專利名稱：三肽硼酸(酯)類化合物、其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及藥品生產領域，具體的，本發明涉及一類新的三肽硼酸(酯)類化合 物、其制備方法和應用，所述的三肽硼酸(酯)類化合物具有很好的蛋白酶體抑制活性，可 用于各種基因疾病，如惡性腫瘤、多種神經系統變性疾病、肌肉惡病質、糖尿病等疾病的治療。
背景技術：
2004年10月6日，瑞典皇家科學院宣布，將本年度的諾貝爾化學獎授予以色列科 學家Aaron Ciechanover, Avram Hershko和美國科學家IrwinRose，因為他們共同發現了 泛素(ubiquitin)-蛋白酶體(proteasome)(以下簡稱UPP)調節的蛋白降解過程。這說明 泛素_蛋白酶體降解蛋白質這一途徑在生命領域具有非凡的意義。泛素(簡稱Ub)是一個由76個氨基酸組成的高度保守的多肽鏈，分子量約 為8.5kD。很多分子、生物化學、細胞、遺傳和臨床研究表明，泛素-蛋白酶體降解蛋白 質這一過程對很多生理過程的調控以及人類許多重要疾病的發展過程都起到非常重要 的作用。近期發現，這一過程還對神經退行性疾病、肌萎縮側索硬化癥(Amyotrophic Lateral Sclerosis, ALS)、阿爾茨海默病(Alzheimer， disease, AD)、帕金森病 (Parkinson，disease, PD)、亨廷頓舞蹈病(Huntington，disease, HD)、皮質-紋狀體-脊 髓變性病(Creutzfeld-Jacob disease, CJD)以及糖尿病的發病都有很大的影響。已經知道，蛋白酶體能調控參與細胞周期控制的蛋白質的水平，如作用于Gl期和 有絲分裂期的周期素、cdk抑制劑、腫瘤抑制因子蛋白及其它調控蛋白。目前已證實UPP依 賴的蛋白降解途徑在控制細胞繁殖和細胞死亡方面起著重要的作用，而且這一途徑還對神 經系統退行性疾病如PD、AD等有重大的影響。使用新的抑制劑將會揭示泛素蛋白酶體更多 新的未知功能。目前已發現的蛋白酶體抑制劑可分為肽類和非肽類兩類。肽類抑制劑通常是由短 肽及其C末端連接的各種藥效團構成。其中，藥效團與蛋白酶體上起催化作用的氨基酸殘 基(主要是N端蘇氨酸上的羥基)反應生成可逆或不可逆的共價復合物，而肽鏈的其它部 分則選擇性地與亞基活性部位的其余殘基結合。目前，主要的藥效團有醛基(肽醛類)、乙 烯基砜、硼酸(肽硼酸類)以及α ’，β ’ -環氧化酮等。與肽醛類抑制劑相比，肽硼酸類抑制劑更具有成藥性，因為這類化合物的藥效團 硼酸基或硼酸酯基的穩定性和選擇性比醛基好，而且硼類物質的毒性非常低，它們可以最 終降解為環境友好的硼酸。例如，PS341，英文名Bortezomib或VELCADE，中文名硼替佐米，
又稱為萬珂，其結構為 是一種二肽硼酸類抑制劑，由美國千年制藥公司(MillenniumPharmaceuticals) 開發的新型抗腫瘤藥物，已在美國、歐盟和我國上市，主要用于治療至少接受過二種以上療 法的多發性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)。該藥是目前全球唯一批準用于臨床治療的蛋 白酶體抑制劑，它能克服傳統抗癌藥物的耐受性，為多發性骨髓瘤的治療帶來希望。USP5, 780，454公開了新的硼酸酯類化合物P-AA1-AA1-AA3-B^1) (Z2)，其中包括 三肽硼酸酯類化合物，但僅公開了少量三肽類化合物，而且所述三肽的結構只有兩類 L-Leu-L-Leu-L-Leu或L-Leu-L-Nal-L-Leu ；該專利提供的數據表明，其中二肽類化合物的 活性優于三肽類化合物。另據美國專利(5，693，617)報道，三肽醛類化合物是一類活性很好的蛋白酶體抑 制劑。但是這類抑制劑由于其藥效團為醛基，使得它們的選擇性和穩定性都非常差。在此基礎上，本發明人通過研究發現一類新的三肽的硼酸(酯)類化合物具有更 好的蛋白酶體抑制活性。

發明內容
本發明的目的是提供一種新的、具有下述通式(I)結構的三肽硼酸(酯)類化合 物 其中，R1^R2和R3各自獨立的為L-氨基酸側鏈，E為H或2，3-菔烷二醇酯基。其 中所述的氨基酸為α “氨基酸，優選所述的氨基酸是天然氨基酸。優選的，R1, R2和R3各自獨立的為CV6的直鏈或支鏈烷基、芳基甲基或芳雜環基甲 基，其中在芳基甲基或芳雜環基甲基的芳環上可任選的被選自Cy的直鏈或支鏈烷基、羥 基、氨基或鹵素的基團所取代。在本發明化合物定義中，所用的術語"(V6的直鏈或支鏈烷基”是指含有1-6個碳 原子的、直鏈或支鏈的飽和烴基；優選具有3-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如丙基、異 丙基、丁基、異丁基或叔丁基等，更優選異丙基、異丁基或叔丁基；最優選異丁基。類似地，所 用的術語"(V4的直鏈或支鏈烷基”是指含有1-4個碳原子直鏈或支鏈的飽和烴基，例如甲 基、乙基、丙基、異丙基、異丁基或叔丁基等，優選甲基。所用的術語“芳基”是指具有6-10個碳原子的芳香族基團，優選苯基或萘基。所用的術語“芳雜環基”是指含有選自N、0、S的雜原子的五員或六員環，且所述的 五員或六員環還可與苯環稠合；例如吡咯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吲哚基、苯并噻吩基、喹啉基或異喹啉基等，更優選的芳雜環基為吲哚基。上述定義中，在芳基甲基或芳雜環基甲基的芳環上可任選的被選自Cy的直鏈或 支鏈烷基、羥基、氨基或鹵素的基團所取代，其中所使用的術語“鹵素”是指氟、氯、溴和碘原 子，優選為氟、氯或碘原子；所述芳環上的取代基優選是甲基、羥基、氟或氯原子。優選的，其中所述的禮、R2和R3各自獨立的為苯甲基、對羥基苯甲基、β -吲哚基 甲基、異丁基或2-萘基甲基等L-氨基酸側鏈，更優選所述的R3基團是異丁基。根據上述定義，本發明化合物結構中的三肽結構部分的三個氨基酸優選的是下述 L-氨基酸的任意組合亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和2-萘基丙氨酸；更優選的，其中 所述的R3基團是異丁基，即最靠近硼酸(酯)一端的氨基酸是亮氨酸。優選的，本發明提供了下述化合物UN-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5a)，2、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5b)，3、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5c)，4、N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷5、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷6、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷7、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5g)，8、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5h)，9、N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5i)，
\1/ \1/ \1/ d θ f
5 5 5
/. /. /.
匕日 匕日 匕日
酉酉酉
醇醇醇 .1 - 1 ^10、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-色氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(5j)，
11、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(5k)，
12、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L--亮丙氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(51)，
13、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(5m)，
14、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-苯丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6a)，
15、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-苯丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6b)，
16、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-酪氨酰-L--亮氨硼酸(6c)，
17、N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L--苯丙氨酰-L--亮氨硼酸(6d)，
18、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L--苯丙氨酰-L--亮氨硼酸(6e)，
19、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L--萘丙氨酰-L--亮氨硼酸(6f)，
20、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-萘丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6g)，
21、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-萘丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6h)，
22、N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L--苯丙氨酰-L--亮氨硼酸(6i)，
23、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-色氨酰-L--亮氨硼酸(6 j)，
24、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸(6k)，
25、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L--亮丙氨酰-L--亮氨硼酸(61)，和
26、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸(6m) ο其中括號中的編號為該化合物在本發明的描述中所使用的編號。本發明的另一目的是提供了一種上述通式化合物的制備方法，該方法包括以吡嗪 甲酸為起始原料，依次引入二種所需的氨基酸，然后引入所需第三個氨基酸的硼酸酯，可得到本發明上述通式的硼酸酯類化合物；如果需要制備相應的硼酸化合物，可將上述硼酸酯 化合物水解。其中所述的R3基團是異丁基，即最靠近硼酸(酯)一端的氨基酸是亮氨酸的通式 化合物可以吡嗪甲酸為起始原料，按照下述合成路線制備 在上述方法中主要包括逐個引入氨基酸的步驟，而每一引入氨基酸的步驟包括首 先與所述氨基酸的甲酯反應，然后再水解得到相應的氨基酸化合物，上述引入氨基酸的過 程可按照肽合成反應中常規的方法進行。其中所用的原料亮氨酸硼酸酯(在本文中簡稱為LeuBdiol-NH2)可按照文獻 中公開的方法(Hall, D. G. , Structure, properties, andpreparation of boronic acid derivatives, WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KgaA，Weinheim. 2005，p8)制備；也可按照下
述合成路線制備 其中所使用的原料順式手性菔烷二醇〔(1S，2S，3R，5S) -2，6，6-三甲基二環 [3. 1. 1]庚烷_2，3-二醇〕是一種立體位阻較大的、非常有效的手性試劑。該試劑可在市場 上買到，也可以用現有技術已知的方法合成。
