專利名稱：腫瘤微環境的調控的制作方法
技術領域：
本發明一般涉及基于在腫瘤微環境中對免疫細胞進行調控的癌癥療法。更特別地，本發明涉及靶向或改變非惡性細胞的功能的治療劑，其中所述非惡性細胞促進腫瘤的生長和存活。
背景技術：
先天性和適應性免疫系統的細胞隨時準備對組織損傷和/或致病性感染快速應答。免疫和炎性應答的靜止和激活之間的平衡是被高度調節的平衡，其控制抗病原體和抗腫瘤免疫應答。細胞表面和分泌的蛋白通過正和負反饋機制二者調節此平衡，其中所述反饋機制經設計用以確保適當快速的應答同時將有害的后果最小化。
在癌癥的情況下，構成腫瘤的獨特的、非生理性的組織微環境包括惡性的和非惡性的細胞二者。當惡性細胞中的轉化或致癌性改變清楚地構成未被調節的生長和腫瘤演進的基礎時，非惡性細胞和由惡性和非惡性細胞的并存所致的腫瘤微環境在腫瘤起始作用中扮演關鍵角色。非惡性細胞和腫瘤微環境對于腫瘤的演進也是重要的，其保持支持進一步的遺傳不穩定性和升高的突變頻率的條件。參見例如Reynolds等，Omcer / 漢，1996，56(24):5754-5757。特別地，正常運行以支持炎性和免疫應答的非惡性細胞在某些情況下是在能夠例如通過產生直接或間接地支持腫瘤內惡性細胞生長和生存力的介體，或通過產生直接或間接地抑制惡性細胞生長和生存力的介體，或通過抑制否則將阻礙腫瘤演進的應答而促成腫瘤演進的腫瘤微環境內的。腫瘤微環境還通過在腫瘤部位改變藥物代謝或藥物代謝動力學和/或促成抗藥性的產生而影響腫瘤對治療干預的接受性。
盡管有越來越多關于腫瘤微環境重要性的理解，但是靶向該生物學的治療策略仍然是有限的。作為一個例子，已經用靶向骨髓基質的蛋白酶體抑制劑治療多發性骨髓瘤患者，并因此減少骨轉移。參見Rajkumar等，乂C//". O"co/.,2005,20;23(3):630-399。另外的例子包括調控血管發生、低氧和趨化因子的藥物和候選治療劑。參見例如Nagasawa等，5Zo/.尸/ flra. 5m〃.，2006, 29(12):2335-2342; Giles等，Cwm Omcer Z>wg 7^ge", 2006，6(8):659-670。
鑒于對抗癌療法的持續需要，本發明提供調控存在于腫瘤微環境中的非惡性細胞的功能從而破環支持腫瘤生長和存活的條件的方法。特別地，所述被公開的方法包括施用靶向CD80的治療劑以引起免疫調控作用，包括腫瘤微環境中存在的免疫調節或炎性細胞如抗原呈遞細胞(例如巨噬細胞、樹突細胞、B細胞)或源自骨髓的抑制性細胞的耗竭，以及起到支持腫瘤演進的作用的T細胞亞熟例如調節T細胞和Th2輔助細胞)的抑制。所述被公開的方法還與另外的病癥的治療有關，在所述病癥中調節T細胞的抑制促成病理狀況的惡化。
發明概述
本發明提供在腫瘤微環境中調控非惡性細胞從而抑制腫瘤演進的方法。例如，本發明提供一種治療患有惡性腫瘤的受治療者的方法，所述惡性腫瘤包括惡性和非惡性細胞的腫瘤微環境，其中調節T細胞的功能促成或加重惡性腫瘤，所述方法包括對受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。在本發明另一個方面，提供治療患有惡性腫瘤的受治療者的方法，所述惡性腫瘤包括惡性和非惡性細胞的腫瘤微環境，其中非惡性的表達CD80的細胞促成或加重惡性腫瘤，所述方法包括對受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。如本文所述的靶向CD80的治療劑還可被用來抑制受治療者腫瘤微環境中一種或多種炎性細胞因子的產生，和/或使受治療者腫瘤微環境中非惡性的表達CD80的細胞耗竭。
附圖簡述


圖1A描繪當與受輻射的SB淋巴瘤細胞在無處理(對照，菱形XCTLA-4Ig (三角形、抗CD86抗體(灰色圓圈)、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)或抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養時CD4+CD25- T細胞增殖的百分比。
圖1B描繪當與LPS刺激的成熟樹突細胞在無處理(對照，菱形)、CTLA-4Ig (三角形、抗CD86抗體(灰色圓圈)、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)或抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養時CD4+CD25- T細胞增殖的百分比。
圖2A描繪當與LPS刺激的成熟樹突細胞在無處理(對照，菱形)、CTLA-4Ig (三角形X抗CD86抗體(灰色圓圈)、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)或抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養時經由CD4+CD25-T細胞的IFN-y的產生。
圖2B描繪當與LPS刺激的成熟樹突細胞在無處理(對照，菱形)、CTLA-4Ig (三角形X抗CD86抗體(灰色圓圈)、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)或抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養時經由CD4+CD25-T細胞的白細胞介素-2的產生。
圖3A描繪當與受輻射的SB淋巴瘤細胞以1:120的SB:T比在無處理(對照，菱形X人IgGl (同種型對照，正方形)、CTLA-4Ig (三角形X抗CD86抗體(X X抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)以及抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養時供體202的CD4+CD25+ T細胞的調節T細胞誘導的百分比。還顯示的是當與受輻射的SB淋巴瘤細胞以1:10的SB:T比共培養(加號)以及不共培養即CD4+CD25+T細胞單獨培養(長方形)時供體202的CD4+CD25+T細胞的調節T細胞誘導的百分比。圖3B描繪當與受輻射的SB淋巴瘤細胞以1:160的SB:T比在無處理 (對照，菱形)> 人IgGl (同種型對照，正方形)、CTLA-4Ig (三角形X 抗CD86抗體(X 、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)以及抗CD86 和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養時供體133的 CD4+CD25+ T細胞的調節T細胞誘導的百分比。還顯示的是當與受輻射 的SB淋巴瘤細胞以1:10的SB:T比共培養(加號)以及不共培養即 CD4+CD25+ T細胞單獨培養(長方形)時供體202的CD4+CD25+ T細胞 的調節T細胞誘導的百分比。
圖4A-4F描繪在純化的人血清骨髓瘤IgGl (同種型對照X抗CD80 抗體(加利昔單抗)或CTLA-4Ig的存在下，經由CD14+單核細胞(空心 柱、與尺^淋巴瘤細胞共培養的〔014+單核細胞(灰色柱X與CD14十 單核細胞共培養的CD4+T細胞(陰影柱)以及與CD14+單核細胞和Raji 淋巴瘤細胞共培養的CD4+T纟田胞(黑色柱)的白細胞介素-8 (圖4A、 4C 和4E )和白細胞介素-6 (圖4B、 4D和4F )的產生。細胞群體是從供體A (圖4A-4B X供體B (圖4C-4D )和供體C (圖4E-4F )分離的。
詳述
本發明提供在腫瘤微環境中調控非惡性細胞的方法，其中所述非惡性 細胞正常起作用以調節炎癥以及先天性和適應性免疫力，而且直接或間接 地支持腫瘤演進。被公開的方法對于提高癌癥免疫力即癌癥反應性T細胞 的抗癌活性也是有用的。被公開的方法使用靶向CD80的治療劑，其在阻 斷CD80介導的T細胞功能調節或內環境穩定方面是有效的，和/或使支持 腫瘤生長、遷移和/或血管發生的表達CD80的非惡性細胞耗竭。在本發明 的一個方面，提供了通過對受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療 劑而治療患有疾病或病癥的受治療者的方法，所述疾病或病癥中的調節T 細胞的功能促成疾病病理學。代表性的適應癥包括癌癥，其包括血液的以 及非血液的惡性腫瘤。在本發明的其他方面，提供了使用靶向CD80的治 療劑在受治療者中提高癌癥免疫力或降低腫瘤演進的免疫或炎性支持的 方法，此過程是通過以下實現的調控存在于腫瘤微環境中的免疫細胞，例如降低存在于腫瘤微環境中的免疫調節或炎性細胞比如抗原呈遞細胞 (例如巨噬細胞、樹突細胞、B細胞)或源自骨髓的抑制性細胞(例如源 自骨髓的單核細胞和表達tie-2的單核細胞)的數量，抑制起支持腫瘤演進
作用的T細胞亞群(例如調節T細胞和Th2輔助T細胞)，和/或抑制腫
瘤微環境中一種或多種炎性細胞因子的產生。
I .腫瘤微環境
本發明基于對直接或間接地促成疾病發病或演進/持續的細胞的調控， 其中調節T細胞的功能促成疾病。在本發明的一個方面，腫瘤微環境的非 惡性細胞被調控以至于那些細胞對腫瘤演進的直接貢獻被抑制，而且那些 細胞支持調節T細胞功能的功能也被抑制。
腫瘤微環境的細胞包括惡性細胞以及支持它們生長和存活的非惡性 細胞。所述非惡性細胞，也被稱作基質細胞，占據或聚集在與惡性細胞相 同的細胞空間中，或與惡性細胞相鄰或接近的細胞空間中，其調控腫瘤細 胞的生長或存活。腫瘤微環境的非惡性細胞包括成纖維細胞、肌成纖維細 胞、神經膠質細胞、上皮細胞、脂肪細胞、脈管細胞(包括血液和淋巴脈 管的內皮細胞和周細胞)> 駐留型和/或募集型炎性和免疫(例如，巨噬細 胞、樹突細胞、骨髓抑制性細胞、粒細胞、淋巴細胞等X能夠產生或分 化成上述非惡性細胞中的任一種的駐留型和/或募集型干細胞以及本領域 已知的上述細胞的任何功能上不同的亞型。這些細胞活躍地參與腫瘤細胞 的生長和轉移。
在實行本文所公開的方法時，使用下述標準中的一個或多個來鑒定腫 瘤微環境(a)包括與惡性細胞共享相同生理環境或直接相鄰的非惡性細 胞的區域；(b )延伸的腫瘤區域；(c )環繞或臨近于腫瘤的炎癥區域；(d ) 調節T細胞增殖數目或速率被升高的區域；和(e )巨噬細胞、樹突細胞 或源自骨髓的抑制性細胞被升高的區域。在非實體瘤類型的情況中，腫瘤 微環境還可由惡性細胞之間以及惡性細胞和任何相鄰或附近的非惡性細 胞之間的局部細胞-細胞相互作用而確定。這種相互作用可包括例如細胞粘 附事件和/或腫瘤微環境中經由一種細胞(惡性或非惡性)所產生的可溶介
體對另一種細胞(惡性或非惡性)的旁分泌作用。當評估上述標準中任一個的水平例如炎癥水平或調節T細胞的數目 時，所述水平是相對于合理的對照水平被評估的。例如，相關的對照可包 括從患腫瘤的受治療者身上和從所述受治療者對側相同組織和類似區域 取出的樣品。作為另一個對照，可以從處于相似狀態(年齡、性別、整體 的健康等)的無腫瘤的受治療者的相同組織和類似區域取出樣品。就治療
依賴性應答的評估來說，還可通過治療前對照樣品的平行分析來確定治療 后的作用。
當對定義腫瘤微環境的上述標準中的任一種的水平進行定量的時候， 在相對于對照水平評估時的差別被鑒定為這樣的差別至少約兩倍于對照 水平或更少，或至少約五倍于對照水平或更少，或至少約十倍于對照水平 或更少，至少約二十倍于對照水平或更少，至少約五十倍于對照水平或更 少，或至少約一百倍于對照水平或更少。上述標準中的差別當相對于對照 水平被評估時，也可被視為與對照水平相比至少20%的差別，例如至少 30% ,或至少40% ,或至少50% ,或至少60% ,或至少70% ,或至少80% , 或至少卯％ ，或至少100% ,或更多。例如，升高的調節T細胞的數目可 相對于無腫瘤患者的調節T細胞的已知生理水平被評估。基于上述，本領 域普通技術人員(例如腫瘤學臨床醫師)將能夠容易地使用上述標準和適 當對照的選擇來鑒定構成患者腫瘤微環境的區域。受治療者還可有一個或 多個腫瘤微環境，其中每個與可區分的腫瘤有關。腫瘤微環境的特性可相 對于腫瘤的組織部位、腫瘤級別、腫瘤階段、腫瘤形態或分子表型等而改 變。腫瘤微環境也可隨腫瘤演進而改變。
調節T細胞是腫瘤微環境的非惡性細胞之一 ，它在許多腫瘤中以較高 的頻率被觀察到，其中所述腫瘤包括霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤
