專利名稱：生血丸在制備預防低劑量電離輻射致細胞損傷藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于中藥制劑技術領域，涉及中藥的新用途，更具體的說是生血丸在制備預防或修復低劑量電離輻射致骨髓細胞損傷藥物中的應用。
背景技術：
達仁堂生血丸源于中醫研究院廣安門醫院名老中醫謝海洲教授數十年臨床之驗方。善于補腎陽和腎精，精足則血旺。現代研究，生血丸有保肝利膽、抗腫瘤、抗氧化、鎮靜、 降血糖等多種作用，治療放、化療后的全血細胞減少、再生障礙性貧血有確切療效。方中有鹿茸、黃柏、山藥、炒白術、桑枝、白扁豆、稻芽、紫河車。具有補腎健脾，填精補髓之功效。主藥鹿茸溫腎壯陽、強筋健骨、生精益血，是峻補元陽之要藥，用于治療精血兩虧，活血又補血，具有促進造血之功能；紫河車益氣、養血、補精，有強壯作用；白術、山藥為健脾開胃之品，于大補之中防滋膩，有益氣生血之作用黃柏為瀉火滋陰、清解清瀉之品，取其緩解滋補過峻之作用而有利于體內吸收，該方組方嚴謹，臨床應用功效確切。眾所周知，各種各樣的污染威脅著我們賴以生存的環境。例如無處不在的輻射家用電器電視、電冰箱、空調、微波爐、吸塵器等；辦公設備手機、電腦、復印機、電子儀器、醫療設備等；家庭裝飾大理石、復合地板、墻壁紙、涂料等；周邊環境中的高壓線、 變電站、電視(廣播)信號發射塔等；自然環境中的太陽黑子等。在輻射源集中的環境中工作、學習、生活的人，容易失眠多夢、記憶力減退、體虛乏力、免疫力低下等，其癌細胞的生長速度比正常人快二十四倍。為臨床尋求一種能保護細胞，修復損傷，防止DNA突變的中成藥是當務之急。前期的實驗(生血丸對骨髓抑制小鼠造血調控的實驗研究)表明生血丸能顯著提高骨髓抑制小鼠外周血血像和骨髓有核細胞計數；提高骨髓抑制小鼠外周血網織紅細胞的計數；可促進骨髓抑制小鼠骨髓細胞從(^/G1期進入增殖周期；提高骨髓抑制小鼠體外培養造血干祖細胞集落的產率；能有效調節骨髓微環境中ΤΡ0、ΕΡ0和G-CSF的表達，從而促進外周血像的提升。

發明內容
本發明公開了生血丸在制備預防或修復低劑量電離輻射致骨髓細胞損傷藥物中的應用；其中所述的預防或修復骨髓細胞損傷指的是抑制癌前細胞的增殖。本發明進一步公開了生血丸在制備提前預防低劑量電離輻射致白血病、多臟器腫瘤發生藥物中的應用。本發明進一步還公開了生血丸在制備早期修復低劑量電離輻射致白血病、多臟器腫瘤發生藥物中的應用。本發明所述的預防和修復指的是對低劑量輻照帶來的染色體斷裂加以修復。本發明所述的低劑量電離輻射指的是自然界存在的天然輻射；家用電器和辦公設備產生的輻射；放射醫學中，應用于診斷和治療的醫用X射線、 射線等。根據UNSCEAR1988年報告，低劑量是指低于0.2Gy (Gy是吸收劑量單位)的劑量。在實際應用中，一般將低于0. 5Gy的劑量稱為低劑量。長期接觸低劑量輻射，射線會導致機體造血系統、神經系統、性腺、視神經、眼晶體及免疫系統的損傷，外周血淋巴細胞染色體、微核尤為敏感，常出現異常現象。本發明的實驗結果提示生血丸能很好地預防和治療低劑量輻照帶來的染色體斷裂；生血丸能預防性降低和清除羥自由基和超氧陰離子；生血丸能有效產生0DC，抑制多胺的合成，抑制變異細胞的增殖。本發明以達仁堂生血丸為實驗用藥，從血液淋巴細胞、骨髓微核率的變化；自由基的清除能力；癌前細胞增殖的抑制等方面，檢驗生血丸抗環境污染致畸的功效，為生血丸的臨床應用開辟更廣闊的前景。
具體實施例方式為了更充分的解釋本發明的實施，下面通過典型的實施例對本發明做進一步的說明這些實施實例僅僅是解釋、而不是限制本發明的范圍。實施例1
第一部分生血丸修復低劑量輻照致骨髓細胞損傷的病理研究 1材料和方法 1.1動物
中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供雄性BalB/C小鼠150只，體重 20 士 2g，8-12 周齡，許可證號 SCXK —(軍)2007— 004。1.2主要材料和試劑
快速姬姆薩染液南京建成科技，批號20101109
類標準胎牛血清100ml，中美合資蘭州民海生工程有限公司，批號20100921肝素鈉注射液2ml，1.25萬單位，批號20100502
羥自由基檢測試劑盒南京建成科技，批號20110224 超氧陰離子檢測試劑盒南京建成科技，批號20110303
鳥氨酸脫羧酶ELISA試劑盒華北制藥金坦生物技術股份有限公司，批號E0300007
