專利名稱：地塞米松磷酸鈉－海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及高分子材料表面涂層技術領域，更具體地說，涉及一種利用地塞米松磷酸鈉和多醛基海藻酸鈉對高分子材料表面進行涂層改性的制備方法。
背景技術：
生物醫學材料應用面臨生物相容性及血液相容性兩大問題。涂層技術通過對材料表面的預改性，從而改善了生物醫學材料表面的生物相容性和抗凝活性。其中一例為肝素，肝素屬粘多糖，分子量5000-40000，是由帶負電荷的線性多糖構成的混合體，肝素最重要的性質是其抗凝血特性，肝素的抗凝活性源于它可以和生物體內的多種凝血抑制因子相互作用，通過加速或提高這些抑制因子的抗凝活性來達到抗凝血的目的，但對于抑 制蛋白粘附有缺陷。其中肝素對抗凝血酶III(AT-III)的作用最重要。目前生物醫學材料表面肝素固定原理(即表面涂層)可歸納為物理法和化學法。物理法即通過機械包埋、分子鏈之間的纏繞和滲透、被有孔材料吸附等方式將肝素固定到生物材料表面，從而達到將肝素固定化的目的。化學法即通過肝素分子鏈上豐富的反應性官能基團，如磺酸基、氨基、羧基等與目標材料表面上相應的可反應基團進行反應，以離子鍵或以共價鍵的方式將之固定到生物材料表面。體外循環手術后病人易出現全身炎癥反應，這主要是由于材料本身的缺陷，在進行治療時往往通過靜脈注射和肌肉注射消炎藥物，通過減輕和防止組織對炎癥的反應，從而減輕炎癥的臨床表現，但又會由于血藥濃度過大而產生副作用。

發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的不足，克服體外循環用高分子材料易促發全身炎癥反應、生物相容性差及抗凝活性差等缺點，利用離子鍵及空間纏繞、高碘酸氧化及終點固定技術，提供了一種地塞米松磷酸鈉-多醛基海藻酸鈉復合涂層及其制備方法。本發明的技術目的通過下述技術方案予以實現一種地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法，按照下述步驟進行首先，即步驟(I )，將高分子材料浸泡在高錳酸鉀的硫酸溶液中，進行酸化處理，其中所述高分子材料可以選擇醫用等級的聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚酯、硅橡膠、尼龍、聚碳酸酯或者聚四氟乙烯，這些材料可用于體外血液循環管路的構建，需要對其表面進行改性以改進其與血液的相容性。所述高錳酸鉀的硫酸溶液采利用如下方式進行制備先將高錳酸鉀溶解在去離子水中混合均勻，然后緩慢向其中加入濃硫酸(質量百分數為95—98%的濃硫酸)，攪拌混合至硫酸的質量百分數達到為10% — 70%即可。將高分子材料浸泡在高錳酸鉀的硫酸溶液中，進行酸化處理，主要是為了改性材料的表面性質，可以選擇酸處理時間為Imin — lOmin，常溫處理，溫度為20— 25°C ;在酸化處理過程中可采用機械或者超聲攪拌的方式加強反應的強度，在酸化處理之后可使用去離子水對材料進行清洗。步驟(2)，將經過酸化處理的材料置于聚乙烯亞胺(PEI)水溶液中，反應以得到氨基化修飾的表面，其中所述聚乙烯亞胺(PEI)溶液的質量百分濃度為0.005%-0. 5%，反應時間為10min-60min，常溫處理，溫度為20— 25°C。步驟(3 )，使用高碘酸或者高碘酸鈉氧化處理海藻酸鈉，使得海藻酸片段末端暴露醛基，得到多醛基氧化海藻酸鈉(0SA)，其中高碘酸或者高碘酸鈉與海藻酸鈉的重復單元的摩爾比為(I一3) :10，氧化反應在避光條件下攪拌反應至少24小時，優選24— 40小時，溫度為20— 25°C;采用乙二醇終止反應，96wt%乙醇的水溶液進行沉淀，沉淀后抽濾、透析，_80°C冷凍干燥，得到多醛基氧化海藻酸鈉。 步驟(4)，配置涂層物質地塞米松磷酸鈉(DSP)和多醛基氧化海藻酸鈉(OSA)的反應溶液，其中所述反應溶液中，涂層物DSP濃度為O. 01-0. 5mg/mL,涂層物OSA濃度為O. 05-2mg/mL, NaCl 濃度為 O. 15-0. 55mol/L,氰基硼氫化鈉濃度為 O. 01-0. lmg/mL,溶劑為去離子水，可選擇在常溫下(溫度為20— 25°C)混合均勻溶解，調整反應溶液的pH值為
