專利名稱：一種從西洋參中提取人參皂甙Rb₁的方法及其粉針劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種從西洋參中提取人參皂甙Rt^的方法及用人參皂甙Rbl制成的用 于治療心腦血管疾病的粉針劑，屬于制劑領域。
背景技術：
西洋參又稱花旗參，為五加科植物西洋參Panax quinquefoli咖L.的干燥根。原 產于美國及加拿大，我國已引種成功，形成規?；a，稱為國產西洋參，西洋參已首次收 入中華人民共和國藥典2000版一部99頁。其性味與歸經為甘、微苦，涼，歸心、肺、腎經。其 功能與主治為補氣養陰，清熱生津，用于氣虛陰虧，內熱，咳喘痰血，虛熱煩倦，消渴，口燥咽 干。西洋參的主要有效單體成分是人參皂甙Rlv 中國發明專利ZL200310100461. 8公開了"西洋參總皂甙提取新工藝及其粉針劑"; 中國發明專利CN1072089(申請號92111985)公開了"吸附樹脂法提取中藥復方有效部分"; 《吉林中醫藥》2006年第07期發表了 "西洋參皂苷Rl^分離、純化工藝的研究"；《天然產物 研究與開發》2008年02期發表了 "從西洋參中提取分離純化人參皂苷R_(b》和人參皂苷 R_e的研究"；《河北醫學》2001年第九期發表了 "大孔吸附樹脂法提取西洋參總皂甙工藝 探討"；《中國藥學雜志》1997年第IO期發表了"西洋參二醇組皂甙注射液的研制及臨床研 究"。上述專利和文獻報道所采用的提取工藝都是常規水提取，包括溫水提取，然后用吸附 樹脂法純化，耗時、耗能且提取轉移率也不高。在從西洋參總皂甙中分離純化人參皂苷Rt^ 時，采用的是單用有機溶劑重結晶或硅膠層析單柱分離洗脫的工藝，存在使用大量有機溶 劑分離效率低且耗時，影響人參皂苷Rbi的回收率，工業化生產有一定難度。
技術內容 本發明的一個目的是公開一種從西洋參中提取人參皂甙Rl^的方法，該方法可節
約能源和時間，減少對環境的污染，使提取物中的人參皂甙Rt^的含量進一步提高，處理量
增大，有利于工業化生產。 本發明的另一個目的是公開一種人參皂甙Rt^的粉針劑，該粉針劑質量更為穩定。
本發明所述的從西洋參中提取人參皂甙Rl^的制備方法包括如下步驟
步驟1.取西洋參粉碎成細粉，用8-12倍的水浸泡，浸泡時間為10-60分鐘后，用 超聲波振蕩提取1-3次，每次20-50分鐘，濾過，合并濾液； 步驟2.濾液通過大孔吸附樹脂柱，吸附完畢用水洗滌至流出液澄清，再用堿性無
機鹽的水溶液，堿的濃度為o. l-5^，進行洗滌，至洗出液澄清，再用水洗滌至ra為5-7 ;用
20_95%的乙醇洗脫，洗脫劑用量為樹脂用量的1-5倍； 步驟3.收集洗脫液，濃縮，干燥，即得西洋參總皂苷提取物； 步驟4.采用模擬移動床色譜工藝從西洋參總皂苷提取物中分離純化人參皂苷 Rbl單體。 所述步驟1中，浸泡所用水的溫度為常溫。 所述步驟1中，超聲波振蕩提取的頻率為26-80kHz。
所述步驟2中，吸附樹脂用量為藥材重量比的0. 5-3倍；樹脂型號為JD-1 (WLD); 或D-101、D-201、XAD-4中任一種。 上述制備方法中，堿性無機鹽的水溶液可以為氫氧化鈉或碳酸鈉等無機鹽。
所述步驟4中用模擬移動床色譜工藝從西洋參總皂苷提取物中分離純化人參皂 苷Rt^單體的方法為
