專利名稱：一種消除或減弱加速血液清除現(xiàn)象產(chǎn)生的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種消除或減弱加速血液清除現(xiàn)象產(chǎn)生的方法，具體涉及一種通過改變給藥間隔來消除或減弱加速血液清除現(xiàn)象。
背景技術(shù)：
活性化合物的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為對(duì)其治療效果有決定性影響，一些在體外實(shí)驗(yàn)中顯示出優(yōu)秀藥理活性的候選化合物正是由于其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)的不理想而被中止開發(fā)。所以將活性化合物載體化，從而改善其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的策略在藥物制劑的開發(fā)過程中得到了廣泛而深入的應(yīng)用。其中，使用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)對(duì)活性化合物進(jìn)行修飾(又稱為藥物分子的PEG化)或?qū)⒒钚苑肿虞d入聚乙二醇化載體(又稱為PEG化載體)是最為常用的手段，并獲得了一些非常成功的案例。例如，將血液中消除極快的蛋白多肽(如腺苷脫氨酶、天冬酰胺酶、干擾素a-2b或粒細(xì)胞集落刺激因子等)進(jìn)行PEG修飾后，其血液循環(huán)半衰期顯著延長，可以在降低給藥頻率的同時(shí)保證療效(胡永祥，牛津梁，張文博，等.聚乙二醇修飾藥物技術(shù)的研究進(jìn)展[J].中國生化藥物雜志，2004，25 ￠):369.373);將血液中代謝較快且具有嚴(yán)重心臟毒性的阿霉素裝載于PEG化脂質(zhì)體中(Doxil )，不僅大大降低了其心臟毒性，而且其療效得到顯著提升。鑒于PEG化載體/藥物的獨(dú)特優(yōu)勢，被FDA認(rèn)可的靜脈注射安全性，以及上市產(chǎn)品所帶來的可觀社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益，世界各國政府都投入大量的人力、財(cái)力和資源，進(jìn)行諸如PEG化脂質(zhì)體、PEG化樹枝狀(dendrimer)給藥系統(tǒng)、PEG化納米粒、PEG化膠束、PEG化藥物、PEG化酶等方面的研究，特別是PEG化結(jié)合主動(dòng)靶向配體、基因轉(zhuǎn)染、細(xì)胞穿透肽、RNA干擾治療等21世紀(jì)主攻方向的研究。但是自 2000年以來，PEG化制劑給藥的安全性和治療的有效性受到了挑戰(zhàn)。鑒于大多數(shù)PEG化制劑在臨床應(yīng)用上需要多次給藥，Dams等(Dams ETM, Laverman P, OyenWJGj et al.Accelerated blood clearance and altered biodistribution of repeatedinjections of sterically stabilized liposomes [J].J Pharmacol exp Therj 2000，292: 1071 - 1079)以99mTc標(biāo)記脂質(zhì)體，研究大鼠重復(fù)注射PEG化脂質(zhì)體后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和組織分布變化情況，意外的發(fā)現(xiàn)第二次注射的脂質(zhì)體血漿水平出現(xiàn)極大降低(20分鐘時(shí)的濃度約為首次注射的10%)，且肝攝取量從8.1±0.8%驟升至46.2±9.8%，即為加速血液清除(Accelerated Blood Clearance, ABC)現(xiàn)象。目前研究者對(duì)ABC現(xiàn)象的機(jī)制還不十分明確，其可能的機(jī)理是:首次注射的PEG化脂質(zhì)體，作為抗原激活脾臟B細(xì)胞，該B細(xì)胞增殖分化為漿細(xì)胞后分泌相應(yīng)抗體，此抗體與之后注射的脂質(zhì)體表面的PEG結(jié)合，隨后激活補(bǔ)體系統(tǒng)，通過補(bǔ)體C3片段對(duì)PEG化脂質(zhì)體的調(diào)理作用而加快單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)對(duì)其的攝取，導(dǎo)致PEG化脂質(zhì)體快速從血液中清除(佘振南，翟文君，鄧意輝，“加速血液清除”現(xiàn)象中的免疫機(jī)制分析[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011.28(9): 760-768.)