專利名稱：虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及天然植物活性成分虎杖苷的藥物新用途，具體地說是涉及虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，特別是涉及制備預防和治療進行性的慢性腎小球疾病及足細胞病變相關(如腎小球硬化癥等)腎小球疾病藥物中的應用。
ニ背景技術：
虎杖苷(Polydatin，CAS號65914-17-2)又名云杉新甙或白藜蘆醇甙，是ー種天然活性成分，其來源包括寥科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根莖和根。中國糖尿病患病率為9. 7%，高于世界平均水平的6. 4%，已成為世界第一糖尿病大國。我國糖尿病高危人群高達I. 5億人。隨著糖尿病腎病發病率的逐年増加，糖尿病的并 發癥中，慢性腎小球疾病的發病率已經上升到第一位。糖尿病性腎病發病后轉向末期腎衰竭(需透析)的比例非常高；與之類似，其它慢性腎小球疾病隨著病程進展轉向透析吋，同樣會出現醫療費用高漲等社會性重大問題。因此，針對慢性腎小球疾病進展相關的預防和治療藥劑需求十分強烈。就慢性腎小球疾病而言，足細胞(podocyte)病變在其發生發展過程是十分重要的病理事件。足細胞是位于腎小球毛細血管基底膜外側的臟層上皮細胞，因其胞漿在基底膜表面形成偽足樣突起而得名。足突之間的裂孔膜(split mernbrane)是腎小球濾過的最后一道屏障，因此足細胞損傷將導致蛋白尿出現。隨著對足細胞生物學研究的深入，尤其是在發現足細胞表達的ー些特異性蛋白分子之后，足細胞已被認為是參與各種原發性或繼發性腎小球疾病進展的關鍵細胞。原發性足細胞病常以微小病變、局灶節段性腎小球硬化以及膜性腎病的表現形式而發病；而繼發性足細胞病常見于感染相關性、藥物相關性、金屬類藥物相關性、自身免疫性、腫瘤相關性、腎移植相關性膜性腎病。目前國內外尚未出現以腎小球病變為針對性目標靶點的藥物，為抑制或延遲病程向透析轉變，臨床常用藥劑包括類固醇類藥物、抗凝藥物、免疫抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑類等。上述藥物改善作用有限，副作用明顯。

發明內容
本發明的目的在于提供天然植物活性成分虎杖苷的醫藥新用途，具體地說是涉及虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，特別是涉及制備用于進行性的慢性腎小球疾病包括腎小球硬化癥的預防和治療藥物中的應用。本發明的技術解決方案提供虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用。虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為腎小球足細胞病。虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為局灶性腎小球硬化癥。虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為IgA腎病。虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為膜性腎病。虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為膜增生性腎小球腎炎。該應用包括了以虎杖苷為主料，配以本領域的技術人員所熟知的藥用輔料(賦形齊U、助溶剤、控釋劑等)，用常規的制劑方法制成本領域的技術人員所熟知的劑型(包括ロ服液、注射劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、微囊劑等)。本發明的優點是，提供了對進行性的慢性腎小球疾病具有確切改善和治療作用的 虎杖苷制備藥劑(保健品或藥物)，用于預防和治療進行性的慢性腎小球疾病及足細胞病變相關(如腎小球硬化癥等)腎小球疾病。本發明具有3個明顯的進步和優點1、成分明確(虎杖苷)；2、目標明確(腎小球疾病)；3、調節作用明確(明顯改善和治療作用)。本發明利用動物模型在生化功能和組織細胞水平上科學地評價并證明了虎杖苷對慢性腎小球疾病的確切的改善和治療作用。本發明所涉及的虎杖苷對正常對照動物慢性腎小球疾病相關指標無顯著影響，具有很好的安全性。為了更好的理解本發明的實質，下面將用虎杖苷的藥理實驗及結果來說明其在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用。
