治療診斷顯像劑和使用方法【專利摘要】本發明提供了攜帶多模式顯像報告物與靶酶抑制劑諸如siRNA和靶前體藥物酶的靶向納米復合物分子，其對細胞和疾病包括，例如，多種癌癥并包括轉移性前列腺癌的治療診斷顯像是有用的。本發明的納米復合物分子提供了面向許多癌癥亞型的平臺技術和可選的治療靶。使用靶酶抑制劑下調特定的通路還提供了選擇性靶向癌細胞同時避開正常組織的難得的機會。本文所描述的納米復合物分子平臺具有遞送多種siRNA酶抑制劑的能力。還包括診斷和治療多種疾病的方法。本文所描述的策略對下調多藥耐藥性通路或修復酶以旨在增加化學治療或放射治療的效力、安全和效率可以是有用的?！緦＠f明】治療診斷顯像劑和使用方法[0001]相關_請的引用[0002]本申請要求2011年3月31日提交的美國臨時專利申請號61/470，054的權益，該美國臨時專利申請在此通過引用被并入用于所有目的，如同在本文充分闡述。[0003]政府權益的聲明[0004]本發明根據NIH基金號P50CA103175、R01CA138515、U54CA151838和R01CA134675，在美國政府支持下完成。美國政府在本發明中具有某些權利。_5]發明背景[0006]納米技術與分子生物學及顯像的進展的結合正提供用于癌癥治療的令人興奮的新的基于納米醫學的策略。理想的癌癥治療將靶向癌細胞同時避開正常組織。在大多數傳統的化療中，正常細胞與癌細胞一起受到損傷。siRNA-介導的特定靶標的沉默在癌癥治療中具有下調在癌細胞中被上調而正常組織中則不被上調的通路以實現癌細胞特異性治療的顯著潛力。類似地，前體藥物酶治療，其中被遞送至腫瘤的激活-藥物的酶將無毒的前體藥物轉化為細胞毒性藥物，正被積極地研究以最小化正常組織的損傷?？衫脙煞N策略的組合以增強傳統化療對癌細胞的作用并最小化對正常組織的損傷。顯像可在此治療中的幾個方面起到關鍵作用。由于腫瘤血管結構是典型的不均勻的且雜亂的，顯像siRNA和激活-前體藥物的酶在腫瘤內的遞送的能力將確定有效遞送?？衫眉せ?前體藥物的酶的靶向下調和可視化的無創檢測以為前體藥物的施用安排時間以最小化正常組織的損傷。檢測腫瘤內前體藥物向活性藥物的轉化將驗證前體藥物酶是有功能的。[0007]在美國，前列腺癌(PC)是男性死于癌癥的第二大原因。絕大多數死于PC的男性死于轉移性雄性激素難治性疾病。因而，對發現關于轉移性PC的有效治療有迫切需要。在治療診斷中，將無創的基于-顯像檢測祀標與遞送治療有效載荷至祀標結合。`[0008]因而，對癌癥包括轉移性前列腺癌的靶向治療仍然存在需求。[0009]發明概沭[0010]根據實施方案，本發明提供了包含a)前體藥物酶部分、b)報告物部分、c)酶抑制劑部分和d)祀向劑的納米復合物(nanoplex)分子。[0011]根據另ー個實施方案，本發明提供了包含前體藥物部分、報告物部分、酶部分和靶向劑的納米復合物分子，其中，該前體藥物酶部分包含酶，該報告物部分包含與染料連接的多聚-L-賴氨酸載體和用放射性同位素標記的連接至聚乙烯亞胺(PEI):聚乙二醇(PEG)接枝共聚物的螯合劑，且該靶向劑以高親和力與靶細胞膜蛋白結合。[0012]根據另外的實施方案，本發明提供了包含ー種或多種如本文所描述的納米復合物分子和藥學上可接受的載體的藥物組合物。[0013]根據又另一個實施方案，本發明提供了包含ー種或多種如本文所描述的納米復合物分子、第二治療劑和藥學上可接受的載體的藥物組合物。[0014]根據又另外的實施方案，本發明提供了調節宿主細胞或細胞群中靶基因表達的方法，該方法包括以足夠調節該宿主細胞或細胞群中靶基因表達的量向該細胞或細胞群施用ー種或多種如本文所描述的納米復合物分子或包含一種或多種納米復合物分子的藥物組合物。[0015]根據另ー個實施方案，本發明提供了本文所描述的納米復合物分子以有效的量制備藥劑的用途，所述藥劑優選用作治療受試者中疾病的藥劑。[0016]附圖簡沭[0017]圖1A-1C說明本發明的納米復合物分子的實施方案的一般合成過程。[0018]圖2顯示經設計具有PSMA靶向部分的納米復合物I的結構和不包含PSMA靶向部分的納米復合物2的結構的圖示。[0019]圖3A顯示代表性的免疫印跡，顯示了與納米復合物I孵育24小時之后的PC3-PIP細胞中Chk的下調取決于被并入納米復合物中的SiRNA-Chk的濃度(N/P比是50)。將GAPDH蛋白水平用于蛋白上樣評價。泳道1:用不具有siRNA-Chk的納米復合物I處理的PC3-PIP細胞；泳道2:用具有IOOnM亂序(scrambled)siRNA的納米復合物I處理的PC3-PIP細胞；泳道3:用具有IOOnMsiRNAChk的納米復合物I處理的PC3-PIP細胞；泳道4:用具有50nMsiRNA-Chk的納米復合物I處理的PC3-PIP細胞；和泳道5:用具有20nMsiRNA-Chk的納米復合物I處理的PC3-PIP細胞。圖3B描繪了PC3-PIP細胞中siRNA和前體藥物的治療效力。持續24、48和72小時用不具有siRNA-Chk的納米復合物I(對照)、具有siRNA-Chk的納米復合物I(siRNA-Chk)、不具有siRNA-Chk但具有5-FC的納米復合物I(5-FC)和具有siRNA-Chk和5-FC的納米復合物I(siRNA-Chk+5-FC)處理PC3-PIP細胞。(1.持續24小時處理；2.持續48小時處理；3.持續72小時處理；納米復合物濃度=350nM，N/P=50，siRNA-Chk濃度=80nM，5-FC濃度=3mM)。值代表每ー種處理的三次或多次測定的平均值土SEM;*，P〈0.05;**，P〈0.01;林*，P〈0.001。[0020]圖4A是顯示PC3-PIP和PC3-F1U細胞中PSMA蛋白表達的代表性免疫印跡。將GAPDH用作上樣對照。圖4B顯示`具有PC3-PIP和PC3_Flu腫瘤的SCID小鼠的代表性SPECT圖像。用776iiCi的111In標記的靶向PSMA的納米復合物I靜脈注射小鼠(0.2mlPBS中150mg/kg)。以30s/投影(projection)在64次投影中采集SPECT圖像。斷層攝影之后,在512次投影中采集CT圖像以允許配準。代表性小鼠的衰變修正的軸向SPECT顯像切片(切片厚5mm)顯示48小時PC3-PIP腫瘤中放射活性的明顯積累。圖4C描繪了腫瘤和肌肉的ROI分析，顯示注射后48小時PC3-PIP腫瘤中活性的顯著積累。值代表平均值土SEM(n=4，*，P〈0.05，PC3-Flu腫瘤攝取作為對比參照)。圖4D顯示不具有或具有阻斷的PC3-PIP和PC3-F1U腫瘤中納米復合物分子的積累。顯示了納米復合物注射后48小時所切除的代表性腫瘤。在卡尺光譜掃描儀(CaliperSpectrumscanner)上采集圖像以檢測Cy5.5信號。關于阻斷研究，將100ug的抗-PSMA抗體靜脈注射入具有PC3-PIP和PC3-F1U腫瘤的小鼠?？贵w注射之后5小時，將75mg/kg的納米復合物I靜脈注射入相同的小鼠。[0021]圖5A描繪了靶向PSMA的納米復合物l(150mg/kg)靜脈注射之前和之后48小時，來自從代表性PC3-PIP腫瘤(~400mm3)采集的2DCSI數據集的體內tCho密度圖。所使用的參數為TE=120ms，TR=1000ms,每相位編碼步4次掃描。在Immxlmm的平面空間分辨率下于9.4T從4mm厚的切片采集CSI光譜。圖5B顯示來自相同2DCSI數據集的對應的體內tCho圖。圖5C是來自5A和5B中所展示的2DCSI的代表性的單體素光譜(onevoxelspectra)。圖提供了納米復合物I注射之前和之后48小時以任意單位計算的tCho濃度。值代表中值土SEM(n=3，*，P〈0.05)。圖5E顯示靶向PSMA的攜帶bCD和siRNA-Chk的納米復合物(150mg/kg)靜脈注射之后24小時和48小時從PC3-PIP腫瘤(~400mm3)采集的體內19FMR光譜。使用可調至1H和19F頻率的Icm螺管線圈(solenoidcoil)在fcukerBiospec9.4T光譜儀上在5-FC(450mg/kg)的組合的靜脈和腹腔注射之后采集光譜。