專利名稱：：抗癌用化合物及制備方法
技術領域：
：本發明涉及抗癌用化合物和它們的鹽、其制備方法以及含有它們的藥物組合物。
背景技術：
：原發性肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤，高發于我國、東南亞、非洲東南部和地中海沿岸。我國肝癌發病率位居全球之首，在國內位居腫瘤的第2位，特別是在東南沿海高發，江蘇省更是高達第1位。肝癌發病兇險、進展快、死亡率高、治療效果差。中國內地、東南亞及非洲是全球三個肝癌高發地區。世界衛生組織年度健康報告顯示，肝癌發病率為23.7/10萬，全球每年有62萬人死于肝癌，中國占45%。由于起病隱襲，大多數患者在確診時已達中晚期，往往失去了手術根治機會。初診患者中僅10%15%可以根治性切除，而術后5年復發率高達50%80%。晚期患者治療非常棘手，效果很差，生存時間短，診斷后平均生存時間僅34個月，平均5年生存率僅5%，因此肝癌的確存在早期診斷率低、手術切除率低、預后惡劣等特點，因此被稱為“癌中之王”。有關肝癌的治療手段，目前主要有手術切除、肝移植、肝動脈介入治療、經皮消融、系統化療以及傳統醫藥治療等。國內外學者一直致力于肝癌治療研究。我國的吳孟超、湯釗猷院士在上個世紀70、80年代曾進行了許多有意義的探索，如改進手術方法，包括小肝癌的診治、肝癌的不規則切除和二期切除等，貢獻巨大。對于中晚期肝癌，肝動脈介入治療是最重要的保守治療手段，對部分患者具有明顯的療效。然而，介入治療臨床應用受到諸多限制，不少病例并不符合介入治療的指征，比如，有嚴重的肝腎功能不全、重度腹水、骨髓造血功能抑制或凝血功能障礙、腫瘤太大(占肝臟的體積超過70%)、門靜脈主干癌栓完全閉塞、重度門脈高壓、合并活動性消化道潰瘍或遠處轉移的患者就不能采取介入治療。此時，雖然可以采取全身化療來作為姑息治療手段，然而肝癌細胞對多種化療藥物抗拒，傳統的化療藥物療效很低，同時，患者通常存在病毒性肝炎、肝硬變等基礎肝病，肝功能不良，對化療的耐受性差，往往不能接受強烈化療。近年來，臨床上正在積極探索一些新的化療藥物如奧沙利鉬、吉西他濱和卡培他濱等應用于肝癌治療，已有苗頭，但都仍然在研究之中，還未獲得最終結果。Sorafenib(索拉非尼)由德國拜耳公司研發，是一種新型信號轉導抑制劑，綜合兩種抗癌途徑Raf/MEK/ERK信號通路和VEGFR、PDGFR，達到抑制腫瘤細胞增殖、抗血管生成目的。索拉非尼是分子靶向治療藥物，這是一種完全嶄新的肝癌治療藥物和策略方法，而其結果顯著，能有效地延長了晚期肝癌患者的生存時間，應該說是晚期肝癌治療上的一個突破性進展和里程碑，真正地開創了肝癌靶向治療的新時代，。我們通過化學分子修飾方法改造索拉非尼的化學結構生產出二種全新的化合物實體物質，能廣泛抑制包括肝癌細胞在內的多種類型的人腫瘤細胞系的生長，誕生了本發明。
發明內容本發明的第一個目的是提供兩種具有抗癌作用的新化合物和它們的鹽；本發明的第二個目的是提供新化合物的制備方法；本發明的第三個目的是提供含有新化合物的藥物組合物。本發明提供兩種新化合物，N-[4_氯_3-(三氟甲基)苯基]-[4_(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶氧基)苯基]_硫脲和N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶硫基)苯基]-硫脲，或者它們的藥學上可接受的鹽。