專利名稱：一種用于提高缺氧耐受力藥物組合物軟膠囊及其制備方法
技術領域：
本發明涉及保健品技術領域，具體地說是涉及能提高缺氧耐受力的用紅景天有效物質和蜂膠組合物制成的軟膠囊及其制備方法。
背景技術：
近年來，國家加強對西藏的建設，一批批為了開發高原資源，保衛和建設祖國高原、邊疆的內地援藏人員和由內地到高原的中國人民衛士進入西藏，他們需要長期工作和生活在高原缺氧的環境下，高原反應對他們帶來的困擾以影響他們正常的工作和生活。此外西藏列車的開通，打開了西藏旅游的便捷之門，人們為一睹西藏的原始風情及自然風光蜂擁而至，但高原反應使大部分人痛苦煩惱，高原反應所帶來的頭痛，無力疲憊，使人們失去了游玩的興致，不得不但在賓館里休息，甚至有的人沒有欣賞高原風光就馬上回去了。使一些未到高原的人一提到高原反應就對去高原旅游望而卻步。
海拔3000米以上的地區，稱為高原地區。高原地區大氣壓力低，僅為平原的一半， 空氣中含氧量僅為平原的60%，因而形成了以低氣壓、缺氧、低溫、太陽輻射強、溫差大、大風、干燥等位顯著特點的高原氣候。低海拔地區的人，進入高原后，由于氣候等方面的急劇變化，超過了正常人機體自動調節的限度，在海拔4000米以上地段，約有60% -100%的人會發生急性缺氧反應或者疾病，起癥狀常見的有頭痛、頭昏、心慌、氣短、食欲不振、惡心嘔吐、腹脹、胸悶、胸痛、疲乏無力、面部輕度浮腫、口唇干裂等。嚴重時血壓增高、心跳加快，甚至出現昏迷狀態。有的人則會出現異常異常興奮、多言多語、步態不穩、幻覺、失眠等。
目前用于治療高原反應的藥品見效快，但副反應較為嚴重。如醋氮酰胺、利尿磺胺常用于防治因高原不適引起的水腫性疾病。而使用醋氮酰胺常見不良反應有困倦、面部和四肢麻木感，可引起腎臟病發癥等。過多使用利尿磺胺可能出現輕微的惡心、腹瀉、藥疹、瘙癢、視力模糊等不良反應。而常用的抑制劑、肌苷片、葡萄糖等常受個體技能條件影響，服用量較大，效果不太明顯。因此開發生產高效的提高缺氧耐受力的且副作用小的制品是迫不及待的。
2010版藥典收載的紅景天為景天科植物大花紅景天Rhodiola crenulata(Hook, f. et Thorns.) H. OtAa的干燥根和根莖。秋季花莖凋枯后采挖，除去粗皮，洗凈，曬干。
紅景天是我國傳統藥用植物，一般生長在海拔3500-5100米的多石及粗砂山地。 由于紅景天適應了缺氧、高寒、干燥、強紫外線照射、晝夜溫度懸殊等極其惡劣多變的自然環境，因此具備了抗缺氧、抗狂風、抗幅射、抗低溫干燥的特殊藥效。紅景天含有獨特的紅景天苷元酪醇以及18種氨基酸(其中8種為人體所必需的)、34中微量元素和7種維生素， 具有滋補和藥用功效。其中紅景天所特有的紅景天苷(Mlidroside)具有抗高原缺氧、抗疲勞、抗輻射、抗衰老、增強機體免疫力，雙向調節機體機體功能等作用。醫學專家經動物實驗證明，紅景天苷在對于小鼠抗疲勞作用的研究中，表明紅景天具有增強血清LPH活力的作用，加速分解乳酸，血乳酸濃度下降，降低耗氧速率，增加供養作用，明顯延長負重小鼠游泳時間，運動耐力得到顯著延長和持續，增強肝糖原、肌糖原的儲備，具有明顯的抗疲勞作用，動物實驗結果提示該藥能改善心腦等重要臟器組織中的有氧代謝過程，能顯著提高動物肝、心肌糖原的含量及提高動物心肺組織中中心鈉素的水平，從而減輕因缺氧導致的動物臟器損害，進而能有效提高動物在低氧條件下的生存時間，減輕因缺氧、強紫外線輻射等引起的高原反應。
當前對紅景天中的紅景天素、紅景天苷等活性成分的主要提取方法是水提法和醇提法，水法提取成本低，方法簡單；醇法提取成本較前者高，但提取液中可溶性固形物的含量(得率)相對于水提法較高，故傳統紅景天有效成分提取以醇提更為常用(余華何志禮紅景天有效成分的提取和加工適應性研究食品工業科技.2002. 23 (8). -47-49).但傳統提取方法存在提取時間長、工藝繁復、效率低、工業污染大和對目標化合物提取無選擇性等缺陷。
2010版藥典收載的蜂膠為蜜蜂科昆蟲意大利蜂Apis mellifera L.的干燥分泌物。多于夏季從蜂箱中收集，除去雜質。
