專利名稱：治療禿發的毛囊干細胞培養方法及注射器的制作方法
技術領域：
本發明涉及保健領域，具體為治療禿發的毛囊干細胞培養方法及注射器。
背景技術：
毛發非正常脫落后會形成禿發，給患者帶來不便。利用患者自身正常毛發的毛囊， 在體外培養、繁殖、提純后再注射到患者禿發區，從而生成新的正常的毛發。目前有采用臍帶血分離干細胞，分離培養后注射在禿發區，但是，臍帶血的來源直接限制其技術的應用。另外，采用臍帶血分離干細胞的操作的過程中需采集與患者的組織相容性基因相同或相似的臍帶血干細胞，必須考慮免疫排斥現象；操作過程復雜、使用儀器多、耗費大。

發明內容
本發明提供一種治療禿發的毛囊干細胞培養方法及注射器，能夠改善禿發情況下的毛發生長。本發明提供了一種治療禿發的毛囊干細胞培養方法，包括A.利用分離酶對離體的毛囊進行消化；B.切取所述步驟A得到的毛囊的毛囊隆突部；C.利用胰酶對B步驟得到的毛囊隆突部進行消化；D.對經過步驟C處理得到的毛囊隆突部進行離心收集得到細胞；E.將步驟D得到的所述細胞在無血清的含各種氨基酸和葡萄糖的培養基(DEME) 條件培養液中培養，初步分離；F.將步驟E初步分離的產物置于培養皿中培養；G.離心收集得到經過F步驟培養后的上層未貼附角質形成細胞和毛囊真皮成纖維細胞，并培養，得到毛囊干細胞。所述步驟A中，分離酶優選為O. 25%分離(dispase)酶，消化的溫度優選為4°C， 消化的時間優選為25分鐘-30分鐘；和/ 或，所述步驟B中優選為采用在解剖顯微鏡下切取所述步驟A得到的毛囊的毛囊隆突部;和/ 或，所述步驟C的消化溫度優選為37°C ；和/ 或，所述步驟D的分離速度優選為1000轉/分鐘；和/ 或，所述步驟E中的初步分離優選采用密度梯度離心；和/ 或，所述步驟F中培養的條件優選為培養皿中鋪設有25平方厘米膠原蛋白，培養溫度為 37。。，5% CO2 ；和/ 或，所述步驟G的培養液優選為20%血清的含各種氨基酸和葡萄糖的培養基(DMEM) 條件培養液。所述G步驟培養過程中，優選為每2天換一次所述培養基；和/ 或，所述E步驟培養過程中，優選為每3天換一次所述培養基。本發明還提供了一種用于上述毛囊干細胞注射的注射器，包括毛囊干細胞抽取組件和針頭，所述毛囊干細胞抽取組件用于定量抽取所述毛囊干細胞，所述毛囊干細胞抽取組件和針頭相連接，所述針頭呈彎曲狀，且為鈍頭。所述毛囊干細胞抽取組件優選為包括推桿、刻度調節件、活塞調節件、活塞；其中，所述刻度調節件的上端中心處優選為設有通孔，所述通孔優選為延伸至所述刻度調節件的下端，所述通孔優選為用于所述推桿從中無摩擦穿過；所述刻度調節件與所述活塞調節件優選為通過可傳動機構相連，所述可傳動結構，優選為用于將刻度調節件的轉動轉變為所述活塞調節件在沿推桿軸向上的直線運動；所述活塞調節件優選為呈中空的圓柱狀，所述活塞調節件的一側優選為設有刻度指示線；所述刻度調節件、活塞調節件、活塞優選為位于殼體內，所述推桿的一端優選為處于所述殼體外，所述推桿的另一端優選為從所述殼體外穿入，穿過所述刻度調節件、活塞調節件，并與所述活塞固定連接；所述活塞調節件優選為與所述活塞相接觸；所述殼體上，優選為位于所述刻度調節桿同一側設有刻度盤。所述可傳動機構優選為包括螺紋傳動、或絲杠傳動。所述活塞調節件優選為包括活塞調節圈和一個以上第一彈簧；所述活塞調節圈優選為中空圓柱體；所述活塞調節圈的上端優選為通過可傳動機構與所述刻度調節件相連，所述刻度調節件的下端與一個以上第一彈簧的上端相連接，一個以上所述第一彈簧的下端優選為與所述活塞相連接。所述第一彈簧的個數優選為3個，優選為在垂直于所述推桿軸向的圓周上均勻分布。所述注射器還包括換針組件，所述換針組件優選為包括按壓抦、第二彈簧、連接桿、換針件；其中，所述按壓抦的一端優選為處于所述殼體的外部，另一端優選為穿入所述殼體并向殼體內延伸；所述按壓抦位于所述殼體內部的一端與所述連接桿的上端優選為相連接，所述連接桿的上部優選為套有所述第二彈簧，并將第二彈簧的位置進行固定；按壓所述按壓抦，所述按壓抦優選為與所述第二彈簧接觸，并被所述第二彈簧彈起；所述連接桿的另一端優選為與所述換針件相連接，所述換針件優選為環狀，套在所述針頭上；
