專利名稱：生血丸在制備預防或修復環境污染致細胞損傷藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于中藥制劑技術領域，涉及中藥的新用途，更具體的說是生血丸在制備預防或修復環境污染致細胞損傷藥物中的應用。
背景技術：
達仁堂生血丸源于中醫研究院廣安門醫院名老中醫謝海洲教授數十年臨床之驗方。善于補腎陽和腎精，精足則血旺。現代研究，生血丸有保肝利膽、抗腫瘤、抗氧化、鎮靜、 降血糖等多種作用，治療放、化療后的全血細胞減少、再生障礙性貧血有確切療效。方中有鹿茸、黃柏、山藥、炒白術、桑枝、白扁豆、稻芽、紫河車。具有補腎健脾，填精補髓之功效。主藥鹿茸溫腎壯陽、強筋健骨、生精益血，是峻補元陽之要藥，用于治療精血兩虧，活血又補血，具有促進造血之功能；紫河車益氣、養血、補精，有強壯作用；白術、山藥為健脾開胃之品，于大補之中防滋膩，有益氣生血之作用黃柏為瀉火滋陰、清解清瀉之品，取其緩解滋補過峻之作用而有利于體內吸收，該方組方嚴謹，臨床應用功效確切。在人們日常生活和工作環境中如辦公室、居室、小汽車內存在的揮發性有機化合物中都存在苯，苯除了能引起人們神經、血液、免疫系統功能障礙外，近年來苯引起癌癥，是一種致癌物的報告不斷出現。有研究表明，化學物苯、二甲苯、甲醛對小鼠骨髓紅細胞微核率的存在顯著影響。甲醛是一種常見的化學性室內空氣污染物，主要來源于保濕材料、絕緣材料、地板膠、涂料、塑料貼面、壁紙、家具的粘合樹脂、家用燃料和煙葉的不完全燃燒。在所有因室內裝修引起的有機類空氣污染物中(例如苯系物、其他的醛、酮、酚、烷等)，甲醛單獨的污染水平常可高達0. 1-0. 4mg/m3,這樣的濃度水平不但遠遠高于其他單個污染物的水平，有時甚至高于其他揮發性有機化合物的總量。結果表明甲醛污染能造成生物染色體損傷。鉛是一種嚴重危害人類健康的重金屬元素。鉛其化合物可通過消化道、呼吸道進入人體，影響身體的各器官，特別是神經系統、造血系統對鉛最感，是鉛作用的主要靶器官。還有研究認為鉛還可以對小鼠生殖遺傳細胞產生損傷。香煙煙霧中含有尼古丁、煙焦油、氫氰酸、醛等多種化學物質，成分十分復雜，估計含有3 500多種化合物，且許多物質已證明具有致癌、致畸和致突變作用。目前認為煙霧凝聚物中各種致突變物的作用具有協同效應。此外，煙霧凝聚物中某些物質雖無誘變性， 但可大大加強其它誘變劑的誘變作用。

發明內容
本發明首先公開了生血丸在制備預防或修復環境污染致骨髓細胞損傷藥物中的應用；其中所述的環境污染為鉛、香煙污染、苯、二甲苯、甲醛；所述的預防或修復骨髓細胞損傷指的是抑制癌前細胞的增殖。本發明進一步公開了生血丸在制備提前預防環境污染致白血病、多臟器腫瘤發生藥物中的應用。本發明進一步公開了生血丸在制備早期修復環境污染致白血病、多臟器腫瘤發生藥物中的應用。本發明的研究實驗說明生血丸可有效降低外周血淋巴細胞微核率，降低由醋酸鉛污染導致的周圍血淋巴細胞DNA的損傷。本發明的研究實驗說明生血丸預防組和治療組均能很好改善外周血淋巴細胞微核率，修復細胞損傷。本發明的實驗還提示生血丸能有效預防甲醛的細胞損傷，并能修復已損傷的造血細胞。本發明的實驗還提示生血丸不但可以預防苯、二甲苯污染導致的骨髓細胞損傷還可以清除自由基，促進ODC的生成，抑制異形細胞的增值修復已損傷的骨髓細胞。
具體實施例方式為了更充分的解釋本發明的實施，下面通過典型的實施例對本發明做進一步的說明這些實施實例僅僅是解釋、而不是限制本發明的范圍。特別加以說明的是，為了更加清楚地說明本發明的應用效果，分為四個部分分別加以介紹，具體的實驗方法及結果如下
實施例1
第一部分生血丸修復鉛污染致骨髓細胞損傷的病理研究 1材料和方法 1.1動物
中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供雄性BalB/C小鼠150只，體重 20 士 2g，8-12 周齡，許可證號 SCXK —(軍)2007— 004。2. 2主要材料和試劑
快速姬姆薩染液南京建成科技，批號20101109
類標準胎牛血清100ml，中美合資蘭州民海生工程有限公司，批號20100921肝素鈉注射液2ml，1.25萬單位，批號20100502 敵百蟲:250mg, Sigma，批號:8021X
醋酸鉛500ml，天津大學科威公司，批號2008年10月9日羥自由基檢測試劑盒南京建成科技，批號20110224
超氧陰離子檢測試劑盒南京建成科技，批號20110303鳥氨酸脫羧酶ELISA試劑盒華北制藥金坦生物技術股份有限公司，批號E0300007