本發明的另一目的是提供了一種藥物組合物，該藥物組合物是一種蛋白酶體抑制 劑，可用于治療由蛋白酶體介導的疾病，例如可用于治療惡性腫瘤、多種神經系統變性疾 病、肌肉惡病質或糖尿病等。該組合物以本發明的通式(I)的三肽硼酸(酯)類化合物為 活性成分，其中還可以任意地含有藥用載體。具體的，該組合物含有治療有效量的本發明通式⑴化合物，以及一種或多種藥 學上可接受的載體。優選的，本發明組合物中活性成分的含量是0.5%-99%，藥用載體的 含量是-99. 5%。本發明的組合物可以制成各種常規的藥用劑型，例如制成口服、腸胃外給藥的形 式，所述腸胃外給藥的形式例如是各種注射給藥、局部給藥、吸入給藥、直腸給藥或植入給 藥的形式。優選注射給藥形式，例如注射劑、凍干粉針制劑或輸液劑型；或口服給藥形式，例 如是片劑、膠囊、顆粒劑或其它適于口服的液體制劑形式如溶液、乳液、懸浮劑等。優選的口 服制劑是片劑，所述片劑可以制成包衣或腸溶形式，優選所述的口服制劑被制成緩釋或定 量釋放的形式。為了制備適用的劑型，可根據需要在活性成分中添加一種或多種藥用載體，所述 的藥用載體包括各種常規的藥用輔劑，例如賦形劑、填充劑、稀釋劑、崩解劑、表面活性劑、 濕潤劑、防腐劑、甜味劑、色素等。根據疾病的類型、嚴重的程度以及患者的狀況，例如性別、年齡、體重等選用合適 的劑型和施用劑量，通常成人施用劑量在l-200mg/kg體重/天，優選為l-50mg/kg體重/ 天之間。本發明的藥用組合物和該組合物的各種制劑可按照制藥領域已知的常規方法、使 用常規的藥用載體制備。本發明的三肽硼酸(酯)類化合物對蛋白酶體具有良好的抑制活性，可作為一種 新的蛋白酶體抑制劑使用，用于治療惡性腫瘤、多種神經系統變性疾病、肌肉惡病質或糖尿 病等疾病。本發明的另一目的是提供了通式(I)化合物和含有所述化合物的藥物組合物的 藥用用途。即本發明提供了通式(I)化合物以及含有上述化合物的藥物組合物在制備蛋 白酶體抑制劑中的應用，特別是該化合物或藥物組合物在制備治療惡性腫瘤、多種神經系 統變性疾病、肌肉惡病質或糖尿病等疾病的藥物中的應用。所述的疾病包括各種惡性腫瘤、 神經退行性疾病、肌萎縮側索硬化癥、阿爾茨海默病、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、皮質_紋狀 體-脊髓變性病以及糖尿病；其中所述的惡性腫瘤是白血病、胃癌、肝癌或鼻咽癌。本發明的另一目的是提供了一種治療各種惡性腫瘤、神經退行性疾病、肌萎縮側 索硬化癥、阿爾茨海默病、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、皮質_紋狀體_脊髓變性病或糖尿病的 方法，該方法包括將治療有效量的通式(I)化合物施用于需要這種治療的患者；其中所述 的惡性腫瘤是白血病、胃癌、肝癌或鼻咽癌等。試驗證明，本發明的三肽硼酸(酯)對蛋白酶體抑制作用具有很好的活性，其抗腫 瘤活性高于已知藥物硼替佐米，可用于替代硼替佐米治療惡性腫瘤，特別是用于治療多發 性骨髓瘤。在對HL-60人白血病、BGC-823人胃癌、Bel_7402人肝癌和KB人鼻咽癌的測試 模型實驗中，本發明化合物也顯示出良好的活性。
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具體實施例方式下面通過具體的實施方式對本發明的技術方案作進一步的說明，其中例舉的實施 例僅是對本發明的說明，而不以任何方式限制本發明的保護范圍。制備實施例1 L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽在IOOmL反應瓶中加入25mL無水甲醇，冰鹽浴冷卻到-10°C以下，攪拌下緩慢滴加 SOCl2 (7mL, 96mmol)，然后于-10°C 以下反應 IOmin,再加入 L-苯丙氨酸(1. 65g，IOmmol)，低 溫反應40min，撤去冰鹽浴，于室溫反應48h，減壓濃縮，再加入15mL甲醇，反復減壓濃縮兩 次。加入50mL乙醚，放置，析出針狀結晶，過濾干燥，粗產品再用甲醇-乙醚重結晶，得白色 晶體 L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽 2. 0g，收率 95%，[a ]D25 =+37 . 2° (c = 1，CH3CH2OH)，m. p. 155-158°C制備實施例2 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酸甲酯將制備實施例1的產物L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(1. 12g，5. 2mmol)溶于20mL THF 中，用N-甲基嗎啉(NMM) (0. 7mL，6. 2mmol)中和，于冰浴下冷卻備用。在另一反應瓶中加入 吡嗪甲酸(0. 65g，5. 2mmol)，用THF20mL溶解，冰水浴冷卻，于0°C加入二環己基碳二亞胺 (DCC) (1. 07g，5. 2mmol)，HOBt (0. 84g，6. 2mmol)，于 0°C反應 40min，然后加入已制備并冷卻 好的中和完畢的L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽的THF溶液，TLC檢測反應，2h后反應完畢，過濾除 去不溶物N，N’ - 二環己基脲(D⑶)，濾液加入乙酸乙酯150mL，分別用5% NaHCO3溶液、10% 的檸檬酸溶液、5% NaHCO3溶液、飽和食鹽水溶液洗滌(2X20mL)。乙酸乙酯層用無水Na2SO4 干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，得化合物1.378，產物為白色固體，收率98%，!11. . :152-155°C。 1H-WR(O)Cl3, 300MHz) δ 3. 26 (-CH2, m, 2H)，3. 75 (-CH3, s, 3H)，5. 09 (-CH, m, 1H)，7. 15
7.32 (-Ph, m，5H) ,8. 23 (-C0NH, d, 1H) ,8. 52 (-Pyz, d, 1H) ,8. 74 (-Pyz, d, 1H) ,9. 37 (-Pyz, s, 1H)。制備實施例3 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酸將制備實施例2的產物N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酸甲酯(1.0g，3. 51mmol)用 IOmL丙酮溶解，冰水浴下慢慢滴加2N NaOH至pH值為12 13，繼續保持冰水浴中反應， TLC檢測，2h后反應完畢。冰水浴下滴加鹽酸至pH值為2 3，產生大量白色固體，過濾 產生的沉淀，用水、乙醚洗滌后晾干，得白色產品0.89g，收率93.6%，m.p. 166-1690C0 1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 3. 23 (-CH2, m, 2H)，4. 74 (-CH, m, 1H)，7. 16 7. 25 (-Ph, m, 5H)，
8.74 (-C0NH, t, 1H) ,8. 86 8. 89 (-Pyz, t，2H)，9. 14 (-Pyz, d, 1H)，13. 06 (-C00H, s, 1H)。制備實施例4 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯將L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(0. 8g，3. 69mmol)用20mL THF溶解，用NMM(0. 49mL， 4. 43mmol)中和鹽酸，于冰浴下冷卻備用。在另一反應瓶中加入制備實施例3的產物N-吡 嗪甲酰基-L-苯丙氨酸(1.(^，3.69讓01)，用201^ THF溶解，冰水浴冷卻，于0°C加入二 環己基碳二亞胺(DCC) (0. 76g,3. 69mmol), HOBt (0. 60g,4. 42mmol)于 0 °C 反應 40min，然 后加入已制備并冷卻好的中和完畢的L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽的THF溶液，TLC檢測反應， 2h后反應完畢，過濾除去不溶物D⑶，濾液加入乙酸乙酯80mL，分別用5 % NaHCO3溶液、 10%的檸檬酸溶液、5% NaHCO3溶液、飽和食鹽水溶液洗滌(2X20mL)。乙酸乙酯層用無 水Na2SO4干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，得化合物1. 52g，產物為白色固體，收率95.6%，m. p. 111 113°C。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 3. 04(-CH2，m，2H)，3· 18 (-CH2, d，2Η)，3· 69 (-CH3, s,3H)，4. 82 (-CH, m, 2H)，6. 36 (-C0NH, d, 1H)，6. 92 7. 30 (-Ph, m, 10H)，8. 26 (-C0NH, d, 1H)， 8. 54 (-Pyz, d, 1H) ,8. 76 (-Pyz, d, 1H) ,9. 33 (-Pyz, s, 1H)。制備實施例5 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸將制備實施例4的產物N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(1. 52g， 3. 52mmol)用IOmL丙酮溶解，冰水浴下慢慢滴加2N NaOH至pH值為12 13，繼續保持冰 水浴中反應，TLC檢測，2h后反應完畢。冰水浴下滴加鹽酸至pH值為2 3，產生大量白 色固體，過濾產生的沉淀，用乙醚洗滌后晾干得白色產品1.33g，收率90.5%，白色固體熔 點194-196 "C ；1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 12. 88 (s，1Η)，9. 10 (s，1H)，8. 90-8. 87 (m，1H)， 8. 77-8. 73 (m, 1H)，8. 75-8. 65 (m, 2H)，7. 24-7. 14 (m, 10H)，4. 84-4. 80 (m, 1H)，4. 53-4. 50 (m, 1H), 3. 14-2. 89(m，4H)。制備實施例6 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酸以萘丙氨酸甲酯煙酸鹽為原料，合成及后處理同制備實施例3。得紅褐色粘稠固 體 2. 96g，收率 97. 4%。1H-NMR(DMS0-d6，300MHz) δ 4. 78(_CH，s，1H)，6. 92 7. 54 ( = CH, m，5H)，8· 74 (-C0NH, -Pyz, d，2H)，8· 87 (-Pyz, s, 1H)，9· 15 (-Pyz, s, 1H)，10. 86 (-NH, s, 1H)， 13. 04(-C00H, s，1H)。制備實施例7 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以上一制備實施例6的產物N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酸為原料，合成方法及后處 理同制備實施例4。得黃色粘稠狀物1.89g，收率94.2%。產品直接用于下步皂化。制備實施例8 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酸以制備實施例7的產物2b為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。收率77%， 白色固體，熔點196-197°C ；1H-WR(DMS0-d6，300MHz) δ 9. 07 (s, 1H) ,8. 86 (d, J = 2. 7Hz, 1H)，8. 70 (d, J=L 2Hz, 1H)，8. 68-8. 62 (m, 2H)，7. 83-7. 72 (m, 4H)，7. 45-7. 37 (m, 3H)， 7. 24-7. 17 (m, 5H)，4. 93-4. 91 (m, 1H)，4. 53-4. 50 (m, 1H)，3. 24-2. 98 (m, 4H).制備實施例9 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酸甲酯以酪氨酸甲酯鹽酸鹽及制備實施例3產物為原料，合成方法及后處理同制備實施 例4。得黃色粘稠狀物，收率92%。產品直接用于下步皂化。制備實施例10 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酸以制備實施例9產物2c為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。得泡沫狀固 體，收率83 %。，直接用于下一步反應。制備實施例11 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酸以N-吡嗪甲酸和酪氨酸甲酯鹽酸鹽為原料，合成方法同制備實施例3，得乳白色 粘稠狀固體，收率89%，產品直接用于下步反應。制備實施例12 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制備實施例11產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例4。得黃色粘稠狀 物2. 26g，收率95. 5%。產品直接用于下步皂化。制備實施例13 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酸以制備實施例12產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。得泡沫狀固體， 收率86%。直接用于下一步反應。制備實施例14 L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽
以L-亮氨酸為原料，合成方法及后處理同制備實施例1。得白色晶體1. 7g，收率 94%，[a ]D25 =+20 . 2° (c = 1，CH3OH)，m. p. :149_150°C。制備實施例15 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸甲酯以制備實施例14產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例2。得紅色粘 稠液體 2. 47g,收率 98 %。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 0. 97 0. 99 (-CH3, m，6H)，1. 69
1.83 (-CH2, -CH, m, 3H)，3. 78 (-CH3, s，3H)，4. 82 4. 90 (-CH, m, 1H)，8. 15 (-C0NH, d, 1H)， 8. 57 (-Pyz, q, 1H)，8· 78 (-Pyz, d, 1H)，9· 40 (-Pyz, s，1Η)。制備實施例16 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸以制備實施例15的產物N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸甲酯為原料，合成方法及后 處理同制備實施例3。得白色固體2. 22g，收率為95%，m. p. 36-380C0 1H-NMR(DMS0_d6， 300MHz) δ 0· 88 0· 91 (-CH3, t, 6Η)，1· 57 1. 64 (-CH2, m, 2H)，1. 81 1. 91(_CH，m，1H)， 4. 48 4. 55 (-CH, m, 1H)，8. 77 (-C0NH, q，1H)，8. 90 8. 95 (-Pyz，dd,2H) ,9. 19 (-Pyz，d, 1H), 12. 8K-COOH, s，lH)。制備實施例17 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制備實施例16產物N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸為原料，合成方法及后處理 同制備實施例4。產物為黃色粘稠狀物，收率93%。1H-NMR (⑶Cl3，300MHz) δ 0.92 0. 96 (-CH3, dd, 6H)，1. 64 1. 79 (-CH2, -CH, m, 3H)，3. 02 3. 20 (-CH2, m, 2H)，3. 74 (-CH3, s，3H)，4. 64 (-CH, m, 1H)，4. 88 (-CH, dd, 1H)，6. 64 (-C0NH, d, 1H)，7. 03 7. 10 (-Ph, m, 5H)， 8. 03 (-C0NH, d，1H)，8. 55 (-Pyz，q，1H)，8. 79 (-Pyz，d，1H)，9. 36 (-Pyz，d，1H)。制備實施例18 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸以制備實施例17產物2e為原料，合成方法及后處理同制備實施例18。得粘稠狀 固體，收率 95. 6% ；1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 12. 61 (s，1Η)，9. 20 (s，1Η)，8. 98-8. 91 (m， 1H)，8. 77 (s，1H)，8. 66-8. 62 (m, 1H)，8. 46-8. 44 (m, 1H)，7. 22-7. 15 (m, 5H)，4. 61 (s，1H)， 4. 48-4. 46 (m, 1H)，3. 10-2. 87 (m, 2H)，1. 98-1. 92 (m, 1H)，1. 62-1. 59 (m, 2H)，0. 92-0. 88 (m, 6H).制備實施例19 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘丙氨酸甲酯以制備實施例16產物N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸為原料，合成及后處理同制備實 施例4。得黃色粘稠狀物2. lg，收率93%。產品直接用于下步皂化。制備實施例20 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘丙氨酸以制備實施例19產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。得白色固體，收 率 83%，m. p. jg-lOOtVH-WlUDMSO-dj；，300MHz) δ 9. 16 (s，1H)，8· 89(d, J = 2. 4Hz, 1H)， 8. 70 (d, J=L 5Hz, 1H)，8. 58 (d, J = 9. OHz，1H)，8. 46 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，7. 79-7. 73 (m, 4H)，4. 60-4. 57 (m, 1H)，4. 55-4. 53 (m, 1H)，1. 54-1. 45 (m, 3H)，0. 83-0. 79 (m, 6H).制備實施例21 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酸甲酯以制備實施例3產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例4。得黃色粘稠狀物
2.3g，收率93.5%。產品直接用于下步反應。制備實施例22 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酸以制備實施例21產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。得白色固體，收 率 79%, m. p. :191-193°C ；1H-WR(DMS0_d6，300MHz) δ 9. 07 (d, J=L 2Hz, 1H)，8· 86 (d, J
12=2. 7Hz, 1H)，8. 68 (d, J = 1. 5Hz, 1H)，8. 64-8. 56 (m，2H)，7. 81-7. 72(m，4H)，7. 42-7. 40 (m, 3H)，7. 17-7. 11 (m, 5H)，4. 83-4. 79 (m, 1H)，4. 59-4. 55 (m, 1H)，3. 26-3. 02 (m, 4H).制備實施例23 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制備實施例6產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例4。得黃色粘稠狀物 1.898，收率94.2%。產品直接用于下步皂化。制備實施例24 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘丙氨酸以制備實施例23產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。得淡黃色固 體，收率 72 %，熔點208-209 "C ；1H-WR(DMS0_d6，300MHz) δ 9. 04(s，1H)，8· 84(d, J = 2. 4Hz, 1Η)，8. 73-8. 69 (m, 1Η)，8. 67-8. 66 (m, 2Η)，7. 82-7. 69 (m, 8H)，7. 74-7. 69 (m, 6H)，
7.44-7. 35 (m, 6H)，4. 95-4. 91 (m, 1H)，4. 64-4. 60 (m, 1H)，3. 28-3. 08 (m, H)。制備實施例25 L-色氨酸甲酯鹽酸鹽以L-色氨酸為原料，合成方法及后處理同制備實施例1。得白色晶體3.02g，收率 93%，[a ]D25 =+16. 5° (c = 1，CH3OH)，m. p. :206_208°C。制備實施例26 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酸甲酯以N-吡嗪甲酸和制備實施例25產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例2。 得紅褐色粘稠狀物3. 18g，收率96%，直接用于下步反應。制備實施例27 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酸以制備實施例26為原料，合成方法及后處理同制備實施例3。得紅褐色粘稠固體 2. 96g，收率 97. 4 %。1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 4. 78 (-CH, s，1Η)，6· 92 7· 54 ( = CH， m，5H)，8· 74 (-C0NH, -Pyz, d，2H)，8· 87 (-Pyz, s, 1Η)，9· 15 (-Pyζ, s, 1Η)，10. 86 (-ΝΗ, s, 1Η)， 13. 04(-C00H, s，1Η)。制備實施例28 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制備實施例27產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例4。得黃色粘稠物
2.13g，收率96.8%，未經分離，直接用于皂化。制備實施例29 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酸以制備實施例28為原料，合成方法及后處理同制備實施例3。收率96. 4%，白 色固體，熔點74-76 "C ；1H-WR(DMS0-d6，300MHz) δ 10. 79 (s, 1H)，9. 13 (s，1H)，8. 86 (s, 1H)，8. 68 (s，1H)，8. 62-8. 59 (m, 2H)，7. 54-6. 84 (m, 10H)，4. 84 (s, 1H)，4. 58-4. 50 (m, 2H)，
3.20-3. 09 (m, 4H)。制備實施例30 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-色氨酸甲酯以制備實施例3產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例4。得淡黃色油狀液 體 1. 65g，收率 94. 8%。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 3. 13 3. 24 (_CH2，m，4Η)，3. 68 (_CH3，s， 3H)，4· 90 (-CH, q, 1H)，5. 06(_CH，m，1H)，6· 79(_NH，s，1H)，6· 91 7. 34(-Ph, = CH，m，10H)，
8.26 8. 33 (-C0NH, t，2H)，8. 43 (-Pyz, d, 1H)，8. 63 (-Pyz, d, 1H)，9. 14 (-Pyz, s，1H)。制備實施例31 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-色氨酸以制備實施例30產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。得淡黃色固體， 收率 93. 7 %，m. ρ· 106-108 "C ；1H-WR(DMS0_d6，300MHz) δ 12. 59 (s, 1H)，10. 87 (s, 1H)，
9.16-9. 12 (m, 1H)，8. 89-8. 87 (m, 1H)，8. 75-8. 72 (m, 1H)，8. 66-8. 59 (m, 2H)，7. 56-6. 96 (m, 10H)，4. 88-4. 85 (m, 1H)，4. 59-4. 56 (m, 1H)，3. 22-3. 05 (m, 4H).