所述針頭的末端分裂成兩個以上的分針頭，分針頭在所述換針件上移時，自動張開。所述分針頭的長度優選為針頭長度的三分之一，所述分針頭優選為向內彎曲，彎曲的度數優選為10° -20°。通過本發明提供的治療禿發的毛囊干細胞培養方法及注射器，能夠達到如下的有益效果通過本發明提供的治療禿發的毛囊干細胞培養方法及注射器，能夠達到如下的有益效果I.本發明對離體的毛囊干細胞進行各種處理，毛囊干細胞來源豐富，首先通過分離酶對其進行消化，然后切取毛囊隆突部，再通過胰蛋白酶對隆突部進行消化，并對其進行分離、培養、再分離、再培養，再次收集培養后的上層未貼附角質形成細胞和毛囊真皮成纖維細胞，經過培養即得毛囊干細胞，該毛囊干細胞較適合在人的頭皮種植，且毛囊干細胞生長較快，對禿發治療效果明顯，且較少產生免疫排斥；且針對該毛囊干細胞，本發明還提供了一種注射器，可以定量抽取毛囊干細胞，且針頭呈彎曲狀、針頭為鈍頭，更適合毛囊干細胞在人的頭皮上種植且對人的頭皮傷害較小。2.本發明采用的分離器、培養液、及注射器均為小型設備，操作方便、快捷，降低治療禿發的整體成本。


為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，以下將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，以下描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員而言，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖所示實施例得到其它的實施例及其附圖。圖I為本發明治療禿發的毛囊干細胞培養方法的基本流程圖。圖2為本發明一個具體實施例中治療禿發的毛囊干細胞培養方法的基本流程圖。圖3為注射治療禿發的毛囊干細胞的注射器的基本結構示意圖。
具體實施例方式以下將結合附圖對本發明各實施例的技術方案進行清楚、完整的描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明的一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例， 本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動的前提下所得到的所有其它實施例，都屬于本發明所保護的范圍。本發明提供了一種治療禿發的毛囊干細胞培養方法，如圖1，所示，包括見圖1，A，利用分離酶對離體的毛囊進行消化；見圖1，B，切取所述步驟A得到的毛囊的毛囊隆突部；見圖1，C，利用胰酶對B步驟得到的毛囊隆突部進行消化；見圖1，D，對經過步驟C處理得到的毛囊隆突部進行離心收集得到細胞；見圖1，E，將步驟D得到的所述細胞在無血清的含各種氨基酸和葡萄糖的培養基 (DEME)條件培養液中培養，初步分離；
見圖1，F，將步驟E初步分離的產物置于培養皿中培養；見圖1，G，離心收集得到經過F步驟培養后的上層未貼附角質形成細胞和毛囊真皮成纖維細胞，并培養，得到毛囊干細胞。本發明對離體的毛囊干細胞進行各種處理，毛囊干細胞來源豐富，首先通過分離酶對其進行消化，然后切取毛囊隆突部，再通過胰蛋白酶對隆突部進行消化，并對其進行分離、培養、再分離、再培養，再次收集培養后的上層未貼附角質形成細胞和毛囊真皮成纖維細胞，經過培養即得毛囊干細胞，該毛囊干細胞較適合在人的頭皮種植，且毛囊干細胞生長較快，對禿發治療效果明顯，且較少產生免疫排斥。