3.O - 6. O ;在調整溶液pH值時，可采用O. lmmol/L的鹽酸水溶液。步驟(5)，將氨基化修飾表面的材料置于步驟(4)配置的反應溶液中，通過空間物理纏繞、離子鍵及終點固定法得到DSP/0SA復合涂層，其中反應溫度為30°C -60°C，優選40-50°C ;反應時間至少2小時，優選2-6小時。本發明采用的終點固定法，屬特殊共價結合法，它首先通過預功能化在人工材料表面引入活性氨基層，其次通過高碘酸或高碘酸鈉氧化海藻酸鈉，產生末端帶活性醛基的多糖分子片段，多糖片段的醛基并不參與半縮醛形成，而與人工材料表面的活性氨基結合為席夫堿，隨后還原為穩定的共價體。因OSA片段活性醛基數量單一且處在末端，端點附著、成鍵量單一，所以OSA分子的功能活性部分可以從人工材料表面伸出與血液分子自由結合，發揮生物相容性好、抗凝活性的優點。同時本發明采用空間物理纏繞和離子鍵結合法，DSP —方面通過離子鍵與預涂的PEI結合，另一方面長鏈多糖大分子OSA對DSP進行空間物理纏繞。本發明使用的海藻酸鈉是一種天然線性多糖，具有良好的生物相容性、生物粘著性、安全性、水溶性、緩釋和聚電解質等特性，廣泛應用于醫藥、食品、藥物釋放和組織工程領域。多醛基海藻酸是通過高碘酸將海藻酸鈉的順二醇結構氧化為二醛結構，從而在海藻酸鈉分子中引入新的活性功能基團，能與具有游離氨基的大分子物質發生交聯反應，同時改善了其降解性能(如附圖I所示)。本發明使用的地塞米松磷酸鈉是腎上腺皮質激素類藥的一種，屬生物小分子，具有很強的抗炎，抗病毒，抗休克作用，廣泛應用于臨床實踐，通過減輕和防止組織對炎癥的反應，從而減輕炎癥的臨床表現。本發明所提供的DSP/0SA復合涂層，由聚乙烯亞胺、海藻酸鈉、地塞米松磷酸鈉組成，天然毒性低、來源豐富成本低，在室溫下可長期儲存，且涂層中海藻酸鈉和地塞米松磷酸鈉基團固定在材料的表面，增大與血液接觸的面積和或機會，有效發揮其性質；物理纏繞和離子鍵結合的地塞米松磷酸鈉既達到了有效固定，又能隨著體外循環血流而緩慢釋放，有效發揮了地塞米松磷酸鈉的抗炎活性；終點固定法實施方便，終點固定的多醛基海藻酸鈉結合牢固，空間構象好，既能有效增加高分子材料表面的生物相容性和抗凝活性，又能有效的纏繞地塞米松磷酸鈉(如附圖2所示)。將未經處理的PVC、帶PEI涂層的PVC、帶有DSP/0SA涂層的PVC進行紅外光譜測試(紅外光譜廠商及型號Thermo NICOLET 6700、檢測器為DTGs KBr、分束器為KBr、波長范圍為650-4000nm)，從附圖3 — 5所示可知，1550cm-1處為NH2的特征吸收峰，3400CHT1左右可見海藻酸鈉的特征吸收峰，說明多醛基海藻酸鈉通過NH2固定在材料的表面，2500-4000cm^范圍可見地塞米松磷酸鈉的特征吸收峰，說明DSP通過物理纏繞及離子鍵固定在材料的表面。目前地塞米松磷酸鈉給藥途徑多為靜脈注射和肌肉注射，本發明的技術方案能以表面涂層方式在體外循環管道表面固定地塞米松磷酸鈉，使其能緩釋持續地起到抗炎作用，又不至于由于血藥濃度過大而產生副作用，便能最大限度的發揮地塞米松磷酸鈉的抗炎作用。DSP/0SA復合涂層具備抗凝和抗炎雙重活性，體外藥物緩釋性能持久穩定，在體外 循環中既能短期替代靜脈肝素化，又能通過緩釋DSP來減輕全身炎癥反應，可以滿足心臟外科中短期手術的要求。在生物醫學材料領域，如體外循環管路、動脈濾器、動靜脈插管等具有廣闊的應用前景和較高的實用價值。