(Shi等，J/Z/^"g.,2004， 23(5):597-601(只有摘要)X惡性黑素瘤(Viguier 等，《/. /mw柳o/., 2004， 173(2): 1444-53; Javia等，/mm訓oA", 2003， 26(1):85-93 )和卵巢(Woo等，07臟r細"2001, 61(12):4766-72 \胃腸道
(Ichihara等，C"" C朋cer 7 ej" 2003, 9(12):4404誦4408; Sasada等，Omcer， 2003, 98(5): 1089-1099 )、 乳腺(Liyanage等， / /mww"o/" 2002， 169(5):2756-2761 X肺(Woo等，Cancer Res" 2001， 61(12):4766-72 )和胰腺(Uyanage等，J/m畫o/,, 2002,169(5):2756-2761 )的癌癥。調節T細胞 響應由腫瘤細胞分泌的趨化因子而募集到腫瘤部位。參見例如，Curiel等, A^,. Mec/.， 2004, 10:942-949。調節T細胞數目的增加還可與預后不良相關 (Curiel等，7V饑Med， 2004, 10:942-949; Sasada等，O^cer, 2003, 98:1089-1099 )o相反地，在化學療法之后觀察到調節T細胞減少(Beyer 等，2005, 106:2018-2025 )b
據顯示，與腫瘤相聯系的巨噬細胞的存在還與腫瘤預后不良和存活相 關，其中所述腫瘤例如乳腺、卵巢、前列腺、子宮頸和肺的癌癥(Pollard,
i ev: Cawce。 2004， 4:71-77 )b相似的相關性在患有濾泡性淋巴瘤的患者 中被觀察至IJ ( Farinha等，5/oo《2005, 15:2169-2174 )b相似地,源自骨髓的 抑制性細胞據說在調節免疫細胞介導的應答中起作用。
被公開的方法作為治療干預的一個機會靶向腫瘤微環境的非惡性免 疫細胞。在本發明的一個方面，提供了抑制調節T細胞和Th2輔助T細胞 功能的方法。這種抑制構成了 T細胞數目的減少和/或T細胞抑制抗腫瘤 應答的功能化能力的破環。例如，調節T細胞的相關功能包括產生促炎性 細胞因子例如白細胞介素-2、白細胞介素-4、白細胞介素-10、白細胞介素 -12、轉化生長因子p和干擾素-y。參見例如，Mocellin等， / /mmw"oAw， 2001，24(5):3920407。產生的炎性腫瘤微環境吸引巨噬細胞，而巨噬細胞反 過來提供帶有營養或存活信號的惡性細胞，促進血管發生，改變抗原呈遞 細胞和樹突細胞的表型和功能，擴增調節T細胞，這些共同地導致免疫抑 制的細胞環境。Th2輔助細胞的相關功能相似地包括促進相聯系的惡性細 胞存活的信號的產生，其中所述信號例如CD40/CD40L信號轉導、白細胞 介素-1或白細胞介素-6。 Th2輔助細胞還通過分泌趨化因子而促成炎性腫 瘤微環境，其中所述趨化因子募集抗原呈遞細胞(包括巨噬細胞)b
調節T細胞可被鑒定為富集于CD4+CD25hi群體中，而且可被進一步 表征為表達細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4( CTLA4 X糖皮質激素誘導的 腫瘤壞死因子受體家族相關基因(GITR )> CC趨化因子受體4 ( CCR4 X 叉頭盒p3 ( FOXP3 X CC趨化因子受體6 ( CCR6 )和/或CD30。此外， 調節T細胞可以是CD62Lhi、 CD45RB1。、 CD45ROhi和/或CD45RA。參見McHugh等，J.爿〃e《;；C"". /附mw"o/.， 2002, 110:693-701; Hori等，Sc/e"ce, 2003, 299:1057-1061; Iellem等，《/. Exp. Mec ., 2001, 194:847-853;第 2006/0063256號美國專利申請公布。
輔助T細胞包括CD4+CD25—Thl細胞和Th2細胞。Thl細胞促進細胞 免疫力，即誘導抗原特異性的CD8+細胞毒性T細胞。Th2輔助T細胞可 抑制Thl細胞介導的細胞免疫力，例如，通過分泌抑制Thl細胞產生干擾 素-Y的細胞因子(Fiorentino等，丄五取Med.， 1989， 170: 2081-2095 )b
CD80-CD28信號轉導是調節T細胞和Th2輔助細胞分化和維持的主 要共調節途徑，而且在不存在CD80共刺激時T細胞顯著地減少。參見 Zheng等，J: /附mw"o/., 2004, 172:2778-2784; Liang等，Med， 2005, 201: 127-137;和Tang等，《//immmo/., 2003， 171:3348-3352。如本文所述，有 用的靶向CD80的治療劑包括這樣的分子，其阻斷CD80/CD28信號轉導從 而減弱調節T細胞和Th2輔助T細胞的免疫抑制作用，然后允許腫瘤反應 性T細胞介導抗腫瘤活性。對CD80/CD28信號轉導的選擇性阻斷，即不 存在CD80/CTLA4信號轉導的阻斷，可提供改善的治療效力，假定未破環 CD80/CTLA4信號轉導對免疫應答的負調控。
調節T細胞和Th2輔助T細胞的激活產生吸引巨噬細胞的炎性腫瘤微 環境。所述巨噬細胞通過分泌細胞因子例如IL-1和IL-6促進惡性細胞的 存活。巨噬細胞還分泌趨化因子以將另外的免疫效應細胞募集到腫瘤微環 境，所述趨化因子例如吸引嗜中性粒細胞的IL-8和吸引白細胞的MIP-1(X。 巨噬細胞還分泌血管生成因子，其促成腫瘤的血管形成。
耙向CD80的治療劑還可直接結合腫瘤微環境的抗原呈遞細胞上表達 的CD80。因此，它們可以通過誘導抗體依賴的細胞毒性(ADCC 、補體 依賴的細胞毒性和/或凋亡而被耗竭。評估這些活性的相關方法是本領域眾 所周知的。
評估腫瘤微環境的非惡性免疫細胞的變化的代表性方法在本文下面 關于治療有效劑量的確定中和實施例中被描述。
II.靶向CD80的治療劑本發明靶向CD80的治療劑包括阻斷腫瘤微環境中調節T細胞和Th2 輔助細胞的激活和/或使腫瘤微環境中表達CD80的細胞耗竭的分子。耗竭 可通過任何誘導細胞破環的機制發生，其包括凋亡的誘導、細胞生長的抑 制或減少和/或抗體依賴的細胞介導的細胞毒性(ADCC >因此，靶向CD80 的治療劑包括CD80拮抗劑以及與細胞毒性劑軛合的CD80結合分子。本 發明中有用的靶向CD80的治療劑包括具有上述特性的任何合成的、重組 的或天然的產物或組合物。代表性的劑包括但不限于肽、蛋白、核酸(例 如適體)> 小分子(例如化合物》抗體和核酸-蛋白融合體。
對于結合CD80的軛合物，細胞毒性劑可以與結合CD80的分子直接 或間接相連或結合，例如，使用連接體分子或生物的或合成的基質。細胞 毒性劑可與結合CD80的分子共價結合，其使用本領域眾所周知的技術例 如使用異雙功能交聯試劑。所述連接體分子可以是可裂解的連接體，其促 進細胞中細胞毒性藥物的釋放。例如，可以使用酸性易變連接體、肽酶敏 感的連接體、二甲基連接體或含二硫化物的連接體。
有用的細胞毒性劑在本領域是已知的，其包括本文下面所述的任何 劑，當與靶向CD80的治療劑如放射性同位素、化療劑和毒素(例如細菌、 真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素或其片段)聯合時更有 用。另外的代表性細胞毒性劑包括細胞抑制劑、烷化劑、抗代謝劑、抗增 殖劑、微管蛋白結合劑、激素和激素拮抗劑以及諸如此類。另外的代表性 細胞毒素包括抗腫瘤抗生素的烯二炔家族的成員或衍生物，其包括刺孢霉 素、埃斯培拉霉素或達內霉素。
II.A.抗CD80抗體
本發明的靶向CD80的治療劑包括抗CD80抗體或其CD80結合片段。 天然存在的抗體包括兩條相同的多肽輕鏈(每條具有大約23,000道爾頓的 分子量)以及兩條相同的重鏈(每條具有53，000-70，000道爾頓的分子量)b 所述四條鏈聯合而形成三個球狀結構域，其通過柔性鉸鏈區而連接。輕 (VL )和重(VH )鏈二者的可變結構域決定抗原的識別和特異性。輕銜CL ) 和重鏈(CH1、 Ch2或CH3 )的恒定結構域使之具有例如Fc受體結合、補 體結合以及諸如此類的生物特性。本發明中有用的抗CD80抗體可包括多克隆抗體、單克隆抗體(mAb X人源化或嵌合的抗體、含有人恒定區和 靈長類(食蟹獼猴(cynomolgus macaque ))可變區的PRIMATIZED⑧抗體、 人單克隆抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab，)2片段、由Fab表達庫產生的 片段、抗獨特型(抗Id )抗體和上述任一個的表位結合片段。這種抗體可 具有天然存在的抗體、其多價體形式或其片段的結構。
作為特定抗原的抗體的同源群體的單克隆抗體可以由任何技術獲得， 所述技術通過培養的連續細胞系提供抗體分子的產生。這些包括但不限于 Kohler和Milstein, 7Va^w, 1975， 256:495-497和第4,376,110號美國專利中 的雜交瘤技術、人B細胞雜交瘤技術(Kosbor等，/mmw"o/ogy 7Way, 1983, 4:72; Cote等，M //.」c"J. 1983， 80:2026-2030 )和EBV雜交
瘤技術(Cole等，在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy (《單克隆 抗體和癌癥療法》)中，1995, Alan R. Liss, Inc., New York, 77-96頁)b這種 抗體可屬于任何免疫球蛋白類及其任何亞類，其中所述免疫球蛋白類包括 IgG、 IgM、 IgE、 IgA、 IgD。產生單克隆抗體的雜交瘤可以在體外或體內 被培養。
嵌合的抗體是其不同部分來源于不同動物物種的分子，例如具有來源 于鼠mAb的可變區和人免疫球蛋白恒定區的那些。嵌合的抗體可通過將 來自具有適當抗原特異性的小鼠抗體分子的基因和來自具有適當生物活 性的人抗體分子的基因剪接在一起而產生(Morrison等，尸rac. iVfl" Xcad
"&4, 1984, 81:6851-6855; Takeda等，Mm/re， 1985， 314:452-454》
人源化抗體是一種嵌合的抗體，其中負責抗原結合的可變區殘基(即 互補決定區的殘基和參與抗原結合的任何其他殘基)來源于非人物種，而 余下的可變區殘基(即框架區的殘基)和恒定區至少部分地來源于人抗體 序列。人源化抗體可變區和恒定區的殘基還可來源于非人來源。人源化抗 體的可變區還被描述為人源化的(即人源化的輕或重鏈可變區)b非人物 種通常是用于以抗原免疫接種的物種，例如小鼠、大鼠、兔、非人靈長類 或其他非人哺乳動物物種。可使用多種方法中的任一種來制備人源化抗
體，所述方法包括如下所述的鑲飾(veneer 互補決定區(CDR )的移植、 縮短的CDR的移植、特異性決定區(SDR )的移植和Frankenstein組合。這些普通步驟可以與標準的致突變作用和合成技術結合以產生具有任何 期望序列的CD80抗體。
本發明所述抗體還可以是人單克隆抗體，例如由永生化人細胞、 SCID-hu小鼠或其他能夠產生人抗體的非人動物所產生的那些。人抗體還 可從抗體噬菌體庫中被分離，例如如Marks等，iWb/. 5/o/.， 1991， 222:581-597所述。鏈改組和重組技術可被用來生產具有增加的抗體多樣性 的噬菌體庫，例如包括具有增加的結合親和力的抗體的庫。參見Marks等, 5/o/ec/ "o/ogy, 1992, 10:779-783和Waterhouse等，M/c.爿"A 1993, 21:2265-2266。
本發明所述抗體還可包括單鏈抗體，其通常通過經由氨基酸橋連接Fv 區的重鏈和輕鏈片段產生單鏈多肽而形成。參見例如第4,946,778號美國 專禾!J; Bird， Sc/e"ce, 1988, 242:423426; Huston等，尸rac. TVa". Zcad 1988, 85:5879-83和Ward等，TVa,ww, 1989, 334:544-546。