接下來，本發明將對治療禿發的毛囊干細胞培養方法進行詳細闡述，見圖2，所示步驟201，利用分離酶對離體的毛囊進行消化；本發明處理的毛囊通常采用離體的毛囊，其中分離酶為O. 25%分離(dispase) 酶，分離的溫度為4°C，分解消化的時間為25-30分鐘，優選30分鐘，通過這次分離可以將毛囊連同結締組織一起分離出來。步驟202，切取上步驟得到的毛囊的毛囊隆突部；切取方式可以采用解剖顯微鏡下常規的分離方法進行分離切取，得到毛囊隆突部。步驟203，利用胰酶對得到的毛囊隆突部進行消化；消化的溫度為37°C，這種胰酶為一種胰蛋白酶。步驟204，對經過胰酶消化后的產物進行離心收集；離心收集的方法優選為采用離心收集，離心的速度優選為1000轉/分鐘，離心收集其中的細胞。步驟205，將離心收集的細胞放入無血清的DMEM條件培養液培養；DMEM條件培養液為一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養基的培養液。在培養過程中每3天換一次培養液。步驟206，對經過培養后的細胞進行初次分離；分離通常采用離心分離，離心的速度為1500轉/分鐘，離心時間為5分鐘。采用密度梯度離心。步驟207，將初次分離得到的細胞再放入培養皿中培養；將初次分離得到的細胞接種于鋪有膠原蛋白的培養瓶中，培養瓶的地可以在25 平方厘米左右，培養的溫度為37°C，培養的氛圍為CO2的濃度為5%。步驟208，離心收集步驟207培養皿中的上層未貼附角質形成細胞和毛囊真皮成纖維細胞；經過步驟207培養，會生成各種細胞，其中包括上層未貼附角質形成細胞、毛囊真皮成纖維細胞，其中這兩種是本發明要收集的。步驟209，將步驟208分離出的細胞放入培養皿中培養得到治療禿發的毛囊干細胞；培養皿中的培養液為含有20%血清的含各種氨基酸和葡萄糖的培養基的培養液 (DMEM)，在培養過程中，每兩天換一次培養液。
本發明還提供了一種用于上述毛囊干細胞注射的注射器，包括毛囊干細胞抽取組件和針頭，所述毛囊干細胞抽取組件用于定量抽取所述毛囊干細胞，所述毛囊干細胞抽取組件和針頭相連接，所述針頭呈彎曲狀，且為鈍頭。針對該毛囊干細胞，本發明提供的注射器，可以定量抽取毛囊干細胞，且針頭呈彎曲狀、針頭為鈍頭，更適合毛囊干細胞在人的頭皮上種植且對人的頭皮傷害較小。如圖3，所示，所述毛囊干細胞抽取組件優選為包括推桿I、刻度調節件、活塞7 ； 刻度調節件、活塞調節件5放置于所述注射器的殼體內。以注射器針頭端所在方向為下，則推桿I位于所述注射器的另一端，為上。推桿I 的樣子可以多樣化，通常采用與手的接觸面積較大的推片和與該推片的下表面中心位置相連接的推桿1，該推桿I的長度可以很長，因為起到推送毛囊干細胞的作用，推桿I要與需要與毛囊干細胞直接接觸的活塞相連，因此，推桿I的長度主要由推片到活塞的距離而定。刻度調節件位于推片的下方，推桿I從其中心位置穿過，為了使推桿I從中穿過， 刻度調節件的中心位置要開設通孔，用于推桿I從中無摩擦穿過。刻度調節件的形狀也是不固定的，通常可以分為上下兩個部分，上部分為一個具有一定厚度的輪子2，輪子2的側表面設有若干耐摩擦刻線，刻線的走向可以為橫向、縱向、 斜向或其他的曲線或花紋，下部分為一個圓柱體4，圓柱體4可以為中空的也可以為實體的，為了方便推桿I從中穿過，其上端在開設細孔，細孔的直徑優選與通孔的直徑相等，細孔能從圓柱體4的上表面穿過并從下表面穿出，從而推桿I能順利從中穿過；需要說明的是，通孔和細孔的橫截面直徑尺寸可以相等或略大于推桿I的橫截面直徑。刻度調節件的下端通過可傳動連接件連接活塞調節件5，可傳動連接件通常用于當刻度調節件以推桿I為旋轉軸在垂直于所述推桿I的平面上轉動時，可傳動連接件可以將轉動轉變為活塞調節件沿推桿I軸向的上下運動。可傳動連接件優選為螺紋傳動或絲桿傳動，鑒于注射器的尺寸和形狀，優選為螺紋傳動。