水質子信號勻場之后，在0.8s重復時間、2000次的大量掃描和IOKHz的譜寬條件下，于5-FC注射之后20分鐘開始并以每30分鐘一次繼續、持續110分鐘采集連續的非選擇性的19FMR光レ曰。[0022]圖6A顯示在150mg/kg納米復合物I每只小鼠的注射后48小時，丙氨酸轉氨酶(ALT)和天冬氨酸轉氨酶(AST)的測量(n=4)。圖6B提供了在150mg/kg納米復合物I姆只小鼠的注射后48小時，肌酸酐和血尿素氮的測量(n=4)。圖6C和6D顯示來自免疫原性研究的結果(每3天注射150mg/kg的納米復合物1，共三次注射)。值代表平均值土SEM(*，P〈0.05;**，P〈0.01;林*，P〈0.001，n=4)(M/ml表示百萬/ml)。[0023]發明詳沭[0024]可將本發明包含多種模式顯像報告物的治療納米復合物分子用于靶向特定細胞類型或細胞群。本發明的納米復合物分子在以下中是有用的:鑒定感興趣的靶細胞諸如癌細胞，及將顯像報告物和在靶細胞胞質溶膠中是有功能的酶和酶抑制劑遞送至靶細胞，所述酶抑制劑是調節靶細胞中靶基因表達的多核糖核苷酸。[0025]在一個實施方案中，納米復合物分子靶向前列腺特異性膜抗原(PSMA)，其在去勢-難治性PC的細胞表面上表達。納米復合物分子被設計以將小干擾RNA(siRNA)和前體藥物酶一起遞送至表達PSMA的腫瘤。仔細選擇納米復合物分子的每ー種組分以使用無創多模式顯像評價其PSMA顯像的診斷方面和其siRNA介導的靶基因下調及前體藥物向細胞毒性藥物轉化的治療方面。[0026]根據實施方案，本發明提供了包含a)前體藥物酶部分、b)報告物部分、c)酶抑制劑部分和d)祀向劑的納米復合物分子。[0027]如本文所用的，術語“前體藥物酶部分”指納米復合物分子的該特定部分包含功能酶或其功能部分，其在靶細胞或細胞群的胞質溶膠中保持其活性。將被普通技術人員理解的是該酶或其功能部分可以是任何感興趣的酶。根據實施方案，該酶具有將前體藥物分子轉化為活性藥物分子的活性。該酶可以是將實現前體藥物分子轉化的任何酶。該酶將優選是本來對靶細胞無毒性的，且可以或可以不是已經在靶細胞中被表達的。被前體藥物酶包含的酶的類型的非限制性實例包括激酶、磷酸酶、脫氨酶、こ?；D移酶和其他的酶。[0028]在本發明的一個實施方案中，前體藥物酶是細菌胞嘧啶脫氨酶。當該酶在靶細胞的胞質溶膠中有功能時，可將無毒的5-氟胞嘧啶(5-FC)施用至細胞或細胞群。只有攝取納米復合物分子的細胞將會把5-FC轉化為抑制DNA合成并是細胞毒性劑的5-氟尿嘧啶(5-FU)。[0029]如本文所用的，術語“報告物部分”指分子的該特定部分包含附著至納米復合物分子的至少兩種顯像劑。至少ー種顯像劑是熒光染料。染料可以是可見光譜或近紅外(NIR)光譜發射體。本發明中有用的已知染料包括羰花青、吲哚羰花青、氧雜羰花青、噻羰花青和部花青、聚次甲基、香豆素、若丹明、咕噸、熒光素、硼-二吡咯甲烷(BODIPY)、Cy5、Cy5.5、Cy7、VivoTag-680、VivoTag_S680、VivoTag_S750、AlexaFluor660、AlexaFluor680、AlexaFluor700、AlexaFluor750、AlexaFluor790、Dy677、Dy676、Dy682、Dy752、Dy780、DyLight547、Dylight647、HiLyteFluor647、HiLyteFluor680、HiLyteFluor750、IRDye800CW.1RDye800RS、IRDye700DX、ADS780WS、ADS830WS和ADS832WS。[0030]在NIR區有活性的有機染料是生物醫學應用中已知的。然而，由于傳統染料的局限性，諸如差的親水性和光穩定性、低的量子產率、不足夠穩定和生物系統中低的檢測靈敏性等，只有ー些NIR染料是可容易利用的。已作出了關于NIR染料(包括花青染料、方酸、酞菁、葉啉衍生物和BODIPY(硼二吡咯甲烷)類似物)的最新發展的顯著進展，具有被很大改善的化學和光穩定性、高熒光強度和長的熒光壽命。NIR染料的實例包括為具有由聚次甲基橋連接的兩個芳香含氮雜環的小的有機分子的花青染料(也稱為聚次甲基花青染料)并包含Cy5、Cy5.5、Cy7和它們的衍生物。方酸(通常稱之為方酸染料)由在分子的兩個末端帶有芳香的或雜環的組分的oxocyclobutenolate核組成,ー個實例為KSQ-4-H。酞菁,是二維18-電子芳香卟啉衍生物，由通過氮原子連接在一起的四個經橋接的吡咯亞基組成。BODIPY(硼二吡咯甲烷)染料具有4，4’-二氟-4-硼-3a，4a-二氮雜-s-引達省(4，4’-difluoro-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacene)的基本結構和具有高量子產率的強烈的突光和優越的熱和光化學穩定性。[0031]附著至本發明的納米復合物分子的其他顯像劑包括PET和SPECT顯像劑。最廣泛使用的劑包括支鏈螯合劑諸如二乙烯三胺五こ酸(DTPA)、1，4，7，10-四氮雜環十二烷-1，4，7，10-四こ酸(DOTA)和它們的類似物。螯合劑諸如二胺二硫醇、活化的巰基こ酰三甘氨酸(MAG3)和聯肼尼克酰胺(hydrazidonicotinamide)(HYNIC),能夠螯合金屬如99111Tc和186Re。代替使用螯合剤，輔基諸如N-琥珀酰亞胺-4-18F-氟苯甲酸酯(18F-SFB)是用18F標記肽所必需的。根據優選的實施方案，螯合劑是D0TA。[0032]根據實施方案，本發明提供了納米復合物分子，其中報告物部分包含適于顯像的金屬同位素。本發明中有用的同位素的實例包括Tc-94m、Tc-99m、In-1lUGa-67、Ga_68、Y-86、Y-90、Lu-177、Re-186,Re-188,Cu-64、Cu-67、Co-55,Co-57,Sc-47、Ac-225、B1-213、Bト212、Pb-212、Sm-153、Ho-166或Dy-i66。[0033]根據實施方案，本發明提供了納米復合物分子，其中報告物部分包含已知適于在SPECT顯像中使用的111In標記的D0TA。[0034]根據另ー個實施方案，本發明提供了納米復合物分子，其中報告物部分包含已知適于在MR顯像中使用的Gd3+標記的D0TA。本領域普通技術人員理解，其他適合的放射性同位素可取代本文所公開的mIn和Gd3+。[0035]根據實施方案，本發明的報告物部分包含聚乙烯亞胺(PEI):聚乙二醇(PEG)接枝共聚物，其中ー個或多個DOTA部分和/或若丹明分子附著至PE1:PEG共聚物。[0036]根據實施方案，本發明的報告物部分還包含多聚-L-賴氨酸(PLL)聚合物，其中NIR染料附著至其上。通過連接基(linker)分子將PLL聚合物連接至PEI=PEG共聚物。例如，可存在具有烷基(alkyl)、芳基、烷基和芳基的組合、或具有雜原子的烷基和芳基基團的連接基團。例如，連接基可以是C1-C2tl烷基、C2-C2tl烯基、C2-C2tl炔基、C1-C2tl羥烷基、C1-C2tl烷氧基、C1-C2tl烷氧基C1-C2tl烷基、C1-C2tl燒氨基、二-C1-C2tl燒氨基、C1-C2tl二燒氨基C1-C2tl焼基、C1-C2tl硫烷基、C2-C2tl硫烯基、C2-C2tl硫炔基、C6-C22芳氧基、C6-C22芳氨基C2-C2tl酸氧基、C2-C20硫?；1-C2tl酰氨基和C1-C2tl磺酰氨基。[0037]如本文所用的，術語“酶抑制劑部分”指具有行使靶細胞或細胞群中靶酶的抑制劑的功能的納米聚合物分子的部分。在實施方案中，酶抑制劑部分可包含適于在調節或抑制靶細胞中靶酶的正常功能中使用的任何小分子。小分子的實例包含但不限于小的有機分子、肽、寡核苷酸、適體、抗體和siRNA。根據實施方案，酶抑制劑部分包含siRNA。[0038]將被理解的是選擇作為抑制劑的靶標的酶充分在本領域技術人員的能力之內。關于作為抑制靶標的酶的典型的選擇是在靶細胞或細胞群中増加細胞毒性的那些酶。