專利名稱：兩種廣譜抗腫瘤藥物及其制備方法
技術領域：
本發明屬于抗腫瘤藥物技術領域，尤其涉及含有苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物的兩種廣譜抗腫瘤藥物及其制備方法。
背景技術：
苦味西葫蘆(Cucurbita pepo cv Dayangua)，別名大煙瓜，是葫蘆科南瓜屬西葫蘆的一個變種，主要分布于內蒙古多倫地區。其果實味苦，當地民間常用于治療感冒，還有鎮痛、止瀉等功效。當地獸醫還用其治療羊、豬等的發熱感冒和羊的痢疾，對家禽的常見傳染性疾病如雞的瘟疫性疾病、傳染性法氏囊炎、傳染性支氣管炎等有很好的療效；《中獸醫醫藥雜志》2001年03期的《苦味西葫蘆藥理作用初步研究》(作者王學林，劉軍，陳志寶， 高豐，柳巨雄，王曉峰，田寶磊，鄧旭明，閻繼業)和《中國藥學會學術年會》2002年的會議論文《苦味西葫蘆藥理作用研究》(作者鄧旭明)均有相關的記載。苦味西葫蘆為1年生蔓生草本，莖具棱溝，其上有細小的剛毛及半透明的棘狀毛。 葉柄粗壯，長l(Tl8cm，葉片稍硬挺直，葉片呈心形，前端銳尖，具有2飛個淺裂，其中，頂部的2個裂深達中脈，邊緣漸淺，葉緣具有不規則銳齒，葉基近心形，深近7cm，寬11 cm ；葉片寬處近Mem。葉片上表面呈深綠色、下表面顏色稍淺，葉脈及葉片兩面均具粗糙毛、卷須稍粗壯，具有柔毛，多為2、分枝。雌雄同株，雄花單生于葉腋，花梗長，略有棱，長iri6cm，被無色至淺黃色短剛毛。花萼基部連合成“帽狀”，具明顯的5條棱，淺綠色，花萼裂只線狀披針形，花冠橘黃色，鐘形，長7 8cm，分裂至近中部，裂片直立或稍擴展，石灰巖碳棒擴展，頂端銳尖。雄蕊3個，花絲長1. 2 1. km，花藥靠合長1. (Tl. 3cm。雌花單生于葉腋，子房長圓狀，3室。花柱粗壯，具3、個深溝槽，柱頭2深裂，粗、大，周圍具3飛個黃色凸起，退化雄蕊 3個，粗，黃白色，下寬上窄，花瓣狀，花冠、花萼同雄蕊，但花柄短，1. 5^2. Ocm側膜胎座。胚珠多數。果梗粗壯、具明顯的棱溝。果蒂稍粗大，棱明顯。果實呈黃白或墨綠色，上帶細小黃色紋點，重1.25 2.0kg，果肉呈明顯絲狀。刀切后有酸漿(苦菇芄菇娘)味，食之極苦。 種子扁橢圓形，黃白色。經考證，該植物為葫蘆科南瓜屬西葫蘆的一個栽培變種。現代藥理實驗研究表明苦味西葫蘆提取物具有抗菌、抗病毒、鎮痛、增強離體十二指腸興奮性和消炎解熱等方面作用；學術期刊《動物醫學進展》2004年第25卷第5期的《苦味西葫蘆粗提取物抗炎作用的實驗研究》(作者張艷萍，鄧旭明，祝萬菊，王學林)、《中獸醫醫藥雜志》2004年第23卷第6期的《苦味西葫蘆抗炎作用機理的初步研究》(作者張艷萍， 鄧旭明，陳志寶)和臨床醫藥實踐(下半月刊)2009年第18卷第6期的《苦味西葫蘆水提取物鎮痛作用的實驗研究》(作者高立新)均有相關的記載。從苦味西葫蘆果實中提取分離得到的化合物分別為甲級鼠李素的3-蕓香糖苷、異鼠李素的3-蕓香糖甙-4，-鼠李糖苷、Kaempferol-3-O-neohesp-eridoside、 Larisiresinal4' -0-β-D-glucopyranoside、(+)-5‘ -Methoxy-isolarisiresinol 3 α-0-β-D-glucopyranoside> Lyoniside、I solariciresino1-9-0-β-D-xylopyra noside、Oct-l-en—3-ylβ-D-arabinopyranosyl- (1 — 6)- β—D—glucopyranoside、葫蘆素E-2-0-葡萄糖苷、山奈酚-3-0-新橙皮糖苷、乙酸蛇麻脂醇酯、β-香樹月旨酉享乙酸酉旨、isomultiflorenol、 isomultiflorenone、 (+)-Isolarisiresinol 3 α -0-β -D-glucopyranoside,2-0-^ -D-葫蘆素E葡萄糖苷、D-果糖、硬脂酸三十二烷醇酯、三十三烷、谷留醇、豆留醇、胡蘿卜甙、胡蘿卜苷、腦甙、13 (18)-齊墩果烯-3-醇、 葫蘆苷A和葫蘆酯A ；《中國藥學雜志》2002年第37卷第9期的《苦味西葫蘆化學成分的研究》(作者丁艷麗，鄧旭明，蔡輝，王芳生，王學林，張聿梅，楊峻山)、《沈陽藥科大學學報》 2006年第23卷第1期的《苦味西葫蘆果實的三萜類化學成分》(作者葛杉，王大成，向華， 祝萬菊，鄧旭明，吳立軍)、《中國現代中藥》2007年第9卷第7期的《苦味西葫蘆化學成分研究》(作者何樂，王大成，吳立軍，鄧旭明)及《中國醫院藥學雜志》2007年第27卷第12期的《高效液相色譜法測定苦味西葫蘆中藥西瓜苦苷的含量》(作者高立新，高慧敏)均有相關的記載。因此，苦味西葫蘆提取物具有巨大的開發潛能。

發明內容
本發明的目的在于提供含有苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物的兩種廣譜抗腫瘤藥物。本發明的另一目的在于提供上述兩種廣譜抗腫瘤藥物的制備方法。本發明是通過以下技術來實現的。兩種廣譜抗腫瘤藥物，所述兩種廣譜抗腫瘤藥物是以苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物作為有效成分。其中，所述兩種廣譜抗腫瘤藥物中分別含有有效量的苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物及可藥用載體和/或賦形劑。進一步地，所述可藥用載體和/或賦形劑為羧甲基纖維素鈉。其中，所述兩種廣譜抗腫瘤藥物作為抗肝癌、前列腺癌、肺癌、結腸癌、胃癌、直腸癌、乳腺癌、腎癌、卵巢癌、胰腺癌、子宮肉瘤、宮頸癌、淋巴瘤、白血病、食管癌、鼻咽癌、膀胱癌、肉瘤、喉癌、黑色素瘤、甲狀腺癌、髓母細胞瘤的藥物。進一步地，所述兩種廣譜抗腫瘤藥物作為抗惡性實體瘤的藥物。其中，所述兩種廣譜抗腫瘤藥物為含有苦味西葫蘆水提取物的口服液或注射液， 或者為含有苦味西葫蘆醇提取物的口服液或注射液。進一步地，所述苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物口服液的口服劑量為每天Ig/體表面積m2。所述的兩種廣譜抗腫瘤藥物的制備方法，是由以下制備步驟制成的所述苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物
(a)取苦味西葫蘆瓜果，去皮，將果肉切塊，加入水煮制，制得糊狀物；
(b)取出糊狀物，曬干，制得原藥干；
(c)將原藥干粉碎為原藥粉末，在室溫下保存；
(d)取原藥粉末，溶解在蒸餾水中，搖動萃取，然后進行離心、過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得到苦味西葫蘆水提取物；或者取原藥粉末，加入乙醇，搖動萃取，然后進行離心、過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得到苦味西葫蘆乙醇提取物。
具體地，所述兩種廣譜抗腫瘤藥物的制備方法，是由以下具體制備步驟制成的所述苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物
(a)取100千克半成熟的苦味西葫蘆瓜果，去皮，將果肉切成小塊，加入25千克的水，煮制4個小時，制得糊狀物；
(b)取出糊狀物，曬干，制得3.4千克原藥干；
(c)將原藥干粉碎為原藥粉末，在室溫下保存；