為了能夠準確量取毛囊干細胞，用于在禿發部位注射，通常處于刻度調節件處的殼體的外側設有刻度線，刻度線可以刻在一個刻度盤3上，活塞調節件上設有刻度指示線， 活塞調節件上下移動的過程中刻度指示線可以指向或顯示殼體的刻度線。活塞調節件5優選為中空的圓柱體，以方便推桿I從中穿過。為了緩解推力不同或推力不穩在注射過程中產生的影響，在活塞調節件和活塞中間安裝有彈簧6，使活塞調節件的下表面與活塞的上表面接觸，在壓力過大時，彈簧6對壓力施以緩沖。彈簧6的數目可以為兩個或多個，為了保持力量平衡，彈簧6的分布優選為在垂直于推桿I軸向的圓周上均勻分布。推桿I穿過活塞調節件5后，推桿I與活塞7固定連接，從而使施予推片上的壓力傳到活塞上，推動活塞7向下運動將毛囊干細胞推出注射器。其中關于針頭部分，注射器還設置了專門的換針組件，換針組件優選為包括按壓抦8、彈簧10、連接桿9、換針件11 ；其中，所述按壓抦8的一端優選為處于所述殼體的外部，另一端優選為穿入所述殼體并向殼體內延伸；所述按壓抦8位于所述殼體內部的一端與所述連接桿9的上端優選為相連接，所述連接桿9的上部優選為套有所述彈簧10，并將彈簧10的位置進行固定；連接桿9的軸向與所述推桿I的軸向相平行，按壓所述按壓抦8，所述按壓抦8優選為與所述彈簧10接觸， 并被所述彈簧10彈起；所述連接桿的另一端優選為與所述換針件11相連接，所述換針件優選為環狀，套在所述針頭上；連接桿可以選擇玻璃桿也可以選擇金屬桿或長條金屬條；所述針頭的末端分裂成兩個以上的分針頭，分針頭在所述換針件上移時，自動張開，優選為三個所述分針頭的長度優選為針頭長度的三分之一，所述分針頭優選為向內彎曲，彎曲的度數優選為10° -20°。通過本發明提供的治療禿發的毛囊干細胞培養方法及注射器，能夠達到如下的有益效果I.本發明對離體的毛囊干細胞進行各種處理，毛囊干細胞來源豐富，首先通過分離酶對其進行消化，然后切取毛囊隆突部，再通過胰蛋白酶對隆突部進行消化，并對其進行分離、培養、再分離、再培養，再次收集培養后的上層未貼附角質形成細胞和毛囊真皮成纖維細胞，經過培養即得毛囊干細胞，該毛囊干細胞較適合在人的頭皮種植，且毛囊干細胞生長較快，對禿發治療效果明顯，且較少產生免疫排斥；且針對該毛囊干細胞，本發明還提供了一種注射器，可以定量抽取毛囊干細胞，且針頭呈彎曲狀、針頭為鈍頭，更適合毛囊干細胞在人的頭皮上種植且對人的頭皮傷害較小。2.本發明采用的分離器、培養液、及注射器均為小型設備，操作方便、快捷，降低治療禿發的整體成本。本發明提供的各種實施例可根據需要以任意方式相互組合，通過這種組合得到的技術方案，也在本發明的范圍內。顯然，本領域技術人員可以對本發明進行各種改動和變型而不脫離本發明的精神和范圍。這樣，倘若對本發明的這些修改和變型屬于本發明權利要求及其等同技術的范圍之內，則本發明也包含這些改動和變型在內。
權利要求
1.一種治療禿發的毛囊干細胞培養方法，其特征在于，包括A.利用分離酶對離體的毛囊進行消化；B.切取所述步驟A得到的毛囊的毛囊隆突部；C.利用胰酶對B步驟得到的毛囊隆突部進行消化；D.對經過步驟C處理得到的毛囊隆突部進行離心收集得到細胞；E.將步驟D得到的所述細胞在無血清的含各種氨基酸和葡萄糖的培養基DEME條件培養液中培養，初步分離；F.將步驟E初步分離的產物置于培養皿中培養；G.離心收集得到經過F步驟培養后的上層未貼附角質形成細胞和毛囊真皮成纖維細胞，并培養，得到毛囊干細胞。
2.如權利要求I所述的治療禿發的毛囊干細胞培養方法，其特征在于，所述步驟A中，分離酶為O. 25%分離dispase酶，消化的溫度為4°C，消化的時間為25 分鐘-30分鐘；和/或，所述步驟B中采用在解剖顯微鏡下切取所述步驟A得到的毛囊的毛囊隆突部；和/或，所述步驟C的消化溫度為37°C ；和/或，所述步驟D的分離速度為1000轉/分鐘；和/或，所述步驟E中的初步分離采用密度梯度離心；和/或，所述步驟F中培養的條件為培養皿中鋪設有25平方厘米膠原蛋白，培養溫度為37°C， 5% CO2 ；和/或，所述步驟G的培養液為20%血清的含各種氨基酸和葡萄糖的培養基DMEM條件培養液。
