專利名稱：：消痛貼膏指紋圖譜檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥制劑的指紋圖譜檢測(cè)方法，具體涉及消痛貼膏藥粉或膏或提取物的指紋圖譜的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：消痛貼膏為西藏林芝奇正藏藥股份公司生產(chǎn)的藏成藥，該藥采用中國(guó)青藏高原特有的天然藥物，經(jīng)特殊低溫真空凍干工藝精制而成，主要功能為活血化瘀、消腫止痛，用于急慢性挫傷、跌打瘀傷、骨質(zhì)增生、風(fēng)濕及類風(fēng)濕疼痛，以其卓越的功效享譽(yù)國(guó)內(nèi)外，位列中國(guó)特有的精品藏藥之首。目前，其質(zhì)量控制指標(biāo)除了測(cè)定木犀草素含量外，另有獨(dú)一味、姜黃色的薄層鑒別，雖能控制質(zhì)量，但無(wú)法全面掌控質(zhì)量狀況，為彌補(bǔ)以上不足，使其質(zhì)量控制技術(shù)更加完善、科學(xué)并對(duì)其今后的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)提供一種可利用的質(zhì)量控制模式，對(duì)連續(xù)生產(chǎn)的11批產(chǎn)品進(jìn)行了分析比較，建立起該產(chǎn)品提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法及標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種消痛貼膏提取物或制劑的準(zhǔn)指紋圖譜檢測(cè)方法，該方法具有方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握的特點(diǎn)。中國(guó)專利號(hào)為ZL200510080696.4公開(kāi)了消痛貼膏提取物或制劑，由下列重量份數(shù)的原料制成藥劑獨(dú)一味5-15份、棘豆2-10份、姜黃15-60份、花椒7_20份、水牛角5_15份和水柏枝15-40份；制備方法是將花椒、水牛角粉碎成0.01-200iim細(xì)粉，其余獨(dú)一味、棘豆、姜黃和水柏枝四味切碎，加水、乙醇或醋煎煮0.5-3小時(shí)，再加入上述細(xì)粉，攪勻，放置至室溫，干燥，取出，粉碎成細(xì)粉，按照常規(guī)方法，制成任意制劑；或制備方法為將花椒、水牛角粉碎成0.01-200um細(xì)粉，其余獨(dú)一味、棘豆、姜黃和水柏枝四味切碎，加水、乙醇或醋煎煮0.5-3小時(shí)，再加入上述細(xì)粉，攪勻，降至室溫后放入鋁盤，入真空冷凍倉(cāng)，降溫至_15°C_40°C。開(kāi)始抽真空，10-24小時(shí)后開(kāi)倉(cāng)取出，粉碎，按常規(guī)方法制成任何一種藥劑學(xué)上所說(shuō)的劑型。本發(fā)明提供上述由獨(dú)一味5-15份、棘豆2-10份、姜黃15-40份、花椒7_20份、水牛角5-15份和水柏枝15-40份原料藥制成的消痛貼膏制劑或提取物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜檢測(cè)方法，其中色譜條件為以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5%磷酸(3-970-90)為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相；采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相8095%、B相205%，60100min，A相5585%、B相4515%,100160min，A相3077%、B相7023%；檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速0.51.5ml/min,柱溫2050°C，進(jìn)樣量125ul；所述乙腈、四氫呋喃、0.5%磷酸的體積比為40104.87.255.282.8；所述色譜條件優(yōu)選為以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以6.473.6的四氫呋喃-0.5%磷酸為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%、B相5%，60100min，A相85%、B相15%,100~160min,A相77%、B相23%，檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速0.51.5ml/min,柱溫2050°C，進(jìn)樣量10ul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000；所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜共有特征指紋峰有18個(gè)，其峰面積綜合占總峰面積的90%以上；10號(hào)色譜峰為木犀草素的特征峰，木犀草素的特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；所得到的消痛貼膏標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中共有特征峰為1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.111.20，相對(duì)保留面積0.1811.622號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.141.26，相對(duì)保留面積0.4227.393號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.161.31，相對(duì)保留面積0.2616.974號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.231.38，相對(duì)保留面積0.1610.435號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.351.54，相對(duì)保留面積0.5636.446號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.421.67，相對(duì)保留面積5.7179.247號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.651.82，相對(duì)保留面積0.4831.278號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.671.87，相對(duì)保留面積0.3623.479號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.962.13，相對(duì)保留面積0.5334.4510號(hào)峰(參考峰木犀草素峰)相對(duì)保留時(shí)間1，相對(duì)保留面積111號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.072.68，相對(duì)保留面積2.01~83.2812號