專利名稱：用于提高免疫、補血及抗氧化的預防腫瘤復合制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及腫瘤預防，具體涉及一種用于提高免疫、補血及抗氧化的復合制劑。
背景技術：
鑒于中年女性處于特定的年齡階段，和我國膳食結構的變化，乳腺癌已呈現逐年上升趨勢，成為婦科腫瘤的 第一位，同時由于不正確的飲食結構和營養知識的缺乏，缺鐵性貧血在我國中年婦女中也普遍存在，女人愛美的天性也對抗氧化、抗衰老的產品提出了很高的要求，目前市場上迫切需要一種針對該人群的復合型營養制品，起到預防乳腺癌、補鐵及抗氧化的復合功效。目前常見的女性營養品，功效較為單一，如單純補鐵、降脂、調經，缺乏預防癌癥和抗氧化的產品，而且所依據的理論較為單一，缺乏中西醫的相互驗證要么依據中醫理論發掘傳統藥方，缺乏現代醫學的理論和實驗證據支持；要么依據現代營養學的觀點，缺什么補什么，著眼于所缺乏營養素的單一補充，均不能針對中年女性的生理特點，實現同時預防乳腺癌、補鐵及抗氧化、防衰老的需求。

發明內容
本發明提供一種用于提高免疫、補血及抗氧化的復合制劑，此復合制劑解決了現有技術難同時能夠提高免疫力、補血和抗氧化的技術難題，且可有效降低荷瘤小鼠免疫負調控細胞(髓樣抑制性細胞細胞，MDSCs)的比例，對腫瘤的預防和輔助治療具有積極的效果。為達到上述目的，本發明采用的技術方案是一種用于提高免疫、補血及抗氧化的復合制劑，其特征在于所述復合制劑由以下組分配方組成
冬蟲夏草菌絲體多糖，10% ；
卟啉鐵，1%;
白藜蘆醇的含量， 1%;
維生素 BI，0.025%;
維生素 B2，0.025%;
維生素C，1% ；
膳食纖維，10% ；
蜂蜜，10%;
余量，水；
所述冬蟲夏草菌絲體多糖通過以下工藝獲得
步驟一、取蟲草發酵提取液濃縮而成的菌粉100g，加入4L H2O,煮沸4h后趁熱紗布過濾除去殘渣；
步驟二、將經步驟一獲得的濾液加熱濃縮至IL獲得濃縮液；
步驟三、將步驟二的濃縮液收集于IL燒杯中，70°C水浴濃縮至400ml ；步驟四、將步驟三中濃縮液分裝至8個50ml的離心管中，在4500 rpm離心速率下處理lOmin，獲得水溶性蟲草多糖溶液；
步驟五、收集經步驟四溶液中的上清液約400ml，去除不溶性雜質，至2L燒杯中，緩慢加入4倍體積無水乙醇后靜置獲得醇沉液；
步驟六、將步驟五的醇沉液分裝至40個50ml離心管中，在4500 rpm離心速率下處理IOmin后將所述各個離心管內醇沉多糖收集至4個50ml離心管中；
步驟七、通過100%乙醇洗經步驟六的所述醇沉多糖2次，真空低溫冷凍干燥獲得所述冬蟲夏草菌絲體多糖。上述技術方案中的進一步改進方案如下
I、上述方案中，所述步驟二中濾液加熱時同時進行攪拌操作。
2、上述方案中，所述步驟二中在70°C水浴中保持時間為24h。3、上述方案中，所述步驟五中靜置溫度為4°C，時間為12h。由于上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有下列優點和效果
本發明復合制劑具有更好的清除免疫負調控細胞的功效，其中冬蟲夏草菌絲體多糖和白藜蘆醇均具有清除免疫負調控細胞的功效，但是各自作用的靶點不同，組合之后能產生協同效應，比單一效果更好；產品能更好保持卟啉鐵的生理活性，因為卟啉鐵是二價鐵，易于吸收，但是暴露在空氣中之后容易氧化，而白藜蘆醇和維生素C具有抗氧化作用，能維持卟啉鐵的亞鐵狀態，從而保持卟啉鐵的良好生物活性。