該兩種化合物的結構式如式I和式II所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式I中的化合物，通過核磁共振技術闡明其結構和質譜計算化合物分子量IH-NMR(400MHz,DMS0)δ10.159(s，1H)，10.182(s，1H)，8·777-8.790(d，J=5.2Hz,1Η)，8.525-8.539(d,J=5.6Hz,1Η)，8.086-8.092(d,J=2.4Hz,1Η)，7.804-7.832(dd,Jl=8.8Hz,J2=2.4Hz,1Η)，7.671-7.692(d,J=8.4Hz,1Η)，7.567-7.589(d,J=8.8Ηζ,2Η)，7.419-7.426(d,J=2.8Hz,1Η)，7.221-7.243(d,J=8.8Ηζ,2Η)，7.175-7.195(dd,Jl=5.6Hz,J2=2.4Hz，1Η)，2.781-2.793(d，J=4.8Hz，3H).MS497[Μ+Η]+.合成式I中的化合物的反應方程式如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式I中的化合物與甲苯磺酸反應生成該化合物的甲苯磺酸鹽。式II中的化合物，通過核磁共振技術闡明其結構和質譜計算化合物分子量IH-WR(400MHz，DMS0)δ10.300(s，1H)，10.370(s，1H)，8.738-8.749(d，J=4.4Ηζ，1Η)，8.417-8.430(d，J=5.2Hz,1H),8.088-8.094(d,J=2.4Hz,1H),7.807-7.813(d,J=2.4Hz,1H)，7.687-7.726(m,3H)，7.591-7.612(m,3H)，7.254-7272(dd,Jl=5.2Hz,J2=2.OHz,1H),2.762-2.774(d,J=4.8Hz，3H).MS481[M+H]+.合成式II中的化合物的反應方程式如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>式II中的化合物與甲苯磺酸反應生成該化合物的甲苯磺酸鹽。式I中的化合物或式II中的化合物或者它們的鹽如甲苯磺酸鹽，可與藥用載體和/或賦形劑制成抗癌藥物，該抗癌藥物可制成片劑、沖劑、膠囊、滴丸、口服液或注射液。藥用載體和/或賦形劑可選擇谷物油、羧甲基纖維素鈉等。式I中的化合物或式II中的化合物或者它們的鹽，一般口服推薦劑量為每天IOOmg/體表面積m2，每天總劑量一次于早餐后半小時口服，連續三周，休息一周為一療程，具體病例可由醫師根據病情調整。經實驗研究發現，N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4_吡啶氧基)苯基]-硫脲和N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶硫基)苯基]-硫脲，均能有效地抑制Raf和VEGFR蛋白激酶的活性，并且能廣泛抑制多種類型的人腫瘤細胞系生長，并進一步誘導腫瘤細胞凋亡。在人腫瘤異種移植模型研究中，該兩種新化合物被證明是有效的抗腫瘤劑，能強烈抑制人肝癌，肺癌和腸癌細胞在體內生長，而且，它們的抗癌作用明顯優于索拉非尼。附圖1為化合物ZTP和ZTQ、Sorafenib以及對照組治療皮下接種的人肝癌(HepG3B)腫瘤細胞的腫瘤體積-移植后天數曲線圖；附圖2為化合物ZTP和ZTQ、Sorafenib以及對照組治療皮下接種的人結腸癌(HCT-116)腫瘤細胞的腫瘤體積-移植后天數曲線圖；附圖3為化合物ZTP和ZTQ、Sorafenib以及對照組治療皮下接種的人肺癌(NCI-H23)腫瘤細胞的腫瘤體積-移植后天數曲線圖。