專利名稱：一種穩定的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統及其制備方法
技術領域：
一種穩定的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，通過超聲波、高壓均質或 微流化技術將白蛋白結合在載有紫杉烷類藥物的脂質囊胞上，可以顯著提高脂質囊胞的 穩定性以及提高藥物在脂質囊胞中的包封率，尤其是可以提高藥物的治療效果。
背景技術：
紫杉烷類化合物包括紫杉醇、多烯紫杉醇、司匹卡亭、紫杉烷一2， 13 — 二酮、紫杉 醚、表紫杉醇、IO —去乙酰紫杉醇、7 —木糖酰一10 —去乙酰紫杉醇、5e， 9P， IOP — 三羥基一環9， 10-縮丙酮乙酸酯、三尖杉寧堿等，其中紫杉醇和多烯紫杉醇的已在多國 上市并應用于臨床。
紫杉醇是一種天然的抗癌原料藥，為白色結晶粉末、難溶于水及許多藥用溶媒，水 中溶解度僅為0. 006mg/ml，易溶于氯仿、丙酮等有機溶劑，紫杉醇是一個復雜的二萜類化 合物，具有含氧四環的紫杉烷環及酯側鏈，分子式為C47H51N014，分子量853.90， 在ra4 8范圍內紫杉醇比較穩定，堿性條件下很快分解，酸性條件下比較穩定。
目前上市的紫杉醇靜脈注射液最早由NCI于1978年研制，該藥物由施貴寶藥廠生產， 現已進入我國市場。處方以CremophorEL50% (v/v增溶劑)，50% (v/v)無水乙醇為溶 媒，紫杉醇濃度達6mg/ml，用5。/。右旋糖酐稀釋或生理鹽水稀釋至0.3 1.2ing/m，紫杉醇 理化性質可穩定12h以上。現FDA批準的給藥方案是每21d靜脈滴注一次，每次將總給 藥劑量的1/3用500ml5X右旋糖酐稀釋后8h內滴完，連續滴注24h，最低給藥劑量 135mg/m2。該處方給藥后數分鐘，部分病人出現藥物性皮疹、呼吸急促、支氣管痙攣、 低血壓等過敏反應。研究認為，這主要是處方中CremophorEL引起體內組胺釋放造成。 其在紫杉醇注射液中使用劑量明顯高于所有已上市制劑，目前多采取在給藥前數小時服
用苯海拉明、地塞米松、氨茶堿等抗組胺劑防止過敏反應的發生。研究還發現，注射液 中Crem叩horEL與聚氯乙烯塑料管和輸液袋接觸可浸提出大量的塑化劑鄰苯二甲酸二乙 基乙酯，因此專家建議臨床使用玻璃、聚乙烯容器及內襯聚乙烯的硝化甘油管為輸液器具。
多烯紫杉醇(Docetaxel)英文名Docetaxel，是由羅納普朗克V樂安公司開發的一 個半合成紫杉醇衍生物，屬微管解聚抑制劑，本品通過促進小管聚合成穩定的微管并抑制其解聚從而使游離小管的數量顯著減少。本品已于1995年4月在墨西哥首次上市，并 隨即在英、美、法、意、德、日等主要國家上市，目前批準的適應癥有經蒽環類抗腫瘤 藥物治療無效或仍復發的晚期和轉移性乳腺癌及曾經治療無效的非小細胞肺癌。
多烯紫杉醇抗瘤譜廣，抗腫瘤作用強，對難治性的乳腺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、 頭頸部腫瘤等的療效均較突出，臨床應用潛力深厚。乳腺癌和肺癌是國內最為常見的兩 類腫瘤，且其發病率還有上升趨向。Goldman公司估計多烯紫杉醇1998年的全球銷售額 可達3億美元。
多烯紫杉醇為白色或類白色粉末，具親脂性，幾乎不溶于水。其注射液為黃色或棕 黃色粘稠液體，規格有20mg， 80mg。每瓶20mg注射液為將無水多烯紫杉醇20mg溶于吐 溫80 0.5ml中制成；每瓶80mg注射液為將無水多烯紫杉醇80mg溶于吐溫80 2ml中制 成，溶劑為13% w/w的注射用乙醇水溶液。
脂質囊胞是利用磷脂雙分子層內嵌入膽固醇所形成的囊泡包裹藥物分子而形成的制 劑，磷脂是構成脂質囊胞的主要化學成分，其中最具有代表性的是卵磷脂。卵磷脂主要 來自蛋黃和大豆，制備成本低，性質穩定，屬于中性磷脂。磷脂酰膽堿是形成許多細胞 膜的主要成分，也是制備脂質囊胞的主要原料，膽固醇也是脂質囊胞另一個重要組成成 分，它是許多天然生物膜的重要成分，本身并不形成膜結構，但是能夠以1:1甚至2:1 的摩爾比插入磷脂膜中。加入膽固醇可以改變脂膜的相變溫度，從而影響膜的通透性和 流動性。因此膽固醇具有穩定磷脂雙分子膜的作用。
按脂質囊胞的結構和粒徑分類，可以分為單室脂質囊胞、多室脂質囊胞和多相脂 質囊胞，按脂質囊胞電荷性可以分為中性脂質囊胞、負電性脂質囊胞、正電性脂質囊胞。
藥物包裹于脂質囊胞內，可降低在組織中擴散而緩慢向血液中釋放藥物，從而延長藥 物作用時間，脂質囊胞能選擇性地分布于某些組織和器官，增加藥物對淋巴系統的定向性， 提高藥物在靶部位的治療濃度。尤其對抗癌藥物，能使之選擇性地殺傷癌細胞或抑制癌細 胞，對正常組織、細胞的毒性明顯降低或無損害作用。對脂質囊胞表面性質進行改變,如 粒徑大小、表面電荷、組織特異性抗體等,可提高藥物對耙區的選擇性,從而也降低了毒 性，減少了不良反應。