。更多的研究表明，ABC現(xiàn)象并不是PEG化脂質(zhì)體所專有的，Lu等(LU，W.,WAN, J., SHE, Z., et al., Brain delivery property and accelerated bloodclearance of cationic albumin conjugated pegylated nanoparticle[J].Journalof Controlled Release, 2007, 118(1): 38-53.)的研究發(fā)現(xiàn)陽離子牛血清白蛋白修飾的PEG與PLA交聯(lián)形成的納米粒(CBSA-NP)在小鼠體內(nèi)的重復(fù)注射時(shí)也產(chǎn)生了 ABC現(xiàn)象；KOIDE 等(K0IDE, H., ASAI, T., HATANAKA, K., et al., Particle size-dependenttriggering of accelerated blood clearance phenomenon[J].1nternational Journalof Pharmaceutics, 2008, 362(1-2): 197-200.)發(fā)現(xiàn) PEG 化的膠束亦能誘導(dǎo) ABC 現(xiàn)象的產(chǎn)生；我們課題組的研究表明PEG化的乳劑和固體脂質(zhì)納米粒對(duì)于小鼠、大鼠或比格犬的重復(fù)注射均可以產(chǎn)生強(qiáng)烈的ABC現(xiàn)象(國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目81072602)。一些研究甚至證明PEG化蛋白也能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗PEG抗體，從而導(dǎo)致蛋白藥物從血液中快速清除(Cheng, T.L., P.Y.ffu, et al.(1999)."Accelerated clearance of polyethyleneglycol-modified proteins by ant1-polyethylene glycol IgM.〃 Bioconjug Chem10(3): 520-528.)，這可以被認(rèn)為是PEG化蛋白藥物的ABC現(xiàn)象。所以，我們認(rèn)為ABC現(xiàn)象是PEG化制劑(即PEG化藥物載體和PEG化藥物)存在的共性問題。ABC現(xiàn)象所引發(fā)的PEG化制劑藥動(dòng)學(xué)特性的改變?cè)谄渑R床應(yīng)用中是一個(gè)不容忽視的問題，會(huì)嚴(yán)重影響藥物治療的的安全性、有效性和患者的順應(yīng)性。Semple等(SempleSC, Harasym TO, Clow KA, et al.1mmunogenicity and rapid blood clearance ofliposomes containing polyethylene glycol-lipid conjugates and nucleic acid [J].J Pharmacol Exp Ther, 2005, 312: 1020 - 1026)的研究證明，重復(fù)注射包封寡核苷酸(0DN)、pDNA或RNA核酶的PEG化脂質(zhì)體會(huì)誘導(dǎo)強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致制劑血液循環(huán)時(shí)間縮短和小鼠死亡率的顯著增加。我們?cè)谘芯抗ぷ髦邪l(fā)現(xiàn)，比格犬在重復(fù)注射PEG化乳劑、PEG化納米粒和PEG化脂質(zhì)體時(shí)，ABC現(xiàn)象的產(chǎn)生往往伴隨著嚴(yán)重的類似過敏的反應(yīng)，如困倦、嘔吐、腹瀉、面部嚴(yán)重水腫等，某些反應(yīng)嚴(yán)重的比格犬甚至因此死亡。現(xiàn)有文獻(xiàn)已證明小鼠、大鼠、家兔、比格犬、恒河猴等試驗(yàn)動(dòng)物均會(huì)在重復(fù)注射PEG化制劑時(shí)產(chǎn)生ABC現(xiàn)象，由此推知，人類在重復(fù)注射PEG化制劑時(shí)亦能產(chǎn)生ABC現(xiàn)象，所引起的相應(yīng)后果。