專利名稱：四季菜有效部位總黃酮的提取方法
技術領域：
本發明涉及總黃酮的提取方法，具體涉及從四季菜有效部位提取總黃酮的方法。
背景技術：
四季菜(Artemisia laxtiflora Wall)是菊科蒿屬的多年生草本植物。又名大力王，鴨腳艾，陰毒草。四季菜資源豐富 ，主要分布在我國的華東、中南、西南等地。其性辛，味甘平，具有清熱解毒、養血柔肝、理氣化瘀、活血化瘀，祛風止咳等功效。臨床上用于治療慢性肝炎、跌打損傷、頭痛、咳嗽、泄瀉、便血尿血、月經不調等病癥。尤其治療氣滯血瘀、血不養肝之慢性活動性肝炎、遷延性肝炎有顯著療效。對肝硬化、急性重癥肝炎亦有較好的效果。四季菜全草中含黃酮、酚類、揮發油、氨基酸、有機酸及糖類化合物。有文獻報道，從其莖葉中分離得到的黃酮類具有抗菌、抗霉、解痙、利尿等作用。臨床研究表明，四季菜有效成分總黃酮對于慢性肝炎、急性黃疸性病毒性肝炎的治療有顯著療效。四季菜中的總黃酮對CCl4、乙醇所致的急性肝損傷有明顯的保護作用。其總黃酮對肝損傷的保護作用可能與其減少肝臟GSH耗竭，抑制肝脂質過氧化作用有關。也有文獻報道，四季菜治療肝病患者，98%的病例，50天內肝功能恢復正常，僅2%的病例長達70天恢復。先進的提取技術已經應用到中藥材提取加工的各個領域，但是，對于四季菜的活性部位總黃酮的提取并未見相關報道。多數仍然采取傳統的提取方法，黃酮類成分的提取方法有主要包括溶劑提取、微波提取、超臨界萃取、酶浸潰萃取、超聲波提取、回流、索氏提取、煎煮法和滲濾等。目前，對四季菜的有效部位總黃酮的提取的相關報道不多，而且未見有用聚酰胺純化四季菜的總黃酮的相關報道，采用現有提取方法獲得的提取物中總黃酮含量低，以蘆丁(C27H3tlO16)計在70%以下。

發明內容
本發明的目的是為了解決現有總黃酮的提取方法得到的提取物中總黃酮含量低的問題，而提供四季菜有效部位總黃酮的提取方法。本發明四季菜有效部位總黃酮的提取方法是通過下列步驟實現一、取40 60kg四季菜中藥材放入水中煎煮I 3小時后，收集第一次煎出的煎煮液，再向四季菜藥材中加水煎煮I 3小時后，收集第二次煎出的煎煮液，合并兩次煎煮液，濃縮成以75 80°C計相對密度為I. 12 I. 14的清膏；二、向步驟一得到的清膏內加水至體積為130 160L，然后加入I. 5 2. 5mol/L的氫氧化鈉溶液調pH值至6 7，浸泡12 24小時收集上清液，用3 5mol/L鹽酸溶液調上清液PH值至2. O 3. 0，然后靜置12 24小時，收集上層液體；三、把步驟二收集的上層液體用預處理的聚酰胺樹脂柱純化，使用6 10個柱體積的水洗脫，然后再用體積濃度為50% 75%，9 11個柱體積的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液；
四、使用減壓蒸餾回收步驟三乙醇洗脫液中的乙醇，再對洗脫液減壓濃縮，然后進行減壓干燥，得到四季菜有效部位的總黃酮提取物；其中步驟一所述的第一次煎煮中水的質量是四季菜中藥材的10 16倍，第二次煎煮中水的質量是四季菜中藥材的6 12倍；步驟三中聚酰胺樹脂質量與四季菜中藥材的質量比為I : (2 4);步驟三中預處理的聚酰胺樹脂柱是將聚酰胺樹脂裝入色譜柱中，用丙酮以O. 2 O. 4BV/h的流速沖洗至洗出液呈無色，再用體積濃度為90 96%，用量為4 6倍柱體積的乙醇以O. 2 O. 4BV/h的流速沖洗，然后倒出乙醇，放入烘箱以80 100°C烘干，得到預處理的聚酰胺樹脂柱。通過本發明四季菜有效部位總黃酮的提取方法得到的提取物中總黃酮含量以蘆 丁(C27H3tlO16)計，含量不少于80%，提取物單體成分中還有香豆素、脫腸草素等，提高了提取物中總黃酮的含量。按藥劑學方法，可以將本發明中四季菜有效部位總黃酮制成適用于臨床的口服制劑和非腸道給藥的劑型。所說的口服制劑可制成顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸、混懸劑、口服液體制劑當中的一種。所說的非腸道給藥劑型可制成注射劑、氣霧劑、栓劑或者皮下給藥劑型當中的一種。