(d)取100克原藥粉末，溶解在1000毫升的蒸餾水中，搖動萃取8小時，然后進行離心、 過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得到11克苦味西葫蘆水提取物；或者取100克原藥粉末，加入1000毫升的濃度為95%的乙醇，搖動萃取8小時，然后進行離心、過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得到10克苦味西葫蘆乙醇提取物。本發明的有益效果本發明的含有苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物的兩種廣譜抗腫瘤藥物，能廣泛抑制多種類型的人腫瘤細胞系生長，并進一步誘導腫瘤細胞凋亡。在人腫瘤異種移植模型研究中，苦味西葫蘆提取物被證明是一種有效的抗腫瘤劑， 能強烈抑制人肝癌、前列腺癌、肺癌、結腸癌、胃癌、直腸癌、乳腺癌、腎癌、卵巢癌、胰腺癌、 子宮肉瘤、宮頸癌、淋巴瘤、白血病、食管癌、鼻咽癌、膀胱癌、肉瘤、喉癌、黑色素瘤、甲狀腺癌、髓母細胞瘤細胞在體內生長。苦味西葫蘆水提取物和苦味西葫蘆醇提取物具有被開發成為抗腫瘤藥物的巨大潛能。


圖1為苦味西葫蘆提取物組及對照組治療皮下接種的人前列腺癌(LnCAP)細胞的腫瘤體積與移植后天數曲線圖。圖2為苦味西葫蘆提取物組及對照組治療皮下接種的人肺癌(NCI-H23)細胞的腫瘤體積與移植后天數曲線圖。圖3為苦味西葫蘆提取物組及對照組治療皮下接種的人結腸癌(HCT-116)細胞的腫瘤體積與移植后天數曲線圖。圖4為苦味西葫蘆提取物組及對照組治療皮下接種的人肝癌(SMMC-7721)細胞的腫瘤體積與移植后天數曲線圖。
具體實施例方式下面以具體實施方式
結合附圖對本發明作進一步的說明，但本發明不受下述實施例的限定。采用以下實驗設計方法來證明本發明的效果。一、原料與樣品的制備。取100千克半成熟的苦味西葫蘆瓜果，去皮，然后將果肉切成小塊，加入25千克的水，煮制4個小時，制得糊狀物。將糊狀物撈出，在太陽下曬干，制得3. 4千克原藥干。將原藥干粉碎，在室溫下保存。取100克原藥粉末，溶解在1000毫升的蒸餾水中， 搖動萃取8個小時。然后進行離心、過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得11克苦味西葫蘆水提取物樣本。取100克原藥粉末，加入1000毫升95%的乙醇，搖動萃取8個小時，然后進行離心、過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得到10克苦味西葫蘆乙醇提取物樣本。
二、苦味西葫蘆水提取物及苦味西葫蘆醇提取物的細胞毒性分析。使用人腫瘤細胞系進行細胞毒性分析。人腫瘤細胞系購自ATCC和NCI，用含10% FBS的DMEM培養液，在含5%ω2的37°C孵箱中培養。用胰蛋白酶消化匯合的細胞，經培養液洗滌后計數。向96孔培養板的每孔中加入3000 6000個細胞，孵育16小時或M小時。然后向孔內加入不同濃度的苦味西葫蘆水提取物和苦味西葫蘆醇提取物。繼續培養72小時后，對藥物處理組細胞和對照組細胞進行MTT試驗。(試驗方法詳細參見以下文獻的 idi(； :Basu S, Ma R, Boyle PJ, Mikulla B, Bradley Μ, Smith B, Basu Μ, Banerjee S. Apoptosis of human carcinoma cells in the presence of potential anti-cancer drugs: III. Treatment of Colo-205 and SKBR3 cells with: cis -platin,Tamoxifen, Melphalan, Betulinic acid, L-PDMP, L-PPMP, and GD3 ganglioside. Glycoconj J. 2004;20 (9):563-77)。在含有不同濃度苦味西葫蘆水提取物和苦味西葫蘆醇提取物的正常培養基中培養多種腫瘤細胞株，3天后應用MTT法測定細胞存活情況。測定結果見表1。表 1
苦味西葫蘆水提物和苦味西葫蘆醇提物外抑制人腫瘤細胞生長
權利要求
1.兩種廣譜抗腫瘤藥物，其特征在于所述兩種廣譜抗腫瘤藥物是以苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物作為有效成分。
2.根據權利要求1所述的兩種廣譜抗腫瘤藥物，其特征在于所述兩種廣譜抗腫瘤藥物中分別含有有效量的苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物及可藥用載體和/ 或賦形劑。