圖I多醛基氧化海藻酸鈉的制備原理示意圖。圖2涂層物DSP固定原理示意圖。圖3空白聚氯乙烯(PVC)紅外光譜圖。圖4帶PEI涂層的PVC紅外光譜圖。圖5帶DSP/0SA涂層的PVC紅外光譜圖。圖6復合涂層管道DSP動態釋放曲線。
具體實施例方式下面結合具體實施例進一步說明本發明的技術方案。使用的高分子材料為東莞科威醫療器械有限公司提供的體外循環管路，材料為聚氯乙烯；地塞米松磷酸鈉CAS 2392-39-4，武漢大華偉業醫藥化工有限公司，分子式C22H28FNa2O8P,分子量為516. 41 ;海藻酸鈉CAS :9005-38-3, SIGMA-ALDRICH，分子式(C6H7NaO6) n，n=80 750，MW 32000^200000 實施例I第一步，將O. 344克高錳酸鉀溶于162毫升去離子水中，緩慢加入95wt%濃硫酸IOml，使濃硫酸與高錳酸鉀很混合均勻。第二步，在步驟一所得溶液中中加入高分子材料PVC，機械攪拌充分反應lOmin，溫度為20°C ;反應之后采用去離子水對材料進行清洗。第三步，經步驟二預處理的高分子材料浸入O. 01wt%聚乙烯亞胺水溶液中，常溫20°C反應60min，得到氨基化修飾的表面。第四步，按高碘酸鈉與海藻酸鈉單元摩爾比1:10，氧化處理海藻酸，使海藻酸片段末端暴露醛基，乙二醇終止反應，96wt%乙醇水溶液沉淀，沉淀后抽濾、透析，-80°C冷凍干燥，得到多醛基海藻酸鈉，即涂層物OSA。氧化反應在避光條件下攪拌反應24小時，溫度為20。。。第五步，首先IOmg地塞米松磷酸鈉溶于200ml去離子水中，常溫20°C充分混勻，得到涂層物DSP ;然后以此溶液為基礎配置反應溶液，其中涂層物DSP O. 05mg/mL，0SA濃度O. lmg/ml, NaCl O. 15mol/L,氰基硼氫化鈉O. lmg/mL,并以O. lmmol/L的鹽酸水溶液調節pH值為3.0。第六步，氨基化修飾的高分子材料置于反應液中，反應溫度40°C，反應時間2小時。實施例2第一步，將O. 328克高錳酸鉀溶于144毫升去離子水中，緩慢加入95%濃硫酸20ml，使濃硫酸與高錳酸鉀很混合均勻。
第二步，在步驟一所得溶液中加入高分子材料，超聲攪拌充分反應lmin，溫度為250C ;反應之后采用去離子水對材料進行清洗。第三步，經步驟二預處理的高分子材料浸入O. 5wt%聚乙烯亞胺水溶液中，常溫25°C反應lOmin，得到氨基化修飾的表面。第四步，按高碘酸鈉與海藻酸鈉單元摩爾比3:10，氧化處理海藻酸，使海藻酸片段末端暴露醛基，乙二醇終止反應，96wt%乙醇水溶液沉淀，沉淀后抽濾、透析，-80°C冷凍干燥，得到多醛基海藻酸鈉，即涂層物0SA。氧化反應在避光條件下攪拌反應40小時，溫度為25。。。第五步，首先20mg地塞米松磷酸鈉溶于200ml去離子水中，常溫25°C充分混勻，得到涂層物DSP ;然后以此溶液為基礎配置反應溶液，其中涂層物DSP O. lmg/mL, OSA濃度2mg/ml, NaCl O. 15mol/L,氰基硼氫化鈉O. lmg/mL,并以O. lmmol/L的鹽酸水溶液調節pH值為 4. O。第六步，氨基化修飾的高分子材料置于反應液中，反應溫度50°C，反應時間6小時。實施例3第一步，將O. 328克高錳酸鉀溶于144毫升去離子水中，緩慢加入95%濃硫酸20ml，使濃硫酸與高錳酸鉀很混合均勻。