專利名稱：異黃酮類化合物fhs在制備癌癥藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種化合物在醫藥中的用途，特別涉及一種異黃酮類化合物ras在制備癌癥藥物中的用途。
背景技術：
大豆異黃酮是一組多酚類的混合物，由于它能與雌激素受體結合，具有弱雌激素樣作用，故稱之為植物雌激素。有研究證實，5，7，4’_三羥基異黃酮(Genistein)具有抗癌作用，同時能減輕放療所致的造血損傷，提示該類化合物有獨特的研發價值。值得注意的是，大多數的異黃酮化合物需在較大劑量時才能顯示出抗癌活性，但在該劑量時，對機體正常細胞也造成損傷，故用化學合成方法制備異黃酮類化合物，或以其為先導化合物，改造其結構，以增強其生物活性是十分必要的。目前國內外對異黃酮類化合物ras的研究僅限于對抗生育效應研究和親/抗子宮活性的初步評價，而對ras抑制腫瘤細胞生長的研究在國內外均未見報導。因此對于ras 的抑瘤效應還沒有明確的定論。

發明內容
本發明提供一種異黃酮類化合物ras在制備癌癥藥物中的用途。本發明涉及的異黃酮類化合物ras具體的說是在制備宮頸癌藥物中的用途，異黃酮類化合物ras在制備乳腺癌藥物中的用途，異黃酮類化合物ras在制備肝癌癌藥物中的用途以及異黃酮類化合物FHS在制備胃癌癌藥物中的用途。發明人按照腫瘤藥物的篩選方法，對異黃酮類化合物ras進行了藥理和病理研發明人制備了一系列的異黃酮類化合物的衍生物，并通過抗癌活性的初步篩選， 認為異黃酮類化合物ras抗癌效果較好，因此，我們對其在抗腫瘤作用方面進行了專門體內外研究。發明人以異黃酮類化合物ras進行體外試驗，可以有效地抑制多種腫瘤細胞的生長，腹腔給藥可以較好的抑制人乳腺癌細胞及人宮頸癌細胞在裸小鼠體內的生長。發明人的體外實驗中，研究的細胞株有人宮頸癌細胞株(HeLa)、人乳腺癌細胞株(MCF-7)、人肝癌細胞株(SMMC-7721)、人胃癌細胞株(SGC-7901)；體內實驗，建立了兩種裸小鼠移植瘤模型，包括人乳腺癌MCF-7細胞裸鼠移植瘤模型和人宮頸癌HeLa細胞裸鼠移植瘤模型，并以目前臨床常用抗癌藥物環磷酰胺作為陽性對照。以異黃酮類化合物ras進行治療時，可以粉劑、粒劑、片劑、膠囊、丸劑和液體藥劑等形式；也可以注射液、栓劑、經皮制劑、吸入劑等非經腸給藥。異黃酮類化合物FHS的有效藥劑，是通過與適當的藥用摻混物，如賦形劑、粘合劑、滲透劑、潤滑劑等混合配置的。其中， 異黃酮類化合物ras在上述藥物中的重量比為10-20%。劑量隨患者的病情、給藥途徑、患者的年齡和體重而改變?？诜o藥，異黃酮類化合物ras劑量為每公斤體重0. 4-0. 8毫克。本發明的優點該化合物的優點是低系統毒性，當用抑制腫瘤生長的有效劑量時， 既不引起體重減輕也不引起系統毒性，尤其是無生殖系統毒性。異黃酮類化合物ras的分子式=C18H16O4化學名稱2-乙基-4’ -甲氧基-7-羥基-異黃酮英文名稱:2-ethyl-7-hydroxy-4' -methoxy-isofIavone商品名稱ras化學結構式


圖1為異黃酮類化合物ras對人乳腺癌裸鼠移植瘤生長曲線的影響圖。圖2為異黃酮類化合物ras對人宮頸癌裸鼠移植瘤生長曲線的影響圖。