A.設備特征 該系統由洗脫泵、進樣泵、萃取泵、流量計、色譜柱、電磁閥、單向閥和可編程邏輯 控制器及電腦組成；洗脫泵流量0-1000ml/min，壓力0-lOmpa ;進樣泵流量0-30ml/min，壓力0_8mpa ; 萃取泵流量0-100ml/min，壓力0-lOmpa ;工作溫度20-25。C。
色譜柱填料填料為反相硅膠ODS，填料粒度30-40um ;
B.分離步驟 ①配制樣品液將步驟3所得西洋參總皂苷提取物溶于甲醇中，沉降，O. 45 m濾 膜過濾，濾液濃度0-10g/ml，備用； ②流動相的配制V甲醇V水二 40-55 : 60-45; ③模擬移動床色譜參數解吸段3根柱，精制段3根柱，吸附段2根柱；進樣流速 Uf = 3-4ml/min ;洗脫泵流速Ud = 50_70ml/min ;萃取液流速Ue = 20_40ml/min ;殘余液 流速Ur = 10-12ml/min ;切換時間ts = 5-7min。
濃縮將模擬移動床流出的殘余液用薄膜旋轉蒸發器在65t:濃縮至干，用甲醇 洗出，真空65t:干燥至恒重，即為模擬移動床制備出的產品； D.重結晶將上述產品按lg加正丁醇5ml比例超聲溶解，過濾，濾液干燥后得白 色粉末，即為純化了的人參皂苷Rbi單體。 本發明的另一個目的是公開一種用人參皂甙Rl^制備粉針劑的制備方法
1、噴霧干燥法 取本發明分離的人參皂甙Rb"在100級以下的車間內加入5-25倍的水，40—9(TC 攪拌溶解，加入適量水溶性藥用輔料，調節PH為5. 5-8. 5，藥液無菌過濾，無菌噴霧干燥，無 菌分裝，即得； 上述制備方法中，水溶性藥用輔料還可以為低分子右旋糖酐、葡萄糖、乳糖、氯化
鈉、氯化鈣等； 2、冷凍干燥法 取本發明分離的人參皂甙Rb"在100級以下的車間內加入5-25倍的水，40—9(TC 攪拌溶解，加入適量水溶性藥用輔料，調節PH為5. 5-8. 5，藥液無菌過濾，無菌分裝，無菌冷 凍干燥，熔封，即得；
3、一步干燥法 取本發明分離的人參皂甙Rbp移入100級以下的車間，加入適量注射用水和輔料， 調節好PH值，無菌過濾，噴霧干燥或冷凍干燥，即得； 按上述粉針劑制備方法，將50mg人參皂甙Rt^制成規格為50mg/2ml西林瓶中，或 2ml安瓿中，或者100mg人參皂甙Rt^制成規格為100mg/2ml西林瓶中，或2ml安瓿中。
本發明對從西洋參中提取人參皂甙Rt^進行了創新性研究。 一是變飲片為細粉，以利于藥物的提??；二是變煮沸為常溫浸泡，節約了能源，且提高了提取率；三是用超聲波 振蕩提取，大大節約能源，時間和西洋參總皂甙包括人參皂甙R^的提取轉移率；四是在吸 附完畢洗滌柱子時，用了無機洗滌劑，使提取物中總皂甙含量大大提高。五是模擬移動床色 譜工藝從西洋參總皂苷提取物中分離純化人參皂苷Rt^單體，使分離純化工藝操作簡單，處 理量增大，耗時減少。本發明粉針劑制劑更為穩定，運輸和貯存更為方便。
下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。
實驗例1 :超聲波振蕩提取與溫水浸泡提取工藝比較
方法1 :溫水浸泡提取+大孔吸附樹脂 取產地吉林5g以下長枝的西洋參，研為粉末，過100目篩，并檢測人參皂甙Rbl的 含量，各取50g，分別編號為1和2號。取1號粉，用40倍9(TC的水浸泡1小時，水浴保溫， 不時攪拌，靜置1小時，濾過。濾液通過1. 5倍量大孔吸附樹脂(型號D-lOl凈品型批號 070305產品標準津Q、HG3790-91天津市海光化工有限公司出品)，吸附完畢后，用水洗至 無色，再用0. 5%的NaOH溶液洗至無色，并用水洗至中性，再用4倍樹脂量的70%乙醇洗 脫，洗脫液回收乙醇，濃縮，減壓干燥，得西洋參總皂甙提取物1號。