蜂膠是蜜蜂從植物芽孢和樹干處采集的樹脂，混入蜜蜂上顎腺分泌物和蜂蠟等形成的一種具有芳香味的粘性膠狀固形物。蜂膠含有約55%樹脂、30%的蜂蠟、10%的揮發性油和5%的花粉等，其化學成分復雜，含有酚、酸、醇、酯、酚、醚、萜、烯、留醇及多種微量元素。蜂膠具有補虛弱、化濁脂的功效，還可用于體虛早衰、高脂血癥。近年來國內外學者所做的大量研究表明，蜂膠具有治療心血管、糖尿病、皮膚病、胃腸疾病、抗癌、增強免疫、抗菌消炎等重要的生理功效，已經成為保健食品研究領域的熱點，對蜂膠中發揮功效作用的成分分離和分析也越來越深入。
超臨界萃取(Supercritica fluid extraction，SFE)技術是利用所選擇的超臨界流體，在溫度、壓力均高于其臨界溫度和臨界壓力條件下，該流體密度接近液體狀態，而擴散系數和粘度接近氣體狀態，不僅具有與液體溶劑相當的物質萃取能力，而且具有與氣態溶劑相當的傳質效果。另外，通過向超臨界流體中加入不同種類和數量的夾帶劑，可以大大提高超臨界流體對目標化合物提取的選擇性和效率。
蘇子是衛生部第一批規定的既是藥品又是食品的60種物品之一。蘇籽中含有豐富的脂肪和蛋白質，可用于生產食用油和蛋白質。近來.蘇子油中富含的多不飽和脂肪酸引起國內外的廣泛重視。經研究證明，蘇子油具有降血壓，降血脂，抗癌以及抑制血小板的聚集，減少血栓的形成.保護視力.提高智力的作用。
已有專利報道紅景天具有提高缺氧耐受力的作用。中國專利(CN200510068041. 5) 中公開一種提取紅景天方法加4-10倍水煮沸，1-4小時過濾，收集濾液濃縮，加 70%-100%的乙醇，靜置，過濾，濃縮，得紅景天提取物，和蜂膠制成了一種能提高缺氧耐受力的組合物。中國專利(CN200710017501. 0)公開了一種抗高原反應的食物組合物及制備方法，其中也提到紅景天苷具有提高缺氧耐受力的作用，其提取方法是用60% -65%酒精回流提取溫度為40-55°C，減壓回收酒精。故紅景天在提高缺氧耐受力方面功效明確。但上述兩篇專利中均是使用不同濃度的乙醇進行提取。
此外，中國專利(CN200510129948. 8)中使用了以乙醇為夾帶劑使用CO2-超臨界萃取方法提取紅景天中的苷元酪醇紅景天干燥根，粉碎，過篩為材料。裝入萃取釜中，萃取溫度為40°C，0)2流體壓力400Par，夾帶劑乙醇流速0. 3ml/min時，萃取時間池。苷元酪醇的提取率為1. 637%，比通過傳統的回流法(0. 25% )提取率提高6. M倍。此外，還有使用微生物酶液對紅景天根莖進行酶解處理后，再使用乙醇進行回流提取，進而提取紅景天提取率。
中國專利(CN200510068041. 5)中是用蜂膠和紅景天分別用乙醇提取和水提取， 將兩者的提取物混合加入輔料。其中蜂膠和紅景天的配比是2. 5 3。
綜上所述，現有專利報道的提取工藝均復雜，并且成本高，不宜于應用。迄今為止， 國內外尚未見任何關于采用CO2-超臨界方法直接提取紅景天和蜂膠中提高缺氧耐受力的有效成分的文獻和專利報道。發明內容
本發明提供一種用于提高缺氧耐受力的組合物軟膠囊及其制備方法，以解決現有技術提取工藝復雜，并且成本高，不宜于應用的問題。本專利是將蜂膠和紅景天混合后，采用CO2-超臨界方法直接提取，參考2010版藥典的服用量及預實驗結果，確定蜂膠和紅景天的比例為1 10-20。與上述專利相比在提取方法和兩者的比例上有較大的差異。本產品采用CO2-超臨界萃取技術提取長白紅景天中的紅景天苷和蜂膠中的白楊素和高良姜素，使其有效成分的含量較傳統提取方法有顯著提高，保證和提高了天然物產品的質量，產品質量穩定，無有害溶劑的殘留。
本發明采取的技術方案是
(一)取粉碎后的紅景天根莖和蜂膠，放入超臨界釜中，萃取溫度20°C-80°C，萃取壓力為20MPa-80MPa，提取時間為lh_6h，得組合物提取物。
(二)將超臨界萃取組合物提取物溶于食物油中，將3g組合物提取物定容至 0. 5-1. 5倍的食用油中，再加入防腐劑、抗氧劑混合均勻；