制備紫杉醇類藥物的脂質囊胞， 一般采用薄膜分散法、注入法、前體脂質囊胞法、 超聲分散法等方法，工業上常用的方法為薄膜分散法。
由于細胞膜上有白蛋白受體GP60，在Gp60與白蛋白結合后，激活胞膜穴樣內凹，進 行細胞轉運，由腫瘤細胞分泌的富含半光氨酸酸性分泌性蛋白，存在于多種惡性腫瘤組 織間質中，和病人的預后有直接關系，它和GP60同源，能和白蛋白結合，利用其與白蛋 白結合的特性，使表面鑲嵌有白蛋白的脂質囊胞相對富集在腫瘤間質中，通過膜融合和說明書第3/7頁
轉運釋放藥物到腫瘤細胞內，使腫瘤細胞內的藥物局部濃度增高，從而增加腫瘤細胞的 療效。
通過文獻檢索到白蛋白微球以及脂質體的制備方法和相關的研究，而脂質囊胞鑲嵌 白蛋白提高紫杉垸類脂質囊胞療效以及載藥量和包封率的研究還沒有發現。
本發明的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統不僅有效的實現了腫瘤藥物在腫瘤細胞周圍 的富集，提高抗腫瘤的效果，更有意義的是可以有效克服脂質囊胞包封率低，容易滲漏 的缺陷，本發明采用的工藝可以實現工業化生產制成臨床使用的產品，具有非常重要的 現實價值。

發明內容
本發明公開了一種穩定的紫杉垸類白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，其特征在于 將白蛋白結合在載有紫杉垸類藥物的脂質囊胞上，可以顯著提高脂質囊胞的穩定性以及 提高藥物在脂質囊胞中的包封率，其中白蛋白脂質載藥系統中包含具有紫杉烷類、磷脂、 甾醇和白蛋白，其制備方法為采用薄膜分散法將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質囊胞 中，再在體系中加入白蛋白溶液，用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了白蛋 白的脂質載藥系統，也可以將白蛋白和藥物同時加入溶入有機溶劑的磷脂、甾醇中形成 前體脂質囊胞，再用緩沖鹽溶液水化后用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了 白蛋白的脂質載藥系統。
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，.其中各組分質量百分比如下
紫杉垸類藥物0. 01-10%、磷脂0. 1-60%、甾醇0. 01-20%、白蛋白0. 1-90% 優選各組分質量百分比如下
紫杉垸類藥物0. 01-10%、磷脂3-60%、甾醇1-20%、白蛋白0. 1-90%
本發明穩定的紫杉烷類藥物白蛋白脂質載藥系統，還可以包含凍干支持劑，選自小 分子氨基酸、多糖或多元醇，具體包括20種天然氨基酸、海藻糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、 甘露醇、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為2%-50%。
本發明穩定的紫杉垸類藥物白蛋白脂質載藥系統，還包含ra調節劑，選自鹽酸、磷
酸、檸檬酸或其堿金屬鈉鹽、草酸或其金屬納鹽、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、冰醋 酸或其堿金屬鹽。
本發明穩定的紫杉垸類藥物白蛋白脂質載藥系統，還可以進一步包含穩定劑，選自 小分子氨基酸或PEG200、 400、 600，吐溫80、泊洛沙姆(poloxamer)、脫氧膽酸鈉中的 一種或其任意混合物，所述的用量以重量計為0.2%-5%，其中氨基酸具體選自20種常用
氨基酸，比如20種ci-氨基酸
非極性氨基酸丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、 甲硫氨酸(8種)；
極性、不帶電荷氨基酸絲氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰 胺、酪氨酸(7種)；
酸性氨基酸天門冬氨酸、谷氨酸(2種)；
,堿性氨基酸精氨酸、賴氨酸、組氨酸(3種)
本發明穩定的紫杉烷類藥物白蛋白脂質載藥系統，還可以包括抗氧化劑，選自維生 素E、維生素C、亞硫酸鹽類、乙二胺四乙酸及其衍生物、鹽酸半胱氨酸中的一種或一種 以上的混合物。
本發明穩定的紫杉垸類藥物白蛋白脂質載藥系統，還可以包括滲透壓調劑劑，選自 葡萄糖、氯化鈉、甘油、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為0.2%_5%。
本發明穩定的紫杉垸類藥物白蛋白脂質載藥系統，有機溶劑選自二氯甲烷、三氯甲 烷、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮等低沸點溶劑。