方法2 :超聲波提取+大孔吸附樹脂 另取2號粉，用IO倍常溫的水浸泡15min后，用超聲波(超聲波藥品處理機《第 四代》頻率26KHz、47KHz、70KHz濟寧金百特電子有限責任公司出品)提取3次，提取頻率 26KHz，每次30分鐘，濾過，合并濾液；濾液通過l. 5倍量大孔吸附樹脂，吸附完畢后，用水洗 至無色，另用0. 5%的NaOH溶液洗至無色，并用水洗至中性，最后用4倍樹脂量的70%乙醇 洗脫，洗脫液回收乙醇，濃縮，減壓干燥，得西洋參總皂甙提取物2號。 以上實驗重復3次，取3次平均數。經檢測人參皂苷Rl^含量(％)，結果見表1。
表1超聲波振蕩提取與溫水浸泡提取工藝比較
提取工藝-提取物編號提取轉移率(％) (N=3)人參皂苷Rb,含量(％)方法1一-1號68.742. 6
方法2—-2號79.451.6 本實驗將西洋參飲片提取，改為用西洋參經粉碎后的細粉提取，使其接觸溶媒的 表面積顯著提高，西洋參總皂甙，人參皂甙Rt^等活性成分更易溶于溶媒中，以利提高其提 取率。更意想不到的是，將煮沸提取或溫水浸泡提取的方法改變為常溫浸泡后用超聲波振
蕩提取的工藝顯著提高了西洋參總皂甙包括人參皂甙的提取轉移率。
實驗例2 :大孔吸附樹脂工藝研究 方法1 :取產地吉林5g以下長枝的西洋參，研為粉末，過100目篩，并檢測人參皂 甙Rbl的含量。各取50g，分別編號為2-l和2-2號。取2-l號粉，用IO倍常溫的水浸泡 15min后，用超聲波(超聲波藥品處理機《第四代》頻率26KHz 、47KHz 、 70KHz濟寧金百特電子 有限責任公司出品，下同)提取3次，提取頻率26KHz，每次30分鐘，濾過，合并濾液；。濾液 通過1. 5倍量大孔吸附樹脂(型號D-lOl凈品型批號070305產品標準津Q、HG3790-91 天津市海光化工有限公司出品，下同)，吸附完畢后，用水洗至無色，再用4倍樹脂量的70% 乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇，濃縮，減壓干燥，得西洋參總皂甙提取物2-1號。
方法2 :另取2-2號粉，用10倍常溫的水浸泡15min后，用超聲波提取3次，提取頻
5率26KHz，每次30分鐘，濾過，合并濾液；濾液通過1. 5倍量大孔吸附樹脂，吸附完畢后，用
水洗至無色，另用0. 5X的Na0H溶液洗至無色，并用水洗至中性，最后用4倍樹脂量的70%
乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇，濃縮，減壓干燥，得西洋參總皂甙提取物2-2號。以上實驗重復
3次，取3次平均數。經檢測人參皂苷Rbl含量(％)，結果見表2。 表2用含有堿性的無機鹽的水溶液洗滌吸附柱與不洗滌吸附柱的工藝比較
提取工藝_提取轉移率(％) (N=3) 人參皂苷Rb,含量(％) (N=3)
方法l:超聲波提取+大孔吸附樹脂+不用堿溶液洗滌 72.3 46.5 吸附柱
方法2:超聲波提取+大孔吸附樹脂+用堿溶液洗滌吸 79.4 51.6