四

圖I :PAS染色結果(果糖致腎小球病變大鼠模型)上排左圖正常對照；上排中圖正常對照+虎杖苷；上排右圖正常對照+匹格列酮；下排左圖果糖模型；下排中圖果糖模型+虎杖苷；下排右圖果糖模型+匹格列酮。圖2 :透射電鏡結果(果糖致腎小球病變大鼠模型)上排左圖正常對照；上排中圖正常對照+虎杖苷；上排右圖正常對照+匹格列酮；下排左圖果糖模型；下排中圖果糖模型+虎杖苷；下排右圖果糖模型+匹格列酮。圖3 :透射電鏡結果(阿霉素致腎小球硬化癥大鼠模型)左圖正常對照；中圖模型對照；右圖模型+虎杖苷。五具體實施例方式以下實施例僅作為進ー步闡述發明之用，不能用來限制本發明。實施例I :虎杖苷對果糖模型大鼠腎小球病變的改善治療作用。實驗動物SD大鼠，200-220克，雄性。藥物配制選用虎杖苷含量為20mg/片的用于腎小球疾病的預防或治療的片劑，超聲分散于生理鹽水中，用于灌胃給藥，給藥劑量為7. 5mg/kg。實驗儀器高速冷凍離心機，組織切片機，酶標儀，分光光度計，光學顯微鏡，透射電子顯微鏡等。實驗模型果糖大鼠模型。實驗方法I、模型的建立動物適應環境I周后，隨機分成模型組和正常組，每組30只。果糖大鼠模型造模飲用水給予10%果糖溶液；正常組給予自來水，造模周期70天。2、造模4周后模型組和正常組分別設立虎杖苷和匹格列酮給藥組，每組10只。每天灌胃給予虎杖苷(7. 5mg/kg)和匹格列酮(4mg/kg)。該藥持續6周,給藥期間模型動物繼續給予10%果糖溶液。3、收集血液尿液樣本，用于檢測生化指標血肌酐、血尿素氮水平和尿白蛋白與尿 肌酐比值。4、動物處死冰臺上分離腎臟組織，分為二部分，分別經甲醛和戊ニ醛固定，常規切片。分別在光學顯微鏡(PAS染色)及透射電鏡下觀察腎小球組織形態學的改變。實驗結果A :腎功能生化指標
Group 血肌酐血尿素氮尿白蛋白a = 10_fmg/dL)_fmmol/LTl_fmg/mg Cr.)
正常
+ 生理鹽水0.326±0.0124.209±0.3(H6.068± 1.726
+ 虎杖.H:7.5 mg/kg0.304 ±0.0074.503 士 0.4135.042 ±0.047
+ 匹格列酮4mg/kg0.319士0.0063.881 土0.2566.025 ±0.693
果糖模型
+ 生理鹽水0.362 ±0.012出8.885 士 0.406拼27.672 士 5.386++十
+7.5 mg/kg0.316 ±0.006***7.066 ± 0.684**3.174 ± 1.17ΓΜ
+ 匹格列圍4 mg/kg0.282 ± 0.007***3.663 士 0.449M*13.703 土 2.058w+++P<0. 001與正常+生理鹽水組比較；**P〈0.01，***P〈0.001與果糖模型+生理鹽水組比較果糖模型大鼠血肌酐、血尿素氮水平和尿白蛋白與尿肌酐比值均顯著高于正常組大鼠，其中血肌酐和血尿素氮水平升高，說明果糖模型大鼠腎臟濾過能力下降；尿白蛋白與尿肌酐比值升高則提示果糖模型大鼠腎臟濾過屏障受到破壞；上述兩種腎功能濾過功能障礙均說明果糖大鼠腎小球發生功能性損害。虎杖苷可以顯著地緩解果糖引起的腎小球功能損傷，其效果超過陽性對照藥物匹格列酮，而正常動物給予虎杖苷則對上述指標均未發現明顯變化。B:腎組織結構損害如附圖I所示光鏡觀察到模型組大鼠腎小球PAS染色呈現明顯的陽性反應，提示果糖大鼠腎小球系膜基質增生；虎杖苷給藥可以有效的改善果糖誘導的腎小球系膜基質增生；相對于正常對照動物，虎杖苷給藥組動物腎小球系膜未見明顯變化。