這些酶靶標的類型的實例包括，例如，在DNA合成、復制或修復、蛋白合成中使用的酶，在靶細胞群、細胞信號轉導和細胞代謝控制中上調的酶。特定酶靶標的實例包括二氫葉酸還原酶、二氟甲基鳥氨酸和RNA和DNA聚合酶。根據實施方案，酶抑制劑部分是膽堿激酶(Chk)特異性的。在實施方案中，本發明提供了包含針對Chk的siRNA的酶抑制劑部分。[0039]根據本發明，在實施方案中，siRNA酶抑制劑通過siRNA與PE1:PEG接枝共聚物的靜電相互作用與該共聚物締合。[0040]如本文所用的，術語“靶向劑”指能夠以高親和カ與靶細胞或細胞群上的靶膜蛋白結合的納米聚合物分子的部分。本發明的靶向劑的實例包括，例如，已知以高親和カ與特定膜蛋白結合的小的有機分子、肽、寡核苷酸、適體、抗體。靶膜蛋白是已知在靶細胞中表達的蛋白。典型地，靶膜蛋白將相對于正常或非靶組織優先在靶細胞上表達或當與非靶細胞相比時在靶細胞中被上調。受體靶標的實例包括，但不限于ACPP(酸性磷酸酶、前列腺磷酸酶)、ADAM10(ADAM金屬肽酶域10)、肽酶ADAM15(ADAM金屬肽酶域15肽酶)、FNl(纖連蛋白1)、F0LH1(前列腺特異性膜抗原I)、肽酶GNA12(鳥嘌呤核苷酸結合蛋白a12)、HRAS(Harvey大鼠肉瘤病毒致癌基因同系物酶)、KLK3(激肽釋放酶相關的肽酶3肽酶)、MMP3(基質金屬肽酶3肽酶)、MMP13(基質金屬肽酶13肽酶)、OCLN(閉鎖蛋白酶)、SILV(銀同系物(小鼠)酶)、整合素、VEGF(血管內皮生長因子)、VEGFR-1(血管內皮生長因子受體I)、VEGFR-2、TGF-a(轉化生長因子-a)、PDGF(血小板衍生生長因子)和其他的。[0041]根據實施方案，納米復合物分子的靶向劑可針對靶細胞，諸如癌細胞。前列腺特異性靶向劑的實例包括在國際專利公布號W02010/108125中鑒定的那些劑，并通過引用并入本文。`[0042]在實施方案中，靶細胞是表達PSMA的去勢難治性PC，且靶向劑是(2-(3-[1_羧基-5-[7-(2,5-二氧-吡咯燒-1-基氧擬基)-庚酸氨基]-戍基]-服基)-戍二酸，其以聞親和カ與PSMA結合(J.Med.Chem.，200444:298-301)。還可使用結合PSMA的其他劑，包括例如見于(Clin.CancerRes.,200814:3036-43)中的那些劑。通常，通過向預先形成的尿素中順序添加組分制備化合物，諸如在Banerjee等人(J.Med.Chem.第51卷,第4504-4517頁，2008)中描述的賴氨酸-尿素-谷氨酸化合物。也可使用其他基于尿素的化合物作為構件。[0043]通過不同組分之間的反應組裝化合物以形成連鍵(linkage)諸如尿素(-NRC(O)NR-)、硫脲(-NRC(S)NR-)、酰胺(-C(0)NR-或-NRC(0)-)或酷(-C(0)0-或-OC(0)-)?？赏ㄟ^胺和異氰酸酷、或胺與經活化的碳酰胺(-NRC(O)-)之間的反應容易制備尿素連鍵。從胺與異硫氰酸酯的反應可容易制備硫服。可通過胺和經活化的羧酸或酯諸如酰基鹵或N-羥基琥珀酰亞胺酯之間的反應容易制備酰胺(-C(0)NR-或-NRC(0)_)。例如，還可使用偶聯劑諸如碳化二亞胺或羰二咪唑(CDI)原位活化羧酸。可通過醇和經活化的羧酸之間的反應形成酷。通過疊氮化物和炔之間的反應，任選存在銅(Cu)催化劑容易制備三唑。[0044]如果需要，還可使用保護基團以在組裝化合物時保護反應基團。適合的保護基團和它們的去除，將是本領域普通技術人員容易利用的。[0045]以這種方法，可從單獨的構件諸如胺、羧酸和氨基酸容易制備化合物。[0046]根據實施方案，本發明提供了包含前體藥物部分、報告物部分、酶部分和靶向劑的納米復合物分子，其中，該前體藥物酶部分包含酶，該報告物部分包含與NIR染料連接的多聚-L-賴氨酸載體和用111In或Gd3+標記的連接至PEL=PEG共聚物的DOTA部分；且該靶向劑以高親和カ與靶細胞膜蛋白結合。在實施方案中，前體藥物酶部分包含酶細菌胞嘧啶脫氨酶(bCD)。[0047]在另ー個實施方案中，報告物部分包含與Cy5.5染料連接的多聚-L-賴氨酸載體。[0048]在另外的實施方案中，報告物部分包含用mIn標記的與PEI=PEG共聚物連接的DOTA部分。[0049]在又另ー個實施方案中，報告物部分包含用Gd3+標記的與PEI=PEG共聚物連接的DOTA部分。[0050]在另ー個實施方案中，靶向劑是對感興趣的靶細胞膜蛋白特異性的小分子或抗體。在另外的實施方案中，感興趣的靶細胞膜蛋白是PSMA。[0051]在本發明的實施方案中，基于谷氨酸-尿素-X(X是a-氨基酸衍生物)基序使用小分子以通過與PSMA的細胞外活性位點的靜電相互作用獲得納米復合物I的PSMA特異性保留。PSMA靶向部分的三個羧酸基團是用干與PSMA結合必需的，尿素提供與活性位點的Zn2+的相互作用。另外，添加3.4KD的PEG鏈以從納米復合物中分離靶向部分，由于靶向部分應到達PSMA內深處用于生產性結合。PEG鏈可以是任何適合的長度。根據實施方案，PEG鏈可具有約IKD至約5KD的`長度、優選約2KD至約4KD之間的長度。[0052]在又另ー個實施方案中，靶向劑是(2-(3-[1_羧基-5-[7-(2，5_二氧-吡咯燒-1-基氧羰基)_庚酰氨基]-戍基]-脲基)-戍二酸。[0053]在實施方案中，納米復合物分子的酶抑制劑是對靶細胞中過量表達的酶特異性的。在另ー個實施方案中，靶細胞是癌細胞、優選前列腺癌細胞、且更優選去勢-難治性前列腺癌細胞。[0054]在另外的實施方案中，酶抑制劑部分包含至少ー種多核糖核苷酸分子。在又另ー個實施方案中，至少ー種多核苷酸分子選自由以下組成的組:單鏈RNA、雙鏈RNA、微-RNA(miRNA)JS-發夾RNA(shRNA)、siRNA和/或其RNA類似物。[0055]在又另外的實施方案中，酶抑制劑抑制膽堿激酶(Chk)酶，且酶抑制劑是Chk特異性的siRNA。[0056]根據實施方案，本發明提供了包含ー種或多種本文描述的納米復合物分子和藥學上可接受的載體的藥物組合物。[0057]在另ー個實施方案中，本發明提供了包含ー種或多種本文描述的納米復合物分子、藥學上活性的化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。[0058]根據實施方案，本發明提供了調節宿主細胞或細胞群中靶基因的表達的方法，包括以足夠調節宿主細胞或細胞群中靶基因表達的量向細胞或細胞群施用本文描述的納米復合物分子或本文描述的藥物組合物。[0059]在另ー個實施方案中，當與非癌性細胞相比時，癌細胞中的靶基因被上調。[0060]根據實施方案，本發明提供了本文所描述的納米復合物分子以有效的量制備藥劑的用途，所述藥劑優選用作治療受試者中疾病的藥劑。[0061]在另ー個實施方案中，藥劑還包含藥學上可接受的載體。[0062]在另外的實施方案中，藥劑還包含第二治療劑。在又另ー個實施方案中，疾病是癌癥，且在優選的實施方案中，疾病是去勢-難治性的前列腺癌。[0063]如本文所用的，術語“聚合物、共聚物和衍生物”將被本領域普通技術人員所理解。多聚陽離子嵌段和接枝共聚物和它們的衍生物也可用于納米復合物，并包括，例如，聚こ二醇聚合物。在本發明中有用的嵌段共聚物的實例包括，PEI=PEG和其衍生物。[0064]此外，被理解的是可使用包含兩種或多種不同的多聚陽離子聚合物的多種實施方案以制備本發明的納米復合物分子。[0065]如本文所用的，用于本發明的多種實施方案的多聚陽離子聚合物，包括直鏈和支鏈聚合物及嵌段和接枝共聚物，是多聚陽離子聚合物的衍生物，其包括生物相容的聚合物(即，不會引起顯著的不想要的生理反應的聚合物)，其可以是生物可降解或非生物可降解聚合物或其共混物或共聚物。[0066]如本文所用的術語“生物可降解”，指的是在生物系統中降解，例如酶促降解或水解降解。