附柱_ 實驗例3 :模擬移動床色譜工藝從西洋參總皂苷提取物中分離純化人參皂苷Rl^ 單體的 在從西洋參總皂甙提取物中分離，純化人參皂苷Rl^單體的工藝過程中，我們采用 的是模擬移動床色譜，真空濃縮蒸干和重結晶工藝來得到人參皂苷R^單體的。該工藝具 有分離效率高，易工藝放大，潔凈環保的優點。 由于模擬移動床系統是一個非線性，非理想的多自由度系統，產品的純度與收率 取決于對這一非線性的多自由度系統的參數優化與選擇。以下是對幾個重要參數的優化與 選擇 ①流動相配比的選擇
表3流動相配比的選擇
V (甲醇):V (水)
Rb,收率(%)30: 7040: 6045: 5550: 5055: 45
4683898675 從表3可見，甲醇體積分數低時，人參皂苷Rl^收率很低，甲醇體積分數高時，分離 能力差，當V(甲醇)V(水)=45 : 55時人參皂苷Rl^收率最高，故將流動相配比定為 45 : 55。 ②進樣中人參皂苷質量濃度的選擇
表4進樣中人參皂苷質量濃度的選擇
進樣量0. 050.100. 150. 200. 250. 300. 35
P (Rb,) / (g/ral)
Rb,收率A85.287.588.389.584. 179.675. 2 從表4可見，進樣中人參皂苷質量濃度為0. 2g/ml時Rl^收率最高，故將其選擇為 進樣中人參皂苷質量濃度。
③切換時間的選擇
表5切換時間的選擇
6
切換時間/min"(Rb,)/%456789
78.484. 189.688.379.975.1 從表5可見，切換時間過短，前雜質沖洗不夠，被帶入產品中而降低人參皂苷Rbi
的純度。切換時間太長，又會將人參皂苷R^帶入前雜質中，使流出物中人參皂苷Rl^的純
度降低，后雜質增多。當切換時間為6min時，人參皂苷Rl^的純度最高，且其收率未受明顯
影響，故將切換時間選定為6min左右。 ④洗脫流速的選擇 表6洗脫流速的選擇
洗脫流速/ (ml/min)Rbl的收率/%4050 60708090
72. 789. 4 88. 278. 175.272.8 從表6可見，洗脫流速較低時，快組分沖洗程度不夠，產品中帶入雜質，影響了人參皂苷Rt^的收率。洗脫流速過大，部分人參皂苷Rt^會從雜質出口流出，使人參皂苷Rt^的收率和純度都受到影響。當洗脫流速為60ml/min時，人參皂苷Rl^的收率最高，故規定洗脫流速為60ml/min。 下述實施例均能實現上述實驗例的效果。
具體實施例方式實施例1 :人參皂苷Rt^制法 取西洋參粉碎成細粉，用8-12倍的水浸泡，每次浸泡時間為10-20分鐘后，用超聲波振蕩提取1-3次，每次20-50分鐘，超聲波振蕩提取的頻率為26-80kHz，濾過，合并濾液，藥液通過1. 5倍量的大孔吸附樹脂柱，型號為JD-1 (WLD)，吸附完畢，用水洗滌，另用0. 5 %的氫氧化鈉溶液洗滌，再用水洗滌至中性，用樹脂4倍量的70 %乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，即得西洋參總皂苷提取物。將所得西洋參總皂苷提取物溶于甲醇中，沉降，0.45iim濾膜過濾，濾液濃度0-10g/ml，備用。流動相的配制V甲醇V水二 45 : 55。模擬移動床色譜參數解吸段3根柱，精制段3根柱，吸附段2根柱。