如附圖2所示透射電鏡觀察到模型組足細胞足突融合變扁平，部分融合、消失，腎小球基底膜(GBM)增厚；虎杖苷給藥可以有效減輕上述足細胞及GBM病理性變化；相對于正常對照動物，虎杖苷給藥組動物腎小球足細胞未見明顯變化。通過腎功能指標和組織結構檢測結果表明，虎杖苷對于果糖模型大鼠腎小球功能和結構損害有明顯的保護改善作用，其效用與匹格列酮相當，其作用主要體現在對于腎小球足細胞和膜功能的保護上。虎杖苷給藥對于正常動物腎小球功能和結構無顯著影響，說明其用于腎小球疾病的預防和治療藥物的安全性。實施例2 :虎杖苷對阿霉素致腎小球硬化癥大鼠的腎小球病變的改善治療作用。實驗動物SD大鼠，200-220克，雄性。藥物配制選用虎杖苷含量為20mg/片的用于腎小球疾病的預防或治療的片劑，超聲分散于生理鹽水中，用于灌胃給藥，給藥劑量為75mg/kg。注射用鹽酸阿霉素(商品名法瑪新針；蘇法瑪西亞公司)。 實驗方法局灶性節段性腎小球硬化是ー常見的原發性腎小球疾病，主要是由于腎小球血流動力學的異常導致足細胞損傷，易進展為終末期慢性腎衰竭。I、模型的建立動物適應環境I周后，隨機分成模型組和正常組，每組30只。模型組大鼠，經尾靜脈注射阿霉素2. 5mg/kg (溶于生理鹽水O. 5mL中)；正常組尾靜脈注射生理鹽水O. 5mL。20d后，重復上述操作。2、于第2次注射阿霉素后I天，治療組每天灌胃給予虎杖苷(7. 5mg/kg)給藥持續12周。3、收集血液尿液樣本，用于檢測生化指標血肌酐、血尿素氮水平和尿白蛋白與尿肌酐比值。4、動物處死冰臺上分離腎臟組織，戊ニ醛固定切片。透射電鏡下觀察腎小球組織形態學改變。實驗結果A :尿蛋白指標
權利要求
1.虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用。
2.根據權利要求I所述的虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為腎小球足細胞病。
3.根據權利要求I所述的虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為局灶性腎小球硬化癥。
4.根據權利要求I所述的虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為IgA腎病。
5.根據權利要求I所述的虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為膜性腎病。
6.根據權利要求I所述的虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為膜增生性腎小球腎炎。
7.根據權利要求I所述的虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，其特征在于所述的虎杖苷配以相應劑型的輔料用常規的制劑方法制成口服液、膠囊劑、片劑、顆粒劑或微囊劑。
全文摘要
本發明涉及天然單體化合物虎杖苷的醫藥新用途，具體地說是涉及虎杖苷在制備預防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應用，特別是涉及制備預防和治療進行性的慢性腎小球疾病及足細胞病變相關(如腎小球硬化癥等)腎小球疾病藥物中的應用。動物試驗結果表明虎杖苷對果糖模型大鼠腎小球功能和器質性損害有明顯的預防改善作用；對于腎小球硬化癥模型大鼠尿蛋白和腎小球足細胞損害有明顯的治療改善作用。利用虎杖苷配以相關輔料，用常規的制劑方法可制成針對性預防和治療腎小球疾病的保健品或藥物。上述保健品和藥物可用于包括糖尿病、代謝綜合征等涉及慢性腎小球損害的疾病；可用于腎小球硬化癥等涉及足細胞病變的疾病，可延緩和改善相關疾病中腎小球進行性病程。
文檔編號A61K31/7034GK102824354SQ20121035961
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月24日 優先權日2012年9月24日
發明者孔令東, 王偉, 潘穎, 丁曉琴 申請人:南京大學