具體實施例方式(1)Ν-[4-氯_3-(三氟甲基)苯基]-[4_(N-甲基-甲酰胺)(4_吡啶氧基)苯基]-硫脲的制備具體操作如下1、4-氯吡啶-2-碳酰氯(ZTP-I)的制備40°C下，往20克(0.16mol)吡啶_2_羧酸的80mL氯化亞砜溶液中滴加2mL二甲基甲酰胺，滴加畢，在此溫度下攪拌10分鐘，然后將溫度升至72°c，攪拌過夜，LC-MS(液相色譜_質譜儀)顯示反應仍未完畢，補加20mL氯化亞砜，繼續在72°C下反應3小時，LC-MS顯示反應沒有變化，冷卻至室溫，減壓除去氯化亞砜，加入200mL甲苯，減壓蒸干，再加入30mL甲苯，該溶液直接用于下一步反應；2、4_氯(2-吡啶)-N-甲基羧酸胺(ZTP-2)的制備將60mL的25%甲胺水溶液冷卻至_5°C，往該溶液中滴加約60克ZTP-I的甲苯溶液，保持溫度低于20°C，滴加畢，在20°C下攪拌1小時，往反應液中加入200mL乙酸乙酯與50mL水，有機層用飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮至橘黃色油狀物20.1克，不經純化直接用于下一步反應；質譜計算ZTP-2分子量，MS171[M+H]+；3、4-[(4_氨基苯氧基)(2_吡啶)]-N_甲基羧酸胺(ZTP-3)的制備在氮氣保護下，將5.12克(46.89mmol)4_氨基苯酚溶解在80毫升二甲基甲酰胺中，加入5.47克(48.77mmol)叔丁醇鉀，室溫攪拌2小時，然后加入8克(46.89mmol)ZTP-2和3.43克(24.85mmol)碳酸鉀，加熱至80°C反應過夜，TLC(薄層色譜)顯示反應完畢，冷卻至室溫，加入200毫升水和150毫升乙酸乙酯，有機層依次用飽和碳酸鈉水溶液與飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，殘余物柱層析，石油醚乙酸乙酯=3/10/1，V/V，得到4.9克黃色固體產物ZTP-3，收率43%，LC-MS顯示仍然有副產物(吡啶6位上有氯)；質譜計算ZTP-3分子量，MS244[M+H]+；4、N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶氧基)苯基]-硫脲(ZTP)的制備在氮氣保護下，20°C時，將2.0克(8.2mmol)ZTP-3與2.2克(9.8mmol)4-氯-3-三氟甲基苯異氰酸酯加入到10毫升二氯甲烷中，攪拌過夜，TLC顯示反應完畢，反應液濃縮，殘余物經柱層析，二氯甲烷甲醇=1/0200/150/1，V/V，純化，得到黃色粗品，粗品溶解在3毫升二氯甲烷中，緩緩加入約10毫升乙醚，有晶體析出，過濾，以乙醚洗滌，干燥，得到2.3克白色固體物質ZTP，收率59%。(2)N-[4-氯_3-(三氟甲基)苯基]-[4_(N_甲基-甲酰胺)(4_吡啶氧基)苯基]“硫脲的甲苯磺酸鹽的制備在裝有冷凝器、攪拌、溫度計的1升反應瓶中，加入48克ZTP和750毫升無水乙醇，攪拌升溫至回流，溶清后加入18克甲苯磺酸，回流反應約1小時20分鐘，反應畢，冷卻至室溫，過濾，以30毫升乙醇洗滌，干燥，得粗品54g，將粗品加入到200毫升蒸餾水中，攪拌，力口熱回流，溶清后加入2克活性炭，10分鐘后趁熱過濾，濾液室溫放置約1天后過濾，干燥，得50克，收率77%。(3)N-[4-氯_3-(三氟甲基)苯基]-[4_(N_甲基-甲酰胺)(4_吡啶硫基)苯基]-硫脲的制備1,4-氯吡啶-2-碳酰氯(ZTQ-I)的制備40°C下，往20克(0.16mol)吡啶_2_羧酸的80mL氯化亞砜溶液中滴加2mL二甲基甲酰胺，滴加畢，在此溫度下攪拌10分鐘，然后將溫度升至72°c，攪拌過夜，LC-MS顯示反應仍未完畢，補加20mL氯化亞砜，繼續在72°C下反應3小時，LC-MS顯示反應沒有變化，冷卻至室溫，減壓除去氯化亞砜，加入200mL甲苯，減壓蒸干，再加入30mL甲苯，該溶液直接用于下一步反應；2、4_氯(2-吡啶)-N-甲基羧酸胺(ZTQ-2)的制備將60mL的25%甲胺水溶液冷卻至_5°C，往該溶液中滴加約60克ZTQ-I的甲苯溶液，保持溫度低于20°C，滴加畢，在20°C下攪拌1小時，往反應液中加