專利名稱：：一種治療心腦血管系統疾病新化合物及其制備方法、用途的制作方法
技術領域：
：本發明屬于天然藥物化學領域，涉及從棕櫚科植物麒麟竭DaemonoropsdracoBl.提取分離的一種黃酮類新化合物的化學結構，以及該新化合物及其衍生物制備方法及該新化合物及其衍生物在醫藥領域中的用途，尤其是在制備預防與治療與心腦血管有關的疾病的藥物方面的應用。
背景技術：
：血竭為棕櫚科植物麒麟竭DaemonoropsdracoBl.果實中的樹脂，其性甘、溫，味咸、苦。具有活血化瘀、止血補血的功效，古人對血竭的效用極為推崇，李時珍在《本草綱目》中稱之為"活血之圣藥"血竭主產地在印度尼西亞、馬來西亞等地，我國臺灣和廣東有栽培。血竭主產地在印度尼西亞、馬來西亞等地，我國臺灣和廣東有栽培。國外關于血竭化學成分的研究并不是很多，血竭樹脂中主含血竭素(Dracorhodin)、血竭紅素(Dracorubin)、去甲血竭素(Nordracorubin)、(2S)-5-甲氧基-6-甲基黃烷-7-醇[(2S)-5-methoxy-6-methylflavan-7-ol]、苯甲酸等。而國內有關血竭化學研究文獻基本沒有，較多的研究是血竭的替代品龍血竭的研究。現代研究表明，黃酮類化合物是一類活性較強的化合物，黃酮類化合物對高血壓引起的頭痛、項強、頭暈、耳鳴等癥狀有明顯的療效，尤以緩解頭痛、項強為顯著。葛根素對正常和高血壓動物都有一定的降壓作用，靜注葛根素能使正常麻醉犬的血壓短暫而明顯地降低，也能顯著降低清醒自發性高血壓大鼠血壓。黃酮類化合物對凝血因子具有較強的抑制作用，故表現出較好的抗凝血作用。試驗表明，不同濃度的黃酮類化合物可以不同程度地抑制二磷酸腺苷誘導的大鼠血小板凝集，對5-羥色胺和ADP聯合誘導的家兔和綿羊血小板凝集也有同樣的抑制作用。黃酮類化合物還可降低血管內皮細胞羥脯酸代謝，使內壁的膠原或膠原纖維含量相對減少，利于防止血小板粘附凝集和血栓形成，有利于防治動脈粥樣硬化。大豆異黃酮能抑制凝血酶和血小板活化因子誘導的血小板聚集，高濃度抑制血管滲透性因子誘導的冠狀動脈舒張。靜注黃酮類化合物于麻醉犬后，全部動物的腦血流量增加且血管阻力相應降低，還能使乙酸膽堿引起的腦內動脈擴張和去甲腎上腺素引起的收縮減弱，使處于異常狀態下的血管功能恢復正常水平。還可改善異丙腎上腺素引起的小鼠微循環障礙，使毛細血管前小動脈管徑增加，流速加快。對血竭及其提取物進行了大量藥理研究，主要技術治療如下1、活血化瘀作用血竭總黃酮0.lmg/ml對體外ADP誘導的大鼠血小板聚集及PAF誘導的家兔血小板聚集有一定抑制作用(P<0.05)。血竭總黃酮160，80mg/kg連續ig2周，明顯抑制大鼠實驗性深靜脈血栓形成。血栓濕重，干重與模型組動物比較明顯降低(P<0.01)，且有一定量效關系。血竭總黃酮200，100mg/kg連續ig10日，可明顯減少結扎冠狀動脈致大鼠急性心肌缺血引起的心肌梗死面積，并降低心肌缺血致肢體導聯心電圖J點升高。PGI2具有舒張血管，抑制血小板聚集的活性，TXA2則相反。血竭組分B具有提高6-Kele-PGI2水平降低TXB2水平的選擇性傾向。2、止血作用血竭1.72，3.44g/kg連續ig給藥10日，能明顯縮短小鼠凝血時間(P<0.01)。廣西血竭可縮短小鼠凝血時間，促進家兔血液鈣濃度的恢復。3、鎮痛作用血竭1.72g/kg連續給藥5日，能顯著抑制冰醋酸所致的小鼠扭體反應(P<0.01)。對大鼠DRG細胞電壓門控性鈉通道電導，給予0.05%血竭后的通道電導與給藥前的通道電導有顯著性差異，表明云南血竭可顯著抑制背根神經節細胞的電壓門控性鈉通道電流，據此推斷血竭對初級神經元細胞膜鈉通道的阻斷作用是其鎮痛機制之一。