[0067]如本文所用的術語“多核苷酸”，包括和/或與“核酸”、“寡核苷酸”和“核酸分子”同義，并通常指DNA或RNA聚合物，其可以是單鏈的或雙鏈的、合成的或從天然來源中獲取的(例如，分離和/或純化的)，其可包含天然的、非天然的或經改變的核苷酸，且其可包含天然的、非天然的或經改變的核苷酸間連鍵，諸如氨基磷酸酯連鍵或硫代磷酸酯連鍵，代替見于未修飾的寡核苷酸的核苷酸之間的磷酸二酷。`[0068]如本文所用的術語“多核糖核苷酸”，包括“核糖核酸”、“寡核糖核苷酸”和“核糖核酸分子”并通常指RNA聚合物，其可以是單鏈的或雙鏈的、合成的或從天然來源中獲取的(例如，分離和/或純化的)，其可包含天然的、非天然的或經改變的核苷酸，且其可包含天然的、非天然的或經改變的核苷酸間連鍵，諸如氨基磷酸酯連鍵或硫代磷酸酯連鍵，代替見于未修飾的寡核苷酸的核苷酸之間的磷酸二酷。在某些情況下，實施方案中核酸包含ー個或多個插入、缺失、倒位和/或替代可以是適合的。[0069]優選，本發明的核酸是重組體(recombinant)。如本文使用的,術語“重組體”指的是(i)通過將天然的或合成的核酸區段連接成核酸分子而在活細胞外構建的能夠在活細胞中復制的分子，或(ii)以上(i)中所描述的分子的復制產生的分子。為了本文的目的，復制可以是體外復制或體內復制。[0070]使用本領域已知的方法，基于化學合成和/或酶促連接反應可構建核酸。例如，可使用天然存在的核苷酸或經多種修飾g在增加分子的生物穩定性或增加雜交時所形成的雙鏈體的物理穩定性(例如，硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸)的核苷酸化學合成核酸?？杀挥糜诋a生核酸的經修飾的核苷酸的實例包括，但不限干，5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-こ酰胞嘧啶、5-(羧基羥甲基)尿嘧啶、5_羧甲基氨甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、^-D-半乳糖Q核苷、肌苷、N6-異戊烯腺嘌呤、1-甲基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-取代腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲基氨甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨甲基-2-硫尿嘧啶、P-D-甘露糖Q核苷、5’-甲氧基羧甲基尿嘧唳、5-甲氧基尿嘧唳、2-甲硫基-N6-異戍烯腺嘌呤、尿嘧唳-5-輕こ酸(V)、wybutoxosine、假尿嘧唳、Q核苷、2-硫胞嘧唳、5-甲基-2-硫尿嘧唆、2-硫尿嘧唆、4-硫尿嘧唆、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧基こ酸甲酯、3-(3-氨基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶和2，6-二氨基嘌呤。可選地，本發明的一種或多種核酸可從公司購得，諸如MacromolecularResources(FortCollins,CO)和Synthegen(Houston,TX)。[0071]在另ー個實施方案中，本發明提供了一種或多種納米復合物分子，其中多核糖核苷酸分子選自由以下組成的組:單鏈RNA、雙鏈RNA、微-RNA(miRNA)、短-發夾RNA(shRNA)和/或其類似物。[0072]被并入本發明的納米粒子的多核糖核苷酸可包含編碼感興趣的靶基因的任何核苷酸序列。在實施方案中，本發明提供了，多核苷酸在細胞或細胞群中、體外或宿主體內編碼感興趣靶基因的靶mRNA序列的互補序列。在另ー個實施方案中，多核苷酸是經分離或經純化的核酸，包含與任何靶核苷酸序列的核苷酸序列互補的核苷酸序列或在嚴格條件下與本文所描述的任何核酸的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。[0073]本發明還涉及用于使用小核酸分子通過RNAi調節感興趣的靶基因的表達和活性、或表達和/或活性的化合物、組合物和方法。如本文所用的，本發明特征為小核酸分子或多核糖核苷酸，并包含諸如siRNA、siNA,dsRNA、miRNA和shRNA分子的術語和被用于調節感興趣的靶基因表達的方法。[0074]本發明的多核糖核苷酸可以是未修飾的或經化學修飾的。本發明的多核糖核苷酸可以是化學合成的、從載體(vector)表達的或酶促合成的。本發明特征還為多種經化學修飾的多核糖核苷酸，包括，例如，能夠在細胞中通過RNAi調節重復擴增基因表達或活性的siRNA分子。使用經化學修飾的siRNA通過對體內核酸酶降解的增強的抗性和/或通過改進的細胞攝入改進天然siRNA分子的多種特征。`[0075]在一個實施方案中，本發明的多核糖核苷酸分子包含經修飾的核苷酸同時保持介導RNAi的能力。經修飾的核苷酸可被用于改進體外或體內特征，諸如穩定性、活性和/或生物利用率。例如，當多核糖核苷酸分子是siRNA分子時，本發明可包含經修飾的核苷酸作為siRNA分子中存在的核苷酸總數的百分數。如此，本發明的siRNA分子可通常包含約5%至約100%的經修飾的核苷酸(例如，5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%經修飾的核苷酸)。存在于給定siRNA分子中的經修飾的核苷酸的實際百分數將取決于存在于siRNA中的核苷酸的總數。如果siRNA分子是單鏈的，修飾百分比可基于存在于單鏈siRNA分子中核苷酸的總數。同樣地，如果siRNA分子是雙鏈的，修飾百分比可基于存在于有義鏈、反義鏈或有義鏈和反義鏈二者中的核苷酸的總數。[0076]如本文所用的術語“調節”指上調或下調靶基因的表達、或編碼ー種或多種靶蛋白或蛋白亞基的RNA分子或等效的RNA分子的水平、或ー種或多種蛋白或蛋白亞基的活性，以致表達、水平或活性大于或小于不存在調節劑時所觀察到的表達、水平或活性。例如，術語“調節”可以指“抑制”，但詞“調節”的使用不限于該定義。[0077]如本文所用的術語“抑制”、“下調”、“減弱”或“敲低”指減弱靶基因的表達、或編碼ー種或多種靶蛋白或蛋白亞基的RNA分子或等效的RNA分子的水平、或一種或多種靶蛋白或蛋白亞基的活性至低于不存在本發明的多核糖核苷酸分子(例如，siRNA)時所觀察到的表達、水平或活性。在實施方案中，用siRNA分子的抑制、下調或減弱低于存在非活性或減弱的分子時所觀察到的水平。在另ー個實施方案中，用siRNA分子的抑制、下調或減弱低于存在例如具有亂序的序列或具有錯配的siRNA分子時所觀察到的水平。在另ー個實施方案中，本發明的核酸分子對靶基因表達的抑制、下調或減弱在存在該核酸分子時大于其不存在吋。[0078]根據本發明的實施方案，將納米復合物分子暴露于宿主細胞、細胞群或受試者的時間的量應足夠長以實現宿主細胞、細胞群或受試者中基因“敲低”或調節靶基因表達。獲得預期效果的時間隨劑量、靶標、年齡和本領域技術人員已知的其他因素而不同。通常，將納米復合物分子暴露于宿主細胞、細胞群或受試者的時間應在從約I小時至約120小時、優選從約I小時至約48小時、更優選從約I小時至約24小時的范圍。[0079]“靶酶”指的是編碼RNA的核酸，例如，包括，但不限于，編碼在靶細胞中具有酶促活性的多肽的基因的核酸序列。靶酶可以由源自細胞的基因、內源基因、轉基因或外源基因諸如病原體基因所編碼，所述病原體例如，在其感染之后存在于細胞中的病毒。[0080]如本文所用的，術語“互補性”或“互補的”指的是可通過傳統的沃森-克立克或其他非傳統的類型與另ー個核酸序列形成氫鍵的核酸。提及本發明的多核糖核苷酸分子，核酸分子與其互補序列的結合自由能足夠允許核酸進行相關功能，例如，RNAi活性。核酸分子的結合自由能的確定是本領域眾所周知的(見，例如，Turner等人，1987,CSHSymp.Quant.Biol.LII第123-133頁；Frier等人，1986,Proc.Nat.Acad.Sc1.USA83:9373-9377；Turner等人，1987,J.Am.Chem.Soc.109:3783-3785)?