入200mL乙酸乙酯與50mL水，有機層用飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮至橘黃色油狀物20.1克，不經純化直接用于下一步反應；質譜計算ZTQ-2分子量，MS171[M+H]+；3、4-[(4_氨基苯硫基)(2_吡啶)]-N_甲基羧酸胺(ZTQ-3)的制備在氮氣保護下，將5.87克(46.89mmol)4_氨基苯硫酚溶解在80毫升二甲基甲酰胺中，加入5.47克(48.77mmol)叔丁醇鉀，室溫攪拌2小時，然后加入8克(46.89mmol)ZTQ-2和3.43克(24.85mmol)碳酸鉀，加熱至80°C反應過夜，TLC顯示反應完畢，冷卻至室溫，加入200毫升水和150毫升乙酸乙酯，有機層依次用飽和碳酸鈉水溶液與飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，殘余物柱層析，石油醚乙酸乙酯=3/10/l，V/V，得到6.5克黃色固體產物ZTQ-3，收率54.2%，LC-MS顯示仍然有副產物(吡啶6位上有氯)，質譜計算ZTQ-3分子量，MS260[M+H]+；4、N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶硫基)苯基]-硫脲(ZTQ)的制備在氮氣保護下，20°C時，將2.0克(7.7mmol)ZTQ-3與2.0克(9.3mmol)4-氯-3-三氟甲基苯異氰酸酯加入到10毫升二氯甲烷中，攪拌過夜，TLC顯示反應仍未完畢，補加0.5克4-氯-3-三氟甲基苯異氰酸酯，繼續反應5小時，TLC顯示原料消耗完畢，反應液濃縮，殘余物經柱層析純化，二氯甲烷甲醇=1/0200/150/l，V/V，得到黃色粗品，粗品溶解在3毫升二氯甲烷中，緩緩加入約10毫升乙醚，有晶體析出，過濾，以乙醚洗滌，干燥，得到1.9克白色固體物質ZTQ，收率50%。(4)N-[4_氯_3-(三氟甲基)苯基]-[4_(N_甲基-甲酰胺)(4_吡啶氧基)苯基]-硫脲(ZTQ)甲苯磺酸鹽的制備在裝有冷凝器、攪拌、溫度計的1升反應瓶中，加入50克ZTP和750毫升無水乙醇，攪拌升溫至回流，溶清后加入18克甲苯磺酸，回流反應約1小時20分鐘，反應畢，冷卻至室溫，過濾，以30毫升乙醇洗滌，干燥，得粗品57g，將粗品加入到200毫升蒸餾水中，攪拌，力口熱回流，溶清后加入2克活性炭，10分鐘后趁熱過濾，濾液室溫放置約1天后過濾，干燥，得52克，收率77.6%。上述(1)-(4)為制備實施例，下述(5)-(9)為試驗實施例。(5)化合物ZTP和ZTQ抑制Raf和VEGFR蛋白激酶活性Raf是一種原癌基因產物，它的活化受細胞外生長因子刺激所調節的。一旦Raf被活化則能磷酸化MEK使其活化，并進一步將活化信號傳遞給ERK，從而促進腫瘤細胞生長。本試驗利用檢測細胞內被磷酸化的MEK多少來衡量細胞內Raf蛋白激酶活性的高低。MDA-MB-321是一種人性乳腺癌細胞系，富含大量的Raf蛋白。我們用MDA-MB-321細胞來檢測ZTP和ZTQ是否能抑制Raf蛋白激酶活性。MDA-MB-321細胞在37°C、5%C02的條件下，在含10%小牛血清的RPMI1640培養基(GIBC0-BRL)中貼壁生長。以不同濃度ZTP和ZTQ(0、10ng/ml、100ng/ml、500ng/ml，lyg/ml、10yg/ml)處理細胞，于處理后1小時收集細胞蛋白，Bradford法測定蛋白濃度后以westernblot測定被磷酸化的MEK水平。免疫印跡實驗用聚丙烯酰胺變性凝膠分離蛋白，上樣量為60μg總蛋白，將蛋白電轉到PVDF上，封閉后加鼠抗人抗磷酸化MEK抗體(11000稀釋)(購買于美國波士頓信號傳遞公司)、辣根過氧化物酶標記羊抗鼠IG抗體(15000稀釋)(購買于美國波士頓信號傳遞公司)，用化學發光試劑增強反應，X光片壓片曝光，凝膠成像系統分析結果。