地分布于某些組織和器官，增加藥物對淋巴系統的定向性, 提高藥物在耙部位的治療濃度。尤其對抗癌藥物,能使之選擇性地殺傷癌細胞或抑制癌細 胞，對正常組織、細胞的毒性明顯降低或無損害作用。對脂質囊胞表面性質進行改變,如 粒徑大小、表面電荷、組織特異性抗體等，可提高藥物對靶區的選擇性，從而也降低了毒 性，減少了不良反應。
由于細胞膜上有白蛋白受體GP60，在Gp60與白蛋白結合后，激活胞膜穴樣內凹，進 行細胞轉運，由腫瘤細胞分泌的富含半光氨酸酸性分泌性蛋白，存在于多種惡性腫瘤組 織間質中，和病人的預后有直接關系，它和GP60同源，能和白蛋白結合，利用其與白蛋 白結合的特性，使表面鑲嵌有白蛋白的脂質囊胞相對富集在腫瘤間質中，通過膜融合和 轉運釋放藥物到腫瘤細胞內，使腫瘤細胞內的藥物局部濃度增高，從而增加腫瘤細胞的 療效。
通過文獻檢索到白蛋白微球以及脂質體的制備方法和相關的研究，而脂質囊胞鑲嵌 白蛋白提高阿霉素脂質囊胞療效以及載藥量和包封率的研究還沒有發現。
本發明的阿霉素白蛋白脂質載藥系統不僅有效的實現了腫瘤藥物在腫瘤細胞周圍的 富集，提高抗腫瘤的效果，更有意義的是可以有效克服脂質囊胞包封率低，容易滲漏的 缺陷，本發明采用的工藝可以實現工業化生產制成臨床使用的產品，具有非常重要的現 實價值。

發明內容
本發明公開了一種穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，^特征在于將 白蛋白結合在阿霉素脂質囊胞上，可以顯著提高脂質囊胞的穩定性以及提高藥物在脂質 囊胞中的包封率，其中白蛋白脂質載藥系統中包含具有阿霉素、磷脂、甾醇和白蛋白， 其制備方法為采用薄膜分散法結合PH梯度法將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質囊胞 中，再在體系中加入白蛋白溶液，用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了白蛋 白的脂質載藥系統，也可以將白蛋白和藥物同時加入溶入有機溶劑的磷脂、甾醇中形成 前體脂質囊胞，再用緩沖鹽溶液水化后用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了 白蛋白的脂質載藥系統。
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，其中各組分質量百分比如下
阿霉素藥物0. 01-10%、磷脂0. 1-60%、甾醇0. 01-20%、白蛋白0. 1-90% 優選各組分質量百分比如下
阿霉素藥物0. 01—10%、磷脂3-60%、甾醇1-20%、白蛋白0. 1—90%
本發明穩定的阿霉素藥物白蛋白脂質載藥系統，還可以包含凍干支持劑，選自小分 子氨基酸、多糖或多元醇，具體包括20種天然氨基酸、海藻糖、蔗糖、乳'糖、麥芽糖、 甘露醇、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為2%-50%。
本發明穩定的阿霉素藥物白蛋白脂質載藥系統，還包含PH調節劑，選自鹽酸、磷酸、
檸檬酸或其堿金屬鈉鹽、草酸或其金屬納鹽、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、冰醋酸或 其堿金屬鹽。
本發明穩定的阿霉素藥物白蛋白脂質載藥系統，還可以進一步包含穩定劑，選自小
分子氨基酸或PEG200、 400、 600，吐溫80、泊洛沙姆(poloxamer)、脫氧膽酸鈉中的一 種或其任意混合物，所述的用量以重量計為0.2%-5%，其中氨基酸具體選自20種常用氨 基酸，比如20種a -氨基酸
非極性氨基酸丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、 甲硫氨酸(8種)； '
極性、不帶電荷氨基酸絲氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰 胺、酪氨酸(7種)；
酸性氨基酸天門冬氨酸、谷氨酸(2種)； 堿性氨基酸精氨酸、賴氨酸、組氨酸(3種)
本發明穩定的阿霉素藥物白蛋白脂質載藥系統，還可以包括抗氧化劑，選自維生素E、 維生素c、亞硫酸鹽類、乙二胺四乙酸及其衍生物、鹽酸半胱氨酸中的一種或一種以上的
混合物。
本發明穩定的阿霉素藥物白蛋白脂質載藥系統，還可以包括滲透壓調劑劑，選自葡
萄糖、氯化鈉、甘油、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為0.2%-5%。
本發明穩定的阿霉素藥物白蛋白脂質載藥系統，有機溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、 乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮等低沸點溶劑。
本發明穩定的阿霉素藥物白蛋白脂質載藥系統，各組分中磷脂選自天然或合成磷脂， 比如卵磷脂(大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、二月桂酰磷脂、二肉豆蔻酰磷脂、二棕櫚酰磷 脂或二硬脂酰磷脂等)、磷脂酰乙醇胺(二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇 胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺等)磷脂酰絲氨酸(二月桂酰磷脂 酰絲氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸或二硬脂酰磷脂酰絲氨酸 等)、磷脂酸、磷脂酰甘油(二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷 脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰甘油等)、磷脂酰肌醇(二月桂酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷
脂酰肌醇、二棕櫚酰磷脂酰肌醇或二硬脂酰磷脂酰肌醇等)、溶血卵磷脂、鞘磷脂、蛋黃 卵磷脂、大豆卵磷脂、羥基卵磷脂、氫化磷脂以及經過PEG修飾過的磷脂中的一種或一 種以上的混合物；甾醇選自膽甾醇及其衍生物，具體包括膽固醇、聚乙二醇丁二醇膽固 醇醚(優選短鏈聚乙二醇)、膽固醇半琥珀酸酯、麥角固醇、羊毛甾醇中的一種或一種以 上的混合物；白蛋白選自動物白蛋白(比如卵白蛋白、血清白蛋白、乳白蛋白或肌肉白 蛋白)和植物白蛋白，優選動物血清白蛋白、人血清白蛋白以及通過基因工程生產的人 血清白蛋白中的一種。
本發明穩定的阿霉素藥物白蛋白脂質載藥系統得制備方法，具體制備方法有兩種， 第一種包括以下步驟
第一步選擇旋轉蒸發法將藥物、磷脂與甾醇用有機溶劑溶解，通過薄膜分散法形 成的脂質囊胞體系，用緩沖鹽溶液超聲溶解，通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂
質囊胞形成比較均勻的顆粒，粒徑大小在50nm-1000nm; .
第二步在脂質囊胞體系體系中加入白蛋白溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化 技術形成可注射的結合了白蛋白的脂質載藥系統，粒徑大小在20rai-1000nm，過濾罐裝即 得；
第三步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得。 第二種制備方法包括以下步驟
第一步將白蛋白和藥物加入溶入有機溶劑的磷脂與甾醇中，減壓蒸發除去有機溶 劑后加入緩沖鹽溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質囊胞形成比較均勻的
顆粒，粒徑大小在20nm-1000nm，過濾罐裝即得；
第二步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得； 如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
本發明穩定的阿霉素藥物白蛋白脂質載藥系統，注射液或凍干復溶后溶液的ra范圍
為5.0-7.0。
具體實施例
實施例l:吡柔比星白蛋白脂質結合物
取吡柔比星30mg，蛋黃卵磷脂2.5g、氫化卵磷脂0.5g、聚乙二醇丁二醇膽固醇醚 0. lg、色氨酸0.2g、白蛋白0.5g，加入50ml氯仿/乙醇攪拌使吡柔比星、蛋黃卵磷脂、 氫化卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去氯仿/乙醇，加入蔗糖3g、葡萄糖 2g， PH4檸檬酸緩沖鹽至總體積為50ml，超聲溶解，用1^20)3調節溶液PH為7. 5， 40°C 保溫30分鐘，用擠壓過濾法或高壓均勻機均質至粒度為50-200nm，過0. 22的濾膜罐裝 密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入5% (重量百分比)甘露醇凍干即得。 如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
實施例2:表柔比星白蛋白脂質結合物
取表柔比星50mg，蛋黃卵磷脂lg、聚乙二醇丁二醇膽固醇醚0.3g、白蛋白3.0g， 加入50ml無水乙醇中攪拌使表柔比星、蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸 餾除去乙醇，加入蔗糖5g，鹽酸半胱氨酸0.02g、 PH6-7檸檬酸緩沖鹽至總體積為100ml， 高壓均勻機均質至粒度為50-200咖，過0. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入體系重量比2-3%的甘露醇作為凍干保護 劑，凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
實施例3:阿柔比星白蛋白脂質結合物
取阿柔比星150mg，蛋黃卵磷脂3g、膽固醇lg、白蛋白0.7g，加入50ml二氯甲烷 攪拌使阿柔比星、蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去；氯甲烷，加 入蔗糖5克，ra6-7檸檬酸緩沖鹽至總體積為100ml，高壓均勻機均質至粒度為30-200nm， 過O. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入體系重量比2-3%的蔗糖按常規工藝凍干 即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
實施例4:伊達比星白蛋白脂質結合物
取伊達比星100mg，蛋黃卵磷脂2.5g、膽固醇0.8g、白蛋白0.6g，加入50ml乙醇
攪拌使伊達比星、蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去氯仿，加入蔗 糖5克，P朋-7擰檬酸緩沖鹽至總體積為100ml，高壓均勻機均質至粒度為30-200rai，過 0.22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入體系重量比2-3%的甘露醇按常規工藝凍 干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
實施例5:多柔比星白蛋白脂質結合物
取多柔比星50mg，蛋黃卵磷脂2.5g、氫化卵磷脂0.5g、膽固醇0.8g、白蛋白0.5g， 加入50ml乙醇攪拌使多柔比星、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器 減壓蒸餾除去乙醇，加入蔗糖3g、葡萄糖2g， PH4檸檬酸緩沖鹽至總體積為50ml，超聲 溶解，用Na2C(U周節溶液PH為7. 5， 40。C保溫30分鐘，用擠壓過濾法或高壓均勻機均質 至粒度為50-200nm，過0. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入5% (重量百分比)甘露醇凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。'
權利要求
