一種抑制破骨細胞形成的黃芪提取物的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種抑制破骨細胞形成的黃芪提取物及其提取方法。該提取方法為：將干燥的黃芪用乙醇回流提取，回收乙醇得浸膏，浸膏再用蒸餾水溶解后用有機溶劑萃取，萃取物再用乙醇溶解后回收溶劑即得具有抑制破骨細胞形成的黃芪提取物。本發明的黃芪提取物具有很好的抑制破骨細胞形成的作用，并來源與天然藥物，副作用少，使用安全，且提取方法簡單，易于工業化生產。
【專利說明】一種抑制破骨細胞形成的黃芪提取物
【技術領域】
[0001]本發明涉及黃芪提取物，尤其是涉及抑制破骨細胞形成的黃芪提取物。
【背景技術】
[0002]隨著世界人口老齡化日趨明顯，骨質疏松癥的發病率逐年升高，由骨質疏松癥所致的骨痛和骨折直接影響了中老年人的生存質量，已經成為嚴峻的社會問題。人體的骨骼通過不斷的骨生成和骨吸收，一直在進行著改造，這種改造叫骨改造。在年輕時骨生成和骨吸收保持著良好的平衡，但隨著年齡的增長，由于各種原因該平衡傾向于骨吸收，長時間持續該狀態的話會使得骨組織變脆，導致發生骨質疏松癥、骨折等各種骨疾病。在人體里，破骨細胞是有骨吸收的唯一細胞。研究表明，破骨細胞形成變得異常活躍時，將引發上述由于骨損失引起的骨質疏松癥(osteoporosis)等各種骨疾病。因此，抑制破骨細胞的形成與骨吸收機能是一種非常有效的治療骨質疏松癥的方法。
[0003]目前已開發出多種抑制破骨細胞形成的預防和治療骨質疏松癥的藥物和方法，但由于具有價格高，長期服用引起多種副作用，因而使用上都有一定的局限性。比起合成新藥，天然藥物成分具有安全，價廉的優點。

【發明內容】

[0004]本發明的目的在于提供一種來源于天然藥物的，具有抑制破骨細胞形成的植物成分。
[0005]為了實現本發明的目的，本發明采用以黃芪為天然藥物資源，通過多種溶劑提取法和分離方法以及在提取、分離過程中緊密配合得到的提取物或組分對破骨細胞形成的作用的實驗，最終得到具有顯著`破骨細胞抑制作用的黃芪提取物。
[0006]具有抑制破骨細胞形成的黃芪提取物的提取方法為如下:
[0007]①取干燥的黃芪，粉碎成1-1Omm的小塊，備用；
[0008]②將粉碎的黃芪用乙醇回流提取1-3次，冷藏過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇，
得乙醇浸膏；
[0009]③將乙醇浸膏加入蒸餾水熱溶，然后用有機溶劑萃取，減壓回收溶劑，得浸膏I ;
[0010]④將浸膏I用2-10倍量的乙醇溶解，冷藏過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇，即得抑制破骨細胞形成的黃芪提取物。
[0011]本發明的優選技術方案中，在步驟①所述的乙醇為60-80%的乙醇溶液。
[0012]本發明的另一優選技術方案中，在步驟②所述的有機溶劑為含有1-6個碳原子的醇，燒或酯類。
[0013]本發明的再一優選技術方案中，萃取所用有機溶劑為一種或兩種以上有機溶劑的混合物。
[0014]本發明的優選技術方案中，在步驟③所述的乙醇為30-100%的乙醇溶液。[0015]所述有機溶劑萃取，可以采用按溶劑極性小到大的順序依次萃取的方法，或者用一種溶劑萃取的方法或者兩種以上的混合溶劑萃取的方法。
[0016]黃芪為常用中草藥，內蒙古、山西、甘肅、黑龍江等地，資源豐富。具有增強免疫力，增強能量，抗疲勞，抗突變，保肝等作用。黃芪含多糖、皂甙、黃酮、氨基酸等多種有效成分，黃芪多糖具有降血脂，即降低膽固醇和甘油三酯、升高高密度脂蛋白的作用；能夠預防和治療心腦血管疾病，黃芪甲苷具有顯著降低血糖、糖化血紅蛋白和尿蛋白的作用，在黃芪甲苷中加入適當輔料，可制成口服制劑，它用于預防和治療糖尿病腎病。