3.如權利要求2所述的治療禿發的毛囊干細胞培養方法，其特征在于，所述G步驟培養過程中，每2天換一次所述培養基；和/或，所述E步驟培養過程中，每3天換一次所述培養基。
4.一種用于權利要求1-3任一項所述毛囊干細胞注射的注射器，其特征在于，包括毛囊干細胞抽取組件和針頭，所述毛囊干細胞抽取組件用于定量抽取所述毛囊干細胞，所述毛囊干細胞抽取組件和針頭相連接，所述針頭呈彎曲狀，且為鈍頭。
5.如權利要求4所述的注射器，其特征在于，所述毛囊干細胞抽取組件包括推桿、刻度調節件、活塞調節件、活塞；其中，所述刻度調節件的上端中心處設有通孔，所述通孔延伸至所述刻度調節件的下端，所述通孔用于所述推桿從中無摩擦穿過；所述刻度調節件與所述活塞調節件通過可傳動機構相連，所述可傳動結構，用于將刻度調節件的轉動轉變為所述活塞調節件在沿推桿軸向上的直線運動；所述活塞調節件呈中空的圓柱狀，所述活塞調節件的一側設有刻度指示線；所述刻度調節件、活塞調節件、活塞位于殼體內，所述推桿的一端處于所述殼體外，所述推桿的另一端從所述殼體外穿入，穿過所述刻度調節件、活塞調節件，并與所述活塞固定連接；所述活塞調節件與所述活塞相接觸；所述殼體上，位于所述刻度調節桿同一側設有刻度盤。
6.如權利要求5所述的注射器，其特征在于，所述可傳動機構包括螺紋傳動、或絲杠傳動。
7.如權利要求5所述的注射器，其特征在于，所述活塞調節件包括活塞調節圈和一個以上第一彈簧；所述活塞調節圈為中空圓柱體；所述活塞調節圈的上端通過可傳動機構與所述刻度調節件相連，所述刻度調節件的下端與一個以上第一彈簧的上端相連接，一個以上所述第一彈簧的下端與所述活塞相連接。
8.如權利要求7所述的注射器，其特征在于，所述第一彈簧的個數為3個，在垂直于所述推桿軸向的圓周上均勻分布。
9.如權利要求7所述的注射器，其特征在于，所述注射器還包括換針組件，所述換針組件包括按壓抦、第二彈簧、連接桿、換針件；其中，所述按壓抦的一端處于所述殼體的外部，另一端穿入所述殼體并向殼體內延伸；所述按壓抦位于所述殼體內部的一端與所述連接桿的上端相連接，所述連接桿的上部套有所述第二彈簧，并將第二彈簧的位置進行固定；按壓所述按壓抦，所述按壓抦與所述第二彈簧接觸，并被所述第二彈簧彈起；所述連接桿的另一端與所述換針件相連接，所述換針件為環狀，套在所述針頭上； 所述針頭的末端分裂成兩個以上的分針頭，分針頭在所述換針件上移時，自動張開。
10.如權利要求9所述的注射器，其特征在于，所述分針頭的長度為針頭長度的三分之一，所述分針頭向內彎曲，彎曲的度數為10° -20°。
全文摘要
本發明涉及保健領域，具體為治療禿發的毛囊干細胞培養方法及注射器，培養方法包括A.利用分離酶對離體的毛囊進行消化；B.切取所述毛囊的毛囊隆突部；C.利用胰酶對毛囊隆突部進行消化；D.對步驟C處理得到的毛囊隆突部進行離心收集得到細胞；E將所述細胞在DEME條件培養液中培養，初步分離；F.將步驟E初步分離的產物置于培養皿中培養；G.離心收集得到經過F步驟培養后的上層未貼附角質形成細胞和毛囊真皮成纖維細胞，并培養，得到毛囊干細胞。其注射器包括毛囊干細胞抽取組件和針頭，所述毛囊干細胞抽取組件用于定量抽取所述毛囊干細胞，所述毛囊干細胞抽取組件和針頭相連接，所述針頭呈彎曲狀，且為鈍頭。本發明能夠改善禿發情況下的毛發生長。
文檔編號A61P17/14GK102586177SQ20121003440
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月15日 優先權日2012年2月15日
發明者嚴其高 申請人:北京雍禾植發技術研究院