本發明中有用的抗體還包括非巖藻糖化的抗體。這種抗體包括Fc區 和結合至所述Fc區的復合的N-糖苷連接的糖鏈，其中在所述結合至所述 Fc區的復合的N-糖苷連接的糖鏈的整體中，巖藻糖未結合至所述糖鏈的 還原端的N-乙酰葡糖胺的糖鏈的比例至少是20%。與對照巖藻糖化的抗體 相比，所述非巖藻糖化的抗體具有增強的Fc受體結合以及增強的效應功 能。參見2007年3月28日提交的第60/卯8，643號美國臨時申請，其整體 通過引用并入本文。產生非巖藻糖化的抗體的代表性方法在實施例1中被 闡述。還參見第2004/0093621號美國專利公布、第6,946,292號美國專利、 第WO 2006/089232號PCT國際公布和第1176195號歐洲公布申請，其中 每個也整體通過引用并入本文。
本文所述識別特異性抗原或表面受體的抗體片段可通過已知技術產 生。例如，這種片段包括F(ab，)2片段或Fc區(其可通過抗體分子的胃蛋 白酶消化而產生辨Fab片l效其可通過還原F(ab')2片段的二硫鍵而產生)o 可選擇地,可構建Fab表達庫(Huse等，Sc/證,1989， 246:1275-1281 )以 允許具有期望特異性的單克隆Fab片段的快速和簡單鑒定。
本文所述抗體或抗體片段對抗原的特異性結合指的是在包括多種不同抗原的異質樣品中抗體對抗原的優先結合。基本上缺乏結合描述的是抗 體對對照蛋白或樣品的結合水平，即表征為非特異性或背景結合的結合水 平。抗體與抗原的結合是特異性的，如果結合親和力至少是約1(^M或更 高，例如至少約10—8m或更高，包括至少約10力m或更高，至少約io"m 或更高，或至少約10^M或更高。
本發明中有用的代表性抗CD80抗體是加利昔單抗，它可選地被稱作 PRIMATIZED 16C10、 IDEC-114或PRIMATIZED⑧抗體，其具有由美國 典型培養物保藏中心(ATCC )登錄號為HB-12119的雜交瘤所產生的抗體 產生的可變區。依據國際承認用于專利程序的微生物保藏布達佩斯條約 ("布達佩斯條約")的條款，于1996年5月29日將HB-12119雜交瘤保藏 在ATCC ,其目前位于弗吉尼亞州馬納薩斯大學大道10801號(郵編 20110-2209 )( 10801 University Boulevard, Manassas， VA 20110-2209 >>加利 昔單抗是含有人恒定區和靈長類(食蟹獼猴)可變區的PRIMATIZED⑧抗 CD80免疫球蛋白(Ig)Gl X單克隆抗體。加利昔單抗和本發明中有用的 其他抗CD80抗體的氨基酸和核酸序列被公開在第6,113,898號美國專利 中，其整體通過引用被并入。
另外的代表性抗CD80抗體或其CD80結合片段包括在結合抑制測定 中與16C10或加利昔單抗競爭結合CD80的抗體和其CD80結合片段。這 種結合抑制測定是技術人員所熟知的。本發明還包括可以結合至與16C10 或加利昔單抗相同的CD80表位的抗CD80抗體和CD80結合片段。與加 利昔單抗和其他抗CD80抗體競爭結合CD80的抗CD80抗體，例如可以 結合至與加利昔單抗相同的表位的抗體，在第7,153,508號美國專利中被 公開，其整體通過引用被并入。確定抗體結合特異性的方法可由免疫沉淀 或體外測定例如放射免疫測定(RIA )或酶聯免疫吸附測定(ELISA )而 確定，這些都是技術人員所熟知的。
本發明還包括那樣的抗CD80抗體或其CD80結合片段一其包括加 利昔單抗的可變區或來源于加利昔單抗可變區的可變區，例如通過引入一 個或多個氨基酸添加、置換或其他突變。本發明中有用的另外的抗CD80 抗體和CD80結合片段包括具有含加利昔單抗的抗原結合結構域即加利昔單抗的互補決定區的殘基的抗體。
本發明中有用的抗體可以使用標準的技術重組地制備。參見例如， Harlow & Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (《抗體實驗室手冊》)， 1988， Cold Spring Harbor Laboratory Press (冷泉港實驗室出版社)，Cold Spring Harbor (冷全港)，New York (紐約)和第4,196,265、 4,946,778、 5,091,513、 5,132,405、 5,260,203、 5,658,570、 5,677,427、 5,892,019、 5,985,279、 6,054,561號美國專利。生產包括16C10可變區的抗體的代表性方法在第 6，113，898號美國專利中被描述。還參見第20030103971和200301802卯號 美國專利申請公布。
可以按照例如第WO 02/096948號PCT國際公布中所述制備包括兩個 完整的四聚體抗體的四價抗體(H4L4 ),其包括同源二聚體和異源二聚體。 抗體二聚體還可使用異雙功能的交聯劑通過在抗體恒定區引入促進鏈間 二硫鍵形成的半胱氨酸殘基(Wolff等，Cancer Res.， 1993, 53:2560_2565 )或 通過重組生產以包含雙恒定區(Stevenson等，Anticancer Drug Des., 1989， 3:219-230 )而制備。
II.B.小分子
本發明還提供可用作靶向CD80的治療劑的小分子。這些分子包括如 下所述的式(I )和第11/539,153號美國專利申請中的雜環化合物。這種化 合物抑制CD80和CD28之間的相互作用，其是調節T細胞和Th2輔助細 胞的激活所必需的。可在所發明的方法中使用的雜環化合物的例子包括式 (I )的化合物或其藥學上可接受的鹽。這、些式(I )的雜環化合物基本上 按照第7，081，456號美國專利中所述而制4 ,其整體通過引用并入本文。 式(I)被描繪在下面其中
R,和R3獨立地代表H、 F、 Cl、 Br、 -N02、 -CN、可選地被F或Cl 取代的Q C6烷基或可選地被F取代的d C6烷氧基；
R2代表H或可選地被取代的Q Ce烷基、C3 C7環烷基或可選地被取代 的苯基；
Y代表-O-、 -S-、 N-氧化物或-N(R5)-，其中R5代表H或Q Ce烷基； X代表鍵或二價的d Q亞烷基基團；
R4代表-Q^O)NR6R7 ,其中R6代表式-(Alk)b-Q的基團，其中b是1而
Alk是可選地被取代的二價直鏈或支鏈d Q2亞烷基、C2 d2亞烯基或C2
C,2亞炔基基團，其可被一個或多個不相鄰的-O-、 -S-或-N(Rs)-基團間斷， 其中R8代表H或C, C4烷基、C3 C4烯基、C3 C4炔基或C3 C6環烷基，以 及
Q代表H、 -CF3、 -OH、 -SH ; -NR8R8 ,其中每個Rg可以是相同的或 不同的；酯基或可選地被取代的苯基、C3 C7環烷基、C5 C7環烯基或具有 5至8個環原子的雜環；以及
R7代表H或d C6烷基，或當與它們所連接的原子合在一起時R6和 R7形成可選地被取代的具有5至8個環原子的雜環。
式(I )的代表性分子包括稠合的吡唑啉酮，其具有下面的結構A和B :iii.治療應用
如本文所述，靶向CD80的治療劑可被用來調控與病理狀況相聯系的 T細胞，其中所述病理狀況被調節T細胞和/或Th2輔助細胞的功能所惡化。 耙向CD80的治療劑還可用來使腫瘤微環境中的免疫調節和炎性細胞(例 如，抗原呈遞細胞和源自骨髓的抑制性細胞)耗竭，其中所述細胞支持腫 瘤生長、遷移、血管發生等。因此，本文所述靶向CD80的治療劑起作用 以增強適應性免疫應答，包括調節T細胞的抑制功能的抑制。靶向CD80 的治療劑可單獨地或與另外的治療劑聯合使用，如下面的進一步描述。受 治療者可接受靶向CD80的治療劑作為一線療法，或用于復發的或頑固的 狀況的治療。
iii.a.適應癥
在本發明的一個方面，靶向CD80的治療劑可通過靶向腫瘤微環境的 非惡性細胞而用來治療血液的或非血液的惡性腫瘤。靶向CD80的治療劑 同樣地用于抑制非惡性增殖病癥的細胞的生長，所述非惡性增殖病癥例如 過度增生、組織變形或最特別地發育異常(關于這種異常生長狀況的綜述， 參見DeVita, Jr.等，Cancer: Principles and Practice (癌癥原則和實踐),第 6版，2001年，Lippincott Williams & Wilkins )o
例如，本文所述靶向CD80的治療劑可被用來治療B細胞惡性腫瘤， 例如白血病和淋巴瘤，包括緩慢進展的、侵入性、低度惡性的、中度惡性 的或高度惡性的白血病或淋巴瘤。代表性的B細胞惡性腫瘤包括霍奇金氏淋巴瘤、B細胞慢性淋巴細胞白血病B-CLL X淋巴漿細胞樣淋巴蠓LPL X 外套細胞淋巴瘤(MCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、彌漫性大細胞淋巴瘤 (DLCL 、 Burkitt氏淋巴瘤(BL 、 AIDS相關的淋巴瘤、單核B細胞淋 巴瘤、血管免疫母細胞性淋巴結病、小淋巴細胞性淋巴瘤；濾泡性、彌漫 性大細胞；彌漫性小裂細胞；大細胞免疫母細胞淋巴母細胞瘤；小的、無 裂的Burkitt氏和非Burkitt氏濾泡性、有優勢的大細胞；濾泡性、有優 勢的小裂細胞；和濾泡性、混合的小裂和大細胞淋巴瘤。具有上述所鑒定 的B細胞惡性腫瘤中任一種的受治療者包括復發的受治療者或對之前的療 法抵制的受治療者。
可用公開的靶向CD80的治療劑治療的另外的癌癥包括在乳腺、結腸、 直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小腸、包 括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、 男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內分泌腺、甲狀腺、腎上腺、垂體腺、 皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經、眼、腦膜中的原發性和轉移性腫瘤。 其他相關的實體瘤包括有B細胞參與的那些。
III.B.劑量和施用
從基于細胞的測定和動物研究(通常是嚙齒類、兔、狗、豬和/或靈長 類)中獲得的數據可被用于配制一系列的劑量以用于人。所述動物模型還 可用來確定適當的濃度范圍和施用途徑。這種信息然后可被用來確定在人 身上有用的施用劑量和途徑。通常地，施用最小劑量，并且在不出現劑量 限制性細胞毒性的情況下升高所述劑量。有效量或劑量的確定和調節，以 及對何時和如何進行這種調節的評估，對于醫藥領域普通技術人員是已知 的。
這種化合物的劑量優選地存在于循環濃度范圍內，其中所述循環濃度 包括具有很少或不具毒性的ED5。。劑量可在此范圍內變化，其取決于所使 用的劑型和所用的施用途徑。對于本發明的方法中所用的任何當前的靶向 CD80的治療組合物，治療有效量可最初根據細胞培養測定來估計。可在 動物模型上配制劑量以獲得包括如細胞培養中所確定的IC5。(即，達到癥 狀最大抑制的一半時測試化合物的濃度)的循環血漿濃度范圍。這種信息可被用來更準確地確定人中的有用劑量。可以通過例如高效液相色譜法測 量血漿中的水平。
抗CD80抗體例如加利昔單抗的有效劑量可包括范圍從100 mg/it^至 600 mg/m2的周劑量，例如每周4次輸注劑量為125 mg/m2、 250 mg/m2、 375 mg/m2或500 mg/m2的加利昔單抗。抗CD80抗體還可以更低或更高劑 量被施用，例如，是上面鑒定的加利昔單抗劑量的約卯％ ，或約80% ,或 約70% ,或約60% ，或約50% ，或約40% ，或約30% ,或約20% ,或約 10% ，或更少的劑量。例如，有效劑量可包括10 mg/m2、 12.5 mg/m2、 25 mg/m2、 37.5 mg/m2或50 mg/m2的周劑量。特別地，具有提高的ADCC活 性或其他提高的抗腫瘤活性的非巖藻糖化的抗CD80抗體當與相同的抗體 相比時可以在降低的劑量上有效，其中所述相同的抗體通過不特別去除巖 藻糖殘基的方式制備。抗CD80抗體的劑量還可包括是上面鑒定的加利昔 單抗劑量的約110% ,或約120% ，或約130% ,或約140% ,或約150% ， 或約160% ,或約170% ,或約180% ，或約190% ,或更多的劑量。
根據本發明所用的藥物組合物可使用一種或多種生理學上可接受的 載體或賦形劑以常規的方式配制。因此，可配制所述組合物和它們生理學 上可接受的鹽和溶劑化物以通過吸入或吹入(通過嘴或募)或口服、面頰、 腸胃外、局部、皮下、腹膜內、靜脈內、胸膜內、眼內、動脈內、直腸施 用，或在植入物例如基質(例如膠原纖維或蛋白聚合物)內/上，通過細胞 轟擊，在滲透泵中，在包括適當地轉化的細胞的移植物等等中施用。對于 實體瘤的治療，本發明的靶向CD80的治療劑可被直接施用在腫瘤部位。 對于CNS惡性腫瘤的治療，靶向CD80的治療劑可被直接施用在CNS ， 例如，通過鞘內的或室內的施用。此外，用于促進靶向CD80的治療劑跨 越血腦屏障轉移的多種技術是可得的，其包括使用外科手術或注射、短暫 地打開CNS脈管系統內皮細胞之間的粘連觸點(adhesion contact)的藥物 以及促進易位通過這種細胞的化合物破環血腦屏障。