進樣流速Uf = 3-4ml/min ;洗脫泵流速Ud = 50-70ml/min ;萃取液流速Ue = 20-40ml/min ;殘余液流速Ur =10-12ml/min ;切換時間ts = 5-7min ;殘余液即為模擬移動床色譜的產品。濃縮將模擬移動床流出的殘余液用薄膜旋轉蒸發器在65t:濃縮至干，用甲醇洗出，真空65t:干燥至恒重，即為模擬移動床制備出的產品。重結晶將上述產品按lg加正丁醇5ml比例超聲溶解，過濾，濾液干燥后得白色粉末，即為純化了的人參皂苷Rl^單體。用高效液相色譜儀測定純度后，備用。 實施例2 :人參皂苷Rl^噴霧干燥粉針劑 取人參皂苷Rbi單體提取物在100級以下的車間內加入20倍的水，于6(TC攪拌溶
7解，加入5%低分子右旋糖酐，調節HI為6-7，藥液無菌過濾，無菌噴霧干燥，無菌分裝于2ml
西林瓶中，每支含人參皂苷Rb^Omg，即得。 實施例3 :人參皂苷Rl^冷凍干燥粉針劑 取人參皂苷Rl^單體在100級以下的車間內加入7倍的水，于6(TC攪拌溶解，加入 5%低分子右旋糖酐，調節ra為6-7，藥液無菌過濾，無菌分裝在2ml安瓿內，冷凍干燥，熔 封，每支安瓿含人參皂苷Rb^Omg，即得。
實施例4 :人參皂苷Rl^ —步干燥粉針劑 取西洋參粉碎成細粉，用8-12倍的水浸泡，每次浸泡時間為10-20分鐘后，用超聲 波振蕩提取1-3次，每次20-50分鐘，超聲波振蕩提取的頻率為26-80kHz，濾過，合并濾液， 濾液通過藥材1. 5倍量的大孔吸附樹脂柱，型號為JD-1 (WLD)，吸附完畢，用水洗滌，繼用 0. 5 %的氫氧化鈉溶液洗滌，使雜質徹底去除后，用水洗滌至中性，用樹脂4倍量的70 %乙 醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，即得西洋參總皂苷提取物。將所得西洋參總皂苷提取物溶 于甲醇中，沉降，0.45iim濾膜過濾，濾液濃度0-10g/ml，備用。流動相的配制V甲醇V水 =45 : 55。模擬移動床色譜參數解吸段3根柱，精制段3根柱，吸附段2根柱。進樣流速 Uf = 3-4ml/min ;洗脫泵流速Ud = 50-70ml/min ;萃取液流速Ue = 20-40ml/min ;殘余液流 速Ur = 10-12ml/min ;切換時間ts = 5-7min ;殘余液即為模擬移動床色譜的產品。濃縮 將模擬移動床流出的殘余液用薄膜旋轉蒸發器在65t:濃縮至干，用甲醇洗出，真空65t:干 燥至恒重，即為模擬移動床制備出的產品。重結晶將上述產品按lg加正丁醇5ml比例超 聲溶解，過濾，濾液采用冷凍干燥或真空濃縮蒸干工藝所得到的白色粉末，即為純化了的人 參皂苷R^單體。用高效液相色譜儀測定純度后，備用； 將人參皂苷Rbi單體移入100級以下的車間，加入適量注射用水和輔料，調節好PH 值，無菌過濾，濾液噴霧干燥，分裝于2ml西林瓶內，每支西林瓶含人參皂苷Rb^Omg，軋蓋， 即得；或濾液分裝，冷凍干燥，熔封，每支安瓿含人參皂苷Rh50mg，即得。
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權利要求