制備實施例32 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-亮氨酸甲酯以制備實施例3產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例4。得白色粘稠固體
1.20g，收率94. 5%，直接用于下一步皂化。制備實施例33 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-亮氨酸以制備實施例32產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。收率93.9%，淡 黃色固體，熔點142-144°C ；1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 12. 70 (s, 1H) ,9. 15-9. 12 (m, 1H), 8. 90-8. 88 (m, 1H)，8. 79-8. 74 (m, 1H)，8. 68-8. 65 (m, 1H)，8. 57-8. 53 (m, 1H)，7. 27-7. 15 (m, 5H) ,4. 90-4. 82 (m, 1H) ,4. 32-4. 25 (m, 1H) , 3. 21-3. 04(m，2H)，1. 68-1. 54(m，3H)， 0. 94-0. 91 (m, 3H)，0. 87-0. 85 (m, 3H).制備實施例34 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯以制備實施例16產物N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸為原料，合成方法及后處理同制 備實施例4。得黃色粘稠狀物1.69g，收率91.8%。產品直接用于下步皂化。制備實施例35 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酸以制備實施例34產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。得粘稠固體，收 率83% .，直接用于下一步反應。制備實施例36 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-亮氨酸甲酯以制備實施例6產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例4。得黃色粘稠狀物 1.8g，收率92.5%。產品直接用于下步皂化。制備實施例37 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-亮氨酸以制備實施例36產物為原料，合成方法及后處理同制備實施例5。得白色固體，收 率 78%，熔點 AS-lOOtVH-WlUDMSO-dj；，300MHz) δ 9. 09 (d, J = 1. 2Hz, 1H)，8· 86 (d, J =
2.7，1Η)，8. 71-8. 70 (m, 2Η)，8. 57 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，7. 84-7. 45 (m, 4H)，7. 43-7. 42 (m, 3H)， 5. 02-4. 96 (m, 1H)，4. 32-4. 28 (m, 1H)，1. 66-1. 58 (m, 3H)，0. 89 (d, J = 6. 6Hz,3H)，0. 83 (d, J =6. 3Hz,3H).制備實施例38(化，25，31 ，55)-2，6，6-三甲基二環[3.1. 1]庚烷 _2，3-二醇將Me3N0.2H20(11.3g，102^ol)用 16mL 水溶解，攪拌下再加入 α -菔烯(13. 2g， 96. 9mmol)、74mL叔丁醇、7. 4mL吡啶和四氧化鋨(60mg，0. 236mmol)。然后通氮氣，10分鐘 后，加熱至回流。TLC檢測，15小時反應完畢。自然降至室溫，加入NaHSO3(1. 2g，11. 5mmol)， 適量NaCl飽和水溶液。分出有機相，水層用乙醚提取(3X20mL)，合并有機相，無水硫酸鈉 干燥。濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯石油醚=1 30)，得白色固體15. 33g，收率92.9%， [a JD20 = -IO. 79° (c = 5. 5，甲苯)，m. p. Jz-SrCtj1H-WR(CDCl3JOOMHz) δ 0. 94(-CH3, s，3Η)，1. 28 (-CH3, s，3Η)，1. 32 (-CH3, s，3Η)，1. 34 1. 38 (-CH2, d, 1H)，1. 66 (-CH2, m, 1H)，1. 93 (-CH, m, 1H)，2. 01 (-CH2, t, 1H)，2. 20 (-CH, m, 1H)，2. 33 (H2O, s，2H)，2. 49 (-CH2, m, 1H) ,4. 00(-CH, q, 1H) ； 13C-NMR(CDCl3, 300MHz) δ 24. 11,27. 80,28. 00,29. 54,38. 21, 8. 99，40. 51，53. 98，69. 26，73. 88 ；元素分析 CltlH18O2 計算值C，70. 55 ；H, 10. 66 ；實測值C， 70. 55 ；H, 10. 67。制備實施例39 二氯甲基硼酸二甲酯于250mL瓶中加入無水二氯甲烷(4. 26mL，66mmol)和120mL無水四氫呋喃，通 入氮氣，降溫至-110 °C，然后慢慢滴加正丁基鋰的環己烷溶液(25. 2mL,60mmol)，滴加完畢后低溫繼續攪拌1小時，再加入硼酸三甲酯(7. 5mL，66mmol)，繼續低溫攪拌1小時后加 入5N HCl溶液12mL，自然升至室溫。反應液轉入分液漏斗，分出有機相，水層用乙醚提取 (2 X IOmL)，合并有機相，無水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑得白色粘稠狀固體9. 3g，收率99. 4%。 產品未經純化直接用于下步反應。制備實施例40 二氯甲基硼酸-α-菔烷二醇酯于25mL瓶中加入制備實施例38產物α -菔烷二醇(3. 23g, 0. 019mmol)和制備 實施例38產物二氯甲基硼酸二甲酯(5. 38g，0.035mmol)，5mL THF溶解，室溫下攪拌。TLC 檢測，18h后反應完畢。柱層析分離(乙酸乙酯石油醚=1 20)得無色液體4. 92g，收 率 98.5%。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 0. 85 (-CH3, s，3Η)，1. 21 (-CH2, t，1H)，1. 31 (-CH3, s, 3H)，1. 47 (-CH3, s，3H)，1. 92 1. 97 (-CH2, CH, m, 2H)，2. 15 (-CH, t，1H)，2. 25 2. 43 (-CH2, m，2H)，4. 47 (-CH，q，1H)，5. 40 (-CH，s, 1H) ； 13C-WR(CDCl3，75MHz) δ 23. 92,26. 18，26. 93， 28. 18,34. 98,38. 31,39. 16,51. 09,79. 41,88. 08。MS(EI) :m/z 262. 0 (M+),計算值m/z 262. O0制備實施例41 2-甲基-4-氯-丁基硼酸-α-菔烷二醇酯將制備實施例40產物二氯甲基硼酸- α -菔烷二醇酯(1. 18g，4. 49mmol)用12mL 乙醚溶解，室溫下攪拌。通入氮氣，并降溫至_78°C，然后慢慢滴加新制的叔丁基格式試劑 的乙醚溶液(6mL，4. 50mmol)，滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末(0. 44g，3. 25mmol)。 自然升至室溫，繼續室溫下攪拌。TLC檢測，18h后反應完畢。過濾除去ZnCl2及反應生 成的MgBr2，濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯石油醚=1 200)得無色液體1. 13g，收率 88. 5 V0o 1H-WR (CDCl3, 300MHz) δ 0. 85-0. 94 (-CH3, m, 9H)，1. 19 (-CH, q, 1H)，1. 30 (-CH3, s，3H)，1. 42 (-CH3, s，3H)，1. 62 (CH, m, 1H)，1. 75-1. 95 (-CH2, m, 4H)，2. 10 (-CH, t，1H)， 2. 21-2. 40 (-CH2, m,2H) ,3. 54(-CH, m, 1H) ,4. 37 (-CH, q，1H)。13C-NMR (CDCl3, 75MHz) δ 21. 18,22. 84,23. 93,25. 54,26. 27,26. 97,28. 37,35. 24,38. 18,39. 27,42. 72,51. 11， 86. 63 ；MS (EI) :m/z 284. 2 (M+)，計算值m/z 284. 6。制備實施例42 2-甲基-4-氨基-丁基硼酸-α -菔烷二醇酯鹽酸鹽 (LeuBdiol-NH2)于150mL茄形瓶中加入LiN (SiMe3)2 (9. 5mL，17. 98讓01)，通入氮氣，并降溫 至-78°C，然后用注射器慢慢加入含有制備實施例41產物2-甲基-4-氯-丁基硼酸_ α -菔 烷二醇酯(4. 7g，16. 54mmol)的THF溶液，滴加完畢后，自然升至室溫，繼續室溫下攪拌。TLC 檢測，20h后反應完畢。減壓蒸除溶劑，并用乙醚帶兩次，加50mL石油醚溶解，過濾除去不溶 物。將濾液降溫至_78°C，加入65mL氯化氫的乙醚溶液，然后自然慢慢升至室溫，出現大量 乳白色固體。冷凍使完全析出結晶，過濾，乙醚洗滌產品得乳白色固體2. Sg,收率56. 2%0 產品未經純化，直接用于下步反應。實施例IN-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5a)々將0. 42g (Immol)制備實施例5的N-吡嗪甲酰
15基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸溶于7ml四氫呋喃，在_20°C下加入HOBt 0. 16g(1.2mmol) 和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽0. 29g(1.5mm0l)，反應30分鐘后，加入 0. 3g(Immol)制備實施例 42 得到的 LeuBdiol-NH2 和 N, N- 二異丙基乙胺 0. 26g(2mmol)， 在-20°C下攪拌過夜。TLC檢測反應完畢，過濾除去不溶物，減壓蒸除溶劑，用20mL乙酸乙 酯溶解，分別用10%的檸檬酸溶液、5% NaHCO3溶液、飽和食鹽水溶液洗滌(3X 15mL)。乙 酸乙酯層用無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮后柱層析分離得0. 54g化合物4a，為白色固體，收 率 82 %。熔點 78-80 "C ；1H-WR (CDCl3, 500MHz) δ 9. 31-9. 26 (m, 1H) ,8. 82-8. 77 (m, 1H)， 8. 58-8. 54 (m, 1H)，8. 23-8. 19 (m, 1H)，7. 32-6. 99 (m, 10H)，6. 48-6. 42 (m, 1H)，5. 72-5. 67 (m, 1H) , 4. 80-4. 77 (m, 1H) ,4. 59-4. 55 (m, 1H) ,4. 36-4. 33 (m, 1H) , 3. 19-3. 09 (m, 4H)， 2. 90-2. 88 (m, 1H)，2. 36-2. 22 (m, 2H)，2. 08-2. 03 (m, 1H)，1. 94-1. 86 (m, 2H)，1. 47-1. 39 (m, 3H)，1. 30-1. 28(m，3H)，1. 29-1. 21 (m，3H)，0· 90-0. 83(m，9H) ；13C-NMR(CDCl3,125MHz) 169. 86，169. 77，163. 21，147. 63，144. 33，143. 52，142. 69，136. 25，135. 94，129. 22，129. 13， 128. 81，128. 45，127. 28，126. 72,84. 72,54. 73,54. 27,51. 50,39. 41,39. 37,38. 37,38. 03， 37. 84,37. 64,35. 68,28. 53,28. 44,27. 05,26. 36,26. 32,25. 58,23. 96,22. 36 ；MS(EI) :m/z 665. 6 (M)+. 實施例2 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸(6a)
丙酮溶解，加入NH4OAC溶液(0. 1N, 11. 6mL)，最后加入NaIO4 (0. 32g，1. 5mmol)，室溫攪拌反 應。TLC檢測顯示，IOh后反應完全。向反應溶液中加入NaOH溶液(2N，0. 5mL)，CH2Cl2萃 取。用濃鹽酸調節溶液PH值約為3。用012(12萃取(3 Xl5mL)，合并有機相，無水Na2SO4干 燥，過濾，蒸干得到淡黃色固體 5a 0. 19g，收率 72. 1%。m. p. :112_114°C。1H-NMR(O)Cl3, 300MHz) δ 0. 88 (-CH3, d，3H)，0. 90 (-CH3, d，3H)，1. 25 2. 17 (-CH2, -CH, -B (OH)2, m, 5H)， 2. 96 3. 17 (-CH, m, 5H)，4. 65 4. 77 (-CH, m, 2H)，6. 38 6. 42 (-C0NH, m, 1H)，6. 84 7. 07 (-Ph, -C0NH, m，6H)，7. 24 7. 29 (-Ph, m，5H)，8. 18(_C0NH，s, 1H)，8· 53(-Pyz, s, 1H) ,8. 77(-Pyz, s, 1H) ,9. 15 9. 26 (-Pyz, m, 1Η) ；13C-NMR(CDCl3, 75MHz) δ 22. 51, 23. 17，25. 66，37. 30，37. 54，51. 70，53. 64，54. 96，126. 75，127. 41，128. 41，128. 54，128. 88， 129. 20，135. 66，135. 89，142. 72，143. 32，144. 28，147. 75，163. 32，163. 58，169. 74，170. 01 ； MS (ESI) :m/z 530. 4907 (M-H) ；FT-MS :m/z 532. 27179 (M+H)，計算值532. 27258。
實施例3N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5b)
。以制備實施例8產物為原料，合成及后處理同實施例
1，得白色固體，87%收率，熔點:98-100°Co 1H-Wr(Cdci3JOOMHz) δ 9. 13 (s, 1H) ,8. 74 (d,
z0H將實施例 1 產物 5a(0. 33g，0. 5mmol)用 12mL 的J = 2. 4Hz, 1H) ,8. 48 (d, J = 2. 1Hz，1H)，8. 23-8. 20 (d，J = 7. 5Hz，1H)，7. 80-7. 69 (m， 4H)，7. 46-7. 43 (m, 2H)，7. 35 (d, J = 8. 4Hz, 1H)，7. 02-6. 95 (m, 5H)，6. 53-6. 45 (m, 1H)， 4. 65-4. 57 (m, 1H)，4. 29-4. 27 (m, 1H)，3. 40-3. 26 (m, 2H)，3. 13-3. 02 (m, 1H)，2. 95-2. 84 (m, 1H)，2. 35-2. 27 (m, 1H)，2. 20-2. 15 (m, 1H)，2. 04-1. 99 (m, 1H) , 1. 89-1. 80 (m, 1H)， 1. 39-1. 23 (m, 12H) ,0. 87-0. 83(m，9H) ；13C_NMR (CDC13，75MHz) :170. 39，169. 85，163. 19， 147. 57，144. 32，143. 59，142. 71，136. 13，133. 51，133. 46，132. 47，129. 22，128. 56，128. 35， 128. 01，127. 66，127. 57，127. 51，126. 65，126. 24，125. 84,54. 55,54. 42,53. 64,51. 35， 39. 70，39. 55，38. 19，37. 85，37. 74，35. 50，28. 61，27. 08，26. 24，25. 36，25. 21，24. 03， 22. 97,22. 01 ；HRMS 計算值 C42H51BN505 (M+l)+716. 3978，實測值 716. 3986.