玻璃點樣細管北京醫科大學儀器廠
生血丸干粉達仁堂制藥廠提供
2. 3主要儀器和設備
OLYMPUS顯微鏡日本，BX51
酶標儀上?？迫A實驗系統有限公司型號ST-360
高速低溫離心機美國sigma公司，3k-30
電子分析天平Sartorius德國，BP61型
137Cs γ 身寸線源Nordion, Ottawa, Canada Gamma, cell 40 Exactor恒溫恒濕環境模擬光催化反應艙南開大學環境系研制，YSSN-I型 2.4動物模型制備、分組和給藥
BalB/C小鼠150只，雄性，體重20 士 2g，8-12周齡。分為五組正常組，30只，普食正常飲水40天；模型組1，30只，普食，醋酸鉛溶液5 g/L飼喂20天后，改普食，正常飲水 20天；模型組2，30只，普食，正常飲水20天后，改醋酸鉛溶液5 g/L飼喂20天；預防組，30 只，生血丸2. 5g/kg，正常飲水20天后，普食，醋酸鉛溶液5 g/L飼喂20天；治療組30只， 普食，醋酸鉛溶液5 g/L喂養20天后，生血丸2. 5g/kg，正常飲水20天。2.5外周血淋巴細胞微核率的檢測方法
小鼠目內眥眶靜脈取血0. 1ml，肝素抗凝，與1/2量的3%明膠放入離心管中，加蓋混勻，垂直至于37°C水浴箱中自然沉降40分鐘左右。吸取上清液，注入離心管中，1000rpm/5 分鐘，棄上清，取沉淀物推片，干后，甲醇固定1分鐘，瑞-姬氏染色1 0分鐘。微核計數標準在油鏡下觀察1000個淋巴細胞，按Country-man的標準確定微核， 即微核大小為主核的1/20 1/3，與主核核膜完全分離，形態較規正，圓形或橢圓形，染色性與主核相似或稍淡，無明顯折光性。觀察5000個淋巴細胞中所含微核的淋巴細胞數。2.6骨髓細胞微核率的檢測方法
小鼠頸椎脫臼法處死以后，取雙側的小鼠股骨，剪去骨的兩端，用小牛血清沖洗骨髓，直至骨髓腔發白為止。將骨髓沖洗液1500r/min離心8min，棄上清，然后用約0. 5mL的小牛血清將沉淀懸浮起來。每個載玻片滴一滴，涂開后于空氣中自然干燥，甲醇固定15min，晾干，瑞姬染色15min，細水流沖洗晾干，即可觀察。統計1000個骨髓細胞中所含微核的細胞。2. 7骨髓細胞抑制羥自由基能力的檢測方法
小鼠頸椎脫白法處死以后，取雙側的小鼠股骨，剪去骨的兩端，用生理鹽水沖洗骨髓， 直至骨髓腔發白為止。將骨髓沖洗液1500r/min離心8min，棄上清。細胞勻漿，按羥自由基檢測試劑盒說明書操作，各樣本以吸光值表示(OD )。2.8骨髓細胞抗超氧陰離子能力的檢測方法
小鼠頸椎脫白法處死以后，取雙側的小鼠股骨，剪去骨的兩端，用生理鹽水沖洗骨髓， 直至骨髓腔發白為止。將骨髓沖洗液1500r/min離心8min，棄上清。細胞勻漿，采用比色法測定抗超氧陰離子活性，操作步驟按試劑盒說明書進行。蛋白測定采用考馬斯亮藍法。各樣本以吸光值表示(OD)。2. 9骨髓細胞鳥氨酸脫羧酶(ODC)表達的檢測方法
小鼠頸椎脫白法處死以后，取雙側的小鼠股骨，剪去骨的兩端，用生理鹽水沖洗骨髓，直至骨髓腔發白為止。將骨髓沖洗液1500r/min離心8min，棄上清。細胞勻漿，按 ELISA試劑盒說明書操作，在酶標儀以波長450nm檢測。各樣本以吸光值表示(OD)。3 結果
3. 1生血丸對鉛污染小鼠外周血淋巴細胞及骨髓細胞微核率的影響表1生血丸對鉛污染小鼠外周血淋巴細胞及骨髓細胞微核率的影響( X±S，n=10)
權利要求
1.生血丸在制備預防或修復環境污染致骨髓細胞損傷藥物中的應用；其中所述的環境污染為鉛、香煙污染、二甲苯或甲醛；所述的預防或修復骨髓細胞損傷指的是抑制癌前細胞的增殖。
2.生血丸在制備提前預防環境污染致白血病、多臟器腫瘤發生藥物中的應用。
3.生血丸在制備早期修復環境污染致白血病、多臟器腫瘤發生藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了生血丸在制備預防或修復環境污染致骨髓細胞損傷藥物中的應用；其中所述的環境污染為鉛、香煙污染、苯、二甲苯、甲醛；所述的預防或修復骨髓細胞損傷指的是抑制癌前細胞的增殖。本發明從血液淋巴細胞、骨髓微核率的變化；自由基的清除能力；癌前細胞增殖的抑制等方面，檢驗生血丸抗環境污染致畸的功效，為生血丸的臨床應用開辟更廣闊的前景。
文檔編號A61P35/00GK102370905SQ201110331310
公開日2012年3月14日 申請日期2011年10月27日 優先權日2011年10月27日
發明者嚴蘇純, 張曉樂, 王光普 申請人:天津中新藥業集團股份有限公司達仁堂制藥廠