本發明四季菜總黃酮制成各種劑型中，還可加入常規的藥物賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑等。本發明主要應用于高純度總黃酮的制備，所得總黃酮可用于口服制劑以及非腸道給藥制劑。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式四季菜有效部位總黃酮的提取方法按下列步驟實施一、取40 60kg四季菜中藥材放入水中煎煮I 3小時后，收集第一次煎出的煎煮液，再向四季菜藥材中加水煎煮I 3小時后，收集第二次煎出的煎煮液，合并兩次煎煮液，濃縮成以75 80°C計相對密度為I. 12 I. 14的清膏；二、向步驟一得到的清膏內加水至體積為130 160L，然后加入I. 5 2. 5mol/L的氫氧化鈉溶液調pH值至6 7，浸泡12 24小時收集上清液，用3 5mol/L鹽酸溶液調上清液PH值至2. O 3. 0，然后靜置12 24小時，收集上層液體；三、把步驟二收集的上層液體用預處理的聚酰胺樹脂柱純化，使用6 10個柱體積的水洗脫，然后再用體積濃度為50% 75%，9 11個柱體積的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液；四、使用減壓蒸餾回收步驟三乙醇洗脫液中的乙醇，再對洗脫液減壓濃縮，然后進行減壓干燥，得到四季菜有效部位的總黃酮提取物；其中步驟一所述的第一次煎煮中水的質量是四季菜中藥材的10 16倍，第二次煎煮中水的質量是四季菜中藥材的6 12倍；步驟三中聚酰胺樹脂質量與四季菜中藥材的質量比為I : (2 4);步驟三中預處理的聚酰胺樹脂柱是將聚酰胺樹脂裝入色譜柱中，用丙酮以O. 2 O. 4BV/h的流速沖洗至洗出液呈無色，再用體積濃度為90 96%，用量為4 6倍柱體積的乙醇以O. 2 O. 4BV/h的流速沖洗，然后倒出乙醇，放入烘箱以80 100°C烘干，得到預處理的聚酰胺樹脂柱。
本實施方式四季菜有效部位的總黃酮提取物中主要成分為黃酮，7-甲氧基香豆素和脫腸草素。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二加入I. 7
2.3mol/L的氫氧化鈉溶液調pH值至6 7。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二加入2mol/L的氫氧化鈉溶液調pH值至6 7。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一至三之一不同的是步驟二用
3.5 4. 5mol/L鹽酸溶液調上清液pH值至2. O 3. O。其它步驟及參數與具體實施方式
一至三之一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一至三之一不同的是步驟二用
4.2mol/L鹽酸溶液調上清液pH值至2. O 3. O。其它步驟及參數與具體實施方式
一至三之一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是步驟四所述的減壓干燥為噴霧干燥。其它步驟和參數與具體實施方式
一至五之一相同。
具體實施方式
七本實施方式四季菜有效部位總黃酮的提取方法按下列步驟實施一、取50kg四季菜中藥材放入水中煎煮I. 5小時后，收集第一次煎出的煎煮液，再向四季菜藥材中加水煎煮I. 5小時后，收集第二次煎出的煎煮液，合并兩次煎煮液，濃縮至成80°C計相對密度為I. 14的清膏；二、向步驟一得到的清膏內加水至體積為150L，然后加入2mol/L的氫氧化鈉溶液調PH值至6，浸泡24小時收集上清液，用4mol/L鹽酸溶液調上清液pH值至3. 