一種從西洋參中提取人參皂甙Rb1的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟步驟1.取西洋參粉碎成細粉，用8-12倍的水浸泡，浸泡時間為10-60分鐘后，用超聲波振蕩提取1-3次，每次20-50分鐘，濾過，合并濾液；步驟2.濾液通過大孔吸附樹脂柱，吸附完畢用水洗滌至流出液澄清，再用堿的濃度為0.1-5％的堿性無機鹽的水溶液進行洗滌，至洗出液澄清，再用水洗滌至PH為5-7；再用20-95％的乙醇洗脫，洗脫劑用量為樹脂用量的1-5倍；步驟3.收集洗脫液，濃縮，干燥，即得西洋參總皂苷提取物；步驟4.采用模擬移動床色譜工藝從西洋參總皂苷提取物中分離純化人參皂苷Rb1單體。
2. 如權利要求1所述的方法，其特征在于該方法步驟1中浸泡所用水的溫度為常溫。
3. 如權利要求1所述的方法，其特征在于該方法步驟1中超聲波振蕩提取的頻率為 26-80kHz。
4. 如權利要求1所述的方法，其特征在于該方法步驟2中吸附樹脂用量為藥材重量比 的0. 5-3倍。
5. 如權利要求1所述的方法，其特征在于該方法步驟2中堿性無機鹽的水溶液可以為 氫氧化鈉或碳酸鈉。
6. 如權利要求1-5所述的任意一種方法，其特征在于該方法步驟4中用模擬移動床色 譜工藝從西洋參總皂苷提取物中分離純化人參皂苷R^單體的方法中樣品液配制將步驟3所得西洋參總皂苷提取物溶于甲醇中，沉降，0. 45iim濾膜過濾， 濾液濃度0-10g/ml，備用；流動相的配制甲醇:水=4540-55 : 5560-45 ;模擬移動床色譜參數解吸段3根柱，精制段3根柱，吸附段2根柱；進樣流速Uf =3-4ml/min ;洗脫泵流速Ud = 50-70ml/min ;萃取液流速Ue = 20-40ml/min ;殘余液流速Ur =10-12ml/min ;切換時間ts = 5-7min ;濃縮將模擬移動床流出的殘余液用薄膜旋轉蒸發器在65t:濃縮至干，用甲醇洗出， 真空65t:干燥至恒重，即為模擬移動床制備出的產品；重結晶將上述產品按lg加正丁醇5ml比例超聲溶解，過濾，濾液干燥后得白色粉末， 即為純化了的人參皂苷Rt^單體。
7. 如權利要求6所述的方法，其特征在于人參皂甙Rl^在100級以下的車間內加入 5-25倍的水，40—9(TC攪拌溶解，加入適量水溶性藥用輔料，調節ffl為5. 5_8. 5，藥液無菌 過濾，無菌噴霧干燥，無菌分裝，制成粉針劑。
8. 如權利要求6所述的方法，其特征在于人參皂甙Rl^在100級以下的車間內加入 5-25倍的水，40-9(TC攪拌溶解，加入適量水溶性藥用輔料，調節PH為5. 5_8. 5，藥液無菌過 濾，上述無菌過濾后的藥液，無菌分裝，無菌冷凍干燥，熔封，制成粉針劑。
9. 如權利要求6所述的方法，其特征在于人參皂甙Rl^移入100級以下的車間，加入適 量注射用水和輔料，調節好PH值，無菌過濾，噴霧干燥或冷凍干燥，制成粉針劑。
全文摘要
本發明公開了一種從西洋參中提取人參皂甙Rb1的方法，該方法為將西洋參粉碎成細粉，水浸泡，用超聲波振蕩提取，濾液通過大孔吸附樹脂柱，收集洗脫液，濃縮，干燥，采用模擬移動床色譜工藝從西洋參總皂苷提取物中分離純化人參皂苷Rb1單體；本發明的方法可節約能源和時間，減少對環境的污染，使提取物中的人參皂甙Rb1的含量進一步提高，處理量增大，有利于工業化生產。
文檔編號A61P9/00GK101781351SQ20091007726
公開日2010年7月21日 申請日期2009年1月21日 優先權日2009年1月21日
發明者唐賢俊 申請人:重慶華森制藥有限公司;成都華森藥物高新技術有限公司