在尋找ABC現(xiàn)象解決方法的過程中，研究者們發(fā)現(xiàn)PEG化制劑的注射劑量、PEG修飾密度、PEG分子量、制劑粒徑等因素均可以影響ABC現(xiàn)象的產(chǎn)生及強(qiáng)弱程度。注射劑量Ishida等發(fā)現(xiàn)PEG化脂質(zhì)體的首劑量與ABC現(xiàn)象發(fā)生的程度存在明顯的反相關(guān)(Ishida T, Masuda K, Ichikawa T, et al.Accelerated clearance of asecond injection of PEGylated liposomes in mice [J].1nt J Pharm, 2003, 255:167 - 174)。大鼠首次注射PEG化脂質(zhì)體，磷脂劑量分別為O (HEPES鹽緩沖液)、0.001、0.01、0.1、1、5 μ mol/kg，5天后注射放射標(biāo)記的PEG化脂質(zhì)體(磷脂劑量為5 μ mol/kg),結(jié)果表明二次注射PEG化脂質(zhì)體的血液清除程度與肝聚集量隨首劑量的降低而明顯增加。當(dāng)首劑量磷脂高于I μ mol/kg時(shí)，二次注射的PEG化脂質(zhì)體血液清除速度與肝聚集量不再繼續(xù)增加。而Laverman等的研究與上述Ishida的結(jié)果存在一定矛盾:首次注射磷脂劑量分別為0.05,0.5,5.0 μ mol/kg的PEG化脂質(zhì)體，二次注射PEG化脂質(zhì)體(磷脂劑量5.0μ mol/kg)時(shí)均能產(chǎn)生ABC現(xiàn)象(Laverman P, Carstens MG, Boerman 0C, et al.Factorsaffecting the accelerated blood clearance of polyethylene glycol—liposomes uponrepeated injection [J].J Pharmacol Exp Ther, 2001, 298: 607 - 612)。當(dāng)固定首次注射劑量為5.0 μ mo I磷脂/k g，二次注射的PEG化脂質(zhì)體劑量為15或50 μ mo I磷脂/kg時(shí)，產(chǎn)生的ABC現(xiàn)象比5.0 μ mol磷脂/kg組明顯減弱。最近文獻(xiàn)(Repeated Injection ofHigh Doses of Hemoglobin-Encapsulated Liposomes (Hemoglobin Vesicles) InducesAccelerated Blood Clearance in a Hemorrhagic Shock Rat Model DRUG M ETABOLISMAND DISPOSITION 2011,39 (3):484 - 489)報(bào)道，即使高劑量也會(huì)產(chǎn)生ABC現(xiàn)象。PEG修飾密度目前能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生ABC現(xiàn)象的PEG化脂質(zhì)體均以PEG-DSPE為長循環(huán)材料，因此有研究者專門對(duì)PEG-DSPE在處方中的比例對(duì)ABC現(xiàn)象的影響進(jìn)行考察。首次注射PEG化脂質(zhì)體中PEG-DSPE占處方脂質(zhì)摩爾比分別為0、5、10、15% (磷脂劑量為0.001μ mol/kg)，5天后注射PEG化脂質(zhì)體(磷脂劑量為5.0 μ mol/kg, PEG-DSPE在處方中的摩爾比例為5%)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ABC現(xiàn)象發(fā)生的程度與PEG-DSPE的比例存在明顯的反相關(guān):含有0% PEG-DSPE的脂質(zhì)體(即普通脂質(zhì)體)不產(chǎn)生ABC現(xiàn)象；含有5% PEG-DSPE的脂質(zhì)體可以誘導(dǎo)產(chǎn)生明顯的ABC現(xiàn)象，且伴隨肝聚集量顯著增加。