實施例4 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸(6b)/\ ^OH在100ml圓底瓶中，將實施例3產物硼酸酯
\0H
5b (0. 357g 0. 5mmol)溶于無水二氯甲烷中，滴加1N的三溴化硼二氯甲烷溶液2. 5ml，冰浴 下攪拌，2小時后，TLC檢測反應結束，滴加50ml水撲滅反應，二氯甲烷萃取(15mlX4次)， 合并有機相，飽和食鹽水洗(15ml X 4次)，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮，乙醚二氯甲烷重結 晶得乳白色固體0. 18g。產率 63. 5%。熔點:134-135°Co 咕-匪R(CDC13，300MHz) 8 9. 15 (s， 1H)，8. 73(d, J = 2. 4Hz, 1H)，8. 46(d, J = 2. 1Hz, 1H)，8. 24-8. 17 (m, 1H)，7. 76-7. 66(m，4H)， 7. 44-7. 40 (m, 3H)，7. 32-7. 25 (m, 1H)，6. 90-6. 86 (m, 5H)，6. 52-6. 46 (m, 2H)，4. 81-4. 67 (m, 2H) ,3. 31-3. 26 (m, 1H) ,3. 11 (d, J = 6. 9Hz，2H)，2. 93-2. 89 (m, 1H)，1. 92 (s，br,2H)， 1. 55-1. 21 (m，3H)，0. 85-0. 82(m，6H) ；13C_NMR (CDC13，75MHz) :172. 96，169. 99，163. 61， 147. 70，144. 24，143. 30，142. 70，137. 28，135. 61，133. 47，133. 19，132. 49，129. 13，128. 64， 128. 35，128. 07，127. 64，127. 55，127. 11,126. 71,126. 39，125. 92,54. 88,51. 86,39. 85， 39. 34,37. 43,37. 23，36. 88,25. 68,23. 12,22. 46. HRMS 計算值 C32H36BN505 (M_l廣580. 2727， 實測值580. 2736。 實施例5 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5c)YJ Y S bn K以制備實施例10產物為原料，合成及后處理同實
OH
施例1制備，得淡黃色固體，收率81%。熔點；llQ-UOt。1!!-匪R(CD30D，300MHz) 8 9. 18(s， 1H) ,8. 68 (d, J = 10. 2Hz, 1H) ,8. 48 (s, 1H) ,8. 26 (d, J = 7. 5Hz，1H)，7. 82-7. 74 (m，1H)， 7. 27-7. 18 (m, 5H)，6. 80-6. 76 (m, 3H)，6. 49-6. 40 (m, 2H)，4. 82-4. 61 (m, 2H)，4. 29-4. 27 (d, J =8. 1Hz, 1H)，3. 13-3. 06 (m, 2H)，2. 95-2. 84 (m, 3H)，2. 35-2. 27 (m, 2H)，2. 04-2. 02 (m, 1H)， 1. 85-1. 80(m，2H)，1. 43-1. 26 (m,9H) ,0. 88-0. 83 (m, 9H) ； 13C_NMR(CD30D，75MHz) :170. 17，163. 36，155. 62，147. 61，143. 96，143. 44，142. 83，135. 95，130. 37，129. 21，128. 78，127. 47， 127. 23，126. 61，126. 44，115. 34,85. 30,54. 86,54. 74,52. 91,51. 54,40. 16,39. 82,39. 64， 38. 10,37. 57,36. 97,35. 80,35. 69,28. 73,27. 10,26. 28,25. 41,24. 04,23. 06,22. 97， 22. 03,21. 95 ；HRMS 計算值 C38H49BN506 (M+1)+682. 3770，實測值 682. 3767。
實施例6 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸(6c) fiY V Y V Y、^^以實施例5產物5c為原料，合成及后處理同實施
例 4，得黃色固體，產率 56. 3 %。熔點298-300 °C。屯-匪1 (003( ，300MHz) 8 9. 13(s, 1H) ,8. 78 (t, J = 2. 4Hz，1H)，8. 67-8. 66(dd，J = 1. 2，2. 4Hz，1H)，7. 23—7. 16 (m，5H)， 7. 16-7. 01 (m, 2H)，6. 66-6. 18 (m, 2H)，4. 80-4. 73 (m, 2H)，3. 20-3. 18 (m, 1H)，3. 08-3. 02 (m, 3H)，2. 68-2. 56 (m, 1H)，1. 62-1. 54 (m, 2H)，1. 33-1. 26 (m, 2H)，1. 14-1. 04 (m, 2H)， 0. 89-0. 83 (m, 6H) ；13C_WR(CD30D，300M) -.111. 69，173. 05，165. 13，164. 95，157. 77，157. 68， 148. 79，145. 59，144. 96，144. 79，144. 49，137. 82，131. 47，131. 35，130. 34，129. 56，127. 97， 127. 40，127. 16,116. 41,56. 11,55. 90,52. 87,52. 67,40. 70,38. 82，38. 49,37. 65,37. 30， 26. 83，26. 61，23. 89，23. 69，22. 31，21. 83. HRMS 計算值 C28H34BN506(M_l廣546. 2529，實測值 546. 2527。 實施例7 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯氨酰L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5d) 八以制備實施例13產物為原料，按照實施例1的合成
方法制備，得淡黃色固體，收率80%。熔點90-92°C。屯-匪R(CD30D，300MHz) 8 9. 29 (s, 1H)，8. 74 (d, J = 2. 4Hz, 1H)，8. 50 (d, J = 2. 1Hz, 1H)，8. 26 (d, J = 7. 8，1H)，7. 11-6. 99 (m, 8H)，6. 74 (d, J = 8. 4Hz,2H)，6. 74-6. 71 (m, 1H)，6. 50-6. 42 (m, 1H)，4. 70-4. 26 (m, 1H)， 4. 51-4. 27 (m, 1H)，4. 29-4. 17 (m, 2H)，3. 07-2. 93 (m, 5H)，2. 37-2. 31 (m, 1H)，2. 21-2. 16 (m, 1H) , 2. 06-2. 03 (m, 1H)，1. 90-1. 80 (m，2H)，1. 40-1. 26 (m，6H) ,0. 90-0. 79 (m, 12H)； 13C-NMR(CD30D，75MHz) :171. 36，170. 18，163. 03，155. 47，147. 50，144. 29，143. 74，142. 73， 135.95，130.29，130.15，129.31,128.50，127.51,126.83,116.47,116.64,85.33,55.08， 53. 19，51. 55，39. 73，39. 64，39. 40，38. 23，38. 16，37. 44，37. 14，35. 67，28. 73，28. 54， 27. 14,26. 30,25. 44,24. 07,22. 98,22. 02 ；HRMS 計算值 C38H49BN506 (M+1)+682. 3770，實測值 682.3795。實施例8 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰L-亮氨硼酸(6d)
18oh以實施例7產物5d為原料，合成及后處理方法同實
施例 4，得黃色固體，產率 71. 5%0 熔點:219-221°C 屯-匪1 (。03( ，300MHz) 8 9. 15 (s， 1H)，8. 78 (d, J = 2. 4Hz, 1H)，8. 66 (d, J = 2. 1Hz, 1H)，7. 24-7. 19 (m, 5H)，7. 13-7. 00 (m, 2H)， 6. 97-6. 62 (m, 2H)，4. 80-4. 71 (m, 2H)，3. 11-3. 06 (m, 3H)，2. 93-2. 87 (m, 1H)，2. 64-2. 54 (m, 1H) , 1. 62-1. 54 (m，2H) , 1. 40-1. 29 (m, 2H) , 1. 16-1. 11 (m, 2H) ,0. 92-0. 81 (m, 6H)； 13C-NMR(CD30D，75MHz) -.111. 20，173. 18，164. 92，157. 51，148. 68，145. 62，144. 93，144. 73， 137. 17，136. 96，131. 36，130. 46，130. 33，129. 69，129. 62，128. 25，128. 19，116. 32,56. 34， 56. 17,52. 61,40. 77,38. 46,38. 11,37. 82,26. 62,23. 86,21. 91. ESI :MS(ESI)實測值 (M+Na/z) +570. 2168，計算值570. 2500 (M+Na)。實施例9 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯氨酰L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5e)以制備實施例18產物為原料，按照實施例1的合成方法制備，收率87%。
得白色固體，m. p. 63-65 °C 'H-NMR^DC^, 500MHz)
8 9. 32 (s, 1H)，8. 78-8. 67 (m, 1H)，8. 55-8. 21 (m, 1H)，8. 10-7. 95 (m, 1H)，7. 15-6. 99 (m, 6H)， 6. 04-5. 96 (m, 1H)，4. 65-4. 34 (m, 2H)，4. 30-4. 15 (m, 1H)，3. 22-3. 01 (m, 2H)，2. 37-2. 22 (m, 2H)，2. 12-2. 04 (m, 1H)，1. 93-1. 90 (m, 2H)，1. 76-1. 63 (m, 3H)，1. 48-1. 39 (m, 1H)，1. 28 (s, 3H)，1. 29-1. 22 (m，3H)，0. 94-0. 90(m，6H)，0. 86-0. 83(m，9H) ； 13C_NMR(CDC13，125MHz) 171. 35，170.30，163. 15，147. 47，144. 38，143. 72，142.63，136.451，129. 10，128.37， 126. 66，84. 55，54. 50，52. 02，51. 45，40. 73，38. 31，38. 03，37. 95，37. 77，35. 63，28. 48， 27. 00,26. 26,25. 52,24. 78,23. 91,22. 89,22. 29,21. 78 ；MS (EI) :m/z 631. 6(M)+。