4、解痙廣西血竭1.8g/kg能顯著拮抗己烯雌酚所致大鼠在位子宮平滑肌的收縮。5、抗炎作用廣西血竭O.5g/k能抑制醋酸所致小鼠腹腔通透性升高(P<0.01)，亦顯著抑制巴豆油所致耳腫脹(P<0.01)。血竭1.72，3.44g/kg對二甲苯所致小鼠耳腫脹有明顯抑制作用(P<0.05，P<0.01)。廣西血竭2.4g/kg對角叉菜膠所致大鼠足腫脹，于致炎后4，5h有明顯抑制作用(P<0.05)。于大鼠背部皮下注射瓊脂溶液后連續ig血竭0.48，1.22g/kgl4日，血竭0.48，1.22g/kg，顯著抑制肉芽腫的形成(P<0.01)。6、降糖作用云南血竭O.5，lg/kg對葡萄糖致大鼠高血糖于0.5h，lh有明顯降低作用。云南血竭0.5，lg/kg能明顯降低對腎上腺素所致大鼠高血糖。云南血竭0.5，lg/kg對四氧嘧啶造型大鼠高血糖有明顯抑制作用(P〈0.01)，亦明顯升高血漿胰島素水平(P<0.01)。血竭具有較廣泛的藥理活性，但是，僅局限于血竭及其粗提物的藥理活性研究，對其單體成分的活性評價未見報道。
發明內容本發明致力于從天然產物中需找更安全更有效的活性單體化合物，在血竭活性物質研究中，從棕櫚科植物麒麟竭DaemonoropsdracoBl.果實中的樹脂中分離得到一種新的黃酮類化合物，同時藥效學試驗證明其具有活血化瘀的作用，從而完成了本發明。本發明的目的是要提供一種新的用于心腦血管疾病治療的化合物，為研發預防與治療心腦血管疾病的新藥提供先導化合物，尤其是用于預防與治療與心腦血管有關疾病或與自由基損傷有關疾病，包括動脈粥樣硬化性心臟病、高血壓、腦卒中或血管性癡呆。本發明是通過以下技術方案完成的，具體內容包括黃酮類新化合物的提取分離，結構鑒定，活血化瘀活性的藥效研究及用途。所述的黃酮類化合物是以棕櫚科植物麒麟竭DaemonoropsdracoBl.為原料，經水、有機溶劑或水和有機溶劑混合溶劑加熱或常溫浸泡提取后采用不同粒度的分離柱分離、純化，分離柱層析所用載體為各種粒度規格的硅膠、氧化鋁、聚酰胺、ODS中的一種或幾種；有機溶劑包括單一有機溶劑與有機溶劑混合溶劑，提取溫度為120°C。具體而言，本發明的目的是通過以下方案來實現的(1)提取分離本發明采用印度尼西亞所產棕櫚科植物麒麟竭DaemonoropsdracoBl.果實中的樹脂，干燥后用90%乙醇水溶液加熱回流提取，乙醇提取液減壓回收為乙醇浸膏，再將此提取物用硅膠粗分離，分離所得到的提取物再用ODS柱層析分離純化得到新多個黃酮類化合物，包括本發明的新化合物。所述分離提純得到的單體用于制備調節和治療動脈粥樣硬化性心臟病、高血壓、腦卒中或血管性癡呆疾病藥物。所述分離提純得到的單體可單獨或與其他有效成分或有效部位或有效提取物的組合使用，用于制備治療和調節動脈粥樣硬化性心臟病、高血壓、腦卒中或血管性癡呆疾病藥物。(2)結構鑒定新化合物為白色粉末，質譜給出的分子量為270.0，化合物XJ-1白色粉末。EI-MS給出分子離子峰為m/z(X):256(100)，結合^-NMR和"C-NMR特征，其分子式為C17H1803。綜合分析化合物XJ-1的NMR波譜，可知XJ-1為黃烷類化合物。力-NMR譜給出S6.03(lH，d，J=1.5Hz)和S5.97(lH，d，J=1.5Hz)—對偶合質子信號，說明XJ-1中存在1對苯環間位偶合質子。還可見S7.267.21(5H，m)質子信號，為單取代的苯環質子信號，S3.73(3H，s)為一甲氧基信號。"C-NMR譜給出14個C信號，除1個為甲氧基信號S55.6夕卜，其它13個C信號均為黃烷骨架信號。