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.232.86，相對(duì)保留面積0.41~26.6513號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.292.94，相對(duì)保留面積1.4772.1014號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.363.02，相對(duì)保留面積0.159.7515號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.413.14，相對(duì)保留面積0.8454.6116號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.503.53，相對(duì)保留面積1.6371.3317號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.683.64，相對(duì)保留面積0.3522.7118號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.724.00，相對(duì)保留面積2.82127.89。優(yōu)選，以木犀草素的色譜峰(10號(hào)峰)的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，所得到的消痛貼膏標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中共有特征峰為1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.11，相對(duì)保留面積0.1811.622號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.14，相對(duì)保留面積0.4227.393號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.16，相對(duì)保留面積0.2616.974號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.23，相對(duì)保留面積0.1610.435號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.35，相對(duì)保留面積0.5636.446號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.42，相對(duì)保留面積5.7179.247號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.65，相對(duì)保留面積0.4831.278號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.67，相對(duì)保留面積0.3623.479號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.96，相對(duì)保留面積0.5334.4510號(hào)峰(參考峰木犀草素峰)相對(duì)保留時(shí)間1，相對(duì)保留面積111號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.07，相對(duì)保留面積2.01~83.2812號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.23，相對(duì)保留面積0.4126.6513號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.29，相對(duì)保留面積1.4772.1014號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.36，相對(duì)保留面積0.159.7515號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.41，相對(duì)保留面積0.8454.6116號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.50，相對(duì)保留面積1.6371.3317號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.68，相對(duì)保留面積0.3522.7118號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.72，相對(duì)保留面積2.82127.89。對(duì)照品溶液的制備取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱重，加甲醇或乙醇或乙腈制成濃度為540ug/ml的對(duì)照品溶液，與供試品溶液相同的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到木犀草素峰特征峰的保留時(shí)間；所述供試品溶液的制備方法為取消痛貼膏制劑0.52g(消痛貼膏液體制劑按110130的體積比)，加入0.55mol/L的鹽酸甲醇溶液，加熱回流10120分鐘，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液，用甲醇或乙腈溶解，作為供試品溶液；所述供試品溶液的制備方法中鹽酸甲醇溶液由0.55mol/L的磷酸甲醇溶液或0.55mol/L的鹽酸乙腈溶液或0.55mol/L的磷酸乙腈溶液中的任意一種替換；所述供試品溶液的制備方法中，加熱回流由超聲提取560分鐘或回流提取112小時(shí)或微波萃取0.14小時(shí)的任意一種替換。本發(fā)明所述的消痛貼膏原料藥組成優(yōu)選為獨(dú)一味9.1份、棘豆4.5份、姜黃40.9份、花椒13.6份、水牛角9.1份、水柏枝22.7份；消痛貼膏原料藥組成或優(yōu)選為獨(dú)一味7.1份、棘豆7.5份、姜黃20份、花椒15.6份、水牛角7.1份、水柏枝32.7份；消痛貼膏原料藥組成或優(yōu)選為獨(dú)一味11.1份、棘豆3.5份、姜黃50.9份、花椒13.6份、水牛角12份、水柏枝17份。所述供試品中消痛貼膏可以是按照上述ZL200510080696.4專利的組方制備的各種貼膏劑(ZL200510080696.4所公開(kāi)的劑型)，也可以是按照上述ZL200510080696.4專利的組方制備的提取物或原料直接制備的中藥細(xì)粉或者按照上述ZL200510080696.4專利的組方制備各種口服臨床劑型，如片劑、膠囊、顆粒、緩釋制劑等。本發(fā)明具有方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握的特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)例1木犀草素圖譜指紋圖譜的建立方法1儀器與試藥1.1儀器Waters2695高效液相色譜儀，DAD(二極管陣列檢測(cè)器)，EMPOWERTM2操作系統(tǒng)。1.2試藥四氫呋喃，色譜純；乙腈，色譜純；磷酸，分析純；消痛貼膏為西藏奇正藏藥股份有限公司生產(chǎn)。