本發明穩定的紫杉垸類藥物白蛋白脂質載藥系統，各組分中磷脂選自天然或合成磷 脂，比如卵磷脂(大豆卵磔脂、蛋黃卵磷脂、二月桂酰磷脂、二肉豆蔻酰磷脂、二棕櫚 酰磷脂或二硬脂酰磷脂等)、磷脂酰乙醇胺(二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰 乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺等)磷脂酰絲氨酸(二月桂酰 磷脂酰絲氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸或二硬脂酰磷脂酰絲 氨酸等)、磷脂酸、磷脂酰甘油(二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚 酰磷脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰甘油等)、磷脂酰肌醇(二月桂酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻 酰磷脂酰肌醇、二棕櫚酰磷脂酰肌醇或二硬脂酰磷脂酰肌醇等)、溶血卵磷脂、鞘磷脂、
蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、羥基卵磷脂、氫化磷脂以及經過PEG修飾過的磷脂中的一種
或一種以上的混合物；甾醇選自膽甾醇及其衍生物，具體包括膽固醇、聚乙二醇丁二醇 膽固醇醚(優選短鏈聚乙二醇)、膽固醇半琥珀酸酯、麥角固醇、羊毛甾醇中的一種或一 種以上的混合物；白蛋白選自動物白蛋白(比如卵白蛋白、血清白蛋白、乳白蛋白或肌 肉白蛋白)和植物白蛋白，優選動物血清白蛋白、人血清白蛋白以及通過基因工程生產 的人血清白蛋白中的一種。
本發明穩定的紫杉垸類藥物白蛋白脂質載藥系統得制備方法，具體制備方法有兩種， 第一種包括以下步驟
第一步選擇旋轉蒸發法將藥物、磷脂與甾醇用有機溶劑溶解，通過薄膜分散法形 成的脂質囊胞體系，用緩沖鹽溶液超聲溶解，通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂 質囊胞形成比較均勻的顆粒，粒徑大小在50nm-1000nm;
第二步在脂質囊胞體系體系中加入白蛋白溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化 技術形成可注射的結合了白蛋白的脂質載藥系統，粒徑大小在20mn-1000nm，過濾罐裝即 得； '
第三步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得。
第二種制備方法包括以下步驟
第一步將白蛋白和藥物加入溶入有機溶劑的磷脂與甾醇中，減壓蒸發除去有機溶
劑后加入緩沖鹽溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質囊胞形成比較均勻的
顆粒，粒徑大小在20nm-IOOO醒，過濾罐裝即得；
第二步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得。
本發明穩定的紫杉垸類藥物白蛋白脂質載藥系統，注射液或凍千復溶后溶液的PH范 圍為5.0-7.0。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。' 具體實施例
實施例l:紫杉醇白蛋白脂質結合物
取紫杉醇100mg，蛋黃卵磷脂3g、膽固醇lg、白蛋白1.0g，加入50ml氯仿攪拌使 紫杉醇、蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去氯仿，加入蔗糖5克， PH6-7檸檬酸緩沖鹽至總體積為100ml，高壓均勻機均質至粒度為30-200nm，過0. 22的 濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入體系重量比2-3%的苯丙氨酸按常規工藝 凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
實施例2:多烯紫杉醇白蛋白脂質結合物
取多烯紫杉醇100mg，蛋黃卵磷脂3g、膽固醇lg、白蛋白1.0g，加入50ml氯仿攪 拌使多烯紫杉醇、蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去氯仿，加入蔗 糖5克，PH6-7檸檬酸緩沖鹽至總體積為lOOml，高壓均勻機均質至粒度為30-200nm，過
0.22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入體系重量比2-3%的甘氨酸按常規工藝凍