；パa性百分比顯不可與第二核酸序列形成氫鍵(例如，沃森-克立克堿基配對)的核酸分子中連續殘基的百分數(例如，第一寡核苷酸中總數為10個核苷酸中的5、6、7、8、9或10個核苷酸與具有10個核苷酸的第二核酸序列堿基配對分別代表50%、60%、70%、80%、90%和100%互補)。[0081]如本文所用的，術語“RNA”指包含至少ー個核糖核苷酸殘基的分子?！昂颂呛塑账帷敝傅氖窃赑-D-核糖-呋喃糖部分的2’位置處具有羥基的核苷酸。術語“RNA”、“核糖核苷酸”和“多核糖核苷酸”還包括雙鏈RNA、單鏈RNA、被分離的RNA諸如經部分純化的RNA、基本上純的RNA、合成的RNA、重組產生的RNA、和通過添加、缺失、替代和/或改變ー個或多個核苷酸不同于天然存在的RNA的經改變的RNA。此改變可包括添加非核苷酸物質，諸如在siRNA的末端或內部，例如，在RNA的一個或多個核苷酸處。本發明的RNA分子中的核苷酸還可包含非標準的核苷酸，諸如非天然存在的核苷酸或經化學合成的核苷酸或脫氧核苷酸。這些被改變的RNA可被稱為類似物或天然存在的RNA的類似物。[0082]在另外的實施方案中，本發明提供了一種或多種納米復合物分子，其中酶抑制劑部分包含雙鏈RNA分子或siRNA。siRNA分子的長度可以是大于約IObp的任何長度，其能夠結合細胞或細胞群的胞質溶膠中感興趣的靶基因的mRNA上的其互補序列。siRNA的長度可以約20bp至約50bp,包括,例如，20bp、25bp、30bp、35bp、40bp、45bp直至并包括50bp。[0083]所預期的是以上所描述的本發明的任何納米復合物分子實施方案還可包含藥物組合物，所述藥物組合物包括納米復合物分子和藥學上可接受的載體。[0084]關于本文所描述的納米復合物分子，載體可以是傳統上所使用的任何載體，并僅被物理化學考慮所限制，諸如溶解性和缺少與活性化合物的反應性，并被施用途徑所限制。本文所描述的載體，例如，媒介物、佐劑、賦形劑和稀釋劑，是本領域技術人員眾所周知的并是公眾容易可得的。優選的載體是對活性劑是化學惰性的載體，和在使用條件下具有小的或不具有有害副作用或毒性的載體。載體的實例包括可溶性載體諸如可以是生理上可接受的已知緩沖液(例如，磷酸鹽緩沖液)和固體組合物諸如固態載體或乳膠珠。[0085]本文所使用的載體或稀釋劑可以是用于固體制劑的固體載體或稀釋劑、用于液體制劑的液體載體或稀釋劑、或其混合物。[0086]固體載體或稀釋劑包括，但不限于，樹膠、淀粉(例如，玉米淀粉、預膠凝淀粉)、糖(例如，乳糖、甘露醇、蔗糖、右旋糖)、纖維素物質(例如，微晶纖維素)、丙烯酸酯(acrylate)(例如，聚丙烯酸甲酯(poIymethyIaeryIate))、碳酸韓、氧化鎂、滑石或其混合物。[0087]關于液體制劑，藥學上可接受的載體可以是，例如，水或非水溶液或懸浮液。非水溶劑的實例是丙二醇、聚乙二醇和可注射的有機酯諸如油酸乙酯。水載體包括，例如，水、醇/水溶液、環糊精、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩沖介質。[0088]腸胃外媒介物(用于皮下、靜脈內、動脈內或肌內注射)包括，例如，氯化鈉溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸林格氏液和不揮發油。適于腸胃外施用的制劑包括，例如，水和非水的、等滲無菌注射溶液，其可包含抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑和使得制劑與預期接受者的血液等滲的溶質、和水和非水無菌懸浮液，其可包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑和防腐劑。[0089]靜脈內媒介物包括，例如，液體和營養補充劑、電解質補充劑諸如基于林格氏右旋糖的補充劑和類似的補充劑。實例是無菌液體，諸如具有或不具有表面活性劑和其他藥物上可接受的佐劑的添加的水和油。通常，水、鹽水、右旋糖水溶液和相關糖溶液和二醇諸如丙二醇或聚乙二醇是優選的液體載體，特別是用于可注射的溶液。[0090]載體的選擇將部分由特定的納米復合物分子所決定，并由用于施用該組合物的具體方法決定。因此，具有本發明的藥物組合物的多種適合的制劑。下面用于腸胃外、皮下、靜脈內、肌內、動脈內、鞘內和腹膜內施用的制劑是示例性的，并不以任何方式限制。不止一種途徑可被用于施用本發明的組合物，`且在某些情況下，特定的途徑可提供比另一種途徑更即時且更有效的響應。[0091]可注射的制劑是根據本發明。對用于可注射組合物的有效的藥物載體的要求是本領域普通技術人員眾所周知的(見，例如，PharmaceuticsandPharmacyPractice,J.B.LippincottCompany,Philadelphia,PA,Banker和Chalmers,eds.，第238-250頁(1982),和ASHPHandbookonInjectableDrugs,Trissel,第15版，第622-630頁(2009))。[0092]如本文所用的術語“藥學上活性的化合物”或“治療上活性的化合物”指可用于治療或調節患有疾病或病癥的受試者中的疾病或病癥的化合物。藥學上活性的化合物的實例可包括本領域已知用于治療疾病適應癥的任何藥物。藥學上活性的化合物的特定實例是化學治療劑。[0093]如本文使用的術語“化學治療劑”和起源于其的詞，通常包括通過干擾癌細胞中DNA合成或功能起作用的藥學上或治療上活性的化合物?；谒鼈冊诩毎降幕瘜W作用，化學治療劑可被分為細胞周期特異性劑(在細胞周期的某些階段有效)和細胞周期非特異性劑(在細胞周期的所有階段有效)。不被任何特定實例所限制，化學治療劑的實例可包括烷化劑、血管生成抑制劑、芳香酶抑制劑、抗代謝物、蒽環類、抗腫瘤抗生素、單克隆抗體、鉬、拓撲異構酶抑制劑和植物生物堿。[0094]為了本發明的目的，被施用的本發明的納米復合物分子的量或劑量應足夠有效靶向體內細胞或細胞群，以致經過合理的時間范圍受試者中感興趣的靶酶的表達的調節和納米復合物分子的細胞毒性可被檢測。將通過特定納米粒子制劑的效力和受試者中靶細胞群的位置及待被治療的受試者的體重確定劑量。[0095]本發明的納米復合物分子的劑量還將通過可能伴隨特定納米粒子的施用的任何不良副作用的存在、性質和程度被確定。典型地，主治醫生將考慮到各種因素，諸如年齡、體重、總體健康、飲食、性別、待被施用的化合物、施用途徑和待被治療的病癥的嚴重程度，決定用于治療每ー個個體受試者的納米復合物分子的劑量。以實例說明，且不預期限制本發明，本發明的納米復合物分子的劑量可以是約0.001mg/kg至約1000mg/kg待被治療的受試者體重、從約0.01mg/kg至約100mg/kg體重、從約0.lmg/kg至約10mg/kg體重和從約0.5mg/kg至約5mg/kg體重。在另ー個實施方案中，本發明的納米復合物分子的劑量可以是從約InM至約10，000nM、優選從約IOnM至約5，000nM、更優選從約IOOnM至約500nM的濃度。[0096]如本文所用的術語“治療”和“預防”和源自其的詞，不必然暗示100%或完全治療或預防。而是，存在本領域普通技術人員將認識其作為具有潛在益處或治療效果的治療或預防的不同的度。在這方面，本發明的方法可提供哺乳動物中癌癥的任何級別的治療或預防的任何量。此外，由本發明方法提供的治療或預防可包括待被治療或預防的疾病，例如，癌癥的ー種或多種病癥或癥狀的治療或預防。并且，為了本文的目的，“預防”可包含延遲疾病或其癥狀或病癥的發作。[0097]本發明還提供了包含本文所描述的任何納米復合物分子的宿主細胞。如本文所用的，術語“宿主細胞”指可包含本發明的納米粒子的任何類型的細胞。宿主細胞可以是真核細胞，例如，植物、動物、真菌或藻類。宿主細胞可以是培養的細胞或原代細胞，即，從生物體例如人直接分離。宿主細胞可以是粘附細胞或懸浮細胞，即，生長在懸浮液中的細胞。