(三)將上述混合均勻的藥物上軟膠囊機制得組合物軟膠囊，即將明膠、甘油和水溶解后制成膠帶，并將上述混合均勻的藥物置于兩塊膠板之間，用鋼模壓制而成，經檢驗合格后，得組合物軟膠囊。
本發明中所述的提取用食物油是蘇子油、橄欖油、大豆油、芝麻油、玉米油、麻油、 棉籽油、蓖麻油、茶油、紅花油、中長鏈脂肪酸酯中的一種，兩種，或兩種以上的混合物，其中優先選擇蘇子油、橄欖油。
本發明中所述的防腐劑選自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、苯甲酸、山梨酸中一種或兩種或兩種以上的混合物。
本發明中所述的防腐劑的用量為尼泊金甲酯0.015-0. 2% (W/V)、尼泊金乙酯 0. 015-0. 2% (W/V)、苯甲酸 0.01-0. (W/V)、山梨酸 0. 05-0. 2% (W/V)。
本發明中所述的抗氧劑選自VC、VE、安息香酸、枸櫞酸及其鹽、山梨醇、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉中一種或兩種或兩種以上的混合物。
本發明中所述的抗氧劑的用量為=Vc0. 01-0. 1% (ff/V)、VeO. 001-0· 05% (V/V)。
本發明中所述的軟膠囊囊殼，配方比例為明膠甘油水= 1 0. 2-0. 6 0. 5-1. 5。
本產品采用CO2-超臨界萃取方法具有提取效率高，溶劑用量小，快速和準確的特點。與傳統方法相比具有如下有益效果
(I)CO2-超臨界萃取為環境無害工藝。超臨界萃取比溶解萃取的步驟相對少，流程短，操作參數也易于控制。
(2)由于CO2-超臨界萃取能力取決于流體密度，因而很容易通過調節壓力和溫度使二氧化碳與萃取物迅速分為兩相(氣、液)，達到迅速地、選擇性的提取中藥中有效成分的目的。不僅萃取效率高、耗能低，而且萃取物雜質減少、有效成分高度富集。
C3)超臨界萃取所用溶劑0)2具有無毒、無味、不燃不腐蝕、價格便宜、易于精制、易于回收等優點。與傳統溶劑提取法相比，無溶劑殘留。同時不僅避免大量有機溶劑的使用， 也防止了提取過程對人體健康的危害和對環境的污染。
(4)超臨界萃取CO2-超臨界萃取還具有抗氧化滅菌作用，有利于保證和提高天然物產品的質量。
具體實施方式
以下通過具體實施例，對本發明的具體實施方式
再作進一步的詳細說明
實施例
(一)超臨界萃取取粉碎后的紅景天根莖和蜂膠，放入超臨界釜中，萃取溫度 200C _80°C，萃取壓力為20MPa-80MPa，提取時間為lh_6h，得組合物提取物。
( 二 )將超臨界萃取得到的組合物提取物溶于提取用食物油中，將3g組合物提取物定容至0. 5-1. 5倍的食用油中，再加入防腐劑、抗氧劑混合均勻；
(三)將(二)中混合均勻的藥物上軟膠囊機制得紅景天軟膠囊，即將明膠、甘油和水溶解后制成膠帶，并將(二)中混合均勻的藥物置于兩塊膠板之間，上軟膠囊機用鋼模壓制，經檢驗合格后，得組合物軟膠囊。
本發明中所述的提取用食物油是蘇子油、橄欖油、大豆油、芝麻油、玉米油、麻油、 棉籽油、蓖麻油、茶油、紅花油、中長鏈脂肪酸酯中的一種，或兩種，或兩種以上的混合物，其中優選蘇子油、橄欖油，尤以蘇子油最佳。
紅景天中紅景天苷的含量測定
以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑，以甲醇-水=15 85為流動相；檢測波長為 275nm。分別取紅景天苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為紅景天苷的對照品溶液。取超臨界萃取提取油，精密稱量IOml于分液漏斗中，用乙腈萃取2 次，每次10ml，合并上清液，蒸干，用5ml甲醇溶解，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2010版一部附錄VID)進行含量測定，即得。
蜂膠中白楊素和高良姜素的含量測定