第二步，在步驟一所得溶液中加入高分子材料，超聲攪拌充分反應8min，溫度為250C ;反應之后采用去離子水對材料進行清洗。第三步，經步驟二預處理的高分子材料浸入O. 05wt%聚乙烯亞胺水溶液中，常溫25°C反應30min，得到氨基化修飾的表面。第四步，按高碘酸鈉與海藻酸鈉單元摩爾比1:10，氧化處理海藻酸，使海藻酸片段末端暴露醛基，乙二醇終止反應，96wt%乙醇水溶液沉淀，沉淀后抽濾、透析，-80°C冷凍干燥，得到多醛基海藻酸鈉，即涂層物0SA。氧化反應在避光條件下攪拌反應30小時，溫度為20。。。第五步，首先40mg地塞米松磷酸鈉溶于200ml去離子水中，常溫20°C充分混勻，得到涂層物DSP ;然后以此溶液為基礎配置反應溶液，其中涂層物DSP O. 2mg/mL, OSA濃度O. 05mg/mL, NaCl O. 35mol/L,氰基硼氫化鈉O. 01mg/mL,并以O. lmmol/L的鹽酸水溶液調節pH值為6。第六步，氨基化修飾的高分子材料置于反應液中，反應溫度60°C，反應時間4小時。實施例4第一步，將O. 328克高錳酸鉀溶于144毫升去離子水中，緩慢加入95%濃硫酸20ml，使濃硫酸與高錳酸鉀很混合均勻。第二步，在步驟一所得溶液中加入高分子材料，機械攪拌充分反應5min，溫度為250C ;反應之后采用去離子水對材料進行清洗。第三步，經步驟二預處理的高分子材料浸入O. 005wt%聚乙烯亞胺水溶液中，常溫25°C反應50min，得到氨基化修飾的表面。 第四步，按高碘酸鈉與海藻酸鈉單元摩爾比2:10，氧化處理海藻酸，使海藻酸片段末端暴露醛基，乙二醇終止反應，96wt%乙醇水溶液沉淀，沉淀后抽濾、透析，-80°C冷凍干燥，得到多醛基海藻酸鈉，即涂層物0SA。氧化反應在避光條件下攪拌反應35小時，溫度為25。。。第五步，首先80mg地塞米松磷酸鈉溶于200ml去離子水中，常溫25°C充分混勻，得到涂層物DSP ;然后以此溶液為基礎配置反應溶液，其中涂層物DSP O. 4mg/mL, OSA濃度O. 5mg/mL, NaCl O. 25mol/L,氰基硼氫化鈉O. 05mg/mL,并以O. lmmol/L的鹽酸水溶液調節pH值為5。第六步，氨基化修飾的高分子材料置于反應液中，反應溫度30°C，反應時間4小時。實施例5第一步，將O. 328克高錳酸鉀溶于144毫升去離子水中，緩慢加入95%濃硫酸20ml，使濃硫酸與高錳酸鉀很混合均勻。第二步，在步驟一所得溶液中加入高分子材料，機械攪拌充分反應5min，溫度為250C ;反應之后采用去離子水對材料進行清洗。第三步，經步驟二預處理的高分子材料浸入O. 005wt%聚乙烯亞胺水溶液中，常溫25°C反應50min，得到氨基化修飾的表面。第四步，按高碘酸鈉與海藻酸鈉單元摩爾比2:10，氧化處理海藻酸，使海藻酸片段末端暴露醛基，乙二醇終止反應，96wt%乙醇水溶液沉淀，沉淀后抽濾、透析，-80°C冷凍干燥，得到多醛基海藻酸鈉，即涂層物0SA。氧化反應在避光條件下攪拌反應35小時，溫度為25。。。第五步，首先IOOmg地塞米松磷酸鈉溶于200ml去離子水中，常溫20°C充分混勻，得到涂層物DSP ;然后以此溶液為基礎配置反應溶液，其中涂層物DSP O. 5mg/mL, OSA濃度lmg/mL, NaCl O. 25mol/L,氰基硼氫化鈉O. 05mg/mL,并以O. lmmol/L的鹽酸水溶液調節pH值為5。第六步，氨基化修飾的高分子材料置于反應液中，反應溫度30°C，反應時間4小時。實施例6第一步，將O. 328克高錳酸鉀溶于144毫升去離子水中，緩慢加入95%濃硫酸20ml，使濃硫酸與高錳酸鉀很混合均勻。第三步，經步驟二預處理的高分子材料浸入O. 5wt%聚乙烯亞胺水溶液中，常溫25°C反應40min，得到氨基化修飾的表面。