對于口服施用，所述藥物組合物可采取例如通過常規方法以藥學上可 接受的賦形劑制備的片劑或膠囊劑的形式，所述賦形劑例如粘合劑(例如 預膠化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)、填充劑(例如，乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣X潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、滑石或 二氧化硅》崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或淀粉乙醇酸鈉)或濕潤劑(例如 十二烷基硫酸鈉 可以使用本領域眾所周知的方法對所述片劑進行包衣。 用來口服施用的液體制劑可采用例如溶液、糖漿或懸浮液的形式，或者它 們可作為干燥的產品被呈現，以便在使用之前用水或其他適合的媒介物構 建。這種液體制劑可通過常規方法使用藥學上可接受的添加劑制備，所述 添加劑例如懸浮劑(例如，山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂)、 乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯膠X非水媒介物(例如，杏仁油、油酯、 乙醇或分餾的植物油)和防腐劑(例如，對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲 酸丙酯或山梨酸^所述制劑根據情況還可包含緩沖鹽、調味劑、著色劑 和甜味劑。
藥物組合物還可包含多種緩沖劑(例如，Tris、醋酸鹽、磷酸鹽X增 溶劑(例如，TWEEN 、聚山梨醇酯X載體例如人血清白蛋白、防腐劑 (硫柳汞(thimerosol》苯甲醇)和抗氧化劑例如抗環血酸以穩定藥物活 性。穩定劑可以是去污劑，例如TWEEN -20、 TWEEN -80、 NP-40或 TRITON-X⑧-100。EBP還可被摻入聚合物的微粒制劑以在延長的時間段里 對患者控制遞送。藥物組合物中組分的更廣泛的研究在Remington's Pharmaceutical Sci畫《《雷明頓制藥科學》i 1990,第18版,A. R. Gennaro， 編輯，Mack Publishing, Easton, Pennsylvania (賓夕法尼亞州)中被找到。
除了前面描述的制劑之外，所述化合物還可作為貯庫型(d印ot )制劑 被配制。這種長效制劑可以通過植入(例如，皮下地或肌內地)或肌內注 射被施用。因此，例如，所述化合物可以用適合的聚合的或疏水的材料(例 如，作為可接受的油中的乳劑)或離子交換樹脂，或作為略溶的衍生物例 如作為略溶的鹽而被配制。
如果希望，所述組合物可以被呈現在包裝或分散設備中，所述設備可 包含一個或多個含有活性成分的單位劑型。所述包裝可包括例如金屬或塑 料箔，例如泡罩包裝。所述包裝或分散設備可以附帶施用說明書。
對于包括靶向CD80的治療劑與一種或多種另外的治療劑一起施用的 組合療法，可以在任何適于進行所期望療法的時間框中進行施用。例如，單獨的靶向CD80的治療劑和任何另外的劑可以被大致同時(即作為一個 單獨的制劑或在幾分鐘或幾小時內)或以任何順序連續地施用。對于連續 的施用，單個劑以約10、 8、 6、 4或2個月的干預時間段，或以4、 3、 2 或1個星期的干預時間段，或以約5、 4、 3、 2或1天的干預時間段被施
用O
當與一種或多種另外的治療劑聯合使用時，所述靶向CD80的治療劑 和一種或多種另外的劑可同時地或以任何順序連續地被施用或與細胞接 觸。被公開的組合療法可引起協同的治療效應，即比它們單個效應的總和 還大的效應。可測量的治療效應在本文上面被描述。例如，協同的治療效 應可以是由單個劑引起的治療效應或由給定組合中單個劑引起的治療效 應的總和的至少約兩倍，或至少約五倍，或至少約十倍，或至少約二十倍， 或至少約五十倍，或至少約一百倍。協同的治療效應據觀測還可以是與由 單個劑引起的治療效應或由給定組合中單個劑引起的治療效應的總和相 比增加至少10%的治療效應，或至少20% ，或至少30% ,或至少40% ，或 至少50% ,或至少60% ，或至少70% ,或至少80% ，或至少90% ,或至少 100% ,或更多。
關于制劑、劑量、施用方案和可測量的治療結果的另外的指導，參見 Berkow等5 The Merck Manual of Medical Information (《默克醫學信息手 冊》),2000， Merck & Co" Inc., Whitehouse Station, New Jersey (新澤西州)； Ebadi, CRC Desk Reference of Clinical Pharmacology (《CRC臨床藥理學案 頭參考》)，1998， CRC Press, Boca Raton， Florida; Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (《雷明頓藥劑學的科學與實踐》),2000, Lippincott， Williams & Wilkins, Philadelphia (費城),Pennsylvania (賓夕法 尼亞州)；Katzung, Basic & Clinical Pharmacology (《基礎與臨床藥理學》), 2001， Lange Medical Books / McGraw-Hill Medical Pub. Div" New York (紐 約)；Hardman等，Goodman & Gilman's the Pharmacological Basis of Therapeutics (《Goodman和Gilman氏治療的藥理學基礎》)，2001, The McGraw-Hill Companies, Columbus(哥倫布)，Ohio(俄亥俄州)；Speight & Holford, Avery's Drug Treatment: A Guide to the Properties, Choices,Therapeutic Use and Economic Value of Drugs in Disease Management (《艾弗 里氏藥物治療藥物在疾病處理中的特性、選擇、治療用途和經濟價值的 指南》)，1997, Lippincott， Williams, & Wilkins, Philadelphia (費城)， Pennsylvania (賓夕法尼亞州》
II.C.組合療法
本文所述靶向CD80的治療劑可與其他治療劑或其他療法(例如，外 科摘除、放射等)聯合使用從而引起增強的治療效應和/或減少一些治療劑 的肝細胞毒性。當與一種或多種另外的治療劑聯合使用時，所述靶向CD80 的治療劑和一種或多種另外的劑可同時地或以任何順序連續地被施用或 與細胞接觸。被公開的組合療法可引起協同的治療效應，即比它們單個效 應的總和還大的效應。可測量的治療效應在本文上面被描述。例如，協同 的治療效應可以是由單個劑引起的治療效應或由給定組合中單個劑引起 的治療效應的總和的至少約兩倍，或至少約五倍，或至少約十倍，或至少 約二十倍，或至少約五十倍，或至少約一百倍的效應。協同的治療效應據 觀測還可以是與由單個劑引起的治療效應或由給定組合中單個劑引起的 治療效應的總和相比增加至少10%的治療效應，或至少20% ,或至少30% , 或至少40% ,或至少50% ,或至少60% ,或至少70% ,或至少80% ,或至 少卯％ ，或至少100% ，或更多。
對于惡性腫瘤的治療，對組合療法有用的代表性的劑包括細胞毒素、 放射性同位素、化療劑、免疫調控或免疫調節劑、抗血管生成劑、抗增殖 劑、促凋亡劑、細胞抑制和細胞溶解酶(例如RNA酶X酶抑制劑(例如 蛋白酶體抑制劑)和腫瘤疫苗。另外的劑包括治療性核酸，例如編碼免疫 調控劑、抗血管生成劑、抗增殖劑或促凋亡劑的基因。這些藥物描述詞不 是互斥的，而且因此可以使用上述術語中的一個或多個來描述治療劑。本 發明的靶向CD80的治療劑還可與使調節T細胞耗竭或阻斷、抑制或向下 調節調節T細胞功能的劑聯合使用。
術語細胞毒素一般指的是抑制或預防細胞功能和/或導致細胞破壞的 劑。代表性的細胞毒素包括抗生素、微管蛋白聚合抑制劑、結合并破環DNA 的烷化劑以及破環蛋白合成或必要的細胞蛋白功能的劑例如蛋白激酶、磷
30酸酶、拓撲異構酶、酶和細胞周期蛋白。代表性的細胞毒素包括但不限于 多柔比星、柔紅霉素、伊達比星、阿柔比星、佐柔比星、米托蒽醌、表柔 比星、卡柔比星、諾加霉素、美諾立爾、吡柔比星(pitarubicin )、戊柔比 星、阿糖胞苷、吉西他濱、曲氟尿苷、安西他濱、依諾他濱、阿扎胞苷、 去氧氟尿苷、噴司他汀、溴尿苷、卡培他濱、克拉屈濱、地西他濱、氟尿 苷、氟達拉濱、谷氏菌素、嘌呤霉素、替加氟、噻唑呋林、阿霉素、順鉑、 碳鉑、環磷酰胺、達卡巴嗪、長春堿、長春新堿、米托蒽醌、博來霉素、 雙氯乙基甲胺、浚尼松、丙卡巴肼、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、依托泊苷、紫 杉醇、紫杉醇類似物、鉑類例如順鉑和碳鉑、絲裂霉素、塞替派、紫杉烷、 長春新堿、柔紅霉素、表柔比星、放線菌素、安曲霉素(authramycin )、 氮絲氨酸、博來霉素、他莫西芬、伊達比星、多拉司他汀/auristatin、哈米 特林(hemiasterlin )、埃斯培拉霉素和類美登醇(maytansinoid )b
適合于放射療法的放射性同位素包括但不限于a發射體、P發射體和 俄歇電子。這些放射性同位素通常被偶合至靶抗體而被遞送到疾病細胞。 例如，放射性標記的抗體可包括放射性同位素例如18氟、64銅、65銅、67 鎵、68鎵、77溴、8。m溴、95釕、97釕、103釕、105釕、""尋、107汞、203汞、
123確、124確、125確、126娥、131碘、133碘、'"銦、113銦、"m錸、105錸、101 錸、版錸、188錸、1211"碲、"锝、'2加碲、1251、 '65銩、'67銩、刷銩、卯
釔、a發射體例如213鉍、213鉛和225錒，以及從那里衍生的氮化物或氧化
物形式。
免疫調控或免疫調節劑是引起免疫應答的組合物，所述免疫應答包括 體液免疫應答(例如，抗原特異性抗體的產生)和細胞介導的免疫應答(例 如，淋巴細胞增殖)b代表性的免疫調控劑包括細胞因子、黃嘌呤、白細
胞介素、干擾素和生長因子(例如，TNF、 CSF、 GM-CSF和G-CSF )以 及激素例如雌激素(己烯雌酚、雌二醇)、雄激素(睪酮、HALOTESTIN (氟甲睪酮)X孕激素(MEGACE (醋酸甲地孕酮)、PROVERA (醋 酸甲羥孕酮))和皮質甾類(潑尼松、地塞米松、氫化可的松)o
本發明中有用的免疫調控劑還包括抗激素，其阻斷激素對腫瘤的作 用；以及免疫抑制劑，其抑制細胞因子產生、向下調節自體抗原表達或者掩蔽MHC抗原。代表性的抗激素包括抗雌激素，其包括例如他莫西芬、 雷洛昔芬、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔 芬(keoxifene X LY 117018、奧那司酮(onapnstone )和托瑞米芬；以及抗 雄激素，例如氟他米特、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以 及抗腎上腺劑。代表性的免疫抑制劑包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶、硫 唑嘌呤、環磷酰胺、溴隱定、達那唑、達普松、戊二醛、MHC抗原和MHC 片段的抗獨特型抗體、環孢菌素A、類固醇例如糖皮質類固醇、細胞因子 或細胞因子受體拮抗劑(例如抗干擾素抗體、抗IL10抗體、抗TNFcc抗體、 抗IL2抗體X鏈激酶、TGFP、雷帕霉素、T細胞受體、T細胞受體片段 和T細胞受體抗體。
本發明中有用的另外的藥物包括抑制血管形成的抗血管生成劑，例 如，法呢基轉移酶抑制劑、COX-2抑制劑、VEGF抑制劑、bFGF抑制劑、 類固醇硫酸酯酶抑制劑(例如，2-甲氧雌二醇雙氨基磺酸酯 (2-MeOE2bisMATE ) X白細胞介素-24、血小板反應蛋白、金屬底板反應 蛋白(metallospondin protein 、 I類干擾素、白細胞介素12、魚精蛋白、 血管他汀、層粘連蛋白、內皮他汀和促乳素片段。