實施例10 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酰L-亮氨硼酸(6e)
NH 、 / t
HN
lo
\
:NH
o
4§11以實施例9產物5e為原料，合成方法及后處理
OH
同實施例2。蒸干得到黃色固體19. 7mg，收率68. 4%。m. p. 113-116°C。力-匪1 (0)(13， 300MHz) S 0. 78 0. 82 (_CH3，m, 13H)，1. 19 1. 57 (_CH2，_CH，_B (OH) 2，m, 7H)，1. 95 (-CH, d, 1H)，2. 89 3. 09 (-CH, -CH2, m, 3H)，4. 28 4. 41 (-CH, m, 1H) ,4. 61 4. 76 (-CH, m, 1H)，6. 92 7. 02 (-Ph, -C0NH, m, 6H)，7. 19 7. 25 (-C0NH, m, 1H)，7. 96 8. 02 (-C0NH, m, 1H) ,8. 47(-Pyz, s, 1H) ,8. 72(-Pyz, s，lH)，9. 16 9. 25 (_Pyz，m，1H) ；MS (ESI)實測值m/
19z496. 3710 (M-H)，計算值497. 2809。 實施例11 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘氨酰L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5f)
以制備實施例20產物為原料，合成及后處理方法
同實施例 1,收率 85%，白色固體，熔點140-142 °C .咕-匪1 (0)(13，300MHz) 8 9. 195 (d, J = 1. 5Hz，lH)，8. 71(d，J = 2. 4Hz, 1H) ,8. 40 (t, J = 1. 2Hz，1H)，7. 93 (d，J = 8. 1Hz, 1H)，7. 66-7. 61 (m, 4H)，7. 36-7. 32 (m, 3H)，6. 75 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，6. 00 (d, J = 4. 8,1H)， 4. 78-4. 71 (m, 1H)，4. 59-4. 53 (m, 1H)，4. 27 (dd, J = 8. 7Hz, 1H)，3. 23 (d, J = 6. 6Hz,2H)， 3. 14-3. 10 (m, 1H)，2. 28-2. 20 (m, 1H)，2. 17-2. 08 (m, 1H)，2. 00-2. 05 (m, 1H)，1. 87-1. 57 (m, 6H)，1. 41-1. 27(m，9H)，0. 92-0. 90(m，6H)，0. 83-0. 77(m，9H) ；13C_NMR (CDC13，75MHz) 171. 05，170. 61, 163. 13，147. 52，144. 24，143. 45，142. 59，142. 47，133. 933，133. 25， 132. 22，128. 13，127. 99，127. 48，127. 26，125. 95，125. 52,85. 83,53. 06,51. 98，51. 88， 51. 32，40. 63，39.68，39.56，38. 19，35. 48，28.56，27. 10，26. 23，25. 33，25. 22，24.78， 24. 04，22. 89,21. 80 ；HRMS 計算值 C39H53BN505 (M+l) +682. 4134，實測值 682. 4155。
實施例12 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸(6f)
以實施例11產物5f 為原料，合成及后處理方
法同實施例4，得乳白色固體，產率56. 3 %，熔點157-159 °C。力-匪R(CDC13，300MHz) 8 9. 13-9. 10 (m, 1H)，8. 67 (s, 1H)，8. 36 (s, 1H)，7. 98-7. 94 (m, 2H)，7. 59-7. 29 (m, 7H)， 7. 22-7. 19 (m, 2H)，4. 98-4. 84 (m, 1H)，4. 41-4. 37 (m, 1H)，3. 46-3. 35 (m, 2H)，3. 24-3. 10 (m, 1H)，1. 71-1. 25(m，8H)，0. 88-0. 78 (m, 12H) ； 13C_NMR(CDC13，75MHz) -.111. 48，163，92，147， 65，144，15，143. 31，143. 07，142. 56，133.56，133.22，132.25，129. 16，128. 69，128.24， 127. 51，127. 10，125. 98，125. 58,52. 95,52. 77,51. 91,41. 12,40. 23,36. 76,25. 68,24. 72， 23. 12，22. 83，22. 44，21. 69. HRMS 計算值 C29H37BN505 (M_l廣546. 2893，實測值 546. 2906。
實施例13 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5g)
o \ H 9
20
C
B
/ /
NH
V
N no
SH
N n ^ n K^r^i以制備實施例22產物為原料，合成制備及后 j|N N
處理方法同實施例1，得白色固體，收率86%，熔點:97-98°Co i-NMR (⑶Cl3，300MHz) 實施例14N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸(6g)
以實施例13產物5g為原料，合成方法及后處理同
實施例4，得乳白色固體，產率53%，熔點137-138°C。屯-匪R(CDC13，300MHz) 8 9. 90 (s, 1H)，8. 61 (s，1H)，8. 26 (s, 1H)，8. 09-7. 98 (m, 1H)，7. 50-7. 23 (m, 12H)，7. 19-7. 07 (m, 1H)， 6. 73-6. 56 (m, 2H)，4. 88-4. 76 (m, 1H)，4. 72-4. 67 (m, 1H)，3. 33-3. 28 (m, 1H)，3. 14-3. 12 (d, J = 6. 3Hz，2H)，3. 02-2. 97(m，1H)，2. 04(s，br，2H)，1. 51-1. 42(m，3H)，0. 87-0. 80(m，6H)； 13C-NMR(CDC13，75MHZ) :173. 10，170. 06，163. 51,147. 59，143. 90，142. 95，142. 86，142. 64， 142. 52，135. 90，135. 70，133. 45，133. 23，133. 07，132. 14，129. 29，128. 88，128. 24，127. 94， 127. 46，127. 14，125. 90，125. 53,54. 94,51. 96,42. 92,39. 98,37. 26,36. 92,25. 69,23. 14， 22. 56 ；HRMS 計算值 C32H35BN505 (M_l廣580. 2736，實測值 580. 2729。 實施例15N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5h)
以制備實施例24產物為原料，合成及后
處理同實施例1，得白色固體，收率82 %，熔點136-137 °C。t-NMR (CD30D, 300MHz) 8 9. 10 (s，1H) ,8. 63 (d, J = 2. 4Hz，1H)，8. 26 (d, J = 2. 4Hz, 1H) ,8. 12-8. 02 (m, 1H)， 7. 81-7. 57(m，6H)，7. 53-7. 32(m，8H)，7. 20-7. 17 (dd, J = 1. 8,8. 4Hz，2H)，6. 51-6. 49 (m, 1H) ,6. 00 (d, J = 5. 1Hz，1H)，4. 87-4. 72(m，2H)，4. 28-4. 24(dd，J = 1. 5，8. 7Hz，1H)， 3. 33-3. 31 (d, J = 6. 3Hz,2H)，3. 24-3. 22 (m, 1H)，3. 07-3. 00 (m, 1H)，2. 33-2. 25 (m, 1H)， 2. 18-2. 13 (m, 1H)，2. 04-2. 00 (m, 1H)，1. 87-1. 67 (m, 2H)，1. 36-1. 25 (m, 8H)，0. 87-0. 74 (m, 12H) ； 13C-NMR(CD30D，75MHz) :170. 46，169. 85，163. 22，147. 46，144. 00. 143. 16，142. 61，
21142. 49，133. 58，133. 45，133. 34，132. 50，132. 13，128. 58，127. 97，127. 71，127. 57，127. 44， 126. 31. 125. 90，125. 52,85. 76,54. 41,53. 30,51. 35,39. 58,38. 19,37. 98,37. 59,35. 50， 28. 59，27. 10，26. 24，25. 33，25. 18，24. 04，21. 96 ；HRMS 計算值 C46H53N505 (M+1) +766. 4134，實 測值 766. 4148。實施例16 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸(6h)以實施例15產物5h為原料，合成方法及后處理同實施例4，得乳白色 固體，產率 72. 1 %,熔 ^ 145-146 °C。iH-WI^CDClySOOMHz) S 8. 95(s，1H)，
8. 54(s，lH)，8. 16(s，lH)，8. 17-8. ll(m，lH)，7. 74-7. 16 (m,
14H)，7. 08-6. 95 (m, 2H)，6. 87-6. 50 (m, 2H)，4. 95-4. 87 (m, 1H)，4. 79-4. 68 (m, 1H)， 3. 28-3. 26 (m, 2H)，3. 00-2. 86 (m, 1H)，2. 33 (s, br, 2H)，1. 38-1. 35 (m, 3H)，0. 81-0. 79 (m, 6H) ； 13C-NMR(CDC13，75MHz) :170. 18，169. 61,163. 56，147. 51，143. 79，141. 90，142. 55， 133. 42，133. 126，133. 01, 132. 46，132. 07，128. 58，128. 09，127. 39，127. 14，127. 01， 126. 32，125. 94，125. 83，125. 49，54. 79，51. 52，39. 78，37. 49，37. 30，36. 95，25. 64，23. 09， 22. 39，22. 19 ；HRMS 計算值 C36H37BN505 (M-l)"630. 2893，實測值 630. 2895。