3.根據權利要求2所述的兩種廣譜抗腫瘤藥物，其特征在于所述可藥用載體和/或賦形劑為羧甲基纖維素鈉。
4.根據權利要求1所述的兩種廣譜抗腫瘤藥物，其特征在于所述兩種廣譜抗腫瘤藥物作為抗肝癌、前列腺癌、肺癌、結腸癌、胃癌、直腸癌、乳腺癌、腎癌、卵巢癌、胰腺癌、子宮肉瘤、宮頸癌、淋巴瘤、白血病、食管癌、鼻咽癌、膀胱癌、肉瘤、喉癌、黑色素瘤、甲狀腺癌、髓母細胞瘤的藥物。
5.根據權利要求1所述的兩種廣譜抗腫瘤藥物，其特征在于所述兩種廣譜抗腫瘤藥物作為抗惡性實體瘤的藥物。
6.根據權利要求1所述的兩種廣譜抗腫瘤藥物，其特征在于所述兩種廣譜抗腫瘤藥物為含有苦味西葫蘆水提取物的口服液或注射液，或者為含有苦味西葫蘆醇提取物的口服液或注射液。
7.根據權利要求6所述的兩種廣譜抗腫瘤藥物，其特征在于所述苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物口服液的口服劑量為每天Ig/體表面積m2。
8.權利要求廣5任意一項所述的兩種廣譜抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于是由以下制備步驟制成的所述苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物(a)取苦味西葫蘆瓜果，去皮，將果肉切塊，加入水煮制，制得糊狀物；(b)取出糊狀物，曬干，制得原藥干；(c)將原藥干粉碎為原藥粉末，在室溫下保存；(d)取原藥粉末，溶解在蒸餾水中，搖動萃取，然后進行離心、過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得到苦味西葫蘆水提取物；或者取原藥粉末，加入乙醇，搖動萃取，然后進行離心、過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得到苦味西葫蘆乙醇提取物。
9.根據權利要求8所述的兩種廣譜抗腫瘤藥物的制備方法，其特征在于是由以下具體制備步驟制成的所述苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物(a)取100千克半成熟的苦味西葫蘆瓜果，去皮，將果肉切成小塊，加入25千克的水，煮制4個小時，制得糊狀物；(b)取出糊狀物，曬干，制得3.4千克原藥干；(c)將原藥干粉碎為原藥粉末，在室溫下保存；(d)取100克原藥粉末，溶解在1000毫升的蒸餾水中，搖動萃取8小時，然后進行離心、 過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得到11克苦味西葫蘆水提取物；或者取100克原藥粉末，加入1000毫升的濃度為95%的乙醇，搖動萃取8小時，然后進行離心、過濾，得到上清液，再進行濃縮干燥，得到10克苦味西葫蘆乙醇提取物。
全文摘要
本發明屬于抗腫瘤藥物技術領域，尤其涉及兩種廣譜抗腫瘤藥物及其制備方法，所述兩種廣譜抗腫瘤藥物是以苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物作為有效成分；本發明的含有苦味西葫蘆水提取物或者苦味西葫蘆醇提取物的兩種廣譜抗腫瘤藥物，能廣泛抑制多種類型的人腫瘤細胞系生長，并進一步誘導腫瘤細胞凋亡。在人腫瘤異種移植模型研究中，苦味西葫蘆提取物被證明是一種有效的抗腫瘤劑，能強烈抑制人肝癌、前列腺癌、肺癌和結腸癌等腫瘤細胞在體內生長。苦味西葫蘆水提取物和苦味西葫蘆醇提取物具有被開發成為抗腫瘤藥物的巨大潛能。
文檔編號A61P35/00GK102552370SQ20121004372
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月24日 優先權日2012年2月24日
發明者傅建平, 張南, 簡志光 申請人:傅建平, 張南, 簡志光