洗膜后以未磷酸化MEK抗體檢測以校正結果。結果顯示，ZTP和ZTQ抑制Raf蛋白激酶活性的半數抑制濃度(IC5tl)分別是45nM和20M濃度。VEGFR是血管內皮細胞生長因子受體，調節血管內皮細胞生長，遷移和分化，它決定腫瘤血管新生重要開關。當血管內皮細胞生長因子刺激VEGFR后，VEGFR形成二聚體并活化其激酶并使其自身磷酸化，根據VEGFR自身磷酸化的強弱來檢測VEGn蛋白激酶活性的高低，本試驗我們用人微血管內皮細胞HUMEC來檢測ZTP和ZTQ是否能抑制VEGFR蛋白激酶活性。HUMEC細胞在37°C、5%C02的條件下，在含10%小牛血清的DMEM培養基(GIBC0-BRL)中貼壁生長。以不同濃度ZTP和ZTQ(0、10ng/ml、100ng/ml、500ng/ml，1μg/ml、10μg/ml)處理細胞，于處理后1小時收集細胞蛋白，Bradford法測定蛋白濃度后以westernblot測定被磷酸化的VEGFR水平。免疫印跡實驗用聚丙烯酰胺變性凝膠分離蛋白，上樣量為60μg總蛋白，將蛋白電轉到PVDF上，封閉后加鼠抗人抗磷酸化VEGFR抗體(11000稀釋)(購買于美國波士頓信號傳遞公司)、辣根過氧化物酶標記羊抗鼠IG抗體(15000稀釋)(購買于美國波士頓信號傳遞公司)，用化學發光試劑增強反應，X光片壓片曝光，凝膠成像系統分析結果。洗膜后以未磷酸化VEGFR抗體檢測以校正結果。結果顯示，ZTP和ZTQ抑制VEGFR蛋白激酶活性的半數抑制濃度(IC5tl)分別是21nM禾口9nM。(6)化合物ZTP和ZTQ廣泛抑制人體腫瘤細胞株，但對正常細胞株沒有作用應用人腫瘤細胞株分析ZTP和ZTQ的細胞毒性。人腫瘤細胞株購自ATCC和NCI，在10%FBS的DMEM培養液中，置于5%CO2的37°C孵箱中培養。細胞生長匯合后作毒性分析，胰蛋白酶消化細胞后用培養液洗滌，然后計數。培養33種腫瘤細胞株，96孔板每孔傳3000-6000個細胞孵育16-24小時，再加入溶解于DMSO的不同濃度的ZTP或ZTQ，培養72小時后，應用MTT分析藥物處理后的細胞和對照細胞。結果如表1所示，表1顯示大多數人體腫瘤細胞對本試驗化合物ZTP和ZTQ比較敏感。有些腫瘤細胞對本試驗化合物的EC50低于1μm。對本試驗化合物ZTP和ZTQ最敏感的細胞是人微血管內皮細胞，對于人微血管內皮細胞來說本試驗化合物ZTP和ZTQ是一種極強的腫瘤血管抑制劑。另外正常人乳腺上皮細胞(MCF-IOa)和正常小鼠成纖維細胞(MEF)對本試驗化合物ZTP和ZTQ不敏感，即便這兩種化合物的濃度高達30μm,這些細胞仍然生長良好。表1化合物ZTP和ZTQ體外抑制人腫瘤細胞生長<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>(7)化合物ZTP和ZTQ在小鼠體內的藥代動力學研究取4只8周齡BALB/c小鼠(2只雄性和2只雌性)，單次劑量100mg/kg給予化合物ZTP和ZTQ(用15%Captsol或載體配制)。分別于給藥后0.5、1、3、6、12、24、48、72小時，經眼靜脈取血并制得血漿，以測定給予ZTP和ZTQ的血漿濃度。口飼給藥的化合物ZTP和ZTQ在4個小鼠體內的藥代動力學參數總結如下(表2和3)表2.化合物ZTP在小鼠體內的藥代動力學參數<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表3.