實施例17N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5i)
以制備實施例26產物為原料，合成及后處理同實
施例 1，得白色固體，收率 78%，熔點:127-129°Co 屯-匪 R(CDC13，300MHz) 8 9. 24(s,lH), 8. 76 (d, J = 2. 4Hz,lH),8. 51 (d, J = 2. 4Hz，1H)，8. 50-8. 46 (m，1H)，8. 22-8. 14 (m，1H)， 7. 40-7. 38 (m, 5H)，7. 01-6. 88 (m, 4H)，6. 78-6. 58 (m, 1H)，6. 09-5. 97 (m, 1H)，5. 75-5. 71 (m, 2H) ,4. 82-4. 75 (m，2H) , 3. 51-3. 45 (m, 1H) , 3. 31-3. 01 (m，4H)，1. 25-1. 23 (m, 10H)， 0. 99-0. 89 (m, 8H)，0. 88-0. 85 (m, 6H) ；MS (EI) m/z703. 6 (M_l) \
實施例18 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸(6i)
OH以實施例17產物5i為原料，合成及后處理同實施
例2，蒸干得到黃色粘稠固體11. 4mg,收率49. 2%0力-匪R(CDC13，300MHz) 8 0. 79 (_CH3，d, 6H)，1. 40 1. 60(-CH2，-CH，m，3H)，1. 97 2. 13 (_CH2，_B (OH) 2，m，10H) ,3. 15 3. 19 (-CH,m, 1H)，3. 53 3. 58 (-CH, m, 1H)，3. 75 3. 98 (-CH, m, 1H)，4. 87 4. 98 (-CH, m, 1H)， 5. 05 (-CH, s，1H)，6. 89 (-C0NH, m, 1H)，7. 16 7. 19 (_Ph，吲哚，m, 9H)，8. 06 (-C0NH, d, 1H)， 8. 64(-Pyz, d, 1H) ,9. 17(-Pyz, s, 1H) ,9. 28(-Pyz, d, 1H) ,9. 72 (-NH, s, 1H)。實施例19 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5j)以制備實施例30產物為原料，合成及后處理同實施例1，得淡黃色固
體，收率 79 %，熔點153-155 °C。iH-NMlUCDCly
300MHz) 8 9. 08 (s, 1H) ,8. 73-8. 69 (m, 1H) ,8. 48 (s，1H)，8. 34 (s，1H) ,8. 11-7. 94 (m, 1H)， 7. 32-7. 21 (m, 5H)，7. 08-6. 88 (m, 4H)，6. 62-6. 42 (m, 1H)，6. 01 (s, 1H)，5. 65-5. 58 (m, 2H)， 4. 38-4. 29 (m, 2H)，3. 20-3. 01 (m, 4H)，1. 40-1. 24 (m, 10H)，0. 99-0. 89 (m, 8H)，0. 83-0. 80 (m, 6H) ；MS (EI)m/z 704. 7 (M+)。 實施例20 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸(6 j)
以實施例19產物5j為原料，合成方法及后處 理同實施例2，蒸干得到黃色粘稠固體49. 3mg,收率42. 4 %。'H-NMR(CDC13，300MHz) 8 0. 81(-CH3, m，6H)，1. 23 1. 45(_CH2，_CH，m, 3H)，1. 89 2. 07(_CH2，_B(0H)2，m, 10H)， 3.05 3. 11(-CH, m，lH)，3. 33 3. 48 (-CH, m，1H)，3. 45 3. 78 (-CH, m，lH)，4. 64 4. 81 (-CH, m, 1H)，5. 25 (_CH，d, 1H)，6. 76 (-C0NH, m, 1H)，7. 08 7. 16 (_Ph，吲哚，m, 9H)， 8. 12(-C0NH, d，lH)，8. 57(-Pyz, d，lH)，9. 07(-Pyz, d，1H)，9. 21 (_Pyz，d，lH)，9. 28 (-NH, d, 1H)。 實施例21N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5k)
以制備實施例32產物為原料，合成及后處理同
實施例 1，得白色固體，收率 81%。熔點68-70°C。屯-匪 R(CDC13，300MHz) 8 9. 33(s,lH), 8. 76-8. 73 (d, 1H)，8. 54 (s, 1H)，8. 29-8. 10 (m, 1H)，7. 29-7. 25 (m, 5H)，6. 39-6. 31 (m, 2H)， 4. 82-4. 79 (m, 1H)，4. 44-4. 41 (m, 1H)，4. 30-4. 27 (m, 1H)，3. 22-3. 19 (m, 3H)，2. 32-2. 17 (m, 3H)，2. 05-2. 02 (m, 1H)，1. 89-1. 27 (m, 14H) ,0. 96-0. 83 (m, 15H) ；MS (EI)m/z 631. 6 00。 實施例22 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_L亮氨酰_L_亮氨硼酸(6k)
以實施例21產物5k為原料，合成方法及后處理
同實施例2，蒸干得到黃色固體16. 7mg,收率73. 2 %，熔點116-118 °C。力-匪_。13， 300MHz) 8 9. 30-9. 21 (m, 1H)，8. 74 (s, 1H)，8. 47 (s, 1H)，8. 33-8. 29 (m, 1H)，7. 32-7. 22 (m, 6H)，6. 99-6. 91 (m, 1H)，4. 93-4. 57 (m, 2H)，3. 21 (s，2H)，2. 85-2. 58 (m, 1H)，2. 18-1. 25 (m, 8H) ,0. 96-0. 82 (m, 12H) ；MS (ESI)實測值m/z 496. 3977 (M_H)，計算值497. 2809。
實施例23 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(51)
以制備實施例34產物為原料，合成方法及
后處理同實施例1，得粘稠狀固體，收率87%。屯-匪_。13，300MHz) 6 9.41(s,1H), 8. 76-8. 65 (m, 1H)，8. 56-8. 45 (m, 1H)，8. 18-8. 10 (m, 1H)，5. 43-5. 38 (m, 1H)，4. 71-4. 50 (m, 1H) ,4. 38-4. 32 (m, 1H) ,4. 07-3. 97 (m, 2H) , 3. 86-3. 84 (m, H) , 2. 52-2. 08 (m, 3H)， 2. 04-1. 90 (m, 6H)，1. 67-1. 60(m，2H)，1. 41-1. 25 (m, 10H)，0. 99-0. 83(m，21H) ；MS (EI)m/z 597. 5(M)+。 實施例24 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰_L_亮氨硼酸(61)
/OH以實施例23產物51為原料，合成方法及后處理
同實施例2，得到黃色粘稠固體14. 4mg，收率62. 8%。力-匪1 _13，300MHz) S 0. 81 0. 97 (-CH3, m，18H)，l. 19 2. 82(-CH2, _CH，_B(0H)2，m, 11H) ,2. 85 2. 91(-CH, m，1H)， 4. 53(-CH，s，1H), 4. 69 4. 86(_CH，m，1H) ,6. 99 (-C0NH, d, 1H)，7. 16 (-C0NH, d, 1H) ,8. 06 8. 28 (-C0NH，m，1H)，8. 50(-Pyz, s，lH)，8. 71(-Pyz, s，lH)，9. 30(-Pyz, s, 1H) ；MS (ESI)實測 值:m/z 462. 3825 (M_H)，計算值463. 2966。 實施例25N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-亮氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5m)
以制備實施例36產物為原料，合成及后處理方
法同實施例 1，得白色固體，收率 81%。熔點:99-100°C . iH-NMlUCDCly 300MHz) 8 9. 31(s, 1H) ,8. 73 (s, 1H) ,8. 49 (d, J = 1. 8Hz，1H)，8. 33 (d，J = 7. 5Hz，1H)，7. 66-7. 58 (m，4H)， 7. 44-7. 38 (m, 3H)，6. 48-6. 36 (m, 2H)，4. 94-4. 85 (m, 1H)，4. 42-4. 30 (m, 1H)，4. 25-4. 16 (m,
241H) ,3. 39-3. 37 (d, J = 6.3Hz，2H)，3. 19-3. 11 (m，1H)，2. 35-2. 27 (m，1H)，2. 20-2. 15 (m, 1H) , 1. 89-1. 84 (m, 2H) , 1. 68-1. 61 (m, 2H) , 1. 37-1. 36 (m, 3H) , 1. 53-1. 43 (m, 4H)， 1. 28-1. 21 (m，3H)，0. 94-0. 89(m，6H)，0. 83-0. 79 (m, 9H) ；13C_NMR(CDC13，75MHz) -.111. 81， 170. 10，163. 298，147. 59，144. 34，143. 72，142. 77，133. 46，132. 47，128. 56，128. 12， 127. 62，127. 16，126. 18，125. 80,85. 60,54. 70,54. 53,51. 40,51. 20,50. 96,40. 89,40. 08， 39. 85，39. 56，38. 18，38. 09，35. 58，28. 59，27. 08，26. 25，25. 26，25. 46，24. 51，24. 03， 23. 00,22. 71,22. 15,21. 94 ；HRMS 計算值 C39H53BN505 (M+l)+682. 4134，實測值 682. 4152.