抗增殖劑和促凋亡劑包括PPARy活化劑(例如環戊烯酮前列腺素 (cyPG)X類視黃醇、三萜系化合物(例如，環木菠蘿烷、羽扇烷、烏斯 烷、齊墩果烷、木栓烷、達瑪垸、葫蘆素和檸檬苦素類化合物三萜系化合 物X EGF受體抑制劑(例如HER4 X雷帕霉素、CALCITRIOL ( 1,25-二羥膽鈣化固醇(維生素D )、芳香酶抑制劑(FEMARA ( letrozone )、 端粒酶抑制劑、鐵螯合劑(例如3-氨基吡啶-2-甲醛硫代半卡巴腙 (Triapine )、凋亡蛋白(病毒蛋白3 - VP3 ，來自雞貧血病毒》Bcl-2和 Bcl-X(L)抑制劑、TNF-a、 FAS配體、TNF相關的凋亡誘導配體 (TRAIL/Apo2L ) 、 TNF-a/FAS配體/TNF相關的凋亡誘導配體 (TRAIL/Apo2L )信號轉導活化劑以及PI3K-Akt存活途徑信號轉導抑制 劑(例如，UCN-01和格爾德霉素)b
可與CD80拮抗劑聯合使用的另外的劑包括阻斷B淋巴細胞刺激劑 (BLyS )與它的一個或多個受體、B細胞活化因子受體(BAFF-R )、跨膜激活劑及鈣調親環素配體相互作用分子(TACI )或B細胞成熟抗體 (BCMA)相互作用的劑。例如，有用的劑包括特異性結合BLyS配體的 抗體或特異性結合它的一個或多個受體的抗體，其包括本文所描述的任何 抗體類型。還可以使用BLyS與它的一個或多個受體相互作用的小分子抑 制劑。
本發明的靶向CD80的治療劑還可與其他抗癌治療抗體和抗體/藥物軛 合物聯合使用。可以以未標記的/未軛合的形式或作為抗體/藥物軛合物被 使用的代表性抗體包括抗CD19抗體、抗CD20抗體(例如，RITUXAN⑧、 ZEVALIN⑧、BEXXAR )、抗CD22抗體、抗CD33抗體(例如 MYLOTARG 抗CD33抗體/藥物軛合物、抗Lewis Y抗體(例如， Hu3S193、Mthu3S193、AGmthu3S193 )^抗HER國2抗辨例如>HERCEPTIN
(曲妥珠單抗)、MDX-210、 OMNITARG (帕妥珠單抗、rhuMAb 2C4 )\ 抗CD52抗體(例如CAMPATH X抗EGFR抗體(例如，ERBITUX⑧(西 妥昔單抗、ABX-EGF(帕尼單抗)、抗VEGF抗體(例如AVASTIN (貝 伐單抗)X抗DNA/組蛋白復合體抗體(例如ch-TNT-l/b X抗CEA抗體
(例如CEA-Cide、 YMB-1003 〉 hLM609、抗CD47抗體(例如6H9 X抗 VEGFR2 (或含激酶插入結構域的受體，KDR )抗體(例如IMC-1C11 、 抗Ep-CAM抗體(例如ING-1 X抗FAP抗體(例如西羅珠單抗\抗DR4 抗體(例如TRAIL-R X抗孕酮受體抗體(例如2C5 X抗CA19.9抗體(例 如GIVAREX )和抗纖維蛋白抗體(例如MH-1 >>
本發明的靶向CD80的治療劑還可與全身性抗癌藥物例如埃博霉素 (印ithilone )( BMS-247550、 Epo-卯6》紫杉烷的重制制劑(reformulation ) (Abraxane、 Xyotax X微管蛋白抑制劑(MST-997、 TTI-237 )等聯合使 用。
在其他聯合療法中，靶向CD80的治療劑可與一種或多種化療劑的組 合一同施用，所述化療劑例如，烷化劑例如塞替派和環磷酰胺 (cyclosphosphamide);烷基磺酸酯例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮 丙啶(aziidine )例如benzodopa、卡波醌、meturedopa和uredopa ;乙烯亞 胺和甲基三聚氰胺(methylamelamine ),其包括六甲蜜胺、三乙烯三聚氰胺、三乙烯磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三亞乙基硫代磷酰胺和三羥 甲蜜胺(trimethylolomelamine);氮芥例如苯丁酸氮芥(chiorambucil X萘氮 芥、cholophosphamide 、雌氮芥、異環磷酰胺、雙氯乙基甲胺
(mechiorethamine )、 鹽酸雙氯乙基甲胺氧化物(mechiorethamine oxide hydrochloride),美法侖、新氮芥、膽甾醇對苯乙酸氮芥、潑尼莫司汀、氯 乙環磷酰胺(trofosfamide X尿嘧啶氮芥；亞硝基脲(nitrosureas)例如卡莫 司汀、氯脲菌素(chiorozotocin)、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司 汀；抗生素例如阿克拉希霉素(aclacinomysins)、放線菌素、安曲霉素 (authramycin)、氮絲氨酸、博來霉素、放線菌素C、刺孢霉素(calicheamicin)、 卡柔比星(carabicin)、洋紅霉素、嗜癌霉素、色霉素、放線菌素D、柔紅霉 素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索 比星、伊達比星、麻西羅霉素、絲裂霉素、霉酚酸、諾加霉素、橄欖霉素、 培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、 鏈黑菌素、鏈佐星、殺結核菌素、烏苯美司、凈司他汀、佐柔比星；抗代 謝劑例如氨甲蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物例如二甲葉酸、氨 甲蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物例如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫 咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物例如安西他濱、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡 莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷、5-EU ; 雄激素例如卡魯睪酮、丙酸屈他雄酮、環硫雄醇、環戊縮環硫雄烷、睪內 酯；抗腎上腺劑例如氨魯米特(aminoglutethimide \米托坦、曲洛司坦； 葉酸補充劑例如亞葉酸(frolinic acid );醋葡醛內酯；糖苷醛磷酰胺
(aldophospharnide glycoside );氨基果糖酸(aminolevulinic acid );安吖啶； 百垂布西(bestrabucil);比生群；依達曲沙(edatraxate ); defofamine ;地 美可辛；地吖醌；依氟鳥氨酸(dforn他ine );依利醋銨；依托格魯；硝酸 鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明(Ionidamine);米托胍腙；米托蒽醌；莫 哌達醇；二胺硝吖啶；噴司他汀；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基 酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；西佐喃；鍺螺胺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌； 2,2',2'-三氯三乙胺；尿烷；長春地辛；達卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露 醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；gacytosine ;阿拉伯糖苷("Am-C");環磷酰胺； 塞替派；紫杉烷例如紫杉醇(TAXOL ，普林斯頓的Bristol-Myers Squibb腫瘤學，新澤西州)和多西紫杉醇(doxetaxel ) ( TAXOTERE ， Rhone-Poulenc Rorer of Antony ,法國)；瘤可寧(chiorambucil );吉西他濱； 6-硫鳥嘌昤；巰基嘌呤；甲氨蝶呤；鉑類似物例如順鉑和碳鉑；長春堿； 鉑；依托泊苷(VP-16 );異環磷酰胺；絲裂霉素C ;米托蒽醌；長春新堿； 長春瑞濱；諾維本；諾消靈；替尼泊苷；柔紅霉素；氨基蝶呤(aininopterin ); 希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-11 ;拓撲異構酶抑制劑RFS 2000 ; 二氟甲基鳥 氨酸(DMFO );視黃酸；埃斯培拉霉素(esperamicins );卡培他濱和治療 劑的組合例如ABVD(亞德利亞霉素、博來霉素、長春新堿、達卡巴嗪)b
為了治療霍奇金氏病，本發明的靶向CD80的治療劑可與抗體聯合使 用，所述抗體與在Hodgkin Reed Sternberg ( HRS )細胞或環繞HRS細胞 的滲入細胞上表達的抗原結合。這種對HRS細胞的靶向有用的抗原包括 CD30、 CD40、 RANK、 TRAIL、 Notch、 LMP、 IL-13、 CD20、 CD52和 CCR4。用來治療霍奇金氏病的組合療法的其他有用的劑包括蛋白酶體抑 制劑(例如硼替佐米(PS-341 ; Millennium Pharmaceuticals (千禧制藥)) 和MG-132 (東京都醫學研究所))、組蛋白脫乙酰酶抑制劑(histone deacytylase inhibitors )(例如縮酚酸肽(FK228 ; Gloucester Pharmaceuticals ) 和辛二酰苯胺氧脰酸(suberoylanilide hydroxamic acid )( SAHA ; Aton Pharnia ))和可用來誘導HRS細胞凋亡的小分子和肽，包括三萜系化合物 例如CDD ( RTA401 ， Reata Discovery )和17-烯丙基氨基-17-脫甲氧基-格 爾德霉素(gledanamycin X參見例如Kamal等，Trends. Mol. Med" 2004， 10, 283-290 )、 N-乙酰基-亮氨酸基-leucynil德leucynal、 N-乙酰基-亮氨酸基 leucynil-甲二磺醛、芐氧羰基-亮氨酸基-leucynil-norvalinal、芐氧羰基-亮氨 酸基-leucynil-leucynal、卩-內酯、bactacystine、硼酸肽、泛素連接酶抑制劑、 環孢菌素A和脫氧精胍菌素。
本發明的靶向CD80的治療劑還可與增強抗腫瘤免疫力的劑例如腫瘤 疫苗聯合使用。很多這種疫苗是本領域已知的，包括摻入腫瘤特異性的細 胞毒素表位以及輔助表位的疫苗。另外的劑可防止CD8+細胞溶解T淋巴 細胞無反應性的誘導。
更進一步地，本發明的靶向CD80的治療劑可以與以下聯合使用提高免疫活性的劑，例如抗CTLA4抗體、其他阻斷CTLA4的劑、抗PD1 抗體和釋放T細胞激活和增殖的抑制對照的另外的劑。
在本申請通篇中，各種出版物、專利和發行的專利申請通過可識別的 引用被提及。本申請中引用的這些出版物、專利和發行的專利說明書的公 開內容由此通過引用并入本公開內容以更全面地描述本發明所涉及領域 的技術狀態。
下面的實施例被包括以展示本發明的實施方式。下面的實施例的某些 方面就本發明共同發明人發現或熟思而得并在本發明實踐中有效的技術 和程序進行描述。考慮到本公開內容和本領域一般技術水平，技術人員將 理解，下面的實施例只預期是示范性的，而且許多變化、修飾和改變可以 在不背離本發明的范圍下被使用。
實施例
實施例1.用于治療復發的或頑固的霍奇金氏淋巴瘤的加利昔單抗
挑選患有組織學上確診的典型霍奇金氏淋巴瘤的成人患者(至少18 歲)使用抗CD80抗體加利昔單抗進行治療。加利昔單抗是使用 PRIMATIZED⑧抗體技術開發的IgGl X ,抗CD80單克隆抗體，其降低免 疫原性。可變區源自食蟹獼猴，而恒定區源自人。為了靜脈內注射，加利 昔單抗作為10mmol/L檸檬酸鈉中的無菌產品被配制，其含有150mmol/L 氯化鈉和0.02%聚山梨醇酯80 , pH6.5。