第四步，按高碘酸鈉與海藻酸鈉單元摩爾比2:10，氧化處理海藻酸，使海藻酸片段末端暴露醛基，乙二醇終止反應，96wt%乙醇水溶液沉淀，沉淀后抽濾、透析，-80°C冷凍干燥，得到多醛基海藻酸鈉，即涂層物0SA。氧化反應在避光條件下攪拌反應30小時，溫度為25。。。第五步，首先2mg地塞米松磷酸鈉溶于200ml去離子水中，常溫20°C充分混勻，得到涂層物DSP ;然后以此溶液為基礎配置反應溶液，其中涂層物DSP O. 01mg/mL, OSA濃度lmg/mL, NaCl O. 55mol/L,氰基硼氫化鈉O. 05mg/mL,并以O. lmmol/L的鹽酸水溶液調節pH值為4。第六步，氨基化修飾的高分子材料置于反應液中，反應溫度50°C，反應時間2小 時。利用苯酌■-硫酸法(DuboisM, Gilles K A, Hamilton JK, et al. Colorimetricmethod for determination of sugars and related substances[J]. AnalyticalChemistry, 1956，28(3) :350-356.)，通過計算反應前后海藻酸鈉(OSA)反應液吸光度值變化，間接得到OSA的固定量，同時證明OSA固定確實，可見實施例1-5中海藻酸鈉已經成功固定。
反應前Abs 反應后Abs固定量Ug/cm2
實施例 I0. 1260. 109079
實施例 20. 3940. 3287 78
實施例 30. 1530. 127δΓθ3
實施例 40.2350.224049
實施例 50.2920.2683 62
實施例 60.2580.2364 58利用高效液相色譜法(陳勇鵬，王貴學，陳琰，晉獻春，侯延斌，羅來龍，孫大貴.地塞米松血管內支架的涂層制備及體外緩釋實驗研究[J]，第三軍醫大學學報，2008,5(10) :935-937.)，液相色譜型號為 Agilent 1100 Series, USA，測定 DSP 液與 PVC材料作用后的峰面積值，通過標準曲線法得到固定的DSP量。
峰面積值DSP密度U g/cm2
實施例 I683. 33Τ δ
權利要求
1.地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法，其特征在于，按照下述步驟進行 步驟(I )，將高分子材料浸泡在高錳酸鉀的硫酸溶液中，進行酸化處理 步驟(2)，將經過酸化處理的材料置于聚乙烯亞胺水溶液中，反應以得到氨基化修飾的表面 步驟(3)，使用高碘酸或者高碘酸鈉氧化處理海藻酸鈉，使得海藻酸片段末端暴露醛基，得到多醛基氧化海藻酸鈉 步驟(4)，配置涂層物質地塞米松磷酸鈉和多醛基氧化海藻酸鈉的反應溶液，其中所述反應溶液中，涂層物地塞米松磷酸鈉濃度為O. 01-0. 5mg/mL，涂層物多醛基氧化海藻酸鈉濃度為O. 05-2mg/mL, NaCl濃度為O. 15-0. 55mol/L,氰基硼氫化鈉濃度為O. 01-0. lmg/mL,溶劑為去離子水，調整反應溶液的PH值為3. O — 6. O 步驟(5)，將氨基化修飾表面的材料置于步驟(4)配置的反應溶液中，通過空間物理纏繞、離子鍵及終點固定法得到復合涂層，其中反應溫度為30°C — 60°C，反應時間至少2小時。
2.根據權利要求I所述的地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)中，所述高分子材料可以選擇醫用等級的聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚酯、硅橡膠、尼龍、聚碳酸酯或者聚四氟乙烯；所述高錳酸鉀的硫酸溶液采利用如下方式進行制備先將高錳酸鉀溶解在去離子水中混合均勻，然后緩慢向其中加入質量百分數為95-98%的濃硫酸，攪拌混合至硫酸的質量百分數達到為10% -70%。