實施例26 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_L_亮氨酰_L_亮氨硼酸(6m)
J = 2. 1Hz, 1H) ,8. 45 (d, J = 1. 8Hz, 1H) ,8. 40 (d, J = 7. 5Hz，1H)，7. 74-7. 66 (m，4H)， 7. 45-7. 42 (m, 3H)，7. 37 (d, J = 8. 7Hz, 1H)，5. 05-4. 93 (m, 1H)，4. 53-4. 45 (m, 1H)，3. 38 (d, J = 8. 7Hz，2H)，2. 98-2. 83 (m, 1H)，1. 99 (s，br,2H)，1. 80-1. 51 (m, 1H)，1. 50-1. 29 (m, 6H), 0. 86-0. 74 (m, 12H) ； 13C_NMR(CDC13，75MHz) :170. 59，170. 45，163. 83，147. 74，144. 27， 143. 61，142. 77，133. 46，133. 27，132. 47，128. 59，128. 12，127. 63，127. 05，126. 24，125. 84， 54. 76,39. 88,37. 74，25. 78,24. 61,24. 48,23. 03,22. 82,22. 63,21. 60,21. 45. MS (ESI)實測 值:m/z 462. 3825 (M_H)，計算值463. 2966。 試驗實施例1三肽硼酸(酯)化合物的蛋白酶體抑制作用采用熒光肽的方法測定蛋白酶體的活性，用SuC-leu-leu-Val-Tyr-AMC(SuC代表 琥珀酰，AMC代表7-氨基-4-甲基香豆素，從SIGMA購買)測定糜蛋白酶樣活性(ChT_L)； 用Z-Ala-Arg-Arg-AMC(Z代表芐氧羰基，從Calbiochem購買)測定胰蛋白酶樣活性(T-L)； 用Z-leu-leu-Glu-代表0萘酰胺，從SIGMA購買)測定多肽-谷氨酰-多肽水 解酶活性(PGPH)。所述的活性測定方法是37°C下將1 y g從大鼠肝臟中提取20S蛋白酶體用含有不 同濃度的化合物、50 u M的熒光肽和20mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽的100 u L溶液分別培養 一小時，在380/440nm和335/410nm的激發/發射波長下分別用Fluostar OPTIMA和BMG Germany光譜熒光劑測定AMC及0 NA物質的釋放的熒光，用0. 1 % DMS0作為溶劑空白。比 較溶劑空白的熒光來計算抑制率。所述的試驗以抗腫瘤藥物硼替佐米(bortezomib)(白血 病治療藥)，即PS341作為陽性對照的比較化合物。試驗結果見下表1。表1本發明化合物的蛋白酶體抑制作用
試驗實施例2體外抗腫瘤活性初篩試驗本實施例所采用的試驗方法是藥學領域常規的抗腫瘤活性試驗方法，例如可參見 下述文獻(J. Immunol Method, 1983，65，55)。測試模型A :MTT法(HL-60人白血病)；B :SRB法(BGC-823人胃癌)；C :SRB法 (Bel-7402人肝癌)；D :SRB法(KB人鼻咽癌)。用本發明的實施例1-26的化合物進行上述試驗，試驗結果分別列于表2-5。其中 試驗結果的表示方法是“+++”表示3個劑量的抑制率均大于50% ；“++”表示2個劑量的 抑制率大于50% ；“ + ”表示1個劑量的抑制率大于50%。表2對HL-60人白血病細胞生長的抑制活性(MTT法)
表3對BGC-823人胃癌細胞生長的抑制活性(SRB法)
化合物 編號不同劑量下的測試效應(抑制率％)結果0.05 ^M0.5|iM5b68.5994.7696.54+++6b56.3593.6996.69+++5c3.1955.9996.09++6c2.6425.1097.70+5d23.6493.6397.85++6d4.3346.6697.55+5f38.2789.1583.02++6f80.3095.5296.79+++5g77.6295.4395.89+++6g76.8695.5597.09+++5h55.0088.9795.40+++6h44.9488.0697.58++5m45.9784.5397.18++6m60.3181.9396.99+++ 表4對Bel-7402人肝癌細胞生長的抑制活性(SRB法)
27
表5對KB人鼻咽癌細胞的生長抑制活性(SRB法)
化合物 編號不同劑量下的測試效應(抑制率％)結果0.05nM0.5^iM5(aM5b40.3595.0695.78++6b23.3391.4796.64++5c1.8429.8391.36+6c-13.57-5.1695.40+5d0.8373.2394.76++6d3.2317.3496.20+5f3.7493.4195.26++6f32.1195.6997.80++5g62.7995.5096.51+++6g59.4395.9796.66+++5h20.8391.2594.62++6h14.2591.7797.40++5m8.5985.6196.17++6m40.8486.4294.69++以上試驗數據表明(1)本發明的三肽硼酸(酯)具有很好的體外抗腫瘤活性。多 數化合物在5 u M濃度下可達到> 90%的抑制率，甚至在0. 05 u M濃度下個別化合物仍能達 到> 50. 0%的抑制率；⑵保護基菔烷二醇的脫除與否，對活性影響很小。試驗實施例3體外抗腫瘤活性(IC5(1)
根據上述抗腫瘤細胞活性初步篩選試驗結果，選擇其中活性較好的化合物在 HL-60(早幼粒細胞白血病細胞株)、BXPC-3(人胰腺癌細胞株)、U266(多發性骨髓瘤細胞 株)及BGC-823(人胃癌細胞株)四種腫瘤細胞株上測定了它們的IC5Q值。其中前三種腫 瘤細胞株由American Type Culture (Manassas, VA)獲得，BGC-823 (人胃癌細胞株)從中 國藥科大學獲得。試驗方法HL_60細胞于含有20%胎牛血清的IMDM培養基上培養，培養溫度 37°C，培養環境含5% C02 ；BGC-823細胞及BXPC-3細胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640 培養基上培養，培養溫度37°C，培養環境含5% C02 ；U266細胞在含有15%胎牛血清的RPMI 1640培養基上培養，培養溫度37°C，培養環境含5% C02。采用標準的MTT法測定細胞的生長。在96孔板的每個孔中加入150 y L (含3000 個細胞)的分散液并使其生長，24小時后，將10個50 yL含不同濃度藥物的介質加入相應 的孔中，繼續培養72小時。然后在37°C下將20 y L含有5mg/ml MTT的溶液加入到每個孔 中培養4小時。在4°C下1000轉/分離心5分鐘，將上層介質小心棄去。將沉淀物溶于 lOOii L的DMS0中，在540nm波長下用Infinite M200 (Tecan, Austria)酶標儀測定吸光度。結果用IC5(I值來表示，取三次獨立測定的平均值。結果見表6。表6部分化合物的IC5Q值 結果顯示，多數化合物顯示出比PS341更好的選擇性，而且在一些腫瘤瘤株上的 活性明顯高于PS341。如除6c外，其它化合物對BGC-823細胞的生抑制率均高于PS341 ；6f 對3種細胞的生長抑制率均高于PS341。試驗實施例4體內抗腫瘤活性動物ICR小鼠，雌雄各半(18-22克)，由北京醫科大學動物部提供。腫瘤細胞株小鼠H22由天然藥物及仿生藥物國家重點實驗室藥理組細胞庫提{共。方法取小鼠腫瘤細胞，經處理后將細胞稀釋為5xl06/ml。在無菌條件下，按 0. 2ml/只，接種于小鼠左前肢腋下。接種24h后，分組給藥，每天口服給藥一次，連續10天。 第12天剝瘤稱重，計算每組平均瘤重、標準差及P值。表7化合物6f和6m的體內抗腫瘤活性 NS 空白組；***P < 0. 001 ；*P < 0. 05以上體內抗腫瘤活性試驗結果表明，本發明三肽硼酸化合物的活性與硼替佐米 (PS341)相當，但毒性明顯降低，尤其是化合物6g毒性更低，有望研發成為效果更好、毒副 作用更低的蛋白酶體抑制劑。以上已經詳細描述了本發明的實施方案，對本領域技術人員來說很明顯可以做很 多改進和變化而不會背離本發明的基本精神。所有這些變化和改進都認為是本發明的范圍 之內。
權利要求
一種具有下述通式(I)結構的三肽硼酸類化合物其中，R1、R2和R3各自獨立的為C1 6直鏈或支鏈的烷基、芳基甲基或芳雜環基甲基，其中在芳基甲基或芳雜環基甲基的芳環上可任選的被選自C1 4的直鏈或支鏈烷基、羥基、氨基或鹵素的基團所取代；E為H或2，3 蒎烷二醇酯基。F2009101472920C0000011.tif
2.根據權利要求1所述的化合物，其中所述的芳基是苯基或萘基，所述的雜芳環基是 吲哚基，和/或所述芳環上的取代基是甲基、羥基、氯原子或氟原子。
3.根據權利要求2所述的化合物，其中所述的禮、1 2和R3各自獨立的為苯甲基、對羥基 苯甲基、β -吲哚基甲基、異丁基或2-萘基甲基。
4.根據權利要求3所述的化合物，其中所述的R3基團是異丁基。
5. 根據權利要求4所述化合物，其中所述的化合物是N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基-L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 萘丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 亮氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 亮氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷匕日 匕日 匕日 匕日酉酉酉酉醇醇醇醇 .1 ^ - ^ ,1匕日 匕日 匕日 匕日 匕日酉酉酉酉酉醇醇醇醇醇 .1 ^ - ^ ,1 ^苯丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 亮氨酰-L-亮丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 萘丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸； 萘丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸； 苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸 酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸 亮氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸 亮氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸 苯丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸； 萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸； 色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸 苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸 苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮丙氨酰-L-亮氨硼酸；和 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸。
6.根據權利要求1-5所述化合物的制備方法，該方法包括以吡嗪甲酸為起始原料，依 次引入二種所需的氨基酸，然后引入所需第三個氨基酸的硼酸酯，可得到本發明上述通式 的硼酸酯類化合物；如果需要制備相應的硼酸化合物，可將上述硼酸酯化合物水解。
7.根據權利要求6所述化合物的制備方法，當其中所述的R3基團是異丁基時，所述的 通式化合物可按下述合成路線制備 優選其中所用的原料L-亮氨硼酸酯可按下述合成路線制備
8.藥物組合物，其中含有權利要求1-5任意一項所述的三肽硼酸類化合物作為活性成 分，和任選的含有一種或多種藥用載體，優選其中所的活性成分的含量是0.5% -99%，藥 用載體的含量是_99.5%。
9.根據權利要求8所述的藥物組合物，其中所述的組合物被制成口服或腸胃外給藥的 形式，所述腸胃外給藥的形式包括注射給藥、局部給藥、吸入給藥、直腸給藥或植入給藥的 形式；優選的，其中口服給藥的劑型是片劑、膠囊、顆粒劑或適于口服的液體制劑形式，或所 述的口服制劑是緩釋或定量釋放的形式；其中所述注射給藥的藥物組合物是注射劑、凍干粉針制劑或適于輸液的劑型。
10.權利要求1-5任意一項所述的化合物或權利要求8或9所述的的藥物組合物在制 備蛋白酶體抑制劑中的應用；優選其中所述的蛋白酶體抑制劑是惡性腫瘤、多種神經系統 變性疾病、肌肉惡病質或糖尿病的治療劑；其中所述的惡性腫瘤是白血病、胃癌、肝癌或鼻咽癌。
全文摘要
本發明涉及藥品生產領域，具體的，本發明公開了具有通式(I)結構的一系列三肽硼酸(酯)類蛋白酶體抑制劑、其制備方法和應用，通過合成和初步生物活性評價，發現本發明化合物具有很好的蛋白酶體抑制活性，可作為蛋白酶體抑制劑，用于各種基因疾病如惡性腫瘤、多種神經系統變性疾病、肌肉惡病質或糖尿病等疾病的治療。
文檔編號A61P35/00GK101928329SQ20091014729
公開日2010年12月29日 申請日期2009年6月19日 優先權日2009年6月19日
發明者姚書揚, 崔景榮, 朱永強, 李潤濤, 程鐵明, 葛澤梅 申請人:北京大學