附圖I為本發明復合制劑配方 附圖2為本發明對免疫細胞的促增殖作用示意 附圖3為本發明腫瘤輔助性細胞(免疫抑制性細胞MDSC)生長受抑制圖。產品
具體實施例方式 下面結合附圖及實施例對本發明作進一步描述
實施例一種用于提高免疫、補血及抗氧化的復合制劑，所述復合制劑由以下組分配方組成
冬蟲夏草菌絲體多糖，10% ；
卟啉鐵，1%;
白藜蘆醇的含量， 1%;
維生素 BI，0.025%;
維生素 B2，0.025%;
維生素C，1% ；
膳食纖維，10% ；
蜂蜜，10%;
余量，水；
所述冬蟲夏草菌絲體多糖通過以下工藝獲得
步驟一、取蟲草發酵提取液濃縮而成的菌粉100g，加入4L H2O,煮沸4h后趁熱紗布過濾除去殘渣；步驟二、將經步驟一獲得的濾液加熱濃縮至IL獲得濃縮液；
步驟三、將步驟二的濃縮液收集于IL燒杯中，70°C水浴濃縮至400ml ；
步驟四、將步驟三中濃縮液分裝至8個50ml的離心管中，在4500 rpm離心速率下處理lOmin，獲得水溶性蟲草多糖溶液；
步驟五、收集經步驟四溶液中的上清液約400ml，去除不溶性雜質，至2L燒杯中，緩慢加入4倍體積無水乙醇后靜置獲得醇沉液；
步驟六、將步驟五的醇沉液分裝至40個50ml離心管中，在4500 rpm離心速率下處理IOmin后將所述各個離心管內醇沉多糖收集至4個50ml離心管中；
步驟七、通過100%乙醇洗經步驟六的所述醇沉多糖2次，真空低溫冷凍干燥獲得所述冬蟲夏草菌絲體多糖。上述步驟二中濾液加熱時同時進行攪拌操作。上述步驟二中在70°C水浴中保持時間為24h。上述步驟五中靜置溫度為4°C，時間為12h。具體闡述如下。 (I)、取蟲草發酵提取液濃縮而成的菌粉菌粉100g，加入4L H20，煮沸4h，趁熱紗布過濾除去殘渣。重復3次；
(2)、收集所有濾液(約5L)加熱濃縮至1L。注意邊加熱邊攪拌，防止粘底；
(3)、濃縮液收集于IL燒杯中，70°C水浴濃縮至400ml，在該溫度下，溶劑揮發速度較快，溫度過高，則會影響多糖活性，防止加熱過程中多糖碳化。需要24h ；
(4)、濃縮液分裝至8個50ml的離心管中，4500rpm離心lOmin，獲得水溶性蟲草多糖溶液；
(5)、收集上清液約400ml，除去不溶性雜質；至21燒杯中，緩慢加(120ml/分鐘)入4倍體積(4倍體積乙醇處理后獲得的蟲草多糖生物活性好)無水乙醇，至乙醇終濃度(400ml上清液加入1600ml乙醇后，體系的總體積為2L，1600ml除以2L就是終濃度)75%，4°C靜置12h。注意邊加乙醇邊攪拌；
(6)、2000ml醇沉液分裝至40個50ml離心管中，4500rpm離心IOmin,傾去上清液,所有醇沉多糖收集至4個50ml離心管中；
(7)、100%乙醇洗沉淀物2次，真空低溫冷凍干燥，達到完全脫水的目的；
(8)、蟲草多糖放置在干燥環境中保存。如附圖2所示，2產品對免疫細胞的促增殖作用(左圖是對照組，右圖是產品組。放大倍數為200倍)；??？861腫瘤細胞皮下接種的荷瘤小鼠(C57，雌性，3個月大)，制備脾臟單細胞懸液；實驗分為2組對照組、產品組(lmg/ml)。每組設置3個復孔，接種細胞于6孔板，接種濃度為4X IO6/孔。37 °C, 5% CO2培養3天；顯微鏡下觀察、拍照。由圖2可見，使用本產品后，免疫細胞明顯增殖，細胞數量較多，鋪滿整個培養皿，而且細胞狀態良好，而對照組免疫細胞數少，狀態一般。說明本產品對免疫細胞具有較好的促增殖作用。如附圖3所示，取FB61腫瘤細胞皮下接種的荷瘤小鼠(C57，雌性，3個月大)，制備脾臟單細胞懸液；實驗分為4組對照組、產品低濃度組(3mg/ml)、中濃度組(5mg/ml)、高濃度組(8mg/ml)。