2方法與結(jié)果2.1色譜條件以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5%磷酸(6.473.6)為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%,B相5%,60IOOmin,A相85%,B相15%,100160min,A相77%,B相23%,檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速0.51.5ml/min,柱溫2050°C，進(jìn)樣量IOul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000。2.2特征指紋圖譜的測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱重，加甲醇制成濃度為15ug/ml的對(duì)照品溶液，照中國(guó)藥典2005版或2010版一部附錄高效液相色譜法試驗(yàn)，與供試品溶液相同的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到木犀草素峰保留時(shí)間，得到木犀草素圖譜II。實(shí)驗(yàn)例2消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜I的建立方法1.儀器與試藥1.1儀器Waters2695高效液相色譜儀，DAD(二極管陣列檢測(cè)器)，EMPOWERTM2操作系統(tǒng)。1.2試藥四氫呋喃，色譜純；乙腈，色譜純；磷酸，分析純；消痛貼膏為西藏奇正藏藥股份有限公司生產(chǎn)(按ZL200510080696.4實(shí)施例1)。2.方法與結(jié)果2.1色譜條件以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5%磷酸(6.473.6)為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%,B相5%,60IOOmin,A相85%,B相15%,100160min,A相77%,B相23%,檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速0.51.5ml/min，柱溫2050°C，進(jìn)樣量IOul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000。2.2指紋圖譜的測(cè)定2.2.1消痛貼膏指紋圖譜制備供試品溶液的制備方法取消痛貼膏樣品2g，精密稱重，精密加入2.5mol/L的鹽酸甲醇溶液，加熱回流30分鐘，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2ml，置5ml量瓶中，用甲醇至刻度，作為供試品溶液。將供試品溶液IOul注入高效液相色譜儀，與木犀草素峰保留時(shí)間進(jìn)行比對(duì)，10號(hào)色譜峰為木犀草素的特征峰，10號(hào)峰(木犀草素的特征峰)的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜I。2.2.2共有峰的確定通過(guò)10批消痛貼膏藥粉指紋圖譜測(cè)定，比較其色譜圖，確定共有峰18個(gè)，其中以10號(hào)指紋峰(木犀草素的特征峰)為參照物，其峰面積超過(guò)總峰面積的10%，列舉11批樣品共有峰相對(duì)保留時(shí)間以及相對(duì)峰面積統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)下表1、表2。表1消痛貼膏11批共有峰的相對(duì)保留時(shí)間統(tǒng)計(jì)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2消痛貼膏11批共有峰的相對(duì)面積統(tǒng)計(jì)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>圖1是消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜I圖2是木犀草素圖譜II以下通過(guò)具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。具體實(shí)施例方式實(shí)施例11、消痛貼膏制備獨(dú)一味9.lg、棘豆4.5g、姜黃40.9g、花椒13.6g、水牛角9.lg、水柏枝22.7g；將花椒、水牛角粉碎成50μm的細(xì)粉。其余獨(dú)一味等四味切碎，加水煎煮0.5小時(shí)，再加入上述細(xì)粉，攪勻，放置至室溫，干燥，取出，粉碎成細(xì)粉。將細(xì)粉裝入無(wú)紡布袋中，封口，粘于膠布上制成貼膏劑，包裝即得。2、消痛貼膏指紋圖譜檢測(cè)供試品溶液的制備方法取消痛貼膏樣品2g，精密稱重，精密加入2.5mol/L的鹽酸甲醇溶液，加熱回流30分鐘，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2ml，置5ml量瓶中，用甲醇至刻度，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱重，加甲醇制成濃度為15ug/ml的對(duì)照品溶液，照中國(guó)藥典2005版或2010版一部附錄高效液相色譜法試驗(yàn)，與供試品溶液相同的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到木犀草素峰保留時(shí)間；色譜條件以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5%磷酸(6.473.6)為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，乙腈、四氫呋喃、0.5%磷酸的體積比為30572;采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%、B相5%，60lOOmin，A相:85%、B相15%，10016011^11，八相:77%、B相23%，檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速0.51.5ml/min，柱溫2050°C，進(jìn)樣量IOul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000。將供試品溶液IOul注入高效液相色譜儀，與10號(hào)峰(木犀草素的特征峰)的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例2:1、消痛貼膏提取物制備獨(dú)一味9.lg、棘豆4.5g、姜黃40.9g、花椒13.6g、水牛角9.lg、水柏枝22.7g；將花椒、水牛角粉碎成50μm的細(xì)粉。其余獨(dú)一味等四味切碎，加水煎煮0.5小時(shí)，再加入上述細(xì)粉，攪勻，放置至室溫，干燥，取出，粉碎成細(xì)粉，即得提取物。