專利名稱：C10orf116基因在制備改善脂肪組織胰島素敏感性藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于基因工程領域，涉及ClOorflie基因在制備改善脂肪組織胰島素敏感性的藥物中的應用。
背景技術：
糖尿病是嚴重危害人類身體健康和生活質量的一種代謝性疾病。目前，我國糖尿病構成以2型糖尿病為主，占糖尿病人群的90%以上，而且該病年輕化趨勢日漸明顯。其嚴重的危害性及在青年、兒童中不斷增高的發病率引起了全球學者的廣泛關注，已經成為醫學領域中的重要研究方向。糖尿病的發病機制主要有兩個方面一是胰島素分泌不足，二是胰島素抵抗。而肥胖，尤其是中心型肥胖是產生胰島素抵抗的一個重要危險因素。脂肪細胞是胰島素作用的經典靶細胞，其對葡萄糖攝取障礙是胰島素抵抗產生的重要因素。因此，從脂肪組織中篩選出與胰島素抵抗相關基因作為2型糖尿病防治的靶標業已成為研究熱點之一。C10orfll6基因是我們在前期研究工作中以抑制性差減雜交(suppressive subtractivehybridization, SSH)技術篩選肥胖與正常人網膜脂肪組織中的差異表達基因獲得的一條新基因，該基因cDNA全長67^p(SEQ ID NO :1，匪_006擬9. 2)，開放閱讀框長 221bp，編碼76個氨基酸。該基因特異高表達于脂肪組織，在肥胖患者脂肪組織中表達顯著上調，可促進脂肪細胞增殖、抑制脂肪細胞凋亡。但該基因與胰島素敏感性之間的關系如何尚無知曉。

發明內容
本發明的目的是提供ClOorflie基因在制備改善胰島素敏感性的藥物中的應用。發明人檢測了 ClOorflie基因過表達對成熟脂肪細胞葡萄糖攝取功能及其對葡萄糖轉運蛋白(GLUT4)基因mRNA表達水平的影響。結果發現，脂肪細胞在沒有胰島素作用的基礎狀態下對葡萄糖僅有低水平的攝取，clOorflie基因過表達雖不顯著影響脂肪細胞在此基礎狀態下的葡萄糖攝取量，但卻能顯著提高成熟脂肪細胞胰島素刺激狀態下的葡萄糖攝取，同時發現GLUT4的表達在clOorflie基因過表達的成熟脂肪細胞中也呈明顯上調趨勢。提示clOorflie基因與胰島素抵抗可能密切相關，可用于開發改善胰島素敏感性藥物，另外，ClOorflie基因也能促進脂肪組織攝取葡萄糖，因而提出“ClOorflie基因在制備改善脂肪組織胰島素敏感性和/或促進脂肪組織攝取葡萄糖的藥物中的應用”的技術方案。本發明的有益效果本發明檢測了 clOorflie基因過表達對成熟脂肪細胞葡萄糖攝取功能，考慮到葡萄糖轉運體4(GLUT4)是胰島素敏感葡萄糖攝取作用的重要功能執行者，GLUT4數量減少與轉位障礙被認為是產生外周胰島素抵抗或敏感性降低的重要機制之一，本發明同時檢測了 clOorfl 16基因過表達對GLUT4的影響。顯示ClOorfl 16基因能改善脂肪組織對胰島素敏感性，同時也能促進脂肪組織攝取葡萄糖。本發明公開了 ClOorflie基因在制備改善脂肪組織胰島素敏感性和/或促進脂肪組織攝取葡萄糖的藥物中的應用，為制備改善脂肪組織胰島素敏感性的藥物及制備促進脂肪組織攝取葡萄糖的藥物提供了新的技術方案。


圖IpcDNA. 3. 1/myC-His (_) A載體圖譜及插入位點圖2cl0orfll6基因穩定轉染3T3-L1前體脂肪細胞株的鑒定圖3cl0orfll6基因過表達對成熟脂肪細胞糖攝取功能的影響。Γ，與 pcDNA3. IInsulin 相比 P < 0. 05)圖如10虹打16基因過表達對脂肪細胞中GLUT4基因表達的影響。(*，與第4天 pcDNA3. 1 相比 P < 0. 05 ；#，與第 8 天 pcDNA3. 1 相比 P < 0. 001)圖3、4中□代表pcDNA3. 1空載質粒的3T3-L1前體脂肪細胞(即pcDNA3. 1-3T3L1 細胞)，■代表轉染clOorf 116-pcDNATM3. 1/myc-His (-)A質粒的3T3-L1前體脂肪細胞(即 clOorfl 16-pcDNA3. 1-3T3L1 細胞)
具體實施例方式以下通過實施例對本發明作進一步的闡述。實施例11材料和方法1.1試驗材料1.1試驗材料本試驗所需的pcDNA 3. 1/myc-His (_) A質粒購自美國hvitrogen公司； hCIOorfl 16-pcDNA 3. 1/myc-His (-) A真核表達載體由本實驗小組自行構建；pGEM -T Easy購自美國！Iomega公司；hC10orfll6-pGEM -T Easy質粒載體由本實驗小組自行構建；2-deoxy-D-3[H]Glucose 購自英國 Amersham 公司；RNA 提取劑 TRIzoL Reagent 購自美國hvitrogen公司；反轉錄試劑購自美國Promega公司；Advantage 2PCR試劑盒購自日本Takara公司；TA載體購自美國Promega公司；實時熒光定量PCR中Master Mix購自美國ABI公司；引物由美國^witrogen公司合成。1. 2( —)hC10orfll6基因全編碼區cDNA片段獲取及TA克隆1.總RNA抽提采用Trizol法從人脂肪組織中抽提總RNA。2. 1. 5%瓊脂糖/溴化乙錠凝膠電泳鑒定RNA完整性，利用紫外分光光度計完成總 RNA定量和純度分析。3.反轉錄反應1)照下表，將試劑加入0. 2ml去核酸酶處理過的離心管，混勻并短暫離心。
權利要求
1. ClOorflie基因在制備改善脂肪組織胰島素敏感性和/或促進脂肪組織攝取葡萄糖的藥物中的應用。
全文摘要
本發明屬于基因工程領域，公開了C10orfl16基因在制備改善脂肪組織胰島素敏感性藥物中的應用。本發明提出的C10orfl16基因在制備改善脂肪組織胰島素敏感性和/或促進脂肪組織攝取葡萄糖的藥物中的應用，為制備改善脂肪組織胰島素敏感性的藥物及制備促進脂肪組織攝取葡萄糖的藥物提供了新的技術方案。
文檔編號A61K48/00GK102210873SQ201010139449
公開日2011年10月12日 申請日期2010年4月2日 優先權日2010年4月2日
發明者倪毓輝, 劉曉梅, 彭宇竹, 曹新國, 朱春, 池霞, 王欣, 邱潔, 郭錫熔 申請人:倪毓輝, 劉曉梅, 彭宇竹, 曹新國, 朱春, 池霞, 王欣, 邱潔, 郭錫熔