綜合分析力」HC0SY，HMQC，HMBC和EI-MS譜，確定化合物為4-甲基-5-羥基-7-甲氧基黃烷，其NMR數據歸屬見表1。表1化合物XJ-1的NMR信號歸屬<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>具體實施例方式下面結合具體實施例，對本發明作進一步的說明，但本發明的內容并不僅僅局限于所列舉的實施例，試驗用棕櫚科植物麒麟竭DaemonoropsdracoBl.果實中的樹脂及其果實，于2007年采集于印度尼西亞。實施例1取棕櫚科植物麒麟竭，用乙醇加熱回流提取三次，乙醇量分別為麒麟竭重量的8-12倍，提取時間分別為60-120分鐘，提取液減壓濃縮回收溶劑至干，浸膏用硅膠拌樣，上硅膠柱，用乙酸乙酯、石油醚、正己烷、丙酮多次柱層析分離后得到新化合物。實施例2取棕櫚科植物麒麟竭3公斤，用乙醇加熱回流提取三次，乙醇量分別為麒麟竭重量的12、10、8倍，提取時間分別為120分鐘、60分鐘、60分鐘，提取液減壓濃縮回收溶劑至干，浸膏用硅膠拌樣，上硅膠柱，用乙酸乙酯、石油醚、正己烷、丙酮多次柱層析分離后得到新化合物。實施例3取棕櫚科植物麒麟竭3公斤，用乙酸乙酯加熱回流提取，乙酸乙酯量跟別為麒麟竭重量的8-12倍，提取時間分別為30-60分鐘，提取液減壓濃縮至干，浸膏硅膠拌樣，用乙酸乙酯、石油醚、正己烷進行硅膠柱層析，洗脫液濃縮至干，浸膏再用聚酰胺柱層析，洗脫溶劑用乙酸乙酯、正己烷、石油醚洗脫，得新化合物。實施例4取棕櫚科植物麒麟竭3公斤，用乙酸乙酯加熱回流提取，乙酸乙酯量跟別為麒麟竭重量的12、10、8倍，提取時間分別為60分鐘、50分鐘、30分鐘，提取液減壓濃縮至干，浸膏硅膠拌樣，用乙酸乙酯、石油醚、正己烷進行硅膠柱層析，洗脫液濃縮至干，浸膏再用聚酰胺柱層析，洗脫溶劑用乙酸乙酯、正己烷、石油醚洗脫，得新化合物。實施例5——舒張血管活性評價根據現代醫學研究發現，在心腦血管疾病的發病過程中，都涉及到血管結構與功能的變化，舒張血管是此類疾病治療的主要方面，為此，采用離體血管活性評價，作為主要藥效指標，考察對治療與心腦血管有關疾病或與自由基損傷有關疾病的藥理作用，尤其是對動脈粥樣硬化性心臟病、高血壓、腦卒中或血管性癡呆等疾病的藥理作用。取雄性SD大鼠，頸部脫臼，剪開胸腔，迅速取出胸主動脈條，放置于4°CK-H液中，小心剝去附在胸主動脈的脂肪及結締組織，橫切成3mm長的血管環。將血管環懸掛于預置5mlK-H液的浴槽中，溫度37.0土0.2"恒定，持續通入95%02和5%C02的混合氣體。標本的一端固定，另一端經張力換能器連接ALC-M離體組織器官實驗系統，記錄實驗過程中張力的變化。穩定過程先以0g張力開始，維持30min后調節其基礎張力至lg，平衡lh，期間每隔15min更換一次K-H液。主動脈環穩定后，用KC1(60mmol*L—0剌激，待收縮幅度穩定后用K-H液洗脫，以激發最大收縮并使血管收縮狀態更穩定。用Ach10i！molL—1舒張主動脈環以檢驗內皮的完整性。即加入Ach后使10—5molL—1苯腎上腺素預收縮的血管環舒張70%以上，認為內皮完整。D對kcl所致主動脈環收縮的舒張作用血管環檢測內皮后，用終濃度為60mmol/l的KCL溶液使血管環達到最大收縮，以單次給藥法向浴皿內加入濃度梯度的XJ-1，記錄主動脈環張力，通過GraphPad軟件計算出最大舒張效應及半數有效濃度見表1。結果表明XJ-1能呈劑量依賴性舒張的由KCL所引起收縮的血管環，其半數有效濃度EC5。遠低于陽性對照藥川芎嗪半數有效濃度。表明，XJ-l對KCL所致主動脈環收縮的舒張作用強于川芎嗪。