[0017]黃芪雖有上述多種功效和有效成分，并配合其他中草藥用于骨質疏松癥的治療，但尚沒有明確黃芪中具有抗骨質疏松癥的有效成分。本發明用多種溶劑提取方法，得到抑制破骨細胞形成黃芪提取物。抑制破骨細胞是治療骨質疏松癥的有效途徑。
[0018]本發明的黃芪提取物具有很好的抑制破骨細胞形成的作用，并來源與天然藥物，副作用少，使用安全。
[0019]本發明的黃芪提取物，提取方法簡單，易于工業化生產。
【具體實施方式】
[0020]下述非限制性實施例可以使本領域的普通技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。
[0021]實施例1
[0022]1.黃芪提取物的提取
[0023]①取干燥的黃芪`，粉碎成1-1Omm的小塊，備用；
[0024]②將粉碎好的黃芪，用3倍70%乙醇回流提取2次，每次2個小時，合并提取液，冷藏過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇，得乙醇浸膏；
[0025]③將乙醇浸膏加入5倍量的蒸餾水熱溶，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；
[0026]④將正丁醇萃取液，減壓回收溶劑，得浸膏I ;
[0027]⑤將浸膏I用5倍量的90%乙醇溶解，冷藏過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇，即得抑制破骨細胞形成的黃芪提取物。
[0028]2.黃芪提取物對破骨細胞形成的作用
[0029]破骨細胞的形成體系:采用RAW264.7細胞在RANKL存在下，在a -MEM培養液中培養3-5天就可形成為多核的破骨細胞。形成的破骨細胞用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法觀察TRAP陽性多核細胞，在顯微鏡下數3個以上細胞核的TRAP陽性多核細胞，作為破骨細胞形成的指標。
[0030]所述RAW264.7為細胞小鼠單核/巨噬細胞株，在破骨細胞形成因子(RANKL)的存在下可以形成為有骨吸收能力的破骨細胞。
[0031]將黃芪提取物溶于a -MEM培養液中，配制成一定濃度，然后加入到RAW264.7細胞的破骨細胞形成體系中，在5% 二氧化碳和37°C的細胞培養箱中培養3天，得到的破骨細胞用TRAP染色發染色，并在顯微鏡下統計具有3個以上細胞核的TRAP陽性破骨細胞，結果見表1.[0032]表1.黃芪提取物對破骨細胞形成的影響
【權利要求】
1.一種抑制破骨細胞形成的黃芪提取物，其特征在于用如下方法提取得到: ①取干燥的黃芪，粉碎成1-10_的小塊，備用； ②將粉碎的黃芪用乙醇回流提取1-3次，冷藏過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇，得乙醇浸膏；③將乙醇浸膏加入蒸餾水熱溶，然后用有機溶劑萃取，減壓回收溶劑，得浸膏I; ④將浸膏I用2-10倍量的乙醇溶解，冷藏過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇，即得抑制破骨細胞形成的黃芪提取物。
2.根據權利要求1所述的黃芪提取物，其特征在于:在步驟①所述的乙醇為60-80%的乙醇溶液。
3.根據權利要求1所述的黃芪提取物，其特征在于:在步驟②所述的有機溶劑為含有1-6個碳原子的醇，烷或酯類。
4.根據權利要求3所述的黃芪提取物，其特征在于:萃取所用有機溶劑為一種或兩種以上有機溶劑的混合物。
5.根據權利要 求1所述的黃芪提取物，其特征在于:在步驟③所述的乙醇為30-100%的乙醇溶液。
【文檔編號】A61P19/10GK103816215SQ201210466246
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年11月16日 優先權日:2012年11月16日
【發明者】邢秋苓 申請人:邢秋苓