化合物ZTQ在小鼠體內的藥代動力學參數<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>(8)給藥后化合物ZTP和ZTQ對小鼠的急性毒性研究取兩組8周齡的BALB/c小鼠，每組10只(5只雄性和5只雌性)，分別以單次劑量500mg/kg和多次劑量100mg/kg口飼給予化合物ZTP和ZTQ(15%Captsol或載體配制))，然后分別觀察1周和4周，每兩天稱體重，試驗結束后，將受試小鼠處死，進行病理分析。結果顯示，以單次劑量500mg/kg和多次劑量100mg/kg給予化合物ZTP和ZTQ，均未觀察到毒性，所有受試小鼠生長良好，無一死亡，因此化合物ZTP和ZTQ是具有很大開發前景的廣譜抗腫瘤新藥，化合物ZTP和ZTQ可作為抗腫瘤藥物的原料藥，優先作為抗惡性實體瘤藥物的原料藥，化合物ZTP和ZTQ也可與可藥用載體和/或賦形劑制成不同劑型的抗腫瘤藥物包括片劑、沖劑、膠囊、滴丸、口服液或注射液。可藥用載體和/或賦形劑例如谷物油，羧甲基纖維素鈉等。化合物ZTP和ZTQ—般口服推薦劑量為每天IOOmg/體表面積m2，連續三周，休息一周為一療程。化合物ZTP和ZTQ每天總劑量一次于早餐后半小時口服，具體病例可由醫師根據病情調整。(9)應用人腫瘤移植裸鼠模型進行化合物ZTP和ZTQ的有效性研究T細胞缺陷裸小鼠(nu/nu)，6周齡，購自CharlesRiver實驗室，按照大學動物飼養和使用委員會條例，在無菌環境中飼養、處理。48只鼠肋腹部分別皮下接種5X106個懸浮于0.2mlHBSS/基質膠(5050，V/V)中的人肝癌細胞H印G3B、人肺癌細胞NCI-H23和人結腸癌細胞HCT-116。當腫瘤平均直徑長至7-8mm，腫瘤體積約在100-200mm3大小時，從中挑選出24只鼠，該24只鼠被分成治療組(16只/2組)、對照組(8只)，2組治療組分別按30mg/kg化合物ZTP和60mg/kg化合物ZTQ給藥，化合物ZTP和ZTQ溶解在15%Captsol中，對照組只接受賦形劑(15%Captsol)ο為保證化合物ZTP和ZTQ治療組和對照組在處理開始時腫瘤大小的分布基本相同，小鼠被分成三類小體積腫瘤(<4mm)、中等體積腫瘤(4-8mm)和大體積腫瘤(>8mm)。將每一類中相同數目的小鼠分別分在對照組和化合物ZTP和ZTQ治療組中。腫瘤移植裸鼠的本試驗化合物給藥方案口服給藥，化合物ZTP和ZTQ溶解在15%Captsol，每日給予200μ1含0.75mg禾口1.5mg化合物ZTP和ZTQ的藥液，每周5天，連續3周，休息1周；對照組給予200μ1安慰劑15%Captsol3周，休息1周。兩組動物分開飼養，自由進食。抗腫瘤效果的評價每3或4天測量腫瘤大小，采用下面的公式計算腫瘤體積V=(aXb)/2，其中a代表寬(較小的直徑)，b代表長(較長的直徑)。每個瘤體的相對腫瘤體積(RTV)指給定時間的體積與治療開始時的體積的比率。每個治療組計算平均RTV。應用下面的公式計算腫瘤生長抑制值確定抗腫瘤活性。TGI(%)=T/CX100其中T代表實驗結束點治療組腫瘤的平均RTV，C代表對照組的平均RTV。采用國立癌癥研究所制定的抗腫瘤活性最低水平(T/C42%)標準。實驗結束后切除瘤體，甲醇固定。在化合物ZTP和ZTQ有效抑制多種腫瘤細胞和人微血管內皮細胞體外增殖的基礎上，應用人腫瘤移植裸鼠(皮下接種)評價化合物ZTP和ZTQ的抗腫瘤作用，受試的腫瘤細胞包括人肝癌細胞ifepG3B、人結腸癌細胞HCT-116和人肺癌細胞NCI-H23。結果顯示，ZTP、ZTQ和Sorafenib給藥對人肝癌細胞!fepG3BTGI值分別為13%、1.75%、14%；ZTP,ZTQ和Sorafenib給藥對人結腸癌細胞HCT-116TGI值分別為29.2%,6.45%,33%；ZTP,ZTQ和Sorafenib給藥對人肺癌細胞NCI-H23TGI值分別為10%、9.21%、11.25%。同時未發現ZTP和ZTQ具有明顯的副作用，包括體重的變化。而Sorafenib對受試小鼠產生相當大的副作用。