適合的宿主細胞是本領域已知的`并包括，例如，HeLa細胞(人上皮宮頸癌細胞系)、D407細胞(人視網膜色素上皮細胞系)、中國倉鼠卵巢細胞、猴VERO細胞、COS細胞、HEK293細胞、PC-3-PIP細胞和類似的細胞。為了調節細胞中感興趣的靶基因表達的目的，宿主細胞優選是哺乳動物細胞。最優選，宿主細胞是人細胞。適合的人宿主細胞的實例可包括，但不限干，身體主要器官的細胞，包括，例如，肺細胞，包括肝細胞和肝星狀細胞，乳腺細胞，前列腺細胞，角膜細胞，包括角膜上皮細胞，肺細胞，包括肺上皮細胞，和腦細胞，諸如神經細胞。盡管宿主細胞可以是任何細胞類型、可源自任何類型的組織并可以是任何發育階段，宿主細胞優選為癌細胞，具體前列腺癌細胞。[0098]細胞群可以是異質群體，包含含有所描述的任何納米復合物分子的宿主細胞，以及至少ー種其他細胞，例如不包含任何納米粒子的宿主細胞(例如，上皮細胞)或除了上皮細胞之外的細胞，例如，巨噬細胞、嗜中性粒細胞、紅細胞、肝細胞、肝星狀細胞、內皮細胞、上皮細胞、肌細胞、腦細胞等?？蛇x地，細胞群可以是基本上同質群，其中該群主要包含(例如,基本上由其組成)含有納米復合物分子的宿主細胞。[0099]根據本發明的實施方案，用于治療受試者中的疾病的藥劑可包含藥學領域中已知的許多不同的制劑，包括，例如，靜脈內和緩釋制劑。關于本發明的方法，疾病可包括癌癥。癌癥可以是任何癌癥，包括任何急性淋巴細胞癌、急性骨髄性白血病、腺泡狀橫紋肌肉瘤、骨癌、腦癌、乳腺癌、肛門、肛管或肛門直腸的癌、眼癌、肝內膽管癌、關節癌、頸部、膽囊或胸膜的癌、鼻、鼻腔或中耳的癌、口腔癌、外陰癌、慢性淋巴細胞白血病、慢性髓細胞癌、結腸癌、食管癌、宮頸癌、胃腸類癌瘤。霍奇金淋巴瘤、咽喉癌、腎癌、喉癌、肝癌、肺癌、惡性間皮瘤、黑色素瘤、多發性骨髄瘤、鼻咽癌、非霍奇金淋巴瘤、卵巣癌、胰腺癌、腹膜、網膜和腸系膜的癌、咽癌、前列腺癌、直腸癌、腎癌(例如，腎細胞癌(RCC))、小腸癌、軟組織癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、輸尿管癌和膀胱癌。優選地，癌癥是前列腺癌。[0100]利用多種靶向部分，本發明的納米復合物分子在制備用于治療其他癌癥的藥劑中是有用的。本領域普通技術人員可確定何種靶向分子應被用于不同的癌癥適應癥。[0101]如本文所定義的，在一個或多個實施方案中，“施用”指將本發明的ー種或多種納米復合物分子引入試管、燒瓶、組織培養物(tissueculture)、芯片、陣列、平板、微板、毛細管或類似的裝置中的具有至少ー個細胞或細胞群、具有感興趣的靶基因、和適當的酶或試劑的樣品中，并以足夠允許將本發明的至少ー個納米復合物分子攝入胞質溶膠的溫度和時間被孵育，在那里，其將與至少ー個細胞或細胞群中感興趣的靶酶的mRNA結合并減弱靶酶的表達，同時還向細胞提供當5-FC被施用至細胞時將轉化5-FC為5-FU的bCD。[0102]在另ー個實施方案中，術語“施用”指將本發明的至少ー個或多個納米復合物分子引入受試者，優選接受用于疾病的治療的受試者，并允許至少ー個或多個納米復合物分子與具有感興趣的靶基因的ー個或多個疾病相關細胞或細胞群體內接觸。[0103]如本文所用的，術語“治療”及源自其的詞，包括診斷和預防性及疾患減輕(remitative)治療。[0104]如本文所用的，術語“受試者”指的是任何哺乳動物，包括，但不限于，嚙齒目(Rodentia)哺乳動物，諸如小鼠和倉鼠，和兔形目的哺乳動物，諸如兔。優選的哺乳動物來自食肉目(Carnivora),包括貓科動物(Felines)(貓)和犬科動物(Canines)(狗)。更優選的哺乳動物來自偶蹄目(Artiodactyl`a),包括?？苿游?Bovines)(牛)和豬科動物(Swines)(豬(pig))或奇蹄目，包括馬科動物(Equines)(馬)。最優選的哺乳動物是靈長目、四足猴目(Ceboids)或猴目(Simoids)(猴)或類人猿目(Anthropoids)(人和猿)。特別優選的哺乳動物是人。[0105]在另外的實施方案中，本發明的納米復合物分子可與已知能夠治療以上所討論的病癥或疾病的ー種或多種另外的治療活性劑組合被使用。例如，所描述的本發明的納米粒子可與ー種或多種已知的治療活性劑組合被使用以治療疾病或病癥。能夠在藥物組合物中與本發明的納米復合物分子容易組合的其他治療活性劑的非限制性實例是酶促核酸分子、變構的核酸分子、反義核酸分子、誘館(decoy)核酸分子或適體核酸分子、抗體諸如單克隆抗體、小分子和其他有機和/或無機化合物，包括金屬、鹽和離子。實施例[0106]合成.根據我們先前所描述的制備bCD(23，24)。圖1中概述了納米復合物的簡要合成途徑。首先，產生了低分子量的基于尿素的PSMA結合剤/抑制劑(PI)(2-(3-[l-羧基-5-[7-(2，5-二氧-吡咯烷-1-基氧羰基)-庚酰氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸；分子量572.56)，即，官能化的靶向部分的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)酯。將P1-NHS與馬來酰亞胺-PEG-NH2(3.4kDa；Company(Nanocs.1nc.，NY))綴合以形成P1-PEG-馬來酰亞胺。以10:1摩爾比的SATP=PEI將N-琥珀酰亞胺基-S-乙酰硫代丙酸鹽(SATP)(Pierce，Rockford,IL)綴合至PEI(SigmaMilwaukee,WI)(25kDa)并隨后還原SATP部分以形成自由的巰基基團。該巰基和P1-PEG-馬來酰亞胺之間的反應產生P1-PEG-PEI(化合物3)。使用先前所描述的內部合成(25)用NHS-若丹明(SigmaMilwaukee,WI)和NHS-DOTA標記化合物3以形成化合物4。在乙酸鈉緩沖液(pH=~4.6-5.5)中將化合物4與111InCl3反應以形成111In標記的PEI(化合物5)。在pH8.4的HEPES緩沖液中將放射活性化合物與琥拍酰亞胺基4-甲酰基苯甲酸酯(SFB)(Pierce,Rockford,IL)綴合以形成化合物6。用Cy5.5-NHS(GEHealthcare,Piscataway,NJ)、SATP和6_丙酮腙基煙酸琥拍酰亞胺酯(SANH)(Pierce,Rockford,IL)標記PLL(多聚-L-賴氨酸)(SigmaMilwaukee,WI)(~20kDa)以產生化合物7。6和7在pH7.4時的綴合產生PE1-PLL共聚物，還原其以形成包含自由巰基基團的化合物8。用N-[e_馬來酰亞胺己?；?_琥拍酰亞胺酯(N-[e_Maleimidocaproyloxy)-succinimideester)(EMCS)(Pierce,Rockford,IL)處理bCD產生9。通過馬來酰亞胺和巰基的反應交聯等摩爾量的9和8以提供b⑶-PLL-PEI(化合物10)。最后，10與siRNA結合產生PSMA-靶向的bCD-PLL-PEI/siRNA納米復合物，稱之為納米復合物I。我們還合成了納米復合物2作為非靶向的對照試劑，其與納米復合物I相同但不具有PSMA-靶向部分。納米復合物I和2的最終結構在圖2中顯示。[0107]在合成過程中，如先前所描述的通過在279nm處若丹明(附著在PEI上)、Cy5.5(附著在PLL上)和bCD的吸收系數測量PEI和PLL的量(ACSNan0.，20104:6707-16)。PE1:PLL:b⑶的最終摩爾比為:1:1.1:1.1。使用尺寸排阻色譜以確定納米復合物的分子量為375kDa。納米復合物的縱向尺寸和ζ電勢分別為65nm和1.6mV，如通過動態光散射(DLS)所測量的。將胞嘧啶和5-FC用作底物以評價前體藥物酶的活性。通過監測飽和底物濃度的胞嘧啶對5-FC的吸光度變化確定動力學常數，如我們先前所報道的(Id.)。發現納米復合物I具有與對天然bCD所發現的對兩種底物的Km值相似的Km值。那些結果顯示bCD與PE1-PLL的綴合沒有妨礙bCD的功能。