患者具有可測量的疾病(例如，至少一處損傷^ 10 mm )和足夠的血 液、腎臟和肝臟功能。使用加利昔單抗治療患者一個月的時間。在加利昔 單抗的靜脈內輸注之前，患者被事前用藥，其通過使用輸注泵和0.22微米 低蛋白結合濾器的靜脈內輸注(IV )或通過嘴施用50mg苯海拉明，以及 口服施用650 mg醋氨酚。患者每星期接受一次500 mg/i^加利昔單抗，持 續4周。加利昔單抗在門診情況下于一個小時的時間內被施用。加利昔單 抗輸注完成后對患者進行監測至少一小時。抗體劑量在150mL-250 mL的 生理鹽水中被稀釋。如果發生任何Sl級的輸注反應(例如，發熱、寒戰、呼吸困難)，制止加利昔單抗的輸注。在癥狀解除之后，可以之前速率的 一半重新開始輸注。如果患者再次經歷輸注相關的不良事件，則停止加利 昔單抗的輸注并不在當天再次開始。
在施用上述的誘導療法之后，患者按月接受長期的加利昔單抗療法直 到疾病演進。使用輸注泵和0.22微米低蛋白結合濾器，患者每四個星期在 60分鐘內接受500mg/r^劑量的加利昔單抗。如果患者經歷輸注相關的毒 性，則延長輸注時間。對加利昔單抗有響應的患者被允許繼續治療。在第 八個星期然后在每3次加利昔單抗治療(即每12個星期)后，檢查他們 的進展直至疾病演進。從研究中早期撤出的或在48個月的研究期間的最 后還活著的所有患者以6個月的間隔觀查響應的繼續、其他淋巴瘤療法的 起始、存活狀態或死因。加利昔單抗的治療導致提升腫瘤免疫力的腫瘤微 環境中的變化，其包括適應性免疫應答的增強，例如，通過對調節T細胞 抑制的抑制，腫瘤微環境中的免疫調節細胞和/或炎性細胞的減少，支持腫 瘤演進的細胞因子和其他因子的向下調節，腫瘤細胞生長和/或遷移的減 少，腫瘤血管化的減少等。
疾病的評估通過全面的掃描(計算機斷層攝影術、磁共振成像和X射 線)和在基線的物理檢查(研究錄入)在加利昔單抗治療完成后1個月(第 50天X之后第l和2年中每3個月和第3和4年中每6個月進行。使用 由非霍奇金氏淋巴瘤國際工作組響應標準所定義的臨床試驗的標準結果 測量(完全響應、未確認的完全響應、部分響應、穩定型疾病和進展型疾 病)來分析治療的應答。相關的終點包括總響應率、完全緩解率、未確認 的完全緩解率、部分緩解率、響應持續時間和演進時間。另外的效力相關 指標包括腫瘤微環境的變化，如實施例3中所評價。
實施例2.加利昔單抗的藥物代謝動力學分析
在第八個星期和之后每12個星期(只要患者還留在硏究中)輸注加 利昔單抗之前，血清和/或活體解剖樣品的獲得是在輸注前以及輸注完成的 IO分鐘內(第I、 8、 15和22天)c藥物代謝動力學分析包括血漿、腫瘤 塊、腫瘤結節和/或腫瘤引流淋巴結中加利昔單抗的濃度；觀測到的最大濃度(Cmax );達到觀測到的最大濃度的時間；半衰期；以及濃度時間曲線 下面積(AUC)b使用無房室線性回歸法分析數據以使用在研究第1天之 后采集的所有樣品的數據來確定抗體半衰期，其中所述樣品含有超過測定 定量下限的加利昔單抗濃度(250ng/mL >使用線性的/對數的梯形方法計 算并將時間外推至無窮而確定AUC。
實施例3.加利昔單抗對腫瘤微環境中免疫功能的作用
在接受加利昔單抗療法的患者中，在如下時間點獲得血清和/或活體解 剖樣品第1天治療之前，在第4個星期(誘導完成)，在第8個星期， 和之后患者留在研究的持續時間中的每12個星期。活體解剖樣品可以從 腫瘤塊、腫瘤結節和/或腫瘤引流淋巴結中獲得。根據本領域已知的方法測 定樣品中的免疫細胞功能。使用特異性結合感興趣的細胞因子的抗體來確 定細胞因子水平。使用流式細胞分析以及本領域已知的和本文所描述的適 合的分子標志物來對調節T細胞、Th2細胞和巨噬細胞進行定量。對于腫 瘤微環境的分析，首先使用特異性結合腫瘤相關抗原的抗體使惡性細胞從 樣品中耗竭。本領域技術人員可容易地為被治療的惡性腫瘤鑒定適合的腫 瘤相關抗原。通過鑒定CD4+、 CD25hi細胞群體來評估調節T細胞含量， 可選地聯合以下中的一種或多種細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4
(CTLA4 X糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體家族相關的基歐GITR》 CC趨化因子受體4 ( CCR4 X叉頭盒p3 ( F0XP3 X CC趨化因子受體6
(CCR6 X CD30、 CD62Lhi、 CD45RB1。、 CD45ROhi和/或CD45RA-。 Th2 細胞可以是鑒定的TCR+ ( T細胞受體)CD4+、 CD25-細胞。使用生物標志 物對巨噬細胞進行定量，其中所述生物標志物包括TLR5、 FCGR1A、 SEPTIO、 LGMN和/或C3AR1。還可以使用生物標志物來定量巨噬細胞以 計算淋巴細胞相關的巨噬細職LAM )#量，例如，如Farinha等,S/ooJ，2005, 〗06(16).'2169-274所述。通過在活體染料例如二醋酸羧基熒光素(CFSE ) 的存在下培養細胞來測定調節T細胞的增殖。
實施例4.加利昔單抗對T細胞激活的作用
加利昔單抗對正常的人外周血T淋巴細胞的激活的作用通過將CD4+CD25-T細胞與獲自獨立供體的SB淋巴瘤細胞或成熟樹突細胞一起 培養而被確定。在兩種情況下，通過由SB淋巴瘤細胞或成熟樹突細胞表 達的同種異體的主要組織相容性復合體(MHC )蛋白提供對T細胞激活的 刺激。MHC錯配的范圍沒有被進一步表征。
使用標準的菲科-帕克程序(Ficoll-paque procedure )通過密度離心來 分離外周血單核細胞(PBMC )b使用CD4+ T細胞分離試劑盒(Meltenyi Biotec of Aubern ,加利福尼亞州)通過對缺乏CD4表達的所有細胞進行間 接的磁性標記和磁性細胞分離，從PBMC群體中陰性選擇CD4+CD25- T 淋巴細胞。表達CD8、 CD14、 CD16、 CD19、 CD36、 CD56、 CD123、 TCR y/S和CD235a (血型糖蛋白A )的細胞的耗竭產生CD4+T淋巴細胞群體， 所述CD4+ T淋巴細胞對于CD4的表達超過95%陽性。使用CD25微珠II (Meltenyi Biotec of Aubern ，加利福尼亞州)通過陰性選擇使此種CD"T 細胞群體中表達CD25的細胞被進一步耗竭。所有細胞分離物經由流式細 胞術表征以保證所富集的細胞群體的一致性。接著使用可透過細胞的熒光 染料羧基熒光素琥珀酰亞胺酯(CFSE )標記CD4+CD25- T細胞。通過在 2 pg/ml脂多糖的存在下培養PBMC過夜而產生成熟的樹突細胞。接著將 所述細胞沖洗五次并進行外部Y照射(2000拉德)以使細胞不增殖。CFSE 標記的CD4+CD25- T細胞與SB淋巴瘤細胞或成熟的樹突細胞一同培養五 天。在培養物中包含不同濃度的加利昔單抗。此外，為了進行比較，還研 究了阻斷抗體對CD86和CTLA4-Ig的作用。通過對CFSE熒光染料的強 度進行流式細胞術定量來測量CD4+CD25- T細胞增殖，其中所述CFSE熒 光染料在細胞分裂時分布在子細胞之間，導致細胞熒光強度隨著細胞分裂 周期的增加而逐漸減弱。
由SB淋巴瘤細胞或同種異體的樹突細胞誘導的CD4+CD25- T細胞的 增殖在細胞培養物中包含了加利昔單抗之后被顯著地抑制(圖1A-1B )b加 利昔單抗對T細胞增殖的抑制總是比抗CD86或CTLA4-Ig抗體介導的抑 制小。這與作為支持T細胞激活的共刺激分子的CD80和CD86的相關貢 獻一致。這些結果證明，在強的T細胞激活信號(即同種異體刺激)的情 況下，加利昔單抗部分地抑制新生的CD4+CD25- T淋巴細胞的激活，就如T細胞增殖的抑制所表現的。就T淋巴細胞有助于建立腫瘤微環境中存 在的獨特細胞組成而言，這些結果表明，加利昔單抗能夠調控T細胞功能 并因此改變T淋巴細胞對界定腫瘤微環境的貢獻。
實施例5.加利昔單抗對經由激活的T細胞的細胞因子產生的作用
如實施例4中所述分離并培養CD4+CD25- T細胞。使用多重的細胞 計數的珠陣列測定(BD Biosciences of San Jose ,加利福尼亞州)測量T細 胞激活時產生的干擾素-Y和白細胞介素2的水平。簡短地，在第3天從按 照實施例4中所述被建立的培養物中收集培養物上清液，并在多個稀釋度 下測定。通過從同時產生的標準曲線外推而確定濃度(按照制造商的說明 書)b由CD4+CD25-T淋巴細胞與成熟的、同種異體的樹突細胞一起培養 而誘導的干擾素-Y和白細胞介素-2 二者的產生被加利昔單抗顯著地抑制 (圖2A-2B )o加利昔單抗和抗CD86各自抑制干擾素，的產生大約50% (圖2A >>加利昔單抗和抗CD86的組合導致干擾素-Y產生的幾乎完全的 抑制(圖2A )o CTLA4-Ig也展示了干擾素-Y產生的基本完全的抑制，這 與加利昔單抗和抗CD86的疊加效應一致，假設CTLA4-Ig結合并阻斷 CD80和CD86 二者(圖2A》白細胞介素-2的產生展示了加利昔單抗、 抗CD86、 CTLA4-Ig和加利昔單抗加上抗CD86的相似的差異化抑制(圖 2B》這些結果證明，在強的T細胞激活信號(即同種異體刺激)的情況 下，加利昔單抗部分地抑制新生的CD4+CD25- T淋巴細胞的激活，就如 對干擾素-Y和白細胞介素-2產生的抑制所表現的。就T淋巴細胞有助于建 立腫瘤微環境中存在的獨特細胞因子組合而言，這些結果表明，加利昔單 抗能夠調控T細胞功能并因此改變T淋巴細胞對界定腫瘤微環境的貢獻。
實施例6.加利昔單抗對調節T細胞的發育的作用
在離體的共培養系統中研究加利昔單抗對調節T細胞的產生的作用， 在所述培養系統中CD4+CD25+T淋巴細胞與同種異體的SB淋巴瘤細胞一 起培養3天。簡短地，如實施例4中所述分離PBMC并通過實施例4中所 述的陰性選擇進一步純化CD4+細胞。使用CD25微珠II ( Meltenyi Biotec ofAubern ,加利福尼亞州)通過陽性選擇使CD4+CD25+細胞進一步富集。
40通過流式細胞術將調節T細胞作為CD4+CD45RA+CD127-細胞的百分比 來測量，其中所述CD4+CD45RA+CD127-細胞表達高水平的CD25 ,即 CD25hi。據證實，此細胞群體代表FOXP3陽性細胞，其定義調節T細胞 亞群。
CD4+CD25+ T細胞與SB淋巴瘤細胞以1:10的SB:T比的培養導致調 節T細胞被最大誘導至代表測定中CD4+CD45RA+CD127- T細胞的大約 37%和62%的水平(即CD25hi )，其中所述測定使用來自兩種不同供體的 PBMC (圖3A和3B )b使用1:120和1:160的SB:T比分別導致大約16% 和48%的調節T細胞的誘導(圖3A和3B )o在兩種情況下，單獨培養的 T細胞導致了少于5%的調節T細胞(圖3A和3B》相對于同種型匹配的 人IgGl對照抗體， 一個供體(202 )展現了加利昔單抗對調節T細胞誘導 的顯著抑制(圖3A》在這種情況下，加利昔單抗比抗CD86更有效力， 其展現對調節T細胞誘導的抑制水平與用CTLA4-Ig或用加利昔單抗加上 抗CD86觀察到的抑制水平更相似。另一個供體展現了 CTLA4-Ig而非加 利昔單抗對調節T細胞誘導的抑制(圖3B )o這些結果表明，加利昔單抗 能夠抑制調節T細胞的誘導。
實施例7.加利昔單抗對腫瘤微環境中細胞因子產生的作用
為了進一步研究加利昔單抗在腫瘤微環境情況下的潛在作用，建立了 共培養測定以對在不同程度上有助于建立復雜的腫瘤微環境的多種細胞 類型的貢獻建模。
使用標準的菲科-帕克程序通過密度離心來分離PBMC。通過對所有非 CD4+或CD14+細胞進行間接的磁性標記和磁性細胞分離，從PBMC群體 中陰性選擇由CD4+ T淋巴細胞或CD14+單核細胞組成的特定的細胞亞 群。使用CD4+ T細胞分離試劑盒(Meltenyi Biotec , Aubern ,加州)，通 過使表達CD8、 CD14、 CD16、 CD19、 CD36、 CD56、 CD123、 TCR y/S 和CD235a (血型糖蛋白A )的細胞耗竭來分離CD4+ T淋巴細胞至超過 95%的CD4均一性。使用單核細胞分離試劑盒(Meltenyi Biotec of Aubern , 加利福尼亞州)，通過使表達CD3、 CD7、 CD16、 CD19、 CD56、 CD123和CD235a(血型糖蛋白A )的細胞耗竭來分離CD14+單核細胞至超過卯％ 的CD14均一性。所有細胞分離物經由流式細胞術表征以保證所富集的細 胞群體的一致性。在96孔平底微量滴定板中，以每孔200,000個細胞，使 用純化的CD4+ T淋巴細胞和CD14+單核細胞，在含有10% FBS的 RPMI-1640培養基(Invitrogen of Carlsbad ，加利福尼亞州)中培養細胞。 以每孔20,000個細胞培養Raji淋巴瘤細胞系。維持培養物4天，此時收集 培養物上清液。使用多重的細胞計數的珠陣列(BD Biosciences of San Jose ， 加利福尼亞州)測量存在于培養物上清液中的白細胞介素-12 (p70 )、 TNF-a、白細胞介素-10、白細胞介素-6、白細胞介素-1(3和白細胞介素-8 的濃度。純化的人血清骨髓瘤IgGl k( Southern Biotech of Birmingham ，阿 拉巴馬州)被用作加利昔單抗的同種型對照。從人工產生的CHO細胞系 中純化的CTLA4-Ig被用作對照以將完全的阻斷(即CD80和CD86 )與加 利昔單抗介導的CD80特異性阻斷進行比較。脂多糖(Sigma of St. Louis , 密蘇里州)被用作外周血單核細胞激活的陽性對照。