進(jìn)一步增加PEG-DSPE的含量(10、15%)，與5%組相比，二次注射脂質(zhì)體的清除速率與肝聚集呈現(xiàn)降低趨勢，但仍顯著高于對(duì)照組(P〈0.01) (Ishida T, Harada M, Wang XY, et al.Accelerated blood clearanceof PEGylated liposomes following preceding liposome injection: Effects of lipiddose and PEG surface-density and chain length of the first-dose liposomes [J].J Control Release , 2005, 105: 305 - 317)。Ishida 等也發(fā)現(xiàn)增加 PEG-DSPE 的比例能減弱PEG化脂質(zhì)體對(duì)ABC現(xiàn)象的誘導(dǎo)。與首次劑量中PEG-DSPE含量低(小于5 mol%)的脂質(zhì)體相比，若首次注射脂質(zhì)體中PEG-DSPE含量高(大于10 mol%),則其后注射的PEG化脂質(zhì)體的肝臟蓄積量減少(Ishida T, Ichikawa T, Ichihara M, et al.Effect of thephysicochemical properties of initially injected liposomes on the clearance ofsubsequently injected PEGylated liposomes in mice [J].J Control Release, 2004,95: 403 - 412)。PEG的分子量有研究表明，首次注射摩爾比均為5%的PEG2000-DSPE和PEG5000-DSPE修飾脂質(zhì)體(0.001 μ mol磷脂/kg)，5天后注射PEG2000-DSPE修飾的標(biāo)記脂質(zhì)體(5 μ mol磷脂/kg)，均產(chǎn)生明顯的ABC現(xiàn)象(未考察二次注射PEG5000-DSPE修飾脂質(zhì)體)(Ishida T, Maeda R, Ichihara M, et al.Accelerated clearance of PEGylatedliposomes in rats after repeated injections [J].J Control Release, 2003, 88:35 - 42)，因此認(rèn)為PEG的分子量對(duì)誘導(dǎo)ABC現(xiàn)象沒有影響。Ishida等的結(jié)論恰恰相反:首次注射PEG5000-DSPE修飾脂質(zhì)體誘導(dǎo)ABC現(xiàn)象的程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于首次注射PEG2000-DSPE修飾脂質(zhì)體，PEG5000-DSPE和PEG2000-DSPE修飾脂質(zhì)體組的肝聚集量分別為35.3±3.8%和78.7±8.8%，表明首次注射脂質(zhì)體中PEG分子量的增加可以在一定程度上減弱ABC現(xiàn)象。PEG化制劑粒徑Dams等的研究表明:ABC現(xiàn)象與首次注射PEG化脂質(zhì)體的粒徑、表面性質(zhì)和放射性標(biāo)記均無關(guān)。未標(biāo)記的小(85 nm)或大(400 nm)PEG化脂質(zhì)體均會(huì)引起二次注射PEG化脂質(zhì)體的血液清除速度顯著增加，產(chǎn)生明顯的ABC現(xiàn)象。注射間隔Dams等發(fā)現(xiàn)能夠誘導(dǎo)ABC現(xiàn)象的兩次注射最小時(shí)間間隔為5天；Ishida等證明兩次注射間隔為7天時(shí)ABC現(xiàn)象最為強(qiáng)烈。從上述影響ABC現(xiàn)象各因素的分析可知:對(duì)于PEG化載體，通過調(diào)節(jié)其注射劑量、粒徑或所修飾PEG的分子量等因素難以避免ABC現(xiàn)象的產(chǎn)生；而降低PEG修飾密度雖然可以消弱ABC現(xiàn)象的強(qiáng)度甚至避免其產(chǎn)生，但PEG化制劑的長循環(huán)優(yōu)勢亦隨之喪失；當(dāng)給藥間隔小于5天或更少時(shí)雖然可以減弱或消除ABC現(xiàn)象的產(chǎn)生，但是PEG化制劑的優(yōu)勢正在于延長了活性物質(zhì)的血液循環(huán)半衰期，降低給藥頻率，某些PEG化制劑的循環(huán)半衰期甚至超過100小時(shí)，所以將給藥間隔縮短至5天以內(nèi)并非理想選擇，即使在較短給藥間隔的情況下，多次給藥也會(huì)產(chǎn)生ABC現(xiàn)象；我們課題組的研究發(fā)現(xiàn)，通過可斷裂PEG脂質(zhì)衍生物修飾脂質(zhì)體或囊泡可以消除或減輕ABC現(xiàn)象(Xu H, Wang KQ, Deng YH, et al.Effectsof cleavable PEG-cholesteroI derivatives on the accelerated blood clearance ofPEGylated liposomes.Biomaterials, 2010; 31 (17):4757-63.),但可斷裂 PEG 脂質(zhì)衍生物對(duì)于延長脂質(zhì)體、囊泡或乳劑等制劑的血液循環(huán)時(shí)間效果不大。