以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑，以甲醇-0. 15%磷酸溶液(64 36)為流動相；檢測波長為268nm。取白楊素對照品、高良姜素對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每Iml含白楊素30ug、高良姜素20ug的溶液，作為蜂膠的對照品溶液。取超臨界萃取提取油，精密稱量IOml于分液漏斗中，用乙腈萃取2次，每次10ml，合并上清液，蒸干，用5ml甲醇溶解，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul， 注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2010版一部附錄VID)進行含量測定， 即得。
藥效學實驗
一、小鼠常壓耐缺氧實驗
40只小鼠隨機分成4組，每組10只。生理鹽水組經小鼠尾靜脈注射生理鹽水 10ml/kg ；陽性藥對照組經小鼠腹腔注射鹽酸普萘洛爾20mg/kg ；實驗組分別經尾靜脈給予本發明組合物lg/kg、ang/kg。給藥后20min，將小鼠分別置于放有鈉石灰的250ml磨口廣口瓶內密封，觀察小鼠存活時間(每瓶變性硅膠10g，廣口瓶用前均盛水校正容量，每瓶放1 只小鼠，以呼吸停止為指標)。
實驗結果表明，與生理鹽水組比較，本發明組合物高低劑量組、鹽酸普萘洛爾組均能顯著延長小鼠存活時間(P < 0.05)，表明本發明組合物與鹽酸普萘洛爾均具有提高小鼠耐缺氧能力的作用；本發明物高低劑量作用稍弱于鹽酸普萘洛爾，但沒有統計學差異(P<0. 05)。
二、小鼠特異性心肌缺氧實驗
40只小鼠被隨機分成4組，每組10只。生理鹽水組小鼠和異丙腎上腺素組小鼠均經尾靜脈注射生理鹽水10ml/kg ；陽性藥對照組小鼠經尾靜脈注射鹽酸普萘洛爾20mg/ kg ；實驗組小鼠分別經尾靜脈給予本發明組合物lg/kg、2g/kg。給藥后40min，除生理鹽水組外，其余各組小鼠均皮下注射異丙腎上腺素15ml/kg，IOmin后，將小鼠分別放入裝有變性硅膠的250ml磨口廣口瓶中密封，記錄小鼠存活時間。
實驗結果表明，異丙腎上腺素組小鼠存活時間較生理鹽水組明顯縮短(P<0. 05)，表明異丙腎上腺素能增加小鼠耗氧量，縮短小鼠缺氧狀態下存活時間。與生理鹽水組比較，本發明物高低劑量組、鹽酸普萘洛爾組均能顯著延長小鼠存活時間(P < 0. 05)， 表明本發明組合物與鹽酸普萘洛爾均能對抗異丙腎上腺素引起的心肌耗氧量增加，具有明顯的抗缺氧作用；且本發明物高劑量作用稍與鹽酸普萘洛爾相當。
三、小鼠低壓耐缺氧實驗
取小鼠40只，體重18_22g，雌雄兼用，隨機分成5組。分別為生理鹽水對照組，腹腔給予等容積生理鹽水；本發明物高、中、低劑量組，分別腹腔注射0. 5，l，ang/kg ；陽性藥對照組小鼠經腹腔注射鹽酸普萘洛爾20mg/kg。灌胃給藥IOmin后，將小鼠分別置于真空干燥箱內，用真空泵減壓至21. 3^kpa，并維持相對恒定，記錄小鼠死亡時間。
結果表明，本發明組合物可明顯延長減壓條件下小鼠的存活時間，具有明顯量效關系，與生理鹽水對照組比較差異顯著(P < 0. 05，P < 0. 01，P < 0. 001)。本發明組合物中劑量藥理作用與鹽酸普萘洛爾相當，高劑量作用稍強于鹽酸普萘洛爾。
權利要求
1.一種用于提高缺氧耐受力藥物組合物軟膠囊及其制備方法，制備方法其特征在于(一)取粉碎后的紅景天根莖和蜂膠，放入超臨界釜中，萃取溫度20°c-80°c，萃取壓力為20MPa-80MPa，提取時間為lh_6h，得組合物提取物；(二)將超臨界萃取得到的組合物提取物溶于提取用食物油中，將3g組合物提取物定容至0. 5-1. 5倍的食用油中，再加入防腐劑、抗氧劑混合均勻；(三)將明膠、甘油和水溶解后制成膠帶，并將(二)中混合均勻的藥物置于兩塊膠板之間，上軟膠囊機用鋼模壓制，經檢驗合格后，得組合物軟膠囊。
2.根據權利要求1所述的一種用于提高缺氧耐受力的藥物組合物軟膠囊及其制備方法，其特征在于蜂膠和紅景天的比例為1 10-20。
3.根據權利要求2所述的一種用于提高缺氧耐受力藥物組合物軟膠囊及其制備方法， 其特征在于提取用食物油優選蘇子油、橄欖油。