干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
實施例3:紫杉醇白蛋白脂質結合物
取紫杉醇50mg，蛋黃卵磷脂2. 5g、氫化卵磷脂0. 5g、聚乙二醇丁二醇膽固醇醚0. lg、 白蛋白1.0g，加入50ml氯仿/乙醇攪拌使紫杉醇、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂、膽固醇溶 解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去氯仿/乙醇，加入蔗糖3g、葡萄糖2g， PH7-8檸檬酸緩沖 鹽至總體積為50ml，超聲溶解，用擠壓過濾法或高壓均勻機均質至粒度為30-200nra，過 0.22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入5% (重量百分比)甘露醇凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
實施例4:多烯紫杉醇白蛋白脂質結合物
取多烯紫杉醇50mg，蛋黃卵磷脂0.6g、膽固醇半琥珀酸酯0.2g，加入30ml二氯甲 垸中攪拌使多烯紫杉醇、蛋黃卵磷脂、膽固醇半琥珀酸酯溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾 除去二氯甲烷，加入白蛋白2.5g、蔗糖5g， PH6-7檸檬酸緩沖鹽至總體積為100ml，擠 壓過濾或高壓均勻機均質至粒度為50-200咖，過0. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入5% (重量百分比)甘露醇凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
實施例5:多烯紫杉醇白蛋白脂質結合物
取多烯紫杉醇l50mg，蛋黃卵磷脂1.2g、膽固醇0.4g，加入30ml無水乙醇中攪拌使 溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去乙醇，加入白蛋白3.0g、海藻糖5g， P朋-7檸檬酸緩 沖鹽至總體積為100ml，高壓均勻機均質至粒度為30-200nm，過0. 22的濾膜罐裝密封即 得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入3% (重量百分比)蔗糖凍干即得。 如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
實施例6:多烯紫杉醇白蛋白脂質結合物
取多烯紫杉醇100mg，磷脂酰肌醇0.5g、大豆卵磷脂l.Og、氫化卵磷脂0.5g、膽固 醇0. 3g，加入50ml氯仿攪拌使溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去氯仿，加入白蛋白0. 5g 海藻糖5g， PH7-8檸檬酸緩沖鹽至總體積為50ml，超聲攪拌溶解，用擠壓過濾法或高壓 均勻機均質至粒度為30-200nm，過0. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入3% (重量百分比)蔗糖凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
權利要求
1、一種穩定的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，其特征在于將紫杉烷類藥物結合在白蛋白脂質囊胞上，可以顯著提高紫杉烷類藥物脂質囊胞的穩定性以及提高了藥物在脂質囊胞中的包封率，其中紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統中包含具有活性的紫杉烷類藥物、磷脂、甾醇和白蛋白，其制備方法為用常規制備脂質囊胞的方法先將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質囊胞中，再在體系中加入白蛋白溶液，用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了紫杉烷類的白蛋白脂質載藥系統，也可以將紫杉烷類藥物和白蛋白同時加入溶入有機溶劑的磷脂、甾醇中形成前體脂質囊胞，再用緩沖鹽溶液水化后用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統。
2、 根據權利要求l中穩定的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統，其中各組分質量百分比如下紫杉烷類藥物0. 01-20%、磷脂0. 1-60%、甾醇0. 01-20%、白蛋白0. 01-90% 。