Judge等(JUDGE, A.，MCCLINT0CK, K., PHELPS, J.R., et al., Hypersensitivity and loss of disease sitetargeting caused by antibody responses to PEGylated liposomes[J].Mol Ther,2006，13(2): 328-337.)使用烷基鏈長度不同的PEG脂質(zhì)衍生物對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行修飾，其誘導(dǎo)ABC現(xiàn)象的能力隨烷基鏈的縮短而降低，但烷基鏈較短的PEG脂質(zhì)衍生物易從所修飾的脂質(zhì)體或乳劑等表面脫落，因此也不能使相應(yīng)的PEG化制劑獲得理想的血液循環(huán)效果。雖然Doxif在臨床使用中并未觀察到典型的ABC現(xiàn)象，這可能是由于其中的藥物具有較強(qiáng)的免疫系統(tǒng)毒性而在一定程度上抑制了免疫反應(yīng)，或是由于注射劑量較大因而ABC現(xiàn)象較弱，但是Doxi Γ在靜脈注射給藥時(shí)仍然會(huì)發(fā)生過敏反應(yīng)(HSRs )，其與ABC現(xiàn)象可能有關(guān)(另外，我們?cè)谶M(jìn)行低劑量重復(fù)注射研究中發(fā)現(xiàn)，Doxif也存在ABC現(xiàn)象)。而隨著越來越多的PEG化制劑逐漸步入臨床研究環(huán)節(jié)，它們?cè)谂R床試驗(yàn)或上市后使用中所潛伏的與ABC現(xiàn)象相關(guān)的嚴(yán)重問題和風(fēng)險(xiǎn)也將日益凸顯，所以急需一種解決ABC現(xiàn)象的切實(shí)可行的方法。

發(fā)明內(nèi)容
由于ABC現(xiàn)象的發(fā)生會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象產(chǎn)生傷害甚至引起死亡，所以我們使用藥動(dòng)學(xué)特征與人類相似的比格犬作為模型動(dòng)物`，尋找解決ABC現(xiàn)象的方法，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以在很大程度上用于指導(dǎo)人用PEG化制劑的開發(fā)。我們?cè)趯?duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重復(fù)注射PEG化制劑后ABC現(xiàn)象的產(chǎn)生情況進(jìn)行深入研究后驚人地發(fā)現(xiàn)，對(duì)于PEG化乳劑、PEG化固體脂質(zhì)納米粒、PEG化脂質(zhì)體和PEG化囊泡等PEG化載體，通過對(duì)注射間隔進(jìn)行巧妙地選擇，可以減弱甚至完全消除ABC現(xiàn)象對(duì)二次注射PEG化制劑藥動(dòng)學(xué)的影響。我們提出的注射方案可以保證二次，或之后的第三次、第四次注射的PEG化制劑不會(huì)從血液中快速清除，從而借助其長循環(huán)作用實(shí)現(xiàn)藥物的治療效果。要實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述的減弱或者消除PEG化制劑的加速血液清除現(xiàn)象，須采用如下的技術(shù)方案:
一種消除或減弱加速血液清除現(xiàn)象產(chǎn)生的方法，即PEG化制劑的注射間隔不小于30天。本發(fā)明所述注射間隔可以選擇不小于60天。本發(fā)明所述注射間隔可以選擇不小于90天。作為優(yōu)選，所述注射間隔不小于60天或不小于90天；作為更優(yōu)選，所述注射間隔不小于90天。