具體實施例方式1.材料和試劑研究所需細胞均購自ATCC，噻唑藍(MTT)為Sigma公司產品，細胞培養基、胎牛血清、胰蛋白酶均為GIBCO公司產品。裸鼠由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。下列實驗研究了異黃酮類化合物ras對人宮頸癌細胞、人乳腺癌細胞、人肝癌細胞、人胃癌細胞的抑制作用，對人乳腺癌裸鼠移植瘤和人宮頸癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用。1.異黃酮類化合物ras抗腫瘤細胞增殖活性實驗選用了 4種不同的人源性腫瘤細胞株，分別是人宮頸癌細胞株(HeLa)、人乳腺癌細胞株(MCF-7)、人肝癌細胞株(SMMC-7721)、人胃癌細胞株(SGC-7901)。選擇處于對數生長期的各腫瘤細胞，分別制成單細胞懸液，接種于96孔平面培養板中，調整細胞數為2. 5 X 104/ml，每孔細胞懸液200ul。將96孔板置于37°C，5 % CO2,飽和濕度的二氧化碳培養箱培養M小時，平行設化合物ras處理組及空白對照組?；衔飏as 處理組設兩個濃度，終濃度為50umOl/L、100umOl/L ；空白對照組只加同體積的溶劑DMS0， 每組設6個平行孔。繼續培養48小時后進行MTT檢測，計算化合物HIS對不同腫瘤細胞生長的抑制率。結果見表1表1化合物ras對三種不同腫瘤細胞生長的抑制率細胞株 ^^^^^^對腫瘤細胞生長的抑制率％50 umol/L100 umol/L人宮頸癌細胞株(HeLa)** 71.4** 83.4人乳腺癌細胞株(MCF-7)** 59.2** 71.8人肝癌細胞株(SMMC-7721)35.6** 62.8人胃癌細胞株(SGC-7901)41.2** 66.3*P < 0. 05，**P < 0. Olvs control2.異黃酮類化合物HIS對人乳腺癌MCF-7細胞裸鼠移植瘤的抑瘤實驗收集對數生長期MCF-7細胞，用無血清培養液調整細胞濃度為1 X IO7個/ml，然后用醫用酒精消毒裸鼠皮膚，每只裸鼠頸部右側皮下接種0. 2ml細胞懸液，繼續飼養于SPF環
^Ml O腫瘤細胞移植后，經一定的潛伏期，可見腫瘤生長。待腫瘤增殖至可以觸及時(接種后第8天)，將動物隨機分為4組，設陰性(空白)對照組、陽性對照組(CTX，20mg/kg)、 FHS低劑量組(20mg/kg) ,FHS高劑量組(40mg/kg)，每組6只，每天腹腔給藥1次，連續注射 10天。隔日用游標卡尺測量腫瘤的大小，第22天處死小鼠，進行病理解剖及組織切片觀察。 按公式(1)計算腫瘤體積，繪制生長曲線。按公式( 計算腫瘤體積抑制率。統計分析采用t檢驗處理，P < 0. 05認為有顯著性差異。腫瘤體積=(LXW2)/2........................(1)式中L為腫瘤長徑，W為腫瘤橫徑腫瘤體積抑制率=[(C-T)/C] X 100%...................(2)式中T為給藥組腫瘤平均體積，C為空白對照組腫瘤平均體積結果異黃酮類化合物HIS在劑量為20mg/kg和40mg/kg時對人乳腺癌裸鼠移植瘤均有明顯的抑制作用，腫瘤體積抑制率分別為90. 7<%和93.1<%沖值均<0.01。CTX組(20mg/ kg)的腫瘤體積抑制率為95. 2%，P值< 0. 01。環磷酰胺治療組、FHS(20mg/kg)治療組、 FHS(40mg/kg)治療組之間抗癌效應沒有顯著差異，表明化合物FHS達到與環磷酰胺相當的抗癌效果。組織切片觀察顯示，異黃酮類化合物ras組腫瘤組織細胞壞死較多，出現大片壞死區。