表1XJ-1對KCL所致主動脈環收縮的舒張作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2)對NE所致主動脈環收縮的舒張作用血管環檢測內皮后，用終濃度為10—6mol/l的NE溶液使血管環達到最大收縮，以單次給藥法向浴皿內加入濃度梯度的XJ-1，記錄主動脈環張力，通過GraphPad軟件計算出最大舒張效應及半數有效濃度見表2。結果表明XJ-1能呈劑量依賴性舒張的由NE所引起收縮的血管環，其半數有效濃度EC5。大于陽性對照藥川芎嗪半數有效濃度。表明，XJ-1對NE所致主動脈環收縮的舒張作用略小于川芎嗪。表2XJ-1對NE所致主動脈環收縮的舒張作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>小結XJ-1能呈劑量依賴性的舒張由KCL、NE收縮的動脈環，其半數有效濃度分別為(1.56±0.24)X10—4、(7.09±2.93)X10—4。與陽性對照藥川芎嗪比較，XJ-1對KCL所致收縮的主動脈環的舒張作用要明顯強于川芎嗪，XJ-1對NE所致收縮的主動脈環的舒張作用要略小于川芎嗪。XJ-1具有舒張血管活性。根據現代醫學研究發現，在心血管疾病的發病過程中，都涉及到血管結構與功能的變化，舒張血管是此類疾病治療的主要方面，為此，采用離體血管活性評價，作為主要藥效指標。因此XJ-1可用于治療與心腦血管有關疾病或與尤其是用于治療動脈粥樣硬化性心臟病、高血壓、腦卒中或血管性癡呆的疾病。實施例6—心肌缺血藥效評價大鼠心肌缺血30min后再灌注120min造成大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，放免法測定給藥前后血槳中ET、TXB2及6-Keto-PGFla的含量，觀察XJ-1對MIRI心肌的保護作用。結果XJ-1可以減少ET及TXB2的釋放，提高PGI2的含量。結論XJ-1可以減輕MIRI，可能通過減少ET的釋放，改善TXA2/PGI2系統的平衡狀態，減輕心肌細胞的損傷。該化合物具有預防跟治療心血管疾病的作用。實施例7-抗氧化評價利用果蠅生存試驗和分光光度法研究XJ-1對果蠅壽命及其體內抗氧化系統的影響，各劑量組雌雄果蠅平均壽命(MLS)和平均最高壽命(匪LS)均高于對照組(P<0.05，P<0.01)。喂飼樣品第10天、20天時總SOD活性均較對照組增加(P<0.05);果蠅體內總SOD活性隨著培養基中XJ-1含量遞增，喂飼樣品第10天、20天時MDA含量均較對照組減少(P<0.05);果蠅體內MDA含量隨著培養基中XJ-1含量遞減，XJ-1能延長果蠅壽命，增強黑腹果蠅體內抗氧化酶SOD的活性并減少脂質過氧化產物MDA的生成。XJ-1可用于治療與自由基損傷有關疾病，實施例8—降壓藥效評價12周齡雄性SHR隨機分為SHR空白組，卡托普利組，XJ-1組，每組10只，同時選取10只同周齡的WKY大鼠作為對照。采用尾動脈搏動法測量實驗前、實驗4周、實驗8周各組大鼠的血壓值；結果各給藥組大鼠血壓均有不同程度下降，其中卡托普利組降壓幅度最大，與XJ-1組相比有顯著性差異(P<0.05)，因此XJ-1可用于治療高血壓疾病。實施例9片劑的制備取上述化合物，加藥用輔料淀粉、硬脂酸鎂等適量，充分混勻后，壓片，制成每片含上述新化合物或者衍生物lOOmg的片劑供口服使用。實施例10膠囊劑的制備取上述化合物，加藥用輔料淀粉適量，充分混勻后裝入膠囊，制成每粒含上述新化合物或者衍生物lOOmg的膠囊劑供口服使用。實施例ll顆粒劑的制備取上述化合物若干，加藥用輔料淀粉適量，制成顆粒劑。實施例12注射劑的制備取上述化合物，加注射用純凈水及聚山梨酯80適量，制成每250ml含100ml上述新化合物或者衍生物的注射液供經脈點滴使用。