本發(fā)明所述的在PEG化制劑的注射方式，指通過靜脈注射或是靜脈滴注的方式給予用藥對(duì)象，也可利用其它注射類型，如皮下注射、肌肉注射和硬膜外注射等；或者是利用已知多種類型的注射給藥設(shè)備，例如使用可植入泵或非植入的可便攜或非便攜型的注射泵。注射方式可以是連續(xù)輸注、間歇輸注或脈沖輸注。注射速度可以不同，就如臨床上靜脈注射和靜脈滴注的區(qū)別。本發(fā)明中所述聚乙二醇化制劑(PEG化制劑)是PEG化乳劑、PEG化脂質(zhì)體、PEG化固體脂質(zhì)納米粒、PEG化膠束、PEG化囊泡、PEG化微乳、PEG化納米粒、PEG化納米結(jié)構(gòu)載體或PEG化蛋白。如公知的，PEG化制劑，特別是其中的是PEG化乳劑、PEG化脂質(zhì)體、PEG化固體脂質(zhì)納米粒、PEG化膠束、PEG化囊泡、PEG化納米粒、PEG化微乳或PEG化納米結(jié)構(gòu)載體是采用聚乙二醇脂質(zhì)衍生物(PEG脂質(zhì)衍生物)所修飾的，PEG脂質(zhì)衍生物中PEG與脂質(zhì)鏈段通過酯鍵或酰胺鍵或者醚鍵相連。 聚乙二醇脂質(zhì)衍生物例如:聚乙二醇-留醇類衍生物如聚乙二醇-膽固醇、聚乙二醇-膽固醇琥珀酸酯(PEG-CHEMS)、聚乙二醇-膽固醇碳酸甲酯等，聚乙二醇-磷脂類衍生物如聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DPPE)、聚乙二醇-二油酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-棕櫚酰油酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二肉豆蘧酰磷脂酰乙醇胺等；聚乙二醇-二酸甘油酯或單酯如聚乙二醇-二硬脂酰甘油、聚乙二醇-二棕櫚酰甘油、聚乙二醇-二肉豆蘧酰甘油等;聚乙二醇-脂肪酸或脂肪酸酯衍生物等如聚乙二醇-硬脂酸、聚乙二醇-棕櫚酸、吐溫、芐澤、賣澤、聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯(TPGS)等。PEG衍生物還可以是Diacylglycerol-PEG(公司名稱NOF America Corporation),其結(jié)構(gòu)式如下:
權(quán)利要求
1.一種消除或減弱加速血液清除現(xiàn)象產(chǎn)生的方法，即聚乙二醇化制劑的注射間隔不小于30天。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述注射間隔為不小于60天。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述注射間隔為不小于90天。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述注射包括靜脈注射、皮下注射或肌肉注射。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述聚乙二醇化制劑是聚乙二醇化乳劑、聚乙二醇化脂質(zhì)體、聚乙二醇化固體脂質(zhì)納米粒、聚乙二醇化膠束、聚乙二醇化囊泡、聚乙二醇化微乳、聚乙二醇化納米粒、聚乙二醇化納米結(jié)構(gòu)載體或聚乙二醇化蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求 1的方法，其特征在于，所述聚乙二醇化制劑為臨床上的預(yù)防、診斷或治療制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種可以消除或減弱加速血液清除現(xiàn)象產(chǎn)生的方法，通過合理選擇PEG化制劑的注射間隔可以消除或避免加速血液清除現(xiàn)象的產(chǎn)生。所述PEG化制劑的注射間隔不小于30天，優(yōu)選不小于90天，所述聚乙二醇化制劑為臨床上的預(yù)防、診斷或治療制劑。按照本發(fā)明所述方法進(jìn)行PEG化制劑的注射給藥，可以減輕或完全消除加速血液清除現(xiàn)象，從而避免可能發(fā)生的嚴(yán)重的器官毒性反應(yīng)或類似過敏反應(yīng)，并能保證PEG化制劑的藥效。
文檔編號(hào)A61K47/34GK103169981SQ20111043132
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2011年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月21日
發(fā)明者鄧意輝, 佘振南, 王龍, 嚴(yán)米娜, 王春玲, 趙永雪 申請(qǐng)人:沈陽藥科大學(xué)