圖1-3中顯示了化合物ZTP和ZTQ、Sorafenib和對照組治療人肝癌細胞H印G3B、人結腸癌細胞HCT-116和人肺癌細胞NCI-H23的腫瘤體積-移植后天數曲線圖，這些數據強烈提示，化合物ZTP和ZTQ強烈抑制這三種腫瘤生長，并ZTP和ZTQ將成為優于Sorafenib的新的抗腫瘤藥物。由于Sorafenib與甲苯磺酸反應能形成Sorafenib甲苯磺酸鹽，而Sorafenib甲苯磺酸鹽抗腫瘤藥效作用明顯強過Sorafenib。我們推測ZTP和ZTQ化合物與甲苯磺酸反應形成的鹽類化合物，其抗腫瘤藥效作用也會強過ZTP和ZTQ化合物本身，因此，ZTP和ZTQ鹽類化合物將也會成為有效的抗腫瘤新藥。權利要求式I表示的化合物，或者其藥學上可接受的鹽式I中該化合物的名稱為N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶氧基)苯基]-硫脲。FSA00000123356600011.tif2.制備式I的化合物的方法，其特征在于(1)40°C下，往吡啶-2-羧酸的氯化亞砜溶液中滴加二甲基甲酰胺，攪拌，然后將溫度升至72°C，攪拌過夜，待反應完成后冷卻至室溫，減壓除去氯化亞砜，加入甲苯，減壓蒸干，再加入甲苯，得到4-氯吡啶-2-碳酰氯的甲苯溶液；(2)將甲胺水溶液冷卻至_5°C，往所述甲胺水溶液中滴加所述4-氯吡啶-2-碳酰氯的甲苯溶液，在溫度低于20°C時進行攪拌，然后再加入乙酸乙酯與水，有機層用飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮至橘黃色油狀物，得到4-氯(2-吡啶)-N-甲基羧酸胺；(3)在氮氣保護下，將4-氨基苯酚溶解在二甲基甲酰胺中，然后加入叔丁醇鉀，室溫攪拌，然后加入所述4-氯(2-吡啶)-N-甲基羧酸胺、碳酸鉀，加熱至80°C反應過夜，待反應完成后冷卻至室溫，加入水和乙酸乙酯，有機層依次用飽和碳酸鈉水溶液與飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，殘余物柱層析，石油醚乙酸乙酯=3/10/l，V/V，得到黃色固體產物4-[(4-氨基苯氧基)(2-吡啶)]-N-甲基羧酸胺(4)在氮氣保護下，20°C時，將所述4-[(4-氨基苯氧基)(2-吡啶)]-N-甲基羧酸胺與4-氯-3-三氟甲基苯異氰酸酯加入到二氯甲烷中，攪拌過夜，待反應完成后濃縮反應液，殘余物柱層析，二氯甲烷甲醇=1/0200/150/l，V/V，得到黃色粗品，將該黃色粗品溶解在二氯甲烷中，加入乙醚，有晶體析出，過濾，以乙醚洗滌，干燥，得到式I中所述化合物N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶氧基)苯基]_硫脲。3.制備式I的化合物的甲苯磺酸鹽的方法，其特征在于將式I中所述化合物N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶氧基)苯基]_硫脲和無水乙醇加入反應瓶中，攪拌升溫至回流，溶清后加入甲苯磺酸，進行回流反應，待反應完成后冷卻至室溫，過濾，以乙醇洗滌，干燥，得粗品，將該粗品加入到蒸餾水中，攪拌，加熱回流，溶清后加入活性炭，趁熱過濾，濾液室溫放置后過濾，干燥，得到式I中所述化合物的甲苯磺酸鹽。4.式II表示的化合物，或者其藥學上可接收的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>式II中該化合物的名稱為N-[4-氯_3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶硫基)苯基]-硫脲。5.