電泳凝膠遷移率變動分析顯示納米復合物I在50的N/P比下保持與siRNA強結合。[0108]siRNA.針對人ChkmRNA的siRNA-Chk雙鏈體(有義:5’-CAUGCUGUUCCAGUGCUCCUU-3，(SEQIDNO:1)和反義:5’-GGAGCACUGGAACAGCAUGUU-3，(SEQID勵:2))和亂序的8丨1?嫩從01^1'11^(3011(1^€376憂6，CO)購得并使用他們的0N-TARGETplus程序設計。[0109]細胞培養.經轉染過量表達PSMA的人PCPC3細胞(PC3-PIP)或用單獨的質粒轉染的人PCPC3細胞(PC3_Flu)獲自WarrenHeston博士(ClevelandClinic,Cleveland,0H)。將細胞保持在37°C/5%C02的潮濕培養箱中補充10%胎牛血清的RPMI1640(Invitrogen,GrandIsland,NY)中。[0110]體外細胞培養研究.通過MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)檢驗(Sigma,Milwaukee,WI)評價納米復合物的細胞毒性。在處理之前，將96-孔板中的PC3-PIP細胞(2父103細胞/孔)在1?^11640中孵育24小時。為了評價由Chk下調所引起的治療效力，用納米復合物I處理細胞(N/P=50，80nMsiRNA/350nM納米復合物I)。為了檢測前體藥物策略的治療效力，用不具有siRNA的納米復合物I(350nM)處理細胞并添加5-FC(3mM)。為了評價siRNA和前體藥物策略的組合治療效力，用納米復合物I(N/P=50,80nMsiRNA/350nM納米復合物I)處理細胞并添加5-FC(3mM)。[0111]共聚焦激光掃描熒光顯微術.用不同濃度的納米復合物I或2處理細胞2小時，隨后用PH7.4的PBS緩沖液洗滌3次。使用乙醇/乙酸/甲醛(85/5/10)溶液固定經處理的細胞，隨后，用DAPI(4’，6-二脒基-2-苯基吲哚)持續5分鐘染色細胞核。在ZeissLSM510META共聚焦激光掃描顯微鏡(CarlZeiss,Inc.0berkochen,Germany)上產生PC3-PIP和PC3-Flu細胞的熒光顯微圖像。分別使用λex=543nm和λem=560nm和λex=405nm和λem=420-480nm濾波設置獲得若丹明和DAPI熒光圖像。[0112]PC3-PIP細胞的免疫印跡分析.用不同濃度的納米復合物持續24小時處理PC3-PIP細胞，隨后，用冷PBS緩沖液洗滌3次之后收集細胞。使用具有蛋白酶抑制劑混合物(1/500,Sigma,St.Louis,MO)、二硫蘇糖醇(1/1，000,IM原液)、苯甲基磺酰氟(1/200，0.2M原液)、原釩酸鈉(1/500，0.5M原液)和氟化鈉(1/500，0.5M原液)的RIPA緩沖液提取蛋白。將約100μg的蛋白在10%SDS-PAGE上分離、轉移至硝酸纖維素膜、并用針對PSMA的小鼠單克隆抗體(Abeam,Cambridge,MA，USA)或用針對Chk的定制的多克隆抗體(ProteintechGroup,Inc.,Chicago,IL)進行探測，如先前所描述的(CancerRes.,200565:11034-43)。以1/2，000稀釋度使用適當的辣根過氧化物酶(HRP)綴合的第二抗體驢抗-小鼠抗體。使用1/1,000的針對GAPDH的小鼠單克隆抗體(Sigma,St.Louis,MO)作為上樣對照。使用SuperSignalWestPico化學發光底物試劑盒(PierceBiotechnology,Inc.,Rockford,IL)顯影免疫印跡。通過免疫印跡分析直觀評價處理之前和之后細胞中瘤內Chk水平。[0113]小鼠模型和腫瘤植入.所有的體內研究按照InstitutionalAnimalCareandUseCommitteeofTheJohnsHopkinsUniversity所建立的指南進行。將PC3-PIP和?〇34111人？0&細胞(2父1`06細胞/小鼠)皮下接種至嚴重聯合免疫缺陷型(SCID)雄性小鼠中。植入后一周內腫瘤是可觸知的并在三周內達到約300mm3至400mm3的體積，此時將它們用于實驗。在免疫活性Balb/C小鼠中執行免疫原性和毒性研究。[0114]SPECT/CT顯像.用經[mIn]D0TA-放射標記的納米復合物I執行具有PC3-PIP和PC3-F1U腫瘤的SCID小鼠的SPECT顯像(770±208μCi，靜脈注射0.2mlPBS中150mg/kg劑量，n=4)。將專用的小動物SPECT/CT系統(GammaMedicaX-SPECT,Northridge,CA)用于圖像采集。用170-250keV的能量窗在注射后48小時采集SPECT/CT圖像。以40s/投影，在64次投影中360度采集斷層攝影數據。在SPECT之后，以512次投影采集CT圖像。使用有序子集期望最大化(OS-EM)算法重建數據并使用AMIDE軟件(SourceForge；sourceforge.net/projects/amide/)分析數據。為了計算所積累的放射活性的量，將圖像歸一化至所注射的劑量并在整個腫瘤上畫出感興趣的區域。[0115]體內MRS.在所有MR研究之前，用腹腔注射的氯胺酮(25mg/kg)和乙酰丙嗪(2.5mg/kg)的混合物麻醉具有PC3-PIP腫瘤的小鼠。使用放置在腫瘤附近的螺管線圈在9.4TBrukerBiospec光譜儀(BrukerBiospinC0.，Billerica,MA)上顯像經麻醉的小鼠。通過恒溫調節的加熱墊保持磁體中動物的體溫。[0116]體內1HMRS.使用二維(2D)化學位移顯像(CSI)序列執行MRSI。使用自旋回波序列采集來自腫瘤的4mm厚的中心切片的參考圖像。使用具有VAPOR水抑制和以下參數的2DCSI程序在1_XImm每像素的平面分辨率下在相同的4mm厚的中心切片上執行水抑制的MRSI:120ms的回波時間(TE)、1000ms的重復時間(TR)、1.6cmX1.6cm的視野、16(16X16矩陣)的相位編碼步、掃描次數(NS)4、塊大小512和7，OOOHz的掃探寬度。在不具有水抑制、TE=20ms和NS=I且所有其他參數保持相同的情況下還在相同的切片上采集了水MR光譜圖像。使用內部IDL程序從MRSI數據集產生3.2ppm的總的包含膽堿的化合物(totalcholinecontainingcompound,tCho)信號和4.7ppm的水信號的光譜圖像。在免費軟件NIH程序ImageJ(rsbweb.nih.gov/ij/)中輸入這些圖像用于分析。[0117]體內19FMRS.使用可調至1H或19F頻率的螺管線圈進行所有19FMRS實驗。典型地，在5-FC(450mg/kg)注射之后，將經麻醉的小鼠(n=3)放置在塑料托架上以允許將腫瘤定位在RF線圈中。在水質子信號勻場之后，使用一個脈沖序列每30分鐘一次、持續110分鐘采集來自腫瘤的連續的19F核MR光譜(翻轉角，60°;重復時間，0.8s;平均次數，2000;譜寬，10kHz)。用由D.Shungu博士(CornellUniversity,NewYork,NY)開發的內部XsOs核磁共振軟件處理19FMR光譜。將5-FU共振的化學位移設置為Oppm。[0118]阻斷實驗和離體光學顯像研究.關于結合特異性(阻斷)研究，將0.05ml體積的PBS中100iig的抗-PSMA小鼠單克隆抗體(CloneGCP-05,Abeam,Cambridge,MA)靜脈注射入具有PC3-PIP和PC3-F1U腫瘤的小鼠中。抗體注射之后5小時，將1.5mg的納米復合物I(75mg/kg)靜脈注射入相同的小鼠。納米復合物注射之后48小時處死小鼠。切下腫瘤、肌肉和腎并在IVISCaliperSpectrum光學掃描儀(CaliperLifeSciences,Hopkinton,MA)上獲得光學圖像。