2、消痛貼膏指紋圖譜檢測(cè)供試品溶液的制備方法取消痛貼膏提取物樣品1.8g，精密稱重，精密加入3.5mol/L的鹽酸甲醇溶液，加熱回流40分鐘或，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2ml，置5ml量瓶中，用甲醇至刻度，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱重，加甲醇制成濃度為15Ug/ml的對(duì)照品溶液，照中國(guó)藥典2005版或2010版一部附錄高效液相色譜法試驗(yàn)，與供試品溶液相同的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到木犀草素峰保留時(shí)間；色譜條件以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5%磷酸(5.475.6)為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，乙腈、四氫呋喃、0.5%磷酸的體積比為206.260；采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%、B相5%，60100min，A相:85%、B相15%,100160min，A相:77%、B相23%，檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速lml/min，柱溫2050°C，進(jìn)樣量IOul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000。將供試品溶液IOul注入高效液相色譜儀，與10號(hào)峰(木犀草素的特征峰)的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例3:1、按照Z(yǔ)L200510080696.4實(shí)施例2制備的軟膏劑2、消痛貼膏指紋圖譜檢測(cè)供試品溶液的制備方法取消痛貼膏軟膏20g，精密稱重，精密加入2.5mol/L的鹽酸甲醇溶液，超聲提取30分鐘，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2ml，置5ml量瓶中，用甲醇至刻度，作為供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱重，加甲醇制成濃度為15ug/ml的對(duì)照品溶液，照中國(guó)藥典2005版或2010版一部附錄高效液相色譜法試驗(yàn)，與供試品溶液相同的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到木犀草素峰保留時(shí)間；色譜條件以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5%磷酸(6.473.6)為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，采用梯度洗脫方式，乙腈、四氫呋喃、0.5%磷酸的體積比為207.280；其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%、B相5%，60100min，A相:85%、B相15%,100160min，A相:77%、B相23%，檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速0.51.5ml/min，柱溫2050°C，進(jìn)樣量IOul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000。將供試品溶液IOul注入高效液相色譜儀，與10號(hào)峰(木犀草素的特征峰)的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。實(shí)施例4:1、按照Z(yǔ)L200510080696.4實(shí)施例3制備的巴布膏劑2、指紋圖譜檢測(cè)供試品溶液的制備方法取消痛貼膏巴布膏劑10g，精密稱重，精密加入3.5mol/L的鹽酸甲醇溶液，微波萃取2小時(shí)，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2ml，置5ml量瓶中，用甲醇至刻度，作為供試品溶液。色譜條件以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5%磷酸(4.480.6)為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，乙腈、四氫呋喃、0.5%磷酸的體積比為155.260；采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%、B相5%，60lOOmin，A相80%、B相20%，100160min,A相70%、B相30%，檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm,流速1.2ml/min，柱溫2050°C，進(jìn)樣量10ul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000。將供試品溶液10ul注入高效液相色譜儀，與10號(hào)峰(木犀草素的特征峰)的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。實(shí)施例5:1、消痛貼膏制備獨(dú)一味9.lg、棘豆4.5g、姜黃40.9g、花椒13.6g、水牛角9.lg、水柏枝22.7g；將花椒、水牛角粉碎成50ym的細(xì)粉。其余獨(dú)一味等四味切碎，加水煎煮0.5小時(shí)，再加入上述細(xì)粉，攪勻，放置至室溫，干燥，取出，粉碎成細(xì)粉。將細(xì)粉裝入無(wú)紡布袋中，封口，粘于膠布上制成貼膏劑，包裝即得。2、消痛貼膏指紋圖譜檢測(cè)供試品溶液的制備方法取消痛貼膏樣品2g，精密稱重，精密加入2.5mol/L的鹽酸甲醇溶液，超聲提取30分鐘，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2ml，置5ml量瓶中，用乙腈溶解至刻度，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱重，加甲醇制成濃度為20ug/ml的對(duì)照品溶液，照中國(guó)藥典2005版或2010版一部附錄高效液相色譜法試驗(yàn)，與供試品溶液相同的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到木犀草素峰保留時(shí)間；色譜條件以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5%磷酸(6.473.6)為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，乙腈、四氫呋喃、0.5%磷酸的體積比為205.265.2；采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%、B相5%，60lOOrnin，A相:85%、B相15%,100160min，A相:77%、B相23%，檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速0.51.5ml/min，柱溫2050°C，進(jìn)樣量10ul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000。將供試品溶液10ul注入高效液相色譜儀，與10號(hào)峰(木犀草素的特征峰)的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。