制備式II的化合物的方法，其特征在于(1)40°C下，往吡啶-2-羧酸的氯化亞砜溶液中滴加二甲基甲酰胺，攪拌，然后將溫度升至72°C，攪拌過夜，待反應完成后冷卻至室溫，減壓除去氯化亞砜，加入甲苯，減壓蒸干，再加入甲苯，得到4-氯吡啶-2-碳酰氯的甲苯溶液；(2)將甲胺水溶液冷卻至_5°C，往所述甲胺水溶液中滴加所述4-氯吡啶-2-碳酰氯的甲苯溶液，在溫度低于20°C時進行攪拌，然后再加入乙酸乙酯與水，有機層用飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮至橘黃色油狀物，得到4-氯(2-吡啶)-N-甲基羧酸胺；(3)在氮氣保護下，將4-氨基苯硫酚溶解在二甲基甲酰胺中，加入叔丁醇鉀，室溫攪拌，然后加入所述4-氯(2-吡啶)-N-甲基羧酸胺、碳酸鉀，加熱至80°C反應過夜，待反應完成后冷卻至室溫，加入水和乙酸乙酯，有機層依次用飽和碳酸鈉水溶液與飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，殘余物柱層析，石油醚乙酸乙酯=3/10/l，V/V，得到黃色固體產物4-[(4-氨基苯硫基)(2-吡啶)]-N-甲基羧酸胺；(4)在氮氣保護下，20°C時，將所述4-[(4_氨基苯硫基)(2-吡啶)]-N-甲基羧酸胺與4-氯-3-三氟甲基苯異氰酸酯加入到二氯甲烷中，攪拌過夜，待反應完成后濃縮反應液，殘余物柱層析，二氯甲烷甲醇=1/0200/150/l，V/V，得到黃色粗品，將該黃色粗品溶解在二氯甲烷中，加入乙醚，有晶體析出，過濾，以乙醚洗滌，干燥，得到式II中所述化合物N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶硫基)苯基]_硫脲。6.制備式II的化合物的甲苯磺酸鹽的方法，其特征在于將式II中所述化合物N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶硫基)苯基]_硫脲和無水乙醇加入反應瓶中，攪拌升溫至回流，溶清后加入甲苯磺酸，進行回流反應，待反應完成后冷卻至室溫，過濾，以乙醇洗滌，干燥，得粗品，將該粗品加入到蒸餾水中，攪拌，加熱回流，溶清后加入活性炭，趁熱過濾，濾液室溫放置后過濾，干燥，得到式II中所述化合物的甲苯磺酸鹽。7.權利要求1、4中任一項所述的化合物或其藥學上可接收的鹽在制備抗癌藥物中的應用。8.藥物組合物，其中含有權利要求1、4中任一項所述的化合物或其藥學上可接收的鹽作為有效成分，并含有常規藥用載體和/或賦形劑。9.根據權利要求8所述的藥物組合物，該藥物組合物制成片劑、沖劑、膠囊、滴丸、口服液或注射液。10.根據權利要求8所述的藥物組合物，其中所述藥用載體和/或賦形劑包括谷物油、羧甲基纖維素鈉。全文摘要本發明公開了兩種具有抗癌作用的新化合物N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶氧基)苯基]-硫脲、N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-[4-(N-甲基-甲酰胺)(4-吡啶硫基)苯基]-硫脲，以及它們的鹽，本發明還公開了兩種新化合物的制備方法，以及含有新化合物的藥物組合物，經實驗研究發現，該兩種新化合物均能有效地抑制Raf和VEGFR蛋白激酶的活性，并且能廣泛抑制多種類型的人腫瘤細胞系生長，并進一步誘導腫瘤細胞凋亡。在人腫瘤異種移植模型研究中，該兩種新化合物被證明是有效的抗腫瘤劑，能強烈抑制人肝癌，肺癌和腸癌細胞在體內生長，而且，它們的抗癌作用明顯優于索拉非尼。文檔編號A61P35/00GK101830847SQ201010174968公開日2010年9月15日申請日期2010年5月18日優先權日2010年5月18日發明者張南,鐘榮申請人:蘇州麥迪仙醫藥科技有限公司