異黃酮類化合物FHS治療組裸鼠的其它主要臟器如心臟、脾臟、肝臟、腎臟、骨髓、腸、 子宮、卵巢等組織病理研究結果顯示，未觀察到明顯的毒性損傷作用，特別是異黃酮類化合物ras沒有引起子宮肌瘤或子宮內膜增生過長等病變。用藥組裸鼠和空白對照組裸鼠體重沒有明顯差異，未見裸鼠外觀、活動狀態等方面的異常。3.異黃酮類化合物ras對人宮頸癌HeLa細胞裸鼠移植瘤的抑瘤實驗收集對數生長期HeLa細胞，用無血清培養液調整細胞濃度為1 X IO7個/ml，然后用醫用酒精消毒裸鼠皮膚，每只裸鼠頸部右側皮下接種0. 2ml細胞懸液，繼續飼養于SPF環
腫瘤細胞移植后，經一定的潛伏期，可見腫瘤生長。待腫瘤增殖至可以觸及時(接種后第8天)，將動物隨機分為4組，設陰性(空白)對照組、陽性對照組(CTX，20mg/kg)、 FHS低劑量組(20mg/kg) ,FHS高劑量組(40mg/kg)，每組7 8只，每天腹腔給藥1次，連續注射10天。隔日用游標卡尺測量腫瘤的大小，第22天處死小鼠，進行病理解剖及組織切片觀察。按公式(1)計算腫瘤體積，繪制生長曲線。按公式(2)計算腫瘤體積抑制率。統計分析采用t檢驗處理，P < 0. 05認為有顯著性差異。結果異黃酮類化合物HIS在劑量為20mg/kg和40mg/kg時對人乳腺癌裸鼠移植瘤均有明顯的抑制作用，腫瘤體積抑制率分別為81. 和81. 5%，P值均< 0. 01。CTX組(20mg/ kg)的腫瘤體積抑制率為82. 2%，P值< 0. 01。環磷酰胺治療組、FHS(20mg/kg)治療組、 FHS(40mg/kg)治療組之間抗癌效應沒有顯著差異，表明化合物FHS達到與環磷酰胺相當的抗癌效果。組織切片觀察顯示，FHS組腫瘤組織細胞壞死較多，出現大片壞死區。FHS治療組裸鼠的其它主要臟器如心臟、脾臟、肝臟、腎臟、骨髓、腸、子宮、卵巢等組織病理研究結果顯示，未觀察到明顯的毒性損傷作用，特別是異黃酮類化合物ras沒有引起子宮肌瘤或子宮內膜增生過長等病變。用藥組裸鼠和空白對照組裸鼠體重沒有明顯差異，未見裸鼠外觀、活動狀態等方面的異常。安全性根據抗腫瘤藥物藥效學指導原則，我們可以認為ras具有明確的抑瘤作用。FHS作為異黃酮類化合物，理化特性清楚，化學結構也十分明確，使用安全有效。我們的工作首次證明了 ras對多種腫瘤細胞的增殖活性有顯著的抑制作用，體內應用，可以較好的抑制人乳腺癌MCF-7細胞及人宮頸癌HeLa細胞在裸鼠體內的生長。
權利要求
1.異黃酮類化合物ras在制備宮頸癌藥物中的用途。
2.異黃酮類化合物FHS在制備乳腺癌藥物中的用途。
3.異黃酮類化合物FHS在制備肝癌癌藥物中的用途。
4.異黃酮類化合物ras在制備胃癌癌藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及一種異黃酮類化合物FHS在制備癌癥藥物中的用途，異黃酮類化合物FHS在所述藥物中的重量比10-20％。以異黃酮類化合物FHS為活性成分的藥物，可有效治療宮頸癌、乳腺癌、肝癌。所述藥物的優點是低系統毒性，當用抑制腫瘤生長的有效劑量時，既不引起體重減輕也不引起系統毒性，尤其是無生殖系統毒性。
文檔編號A61P35/00GK102225061SQ20111010752
公開日2011年10月26日 申請日期2011年4月27日 優先權日2011年4月27日
發明者張麗龍, 程天民, 粟永萍, 翁玲玲, 艾國平, 鄭虎 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學