每組設置3個復孔，接種細胞于6孔板，接種濃度為4X106/孔。37 V ’5% C02培養3天；收集細胞，流式染色FITC-Grl，Percp-⑶11b，流式細胞學檢測。由圖3可見，使用本產品后，免疫負調控細胞比例明顯減少，呈現劑量-效應關系，其中對照組為25. 8%，低濃度組為4. 5%，中濃度組為3. 8%，高濃度組為2. 4%，說明本產品具有降低免疫負調控細胞在免疫細胞中比例的作用。上述實施例只為說明本發明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術的人士能夠了解本發明的內容并據以實施，并不能以此限制本發明的保護范圍。凡根據本發明精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發明的保護范 圍之內。
權利要求
1.一種用于提高免疫、補血及抗氧化的預防腫瘤復合制劑，其特征在于所述復合制劑由以下組分配方組成 冬蟲夏草菌絲體多糖，10% ； 卟啉鐵，1%; 白藜蘆醇的含量， 1%; 維生素 BI，0.025%; 維生素 B2，0.025%; 維生素C，1% ； 膳食纖維，10% ； 蜂蜜，10%; 余量，水； 所述冬蟲夏草菌絲體多糖通過以下工藝獲得 步驟一、取蟲草發酵提取液濃縮而成的菌粉100g，加入4L H2O,煮沸4h后趁熱紗布過濾除去殘渣； 步驟二、將經步驟一獲得的濾液加熱濃縮至IL獲得濃縮液； 步驟三、將步驟二的濃縮液收集于IL燒杯中，70°C水浴濃縮至400ml ； 步驟四、將步驟三中濃縮液分裝至8個50ml的離心管中，在4500 rpm離心速率下處理lOmin，獲得水溶性蟲草多糖溶液； 步驟五、收集經步驟四溶液中的上清液約400ml，去除不溶性雜質，至2L燒杯中，緩慢加入4倍體積無水乙醇后靜置獲得醇沉液； 步驟六、將步驟五的醇沉液分裝至40個50ml離心管中，在4500 rpm離心速率下處理IOmin后將所述各個離心管內醇沉多糖收集至4個50ml離心管中； 步驟七、通過100%乙醇洗經步驟六的所述醇沉多糖2次，真空低溫冷凍干燥獲得所述冬蟲夏草菌絲體多糖。
2.根據權利要求I所述的預防腫瘤復合制劑，其特征在于所述步驟二中濾液加熱時同時進行攪拌操作。
3.根據權利要求I所述的預防腫瘤復合制劑，其特征在于所述步驟二中在70°C水浴中保持時間為24h。
4.根據權利要求I所述的預防腫瘤復合制劑，其特征在于所述步驟五中靜置溫度為4°C，時間為12h。
全文摘要
本發明公開一種用于提高免疫、補血及抗氧化的預防腫瘤復合制劑，由以下組分配方組成冬蟲夏草菌絲體多糖，10%；卟啉鐵，1%；白藜蘆醇的含量，1%；維生素B1，0.025%；維生素B2，0.025%；維生素C，1%；膳食纖維，10%；蜂蜜，10%；余量，水；冬蟲夏草菌絲體多糖通過以下工藝獲得取蟲草發酵而成的菌粉，加入水；將獲得的濾液濃縮獲得濃縮液；將濃縮液分裝離心管中，離心獲得水溶性蟲草多糖溶液；收集溶液中的上清液并加入無水乙醇后靜置獲得醇沉液；將醇沉液分裝至離心管中離心獲得醇沉多糖；通過乙醇洗醇沉多糖獲得所述冬蟲夏草菌絲體多糖。本發明解決了現有技術難以同時提高免疫、補血和抗氧化的難題，且可有效降低荷瘤小鼠MDSCs細胞的比例，對腫瘤的預防和輔助治療具有積極的效果。
文檔編號A61K31/715GK102652760SQ20121011429
公開日2012年9月5日 申請日期2012年4月18日 優先權日2012年4月18日
發明者劉小龍, 吳培華, 陶寧 申請人:劉小龍, 陶寧