如圖4A-4D中所示，分離培養的CD14+單核細胞展現了白細胞介素-8 和白細胞介素-6的自發的或組成的產生。與CD4+ T細胞或Raji細胞共培 養導致白細胞介素-8和白細胞介素-6產生的減少(圖4A-4D )o加利昔單 抗以及CTLA4-Ig抑制了經由CD14+單核細胞單獨或者與CD4+ T細職1:1 比例)或Raji細胞(10:1比例)一起培養的CD14+單核細胞的白細胞介素 -8和白細胞介素-6的產生(圖4A-4D )b CD4+T纟田胞、CD14+單核細胞和 Raji淋巴瘤細胞(10:10:1比例)的三方共培養(three-way co-culture )清 楚地證明了取決于所有三種細胞類型的存在的不同的生物活性，這由所有 三種細胞類型共培養與任何單個細胞類型或兩種細胞類型的組合組成的 培養相比時的白細胞介素-8和白細胞介素-6的產生的顯著、協同的增強所 證明。在三方共培養中，加利昔單抗顯著地抑制白細胞介素-8和白細胞介 素_6 二者增多的產生(圖4A-4D )b來自一個供體(供體A )的結果顯示， 加利昔單抗在抑制三方共培養中的白細胞介素-8和白細胞介素-6方面與 CTLA4-Ig同樣有效(圖4A-4B )b來自第二個供體(供體B )的結果顯示， CTLA4-Ig展現更強的效力。在供體B中，加利昔單抗抑制了白細胞介素 -8和白細胞介素-6 二者的產生至少50%。在供體B中，加利昔單抗與Raji 細胞組合在一起的CD14+單核細胞的細胞因子產生的方面展現了相似的 效力(圖4C-4D >因此，就供體B來說，CTLA4-Ig的增強的效力只有在 三方共培養條件下是明顯的，其中在所述條件下白細胞介素-8和白細胞介 素-6的產生被顯著地增加。從共培養測定系統中所分析的一個另外的供體(供體C)獲得的細胞 上觀察到了變化(圖4E-4F )b在這種情況下，加利昔單抗或CTLA4-Ig對 白細胞介素-8和白細胞介素-6的產生都沒有任何作用。然而，CD14+單核 細胞產生的自發的白細胞介素-8和白細胞介素-6的水平至少比使用來源于 供體A或供體B的細胞進行的測定中觀察到的水平高一個級數(圖 4A-4D )，如表1中所概述。此外，使用來自供體C的細胞的三方共培養沒 有導致在來自供體A和B的細胞上觀察到的白細胞介素-8的產生的協同增 加，雖然觀察到了白細胞介素-6的產生的協同增加。這些結果證明，加利 昔單抗能顯著地影響在腫瘤微環境中表達的直接和間接地支持腫瘤演進 的那類細胞因子。表l.經由CD14+單核細胞的自發的細胞因子產生供體白細胞介素-8 (pg/ml)白細胞介素-6 (pg/ml)A8244 +/- 3548144+/- 3B1362 +/-3431+/-0C82094 +/- 109831633+/- 530
權利要求
1.一種治療患有惡性腫瘤的受治療者的方法，所述惡性腫瘤包括惡性和非惡性細胞的腫瘤微環境，其中調節T細胞的功能促成或加重所述惡性腫瘤，所述方法包括對所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
2 .如權利要求1所述的方法，其中所述疾病是血液的惡性腫瘤或非血液的惡性腫瘤。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述惡性腫瘤是血液的惡性腫瘤。
4 .如權利要求3所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
5 .如權利要求4所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細胞淋巴瘤。
6 .如權利要求5所述的方法，其中所述B細胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
7 .如權利要求2所述的方法，其中所述惡性腫瘤是非血液的惡性腫瘤。
8 .如權利要求7所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、結腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內分泌腺、甲狀腺、腎上腺、垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經、眼、腦膜的癌癥。
9 .如權利要求1所述的方法,其中所述靶向CD80的治療劑是抗CD80抗體或其CD80結合片段。
10 .如權利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
11 .如權利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體結合的CD80表位結合。
12 .如權利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體競爭結合CD80。
13 .如權利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區的可變區。
14 .如權利要求13所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區。
15 .如權利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的互補決定區(CDR )。
16 .如權利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
17 .如權利要求1所述的方法，其中調節T細胞、Th2輔助細胞或調節T細胞和Th2細胞二者的激活被抑制。
18 .如權利要求1所述的方法，其中調節T細胞、Th2輔助細胞或調節T細胞和Th2細胞二者的增殖被抑制。
19 .如權利要求1所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑阻斷CD80/CD28信號轉導而不阻斷CD80/CTLA4信號轉導。
20 .如權利要求2所述的方法，其中所述腫瘤微環境中的一種或多種炎性細胞因子的產生被減少。
21 .如權利要求20所述的方法，其中所述一種或多種炎性細胞因子選自由白細胞介素-2、白細胞介素-4、白細胞介素-10、白細胞介素-12、轉化生長因子P和干擾素，組成的組。
22 .如權利要求2所述的方法，其中所述腫瘤微環境中的非惡性的表達CD80的細胞被減少。
23 .如權利要求22所述的方法，其中所述表達CD80的細胞是抗原呈遞細胞、源自骨髓的單核細胞或表達Tie-2的單核細胞。
24 .如權利要求2所述的方法，其中經由所述腫瘤微環境的非惡性細胞的一種或多種惡性細胞存活信號的產生被減少。
25 .如權利要求24所述的方法，其中所述一種或多種存活信號選自由CD40/CD40L信號轉導、白細胞介素-1或白細胞介素-6組成的組。
26 .如權利要求2所述的方法，其中對所述惡性腫瘤的免疫力在所述受治療者中被提高。
27 .如權利要求2所述的方法，其還包括向所述受治療者施用抗癌劑，其中所述靶向CD80的治療劑和所述抗癌劑同時地或以任何順序連續地施用。
28 .如權利要求27所述的方法，其中第二治療劑選自由細胞毒素、放射性同位素、化療劑、免疫調控或免疫調節劑、抗血管生成劑、抗增殖劑、促凋亡劑、細胞抑制和細胞溶解酶(例如RNA酶^酶抑制劑(例如蛋白酶體抑制劑)和腫瘤疫苗組成的組。
29 . —種提高受治療者癌癥免疫力的方法，其包括向所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
30 .—種抑制受治療者腫瘤微環境中調節T細胞和Th2輔助細胞激活的方法，其包括向所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
31 .如權利要求30所述的方法，其中所述腫瘤微環境包括血液的或非血液的惡性腫瘤的惡性細胞。
32 .如權利要求31所述的方法，其中所述惡性細胞是血液的惡性腫瘤的細胞。
33 .如權利要求32所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
34 .如權利要求33所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細胞淋巴瘤。
35 .如權利要求34所述的方法，其中所述B細胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
36 .如權利要求30所述的方法，其中所述惡性細胞是非血液的惡性腫瘤的細胞。
37 .如權利要求36所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、結腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內分泌腺、甲狀腺、腎上腺、垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經、眼、腦膜的癌癥。
38 .如權利要求30所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑是抗CD80抗體或其CD80結合片段。
39 .如權利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
40 .如權利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體結合的CD80表位結合。
41 .如權利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與ATCC保藏編號HB-12I19所產生的抗體競爭結合CD80。
42 .如權利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區的可變區。
43 .如權利要求42所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區。
44 .如權利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的互補決定區(CDR )。
45 .如權利要求44所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
46 .如權利要求30所述的方法，借此所述腫瘤微環境中的一種或多種炎性細胞因子的產生被減少。
47 .如權利要求46所述的方法，其中所述一種或多種炎性細胞因子選自由白細胞介素-2、白細胞介素-4、白細胞介素-10、白細胞介素-12、轉化生長因子(3和干擾素-Y組成的組。
48 .如權利要求30所述的方法，借此調節T細胞和Th2輔助細胞的增殖被減少。
49 . 一種抑制受治療者腫瘤微環境中一種或多種炎性細胞因子的產生的方法，其包括向所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
50 .如權利要求49所述的方法，其中所述一種或多種炎性細胞因子選自由白細胞介素-2、白細胞介素-4、白細胞介素-10、白細胞介素-12、轉化生長因子P和干擾素-Y組成的組。
51 .如權利要求49所述的方法，其中所述腫瘤微環境包括血液的或非血液的惡性腫瘤的惡性細胞。