1、一種穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，其特征在于將阿霉素藥物結合在白蛋白脂質囊胞上，可以顯著提高阿霉素藥物脂質囊胞的穩定性以及提高了藥物在脂質囊胞中的包封率，其中阿霉素白蛋白脂質載藥系統中包含具有活性的阿霉素藥物、磷脂、甾醇和白蛋白，其制備方法為用常規制各脂質囊胞的方法先將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質囊胞中，再在體系中加入白蛋白溶液，用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了阿霉素的白蛋白脂質載藥系統，也可以將阿霉素藥物和白蛋白同時加入溶入有機溶劑的磷脂、甾醇中形成前體脂質囊胞，再用緩沖鹽溶液水化后用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了白蛋白的阿霉素脂質載藥系統。
2、 根據權利要求l中穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統，其中各組分質量百分比如下阿霉素藥物O. 01-20%、磷脂O. 1-60%、甾醇0.01-20%、白蛋白0.01-90% 。
3、 根據權利要求1中穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統，還包含凍干支持劑，凍干支持劑 選自小分子氨基酸、多糖或多元醇，具體包括20種天然氨基酸、海藻糖、蔗糖、乳糖、麥 芽糖、甘露醇、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為2%-50%。
4、 根據權利要求l中穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統，還包含PH調節劑，選自鹽酸、磷 酸、檸檬酸或其堿金屬鈉鹽、草酸或其金屬納鹽、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、冰醋酸或 其堿金屬鹽。
5、 根據權利要求1中穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統，還可以進一步包含穩定劑，選自 小分子氨基酸或PEG200、 400、 600，吐溫80、泊洛沙姆(poloxamer)、脫氧膽酸鈉中的一種 或其任意混合物，所述的用量以重量計為0.2%-5%;還可以包括滲透壓調劑劑，選自葡萄糖、 氯化鈉、甘油、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為0.2%-5%。。
6、 根據權利要求1中穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統，還可以包括抗氧化劑，選自維生 素E、維生素C、亞硫酸鹽類、乙二胺四乙酸及其衍生物、鹽酸半胱氨酸中的一種或一種以 上的混合物。
7、 根據權利要求1中穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統，有機溶劑選自二氯甲烷、三氯甲 垸、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮等低沸點溶劑。
8、 根據權利要求1中穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統，各組分中磷脂選自天然或合成磷 脂中的一種或一種以上的混合物；甾醇選自膽甾醇及其衍生物，具體包括膽固醇、聚乙二醇 丁二醇膽固醇醚、膽固醇半琥珀酸酯、麥角固醇、羊毛甾醇中的一種或一種以上的混合物； 白蛋白選自動物血清白蛋白、人血清白蛋白以及通過基因工程生產的人血清白蛋白中的一 種。
9、 根據權利要求1中穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統得制備方法，具體包括以下兩種方 法第一種制備方法包括以下步驟第一步根據阿霉素藥物的特點用旋轉蒸發法先將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質囊 胞體系，加入緩沖鹽溶液通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質囊胞形成比較均勻的顆粒，粒徑大小在100nm-1000nm;第二步在脂質囊胞體系體系中加入白蛋白溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化技術 形成可注射的阿霉素白蛋白脂質載藥系統，粒徑大小在20nm-1000nm，過濾罐裝即得。第三步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍千即得；第二種制備方法包括以下步驟第一步將阿霉素藥物和白蛋白加入溶入有機溶劑的磷脂與甾醇中，減壓蒸發除去有機溶劑后加入緩沖鹽溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質囊胞形成比較均勻的顆粒，粒徑大小在20nm-1000nm，過濾罐裝即得；第二步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得。如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
10、 根據權利要求l中穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統的應用，為非腸道給藥，其中具有活性的藥物，包括多柔比星、表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊達比星。
全文摘要
一種穩定的阿霉素白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，通過超聲波、高壓均質或微流化技術將阿霉素藥物結合在白蛋白脂質囊胞上，可以顯著提高阿霉素藥物脂質囊胞的療效、穩定性以及提高了藥物在脂質囊胞中的包封率。
文檔編號A61P35/00GK101361746SQ20081014734
公開日2009年2月11日 申請日期2008年8月11日 優先權日2008年8月11日
發明者張文芳 申請人:張文芳