實(shí)施例6:1、消痛貼膏制備獨(dú)一味9.lg、棘豆4.5g、姜黃40.9g、花椒13.6g、水牛角9.lg、水柏枝22.7g；將花椒、水牛角粉碎成50ym的細(xì)粉。其余獨(dú)一味等四味切碎，加水煎煮0.5小時(shí)，再加入上述細(xì)粉，攪勻，放置至室溫，干燥，取出，粉碎成細(xì)粉。將細(xì)粉裝入無(wú)紡布袋中，封口，粘于膠布上制成貼膏劑，包裝即得。2、消痛貼膏指紋圖譜檢測(cè)供試品溶液的制備方法取消痛貼膏樣品2g，精密稱重，精密加入2.5mol/L的磷酸乙腈溶液，微波萃取2小時(shí)，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2ml，置5ml量瓶中，用乙腈溶解至刻度，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱重，加甲醇制成濃度為18ug/ml的對(duì)照品溶液，照中國(guó)藥典2005版或2010版一部附錄高效液相色譜法試驗(yàn)，與供試品溶液相同的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到木犀草素峰保留時(shí)間色譜條件以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5%磷酸(6.473.6)為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，乙腈、四氫呋喃、0.5%磷酸的體積比為205.265.2;采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%、B相5%，60100min，A相:85%、B相15%,100160min，A相:77%、B相23%，檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速0.51.5ml/min，柱溫2050°C，進(jìn)樣量10ul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000。將供試品溶液10ul注入高效液相色譜儀，與10號(hào)峰(木犀草素的特征峰)的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。權(quán)利要求消痛貼膏制劑指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于該方法為取消痛貼膏制劑0.5～2g(消痛貼膏液體制劑按1∶10～1∶30的體積比)，加入0.5～5mol/L的鹽酸甲醇溶液，加熱回流10～120分鐘，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液，用甲醇或乙腈溶解，作為供試品溶液；其中色譜條件為以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以3-9∶70-90四氫呋喃-0.5％磷酸為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相；采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為0～60min，A相80～95％、B相20～5％，60～100min，A相55～85％、B相45～15％，100～160min，A相30～77％、B相70～23％；檢測(cè)波長(zhǎng)為350±2nm，流速0.5～1.5ml/min，柱溫20～50℃，進(jìn)樣量1～25ul；對(duì)照品溶液的制備取木犀草素對(duì)照品適量，精密稱重，加甲醇或乙醇或乙腈制成濃度為5～40ug/ml的對(duì)照品溶液，與供試品溶液相同的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到木犀草素峰特征峰的保留時(shí)間；測(cè)定法將供試品溶液注入高效液相色譜儀即得；所述消痛貼膏制劑由如下重量份的原料藥制成獨(dú)一味5-15份、棘豆2-10份、姜黃15-60份、花椒7-20份、水牛角5-15份和水柏枝15-40份。2.如權(quán)利要求1所述的指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于乙腈、四氫呋喃、0.5%磷酸的體積比為40104.87.255.282.8。3.如權(quán)利要求2所述的指紋圖譜檢測(cè)方法，特征在于其中色譜條件為以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以6.473.6四氫呋喃-0.5%磷酸為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相，采用梯度洗脫方式，其洗脫時(shí)間及流動(dòng)相比例為060min，A相95%、B相5%，60lOOmin，A相:85%、B相15%，10016011^11，八相:77%、B相23%，檢測(cè)波長(zhǎng)為350士2nm，流速0.51.5ml/min，柱溫2050°C，進(jìn)樣量IOul，理論塔板數(shù)按木犀草素峰計(jì)，應(yīng)不低于4000。4.如權(quán)利要求1所述的指紋圖譜檢測(cè)方法，特征在于指紋圖譜共有特征指紋峰有18個(gè)，其峰面積綜合占總峰面積的90%以上；10號(hào)色譜峰為木犀草素的特征峰，木犀草素的特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜共有特征峰為1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.111.20，相對(duì)保留面積0.1811.622號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.141.26，相對(duì)保留面積0.4227.393號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.161.31，相對(duì)保留面積0.2616.974號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.231.38，相對(duì)保留面積0.1610.435號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.351.54，相對(duì)保留面積0.5636.446號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.421.67，相對(duì)保留面積5.7179.247號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.651.82，相對(duì)保留面積0.4831.278號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.671.87，相對(duì)保留面積0.3623.479號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.962.13，相對(duì)保留面積0.5334.4510號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1，相對(duì)保留面積111號