生血丸干粉達仁堂制藥廠提供
1. 3主要儀器和設備
OLYMPUS顯微鏡日本，BX51型
酶標儀上海科華實驗系統有限公司，ST-360型
高速低溫離心機美國sigma公司，3k-30型
電子分析天平Sartorius德國，BP61型
137Cs γ 身寸線源Nordion, Ottawa, Canada , Gamma cell 40 Exactor 1.4動物模型制備、分組和給藥
BalB/C小鼠150只，雄性，體重20士2g，8-12周齡。分為五組正常組30只，普食，正常飲水，16天；模型組1，30只，0. 4GyX射線輻照4天后，普食，正常飲水12天；模型組2，30 只，普食，正常飲水12天后，0. 4GyX射線輻照4天；預防組30只，生血丸2. 5g/kg飼胃，正常飲水12天后，0. 4GyX射線輻照4天；治療組30只，0. 4GyX射線輻照4天后，生血丸2. 5g/kg，正常飲水12天。1.5外周血淋巴細胞微核率的檢測方法
小鼠目內眥眶靜脈取血0. 1ml，肝素抗凝，與1/2量的3%明膠放入離心管中，加蓋混勻，垂直至于37°C水浴箱中自然沉降40分鐘左右。吸取上清液，注入離心管中，1000rpm/5 分鐘，棄上清，取沉淀物推片，干后，甲醇固定1分鐘，瑞-姬氏染色1 0分鐘。微核計數標準在油鏡下觀察1000個淋巴細胞，按Country-man的標準確定微核， 即微核大小為主核的1/20 1/3，與主核核膜完全分離，形態較規正，圓形或橢圓形，染色性與主核相似或稍淡，無明顯折光性。觀察5000個淋
巴細胞中所含微核的淋巴細胞數。1.6骨髓細胞微核率的檢測方法
小鼠頸椎脫白法處死以后，取雙側的小鼠股骨，剪去骨的兩端，用小牛血清沖洗骨髓， 直至骨髓腔發白為止。將骨髓沖洗液1500r/min離心8min，棄上清，然后用約0. 5mL的小牛血清將沉淀懸浮起來。每個載玻片滴一滴，涂開后于空氣中自然干燥，甲醇固定15min， 晾干，瑞姬染色15min，細水流沖洗晾干，即可觀察。統計1000個骨髓細胞中所含微核的細胞。1. 7骨髓細胞抑制羥自由基能力的檢測方法
小鼠頸椎脫白法處死以后，取雙側的小鼠股骨，剪去骨的兩端，用生理鹽水沖洗骨髓， 直至骨髓腔發白為止。將骨髓沖洗液1500r/min離心8min，棄上清。細胞勻漿，按羥自由基檢測試劑盒說明書操作，各樣本以吸光值表示(OD )。1.8骨髓細胞抗超氧陰離子能力的檢測方法
小鼠頸椎脫白法處死以后，取雙側的小鼠股骨，剪去骨的兩端，用生理鹽水沖洗骨髓， 直至骨髓腔發白為止。將骨髓沖洗液1500r/min離心8min，棄上清。細胞勻漿，采用比色法測定抗超氧陰離子活性，操作步驟按試劑盒說明書進行。蛋白測定采用考馬斯亮藍法。各樣本以吸光值表示(OD)。1. 9骨髓細胞鳥氨酸脫羧酶(ODC)表達的檢測方法
小鼠頸椎脫白法處死以后，取雙側的小鼠股骨，剪去骨的兩端，用生理鹽水沖洗骨髓， 直至骨髓腔發白為止。將骨髓沖洗液1500r/min離心8min，棄上清。細胞勻漿，按ELISA試劑盒說明書操作，在酶標儀以波長450nm檢測。各樣本以吸光值表示(OD )。2 結果
2. 1生血丸對低劑量輻照小鼠外周血淋巴細胞及骨髓細胞微核率的影響表1生血丸對低劑量輻照小鼠外周血淋巴細胞及骨髓微核率的影響( X±S，n=10)
權利要求
1.生血丸在制備預防或修復低劑量電離輻射致骨髓細胞損傷藥物中的應用；其中所述的預防或修復骨髓細胞損傷指的是抑制癌前細胞的增殖。
2.生血丸在制備提前預防低劑量電離輻射致白血病、多臟器腫瘤發生藥物中的應用。
3.生血丸在制備早期修復低劑量電離輻射致白血病、多臟器腫瘤發生藥物中的應用。
4.權利要求1所述的應用，其中所述的預防和修復指的是對低劑量輻照帶來的染色體斷裂加以修復。
全文摘要
本發明公開了生血丸在制備預防或修復低劑量電離輻射致骨髓細胞損傷藥物中的應用；其中所述的預防或修復骨髓細胞損傷指的是抑制癌前細胞的增殖。所述的預防和修復指的是對低劑量輻照帶來的染色體斷裂加以修復。本發明從血液淋巴細胞、骨髓微核率的變化；自由基的清除能力；癌前細胞增殖的抑制等方面，檢驗生血丸抗環境污染致畸的功效，為生血丸的臨床應用開辟更廣闊的前景。
文檔編號A61P39/00GK102349978SQ20111033131
公開日2012年2月15日 申請日期2011年10月27日 優先權日2011年10月27日
發明者嚴蘇純, 張曉樂, 王光普 申請人:天津中新藥業集團股份有限公司達仁堂制藥廠