實施例13注射用粉針劑的制備取上述化合物，加注射用水溶性藥用輔料適量，制成注射用粉針劑。說明書附圖圖1為新化合物質譜圖；圖2為新化合物核磁共振氫譜圖；圖3為新化合物核磁共振碳譜圖。權利要求一種治療心腦血管性疾病的化合物，其特征在于具有下列結構式F2008101671012C0000011.tif2.權利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于以棕櫚科植物麒麟竭DaemonoropsdracoBl.為原料，經水、有機溶劑或水和有機溶劑混合溶劑加熱或常溫浸泡提取后采用不同粒度的分離柱分離、純化。3.權利要求2所述的制備方法，其特征在于用有機溶劑或水或有機溶劑和水的混合溶劑提取，分離柱層析所用載體為各種粒度規格的硅膠、氧化鋁、聚酰胺、0DS中的一種或幾種；有機溶劑包括單一有機溶劑與有機溶劑混合溶劑。4.權利要求3所述的制備方法，其特征在提取溫度為120°C。5.權利要求1所述的化合物，其特征在于以棕櫚科植物麒麟竭為原料，用乙醇加熱回流提取三次，提取液減壓濃縮回收溶劑至干，浸膏用硅膠拌樣，上硅膠柱，用乙酸乙酯、石油醚、正己烷、丙酮多次柱層析分離后得到。6.權利要求5所述的化合物，其特征在于乙醇量為麒麟竭重量的8-12倍。7.權利要求5所述的化合物，其特征在于提取時間為60-120分鐘。8.權利要求5所述的化合物，其特征在于以棕櫚科植物麒麟竭為原料，用乙醇加熱回流提取三次，乙醇量分別為麒麟竭重量的12、10、8倍，提取時間分別為120分鐘、60分鐘、60分鐘，提取液減壓濃縮回收溶劑至干，浸膏用硅膠拌樣，上硅膠柱，用乙酸乙酯、石油醚、正己烷、丙酮多次柱層析分離后得到。9.權利要求1所述的化合物，其特征在于以棕櫚科植物麒麟竭為原料，用乙酸乙酯加熱回流提取，提取液減壓濃縮至干，浸膏硅膠拌樣，用乙酸乙酯、石油醚、正己烷進行硅膠柱層析，洗脫液濃縮至干，浸膏再用聚酰胺柱層析，洗脫溶劑用乙酸乙酯、正己烷、石油醚洗脫后得到。10.權利要求9所述的化合物，其特征在于乙醇量為麒麟竭重量的8-12倍。11.權利要求9所述的化合物，其特征在于提取時間為30-60分鐘。12.權利要求9所述的化合物，其特征在于以棕櫚科植物麒麟竭為原料，用乙酸乙酯加熱回流提取，乙酸乙酯量分別為麒麟竭重量的12、10、8倍，提取時間分別為60分鐘、50分鐘、30分鐘，提取液減壓濃縮至干，浸膏硅膠拌樣，用乙酸乙酯、石油醚、正己烷進行硅膠柱層析，洗脫液濃縮至干，浸膏再用聚酰胺柱層析，洗脫溶劑用乙酸乙酯、正己烷、石油醚洗脫后得到。13.權利要求1所述化合物與醫學上可接受的藥用輔料組成的藥物組合物及其制劑。14.權利要求13所述的制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、注射用粉針劑或水針劑。15.權利要求1所述化合物在制備預防與治療與心腦血管有關疾病或與自由基損傷有關疾病的藥物中的用途。16.權利要求15所述的用途，其特征在于所述疾病包括動脈粥樣硬化性心臟病、高血壓、腦卒中或血管性癡呆。全文摘要本發明涉及天然藥物化學領域，公開了從血竭中提取分離的治療心腦血管性疾病的化合物，該單體化合物為5-羥基-6-甲基-7-甲氧基黃烷，分子式為C17H18O3，以及該化合物制備方法及在醫藥領域中的用途，尤其在制備預防、治療與心腦血管疾病的藥物方面的用途。文檔編號A61P9/12GK101712672SQ20081016710公開日2010年5月26日申請日期2008年10月6日優先權日2008年10月6日發明者付梅紅,方婧,楊洪軍,黃璐琦申請人:中國中醫科學院中藥研究所;朝暉生物科技有限公司