4.根據權利要求3所述的一種用于提高缺氧耐受力藥物組合物軟膠囊及其制備方法， 其特征在于提取用食物油以蘇子油為最佳。
5.根據權利要求1所述的一種用于提高缺氧耐受力藥物組合物軟膠囊及其制備方法， 其特征在于防腐劑選自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、苯甲酸、山梨酸中一種，或兩種，或兩種以上的混合物；防腐劑的用量為尼泊金甲酯0. 015-0. 2% (W/V)、尼泊金乙酯0. 015-0. 2% (W/V)、苯甲酸 0.01-0. (W/V)、山梨酸 0.05-0. 2% (W/V)。
6.根據權利要求1所述的一種用于提高缺氧耐受力藥物組合物軟膠囊及其制備方法，其特征在于抗氧劑選自V。、Ve、安息香酸、枸櫞酸及其鹽、山梨醇、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉中一種，或兩種，或兩種以上的混合物；抗氧劑的用量為 VcO. 01-0. 1% (ff/V), Ve 0. 001-0. 05% (V/V)。
7.根據權利要求1所述的一種用于提高缺氧耐受力藥物組合物軟膠囊及其制備方法， 其特征在于軟膠囊囊殼的配方比例為明膠甘油水=1 0. 2-0. 6 0. 5-1. 5。
8.一種用于提高缺氧耐受力藥物組合物軟膠囊及其制備方法，紅景天中紅景天苷的含量測定，其特征在于以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑，以甲醇-水=15 85為流動相； 檢測波長為275nm。分別取紅景天苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為紅景天苷的對照品溶液。取超臨界萃取提取油，精密稱量IOml于分液漏斗中，用乙腈萃取2次，每次IOml，合并上清液，蒸干，用5ml甲醇溶解，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，照中國藥典 2010版一部附錄VID高效液相色譜法進行含量測定。
9.一種用于提高缺氧耐受力藥物組合物軟膠囊及其制備方法，蜂膠中白楊素和高良姜素的含量測定，其特征在于以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑，以甲醇-0. 15 %磷酸溶液 (64 36)為流動相；檢測波長為268nm;取白楊素對照品、高良姜素對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每Iml含白楊素30ug、高良姜素20ug的溶液，作為蜂膠的對照品溶液； 取超臨界萃取提取油，精密稱量IOml于分液漏斗中，用乙腈萃取2次，每次10ml，合并上清液，蒸干，用5ml甲醇溶解，濾過，取續濾液，作為供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，照中國藥典2010版一部附錄VID高效液相色譜法進行含量測定。
全文摘要
本發明提供一種用于提高缺氧耐受力的藥物組合物軟膠囊及其制備方法；本發明涉及保健品技術領域。屬于醫藥、食品、保健品領域。取粉碎后的紅景天根莖和蜂膠，放入超臨界釜中，萃取溫度20℃-80℃，萃取壓力為20MPa-80MPa，提取時間為1h-6h，得組合物提取物。將超臨界萃取得到的組合物提取物溶于食物油中，將3g組合物提取物定容至0.5-1.5倍的食用油中，再加入防腐劑、抗氧劑混合均勻；將上述混合均勻的藥物上軟膠囊機制得軟膠囊。本發明具有提取工藝簡單，質量可控，提取物有效成分含量高，成本低，適用于工業化生產；而且服用方便，具有改善睡眠的作用。
文檔編號A61K35/64GK102512483SQ201210004890
公開日2012年6月27日 申請日期2012年1月10日 優先權日2012年1月10日
發明者孫巍, 張薇, 毛麗超, 邵巖, 金向群 申請人:吉林大學