3、 根據權利要求1中穩定的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統，還包含凍干支持劑，凍干支持 劑選自小分子氨基酸、多糖或多元醇，具體包括20種天然氨基酸、海藻糖、蔗糖、乳糖、 麥芽糖、甘露醇、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為2%-50%。
4、 根據權利要求l中穩定的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統，還包含PH調節劑，選自鹽酸、 磷酸、檸檬酸或其堿金屬鈉鹽、草酸或其金屬納鹽、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、冰醋酸 或其堿金屬鹽。
5、 根據權利要求1中穩定的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統，還可以進一步包含穩定劑，選 自小分子氨基酸或PEG200、 400、 600，吐溫80、泊洛沙姆(poloxamer)、脫氧膽酸鈉中的一 種或其任意混合物，所述的用量以重量計為0.2%-5%;還可以包括滲透壓調劑劑，選自葡萄 糖、氯化鈉、甘油、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為0.2%-5%。。
6、 根據權利要求1中穩定的紫杉垸類白蛋白脂質載藥系統，還可以包括抗氧化劑，選自維 生素E、維生素C、亞硫酸鹽類、乙二胺四乙酸及其衍生物、鹽酸半胱氨酸中的一種或一種 以上的混合物。
7、 根據權利要求1中穩定的紫杉垸類白蛋白脂質載藥系統，有機溶劑選自二氯甲烷、三氯 甲烷、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮等低沸點溶劑。
8、 根據權利要求1中穩定的紫杉垸類白蛋白脂質載藥系統，各組分中磷脂選自天然或合成 磷脂中的一種或一種以上的混合物；甾醇選自膽甾醇及其衍生物，具體包括膽固醇、聚乙二 醇丁二醇膽固醇醚、膽固醇半琥珀酸酯、麥角固醇、羊毛甾醇中的一種或一種以上的混合物； 白蛋白選自動物血清白蛋白、人血清白蛋白以及通過基因工程生產的人血清白蛋白中的一 種。
9、 根據權利要求1中穩定的紫杉垸類白蛋白脂質載藥系統得制備方法，具體包括以下兩種 方法第一種制備方法包括以下步驟-第一步根據紫杉垸類藥物的特點用旋轉蒸發法先將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質 囊胞體系，加入緩沖鹽溶液通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質囊胞形成比較均勻的顆粒，粒徑大小在lOOnm-1000nm;第二步在脂質囊胞體系體系中加入白蛋白溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化技術 形成可注射的紫杉烷類白蛋白的脂質載藥系統，粒徑大小在20nm-1000nm，過濾罐裝即得；第三步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得；第二種制備方法包括以下步驟第一步將紫杉垸類藥物和白蛋白加入溶入有機溶劑的磷脂與甾醇中，減壓蒸發除去有 機溶劑后加入緩沖鹽溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質囊胞形成比較均勻的 顆粒，粒徑大小在20nm-1000nm，過濾罐裝即得；第二步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得。如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
10、 根據權利要求l中穩定的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統的應用，為非腸道給藥，其中具 有活性的藥物，優選紫杉醇和多烯紫杉醇。
全文摘要
一種穩定的紫杉烷類白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，通過超聲波、高壓均質或微流化技術將紫杉烷類藥物結合在白蛋白脂質囊胞上，可以顯著提高紫杉烷類藥物脂質囊胞的療效、穩定性以及提高了藥物在脂質囊胞中的包封率。
文檔編號A61K47/42GK101357126SQ20081014734
公開日2009年2月4日 申請日期2008年8月11日 優先權日2008年8月11日
發明者張文芳 申請人:張文芳