52 .如權利要求51所述的方法，其中所述惡性細胞是血液的惡性腫瘤的細胞。
53 .如權利要求52所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
54 .如權利要求53所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細胞淋巴瘤。
55 .如權利要求54所述的方法，其中所述B細胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
56 .如權利要求52所述的方法，其中所述惡性細胞是非血液的惡性,腫瘤的細胞。
57 .如權利要求56所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、結腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內分泌腺、甲狀腺、腎上腺、;垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經、眼、腦膜的癌癥。
58 .如權利要求49所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑是抗CD80抗體或其CD80結合片段。
59 .如權利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
60 .如權利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體結合的CD80表位結合。
61 .如權利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體競爭結合CD80。
62 .如權利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于;ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區的可變區。
63 .如權利要求62所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區。
64 .如權利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的互補決定區(CDR )。
65 .如權利要求64所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
66 .如權利要求49所述的方法，其中所述腫瘤微環境中的非惡性的表達CD80的細胞被減少。
67 .如權利要求49所述的方法，其中所述表達CD80的細胞是抗原呈遞細胞、源自骨髓的單核細胞或表達Tie-2的單核細胞。
68 . —種使受治療者腫瘤微環境中非惡性的表達CD80的細胞耗竭的方法，其包括向所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
69 .如權利要求68所述的方法，其中所述表達CD80的細胞是抗原呈遞細胞、源自骨髓的單核細胞或表達Tie-2的單核細胞。
70 .如權利要求68所述的方法，其中所述腫瘤微環境包括血液的或非血液的惡性腫瘤的惡性細胞。
71 .如權利要求70所述的方法，其中所述惡性細胞是血液的惡性腫瘤的細胞。
72 .如權利要求71所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
73 .如權利要求72所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細胞淋巴瘤。
74 .如權利要求73所述的方法，其中所述B細胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
75 .如權利要求68所述的方法，其中所述惡性細胞是非血液的惡性腫瘤的細胞。
76 .如權利要求75所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、結腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽嚢、膽管、小腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內分泌腺、甲狀腺、腎上腺、垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經、眼、腦膜的癌癥。
77 .如權利要求68所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑是抗CD80抗體或其CD80結合片段。
78 .如權利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結 合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
79 .如權利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保 藏編號HB-12119所產生的抗體結合的CD80表位結合。
80 .如權利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與 ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體競爭結合CD80。
81 .如權利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于 ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區的可變區。
82 .如權利要求81所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC 保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區。
83 .如權利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC 保藏編號HB-12119所產生的抗體的互補決定區(CDR )。
84 .如權利要求83所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
85 .如權利要求68所述的方法，其中經由所述腫瘤微環境的非惡性 細胞的一種或多種惡性細胞存活信號的產生被減少。
86 .如權利要求85所述的方法，其中所述一種或多種存活信號選自 由CD40/CD40L信號轉導、白細胞介素-1或白細胞介素-6組成的組。
87 . —種治療患有惡性腫瘤的受治療者的方法，所述惡性腫瘤包括惡 性和非惡性細胞的腫瘤微環境，其中非惡性的表達CD80的細胞促成或加 重所述惡性腫瘤，所述方法包括對所述受治療者施用治療有效量的靶向 CD80的治療劑。
88 .如權利要求87所述的方法，其中所述惡性腫瘤是血液的惡性腫 瘤或非血液的惡性腫瘤。
89 .如權利要求88所述的方法，其中所述惡性腫瘤是血液的惡性腫瘤。
90 .如權利要求89所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
91 .如權利要求90所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細胞淋巴瘤。
92 .如權利要求91所述的方法，其中所述B細胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
93 .如權利要求88所述的方法，其中所述惡性腫瘤是非血液的惡性 腫瘤。
94 .如權利要求93所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、 結腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小 腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、 卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內分泌腺、甲狀腺、腎上腺、 垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經、眼、腦膜的癌癥。
95 .如權利要求87所述的方法，其中所述表達CD80的細胞是巨噬細 胞、樹突細胞或源自骨髓的抑制性細胞。
96 .如權利要求87所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑是抗 CD80抗體或其CD80結合片段。
97 .如權利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結 合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
98 .如權利要求％所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保 藏編號HB-12119所產生的抗體結合的CD80表位結合。
99 .如權利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與 ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體競爭結合CD80。
100 .如權利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于 ATCC保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區的可變區。
101 .如權利要求100所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC 保藏編號HB-12119所產生的抗體的可變區。
102 .如權利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC 保藏編號HB-12119所產生的抗體的互補決定區(CDR )。
103 .如權利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
104 .如權利要求87所述的方法，其中所述腫瘤微環境中的一種或多 種炎性細胞因子的產生被減少。
105 .如權利要求104所述的方法，其中所述一種或多種炎性細胞因 子選自由白細胞介素-2、白細胞介素-4、白細胞介素-10、白細胞介素-12、 轉化生長因子p和干枕素-y組成的組。
106 .如權利要求87所述的方法，其中所述腫瘤微環境中的表達CD80 的細胞被減少。
107 .如權利要求87所述的方法，其中經由所述腫瘤微環境的非惡性 細胞的一種或多種惡性細胞存活信號的產生被減少。
108 .如權利要求107所述的方法，其中所述一種或多種存活信號選 自由CD40/CD40L信號轉導、白細胞介素-1或白細胞介素-6組成的組。
109 .如權利要求87所述的方法，其中對所述惡性腫瘤的免疫力在所 述受治療者中被提高。
110 .如權利要求87所述的方法，其還包括向所述受治療者施用抗癌 劑，其中所述靶向CD80的治療劑和所述抗癌劑同時地或以任何順序連續 地施用。
111 .如權利要求110所述的方法，其中第二治療劑選自由細胞毒素、 放射性同位素、化療劑、免疫調控或免疫調節劑、抗血管生成劑、抗增殖 劑、促凋亡劑、細胞抑制和細胞溶解酶(例如RNA酶、酶抑制劑(例如 蛋白酶體抑制劑)和腫瘤疫苗組成的組。
全文摘要
提供了包括靶向CD80的治療劑的組合物和使用這些組合物的方法，以治療疾病或病癥，在所述疾病或病癥中表達CD80的細胞或調節T細胞的功能促成或加重相關的病理學。
文檔編號A61P35/00GK101679522SQ200880017793
公開日2010年3月24日 申請日期2008年3月28日 優先權日2007年3月28日
發明者A·莫里納, K·哈利哈蘭, S·坦格里, S·赫, T·云 申請人:拜奧根Idec公司