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.072.68，相對(duì)保留面積2.0183.2812號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.232.86，相對(duì)保留面積0.4126.6513號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.292.94，相對(duì)保留面積1.4772.1014號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.363.02，相對(duì)保留面積0.159.7515號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.413.14，相對(duì)保留面積0.8454.6116號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.503.53，相對(duì)保留面積1.6371.3317號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.683.64，相對(duì)保留面積0.3522.7118號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.724.00，相對(duì)保留面積2.82127.89。5.如權(quán)利要求4所述的指紋圖譜檢測(cè)方法，特征在于消痛貼膏制劑指紋圖譜中共有特征峰為1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.11，相對(duì)保留面積0.1811.622號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.14，相對(duì)保留面積0.4227.393號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.16，相對(duì)保留面積0.2616.974號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.23，相對(duì)保留面積0.1610.435號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.35，相對(duì)保留面積0.5636.446號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.42，相對(duì)保留面積5.7179.247號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.65，相對(duì)保留面積0.4831.278號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.67，相對(duì)保留面積0.3623.479號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.96，相對(duì)保留面積0.5334.4510號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1，相對(duì)保留面積111號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.07，相對(duì)保留面積2.0183.2812號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.23，相對(duì)保留面積0.4126.6513號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.29，相對(duì)保留面積1.4772.1014號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.36，相對(duì)保留面積0.159.7515號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.41，相對(duì)保留面積0.8454.6116號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.50，相對(duì)保留面積1.6371.3317號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.68，相對(duì)保留面積0.3522.7118號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.72，相對(duì)保留面積2.82127.89。6.如權(quán)利要求1-5任意一種所述的指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于進(jìn)樣的供試品溶液的制備方法中鹽酸甲醇溶液由0.55mol/L的磷酸甲醇溶液或0.55mol/L的鹽酸乙腈溶液或0.55mol/L的磷酸乙腈溶液中的任意一種替換；加熱回流由超聲提取560分鐘或回流提取112小時(shí)或微波萃取0.14小時(shí)的任意一種替換。7.消痛貼膏制劑，由獨(dú)一味5-15份、棘豆2-10份、姜黃15-60份、花椒7_20份、水牛角5-15份和水柏枝15-40份的原料藥制成，其特征在于該制劑指紋圖譜共有特征指紋峰18個(gè)，其峰面積綜合占總峰面積的90%以上；10號(hào)色譜峰為木犀草素的特征峰，木犀草素的特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；特征峰為1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.111.20，相對(duì)保留面積0.1811.622號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.141.26，相對(duì)保留面積0.4227.393號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.161.31，相對(duì)保留面積0.2616.974號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.231.38，相對(duì)保留面積0.1610.435號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.351.54，相對(duì)保留面積0.5636.446號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.421.67，相對(duì)保留面積5.7179.247號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.651.82，相對(duì)保留面積0.4831.278號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.671.87，相對(duì)保留面積0.3623.479號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.962.13，相對(duì)保留面積0.5334.4510號