3.根據權利要求I所述的地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)中，將高分子材料浸泡在高錳酸鉀的硫酸溶液中，進行酸化處理，主要是為了改性材料的表面性質，可以選擇酸處理時間為Imin-lOmin，常溫處理，溫度為20-250C ;在酸化處理過程中可采用機械或者超聲攪拌的方式加強反應的強度，在酸化處理之后可使用去離子水對材料進行清洗。
4.根據權利要求I所述的地塞米松磷酸鈉-海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述聚乙烯亞胺水溶液的質量百分濃度為O. 005%-0. 5%，反應時間為10min-60min，常溫處理，溫度為20— 25°C。
5.根據權利要求I所述的地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，高碘酸或者高碘酸鈉與海藻酸鈉的重復單元的摩爾比為(I一3)10，氧化反應在避光條件下攪拌反應至少24小時，溫度為20— 25°C;采用乙二醇終止反應，96wt%乙醇的水溶液進行沉淀，沉淀后抽濾、透析，-80°C冷凍干燥，得到多醛基氧化海藻酸鈉。
6.根據權利要求5所述的地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，氧化反應的時間為24-40小時。
7.根據權利要求I所述的地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中，在調整溶液pH值時，采用O. lmmol/L的鹽酸水溶液。
8.根據權利要求I所述的地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)中，反應溫度為40— 50°C ;反應時間為2— 6小時。
9.如權利要求I所述的地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法在生物醫學材料中的應用，其特征在于，所述復合緩釋涂層具備抗凝和抗炎雙重活性，并可實現地塞米松磷酸鈉的緩釋。
10.根據權利要求9所述的地塞米松磷酸鈉一海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法在生物醫學材料領域中的應用，其特征在于，所述生物醫學材料是指體外循環管路、動脈濾器、動靜脈插管。
全文摘要
本發明公開了地塞米松磷酸鈉－海藻酸鈉復合緩釋涂層的制備方法及應用，將高分子材料浸泡在高錳酸鉀的硫酸溶液中，酸化處理；然后置于聚乙烯亞胺溶液中，得到氨基化修飾的表面；使用高碘酸或者高碘酸鈉氧化處理海藻酸鈉，使海藻酸片段末端暴露醛基，得到多醛基氧化海藻酸鈉，并將地塞米松磷酸鈉溶于去離子水中，最后將氨基化修飾表面的材料置于反應液中，得到復合涂層。本發明的技術方案能以表面涂層方式在體外循環管道表面固定地塞米松磷酸鈉和海藻酸鈉，具備抗凝和抗炎雙重活性，體外藥物緩釋性能持久穩定，在體外循環中既能短期替代靜脈肝素化，又能通過緩釋來減輕全身炎癥反應，可以滿足心臟外科中短期手術的要求。
文檔編號A61L33/08GK102861364SQ20121039237
公開日2013年1月9日 申請日期2012年10月16日 優先權日2012年10月16日
發明者高文卿, 于美麗, 李彤, 段大為, 胡曉旻, 李鑫 申請人:天津市第三中心醫院