0，然后靜置24小時，收集上層液體；三、把步驟二收集的上層液體用預處理的聚酰胺樹脂柱純化，使用8個柱體積的水洗脫，然后再用體積濃度為75%，10個柱體積的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液；四、使用減壓蒸餾回收步驟三乙醇洗脫液中的乙醇，再對洗脫液減壓濃縮，然后進行減壓干燥，得到四季菜有效部位的總黃酮提取物；其中步驟一所述的第一次煎煮中水的質量是四季菜中藥材的10倍，第二次煎煮中水的質量是四季菜中藥材的12倍；步驟三中聚酰胺樹脂質量與四季菜中藥材的質量比為I :2 ；步驟三中預處理的聚酰胺樹脂柱是將聚酰胺樹脂裝入色譜柱中，用丙酮以O. 3BV/h的流速沖洗至洗出液呈無色，再用體積濃度為95%，用量為5倍柱體積的乙醇以O. 3BV/h的流速沖洗，然后倒出乙醇，放入烘箱以90°C烘干，得到預處理的聚酰胺樹脂柱。本實施方式四季菜有效部位的總黃酮提取物主要成分為黃酮、7-甲氧基香豆素和脫腸草素，提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計為83%。
權利要求
1.四季菜有效部位總黃酮的提取方法，其特征在于四季菜有效部位總黃酮的提取方法是通過下列步驟實現 一、取40 60kg四季菜中藥材放入水中煎煮I 3小時后，收集第一次煎出的煎煮液，再向四季菜藥材中加水煎煮I 3小時后，收集第二次煎出的煎煮液，合并兩次煎煮液，濃縮成以75 80°C計相對密度為I. 12 I. 14的清膏； 二、向步驟一得到的清膏內加水至體積為130 160L，然后加入I.5 2. 5mol/L的氫氧化鈉溶液調pH值至6 7，浸泡12 24小時收集上清液，用3 5mol/L鹽酸溶液調上清液PH值至2. O 3. 0，然后靜置12 24小時，收集上層液體； 三、把步驟二收集的上層液體用預處理的聚酰胺樹脂柱純化，使用6 10個柱體積的水洗脫，然后再用體積濃度為50% 75%，9 11個柱體積的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液； 四、使用減壓蒸餾回收步驟三乙醇洗脫液中的乙醇，再對洗脫液減壓濃縮，然后進行減壓干燥，得到四季菜有效部位的總黃酮提取物； 其中步驟一所述的第一次煎煮中水的質量是四季菜中藥材的10 16倍，第二次煎煮中水的質量是四季菜中藥材的6 12倍； 步驟三中聚酰胺樹脂質量與四季菜中藥材的質量比為I : (2 4); 步驟三中預處理的聚酰胺樹脂柱是將聚酰胺樹脂裝入色譜柱中，用丙酮以O. 2 0.4BV/h的流速沖洗至洗出液呈無色，再用體積濃度為90 96%，用量為4 6倍柱體積的乙醇以O. 2 O. 4BV/h的流速沖洗，然后倒出乙醇，放入烘箱以80 100°C烘干，得到預處理的聚酰胺樹脂柱。
2.根據權利要求I所述的四季菜有效部位總黃酮的提取方法，其特征在于步驟二加入1.7 2. 3mol/L的氫氧化鈉溶液調pH值至6 7。
3.根據權利要求I所述的四季菜有效部位總黃酮的提取方法，其特征在于步驟二用3.5 4. 5mol/L鹽酸溶液調上清液pH值至2. O 3. O。
4.根據權利要求1、2或3所述的四季菜有效部位總黃酮的提取方法，其特征在于步驟四所述的減壓干燥為噴霧干燥。
全文摘要
四季菜有效部位總黃酮的提取方法，它涉及總黃酮的提取方法。它要解決現有總黃酮的提取方法得到的提取物中總黃酮含量低的問題。本發明總黃酮的提取方法一、取四季菜中藥材加水煎煮兩次，合并兩次煎煮液濃縮成清膏；二、清膏中加水，加入氫氧化鈉溶液調節pH值，浸泡后收集上清液，用鹽酸溶液調上清液pH值，靜置后收集上層液體；三、把步驟二收集的上層液體用聚酰胺樹脂柱純化，分別用水和乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；四、減壓蒸餾乙醇洗脫液，對洗脫液進行減壓濃縮和減壓干燥后得到總黃酮提取物。本發明提取物中總黃酮含量以蘆丁計，含量不少于80%。本發明主要應用于高純度總黃酮的制備。
文檔編號A61P1/16GK102920765SQ20121049072
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月27日 優先權日2012年11月27日
發明者王麗娜, 李云濤, 任瑞濤, 吳志軍, 單鈺毓 申請人:哈藥集團中藥二廠