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1，相對(duì)保留面積111號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.072.68，相對(duì)保留面積2.0183.2812號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.232.86，相對(duì)保留面積0.4126.6513號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.292.94，相對(duì)保留面積1.4772.1014號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.363.02，相對(duì)保留面積0.159.7515號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.413.14，相對(duì)保留面積0.8454.6116號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.503.53，相對(duì)保留面積1.6371.3317號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.683.64，相對(duì)保留面積0.3522.7118號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.724.00，相對(duì)保留面積2.82127.89。8.如權(quán)利要求7所述的消痛貼膏制劑，特征在于該制劑指紋圖譜中共有特征峰為1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.11，相對(duì)保留面積0.1811.622號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.14，相對(duì)保留面積0.4227.393號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.16，相對(duì)保留面積0.2616.974號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.23，相對(duì)保留面積0.1610.435號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.35，相對(duì)保留面積0.5636.446號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.42，相對(duì)保留面積5.7179.247號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.65，相對(duì)保留面積0.4831.278號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.67，相對(duì)保留面積0.3623.479號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間0.96，相對(duì)保留面積0.5334.4510號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1，相對(duì)保留面積111號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.07，相對(duì)保留面積2.0183.2812號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.23，相對(duì)保留面積0.4126.6513號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.29，相對(duì)保留面積1.4772.1014號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.36，相對(duì)保留面積0.159.7515號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.41，相對(duì)保留面積0.8454.6116號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.50，相對(duì)保留面積1.6371.3317號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.68，相對(duì)保留面積0.3522.7118號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間1.72，相對(duì)保留面積2.82127.89。9.如權(quán)利要求1-5任一所述的指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于所述消痛貼膏制劑由如下重量份的原料藥制成獨(dú)一味9.1份、棘豆4.5份、姜黃40.9份、花椒13.6份、水牛角9.1份、水柏枝22.7份；或?yàn)楠?dú)一味7.1份、棘豆7.5份、姜黃20份、花椒15.6份、水牛角7.1份、水柏枝32.7份；或?yàn)楠?dú)一味11.1份、棘豆3.5份、姜黃50.9份、花椒13.6份、水牛角12份、水柏枝17份。10.如權(quán)利要求8所述的制劑，其特征在于所述制劑由如下重量份的原料藥制成獨(dú)一味9.1份、棘豆4.5份、姜黃40.9份、花椒13.6份、水牛角9.1份、水柏枝22.7份；或?yàn)楠?dú)一味7.1份、棘豆7.5份、姜黃20份、花椒15.6份、水牛角7.1份、水柏枝32.7份；或?yàn)楠?dú)一味11.1份、棘豆3.5份、姜黃50.9份、花椒13.6份、水牛角12份、水柏枝17份。全文摘要本方法公開(kāi)了消痛貼膏制劑的指紋圖譜檢測(cè)方法，其中色譜條件為以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以四氫呋喃-0.5％磷酸為A相，乙腈為B相組成流動(dòng)相；采用梯度洗脫方式，檢測(cè)波長(zhǎng)為350±2nm，流速0.5～1.5ml/min，柱溫20～50℃，進(jìn)樣量1～25ul；指紋圖譜共有特征指紋峰有18個(gè)，其峰面積綜合占總峰面積的90％以上；10號(hào)色譜峰為木犀草素的特征峰，相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為1，計(jì)算其他峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，即得到消痛貼膏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，能從色譜的整體面貌上把握消痛貼膏的質(zhì)量情況，可作為消痛貼膏質(zhì)量控制的指標(biāo)。文檔編號(hào)A61K9/70GK101797360SQ201010126328公開(kāi)日2010年8月11日申請(qǐng)日期2010年3月15日優(yōu)先權(quán)日2010年3月15日發(fā)明者張雪菊,王浩亮,肖劍琴,馬蓉申請(qǐng)人:甘肅奇正藏藥有限公司