將Cy5.5激發(615-665nm)和發射(695-770nm)濾波設置用于采集Cy5.5熒光數據。使用入ex=615-665nm和入em=695-770nm濾波設置、Is曝光時間采集Cy5.5熒光圖像，且將熒光強度標為Ps-1CnT2Sf1的単位。[0119]血液分析.通過JohnsHopkinsPhenotypingandPathologyCore執行所有血液分析。對150mg/kg納米復合物I注射后48小時的小鼠血清執行丙氨酸轉氨酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)、肌酸酐和血尿素氮測量。關于免疫原性研究，對來自每3天一次、共三次注射的靜脈注射150mg/kg`納米復合物I的免疫活性Balb/C小鼠的肝素化血液樣品執行血細胞計數。用以10mg/kg劑量的菲立磁(Feridex)(AdvancedMagneticsInc.，Cambridge,MA)注射菲立磁的免疫活性的小鼠作出另外的比較,該濃度處于臨床前研究中所使用的典型的濃度范圍中，注射方案與用于納米復合物的相同。[0120]實施例1[0121]納米復合物I的細胞表征.為了評價納米復合物I對PSMA的特異性，應用激光熒光共聚焦顯微鏡顯像以研究納米復合物I和2在PC3-Flu(PSMA陰性)和PC3-PIP(PSMA陽性)細胞中的攝取(數據未顯示)。孵育2小時之后，PC3-PIP中5nM的納米復合物I的攝取是高的而PC3-PIP中5nM的納米復合物2的攝取要低得多。當過量的PMPA(2-膦?；谆於?被添加以阻斷PSMA吋，納米復合物I在PC3-PIP細胞中的攝取降低至與納米復合物2的攝取相似的水平。當將納米復合物I或2添加至具有低PSMA表達的PC3-F1U細胞，攝取則低。當濃度減少至0.5nM時，僅當用具有PSMA-特異性結合的納米復合物I處理PC3-PIP細胞時才觀察到熒光。[0122]MTT檢驗顯示低于2iiM濃度的納米復合物I對細胞活性幾乎沒有影響。用免疫印跡評價了與納米復合物I一起進入PC3-PIP細胞中的SiRNA的瞬時轉染遞送效率。如圖3A中顯示的，通過納米復合物Ι-siRNA復合物下調Chk取決于所使用的siRNA的濃度。24小時孵育之后，IOOnM濃度的siRNA-Chk(泳道3)相對于50ng或20ng(分別為泳道4和5)顯示Chk蛋白最大的下調，至幾乎不可檢測的水平。后兩種處理顯示Chk蛋白水平保持與不具有siRNA或具有亂序的siRNA處理下所見到的Chk蛋白水平相似的水平(分別為泳道I和2)。[0123]在圖3B中呈現PC3-PIP細胞中siRNA、前體藥物和組合治療的治療效力。用單獨的納米復合物I(350nM)，在整個72小時孵育階段細胞活性保持在95%之上。用結合至納米復合物I的siRNA-Chk(350nM納米復合物，80nMsiRNA,N/P=50)，在孵育24小時之后細胞活性下降約65%且在孵育48小時和72小時之后下降至小于60%。當細胞與350nM的具有3mM5-FC但不具有siRNA的納米復合物I持續1_3天孵育時，24小時之后細胞活性減少至約40%、48小時之后減少至25-30%且72小時減少至近20%。最后，當將細胞用與80nMsiRNA加3mM5-FC復合的350nM的納米復合物I孵育時，24小時后細胞活性的降低為30%，其顯著低于在這個時間點單獨使用的任一治療。還在48小時觀察到該趨勢但至72小時時間點時在用單獨的5-FC處理和組合處理之間的活性中無顯著差異。這最可能是歸因于由于將細胞較長地暴露于5-FU而降低細胞活性和至72小時時siRNA下調Chk的減弱的組合，導致用單獨的5-FC處理的細胞和用siRNA和5-FC處理的細胞的細胞活性值的趨同。[0124]實施例2[0125]PSMA過量表達的腫瘤中靶向納米復合物的較高的特異性攝取.PC3-PIP和PC3-F1U細胞提取物的免疫印跡分析證實了PSMA的差異表達，如在圖4A中代表性的免疫印跡中所顯示的。從具有PC3-PIP和PC3-F1U腫瘤的小鼠中獲得的SPECT/CT圖像顯示PSMA-過量表達的PC3-PIP腫瘤中與PC3-F1U腫瘤相比靶向納米復合物的顯著較高的攝取(圖4B和4C)。為了證實該攝取的特異性，通過在注射納米復合物I之前5小時注射針對PSMA的抗體執行阻斷實驗。在具有PC3-PIP和PC3-F1U腫瘤的小鼠中不具有或具有PSMA阻斷的組織切片上執行的光學顯像分析顯示與PC3-F1U相比，PC3-PIP腫瘤中增加的攝取，該攝取被阻斷降低，證實通過SPECT顯像所獲得的體內結果(圖4D)。[0126]實施例3[0127]Chk抑制和活性的體內評價.為了評價siRNA-Chk下調Chk的效力，我們在納米復合物I施用之后48小時采集了PC3-PIP腫瘤的體內1HMRSI。我們觀察到tCho信號的顯著減弱，如在圖5A-5D中所顯示的。在注射之前，檢測到tCho遍及每一個腫瘤的大部分。然而,注射之后48小時內腫瘤中tCho顯著降低并主要定位于腫瘤周邊的薄邊緣。平均而言，在注射后48小時tCho水平降低至處理前值的約30%。此外，通過執行19FMRS,我們觀察到在注射后24小時和48小時前體藥物酶bCD仍然是有活性的，由于其在這段時間繼續將前體藥物5-FC轉化為5-FU(圖5E)。[0128]實施例4[0129]毒性和免疫原性的評價.執行ALT、AST、肌酸酐和血尿素氮測量以評價納米復合物的肝和腎毒性(圖6A-6B)。在注射納米復合物I的處理組和注射PBS的對照組之間沒有觀察到這四個參數的顯著差異。我們還通過測量三次重復注射之后的白細胞計數研究了納米復合物I的免疫原性(圖6C)。注射之后總的白細胞(WBC)計數沒有增加。相反，我們觀察到WBC的下降。這主要因為淋巴細胞數量的下降，盡管值保持在正常范圍內(0.9-9.3百萬/ml)。紅細胞和血小板沒有受到納米復合物注射的影響(圖6D)。我們比較了納米復合物注射的效果與由菲立磁的相似注射所引起的效果。以所使用的劑量，發現菲立磁與納米復合物1相比顯著降低了血細胞計數并增加了血細胞比容(圖6C-6D)。[0130]實施例5[0131]盡管本發明的納米復合物分子能夠以相對高的濃度通過內吞作用進入細胞，細胞和體內結合特異性研究顯示PSMA靶向部分增強了表達PSMA的細胞和腫瘤中納米復合物的攝取。在過量表達PSMA的腫瘤中體內觀察到納米復合物I的增加的保留。進ー步的特異性的證據由阻斷研究提供，其中當事先施用抗-PSMA-抗體阻斷PSMA之后消除了差異保留。[0132]SPECT-CT顯像數據檢測到注射后48小時PC3-腫瘤中納米復合物I增加的積累。腫瘤血管結構較高的通透性提供了用于允許納米復合物大量泄漏入腫瘤中而不在正常組織中的自然選擇過程。然而，由于PSMA靶向部分的特異性，納米復合物I在PC3-PIP中的積累比在PC3-F1U腫瘤中高得多。從SPECT圖像中明顯看出納米復合物在肝中的顯著積累。另外，小鼠(但至比人腎的較低程度)腎表達PSMA。然而選擇的siRNA靶Chk的下調，并不影響非惡性細胞。另外，肝包含高水平的二氫嘧啶脫氫酶(DH))，其使得5-FU分解代謝為二氫氟尿嘧啶(DHFU)。這可解釋歸因于納米復合物的肝或腎毒性的不存在。[0133]發現由于其緩沖效果，支鏈PEI可被用作有效的siRNA遞送載體，其導致經內吞進入細胞質的siRNA的內涵體釋放。在ー個PEI分子表面上具有約10個PEG鏈。摩爾過量的PEG作為PSMA靶向部分和納米復合物之間的橋，并還在空間上屏蔽了PEI表面上的相對大的凈正電荷，否則正電荷可能阻礙PEI和納米復合物的功能。屏蔽正電荷通過PEI與血液及細胞組分的減弱的相互作用部分地降低了PEI的毒性。納米復合物的PEI與親水性PEG的綴合增加了IC5tl至不具有PEG修飾的納米復合物的IC5tl的約30倍。[0134]前體藥物酶bCD展示高穩定性并，重要地，用19FMRS無創檢測酶活性是可能的。本發明顯示bCD甚至在與PEI綴合之后還保持高活性。在實施方案中，選擇PLL作為PEI和bra之間的連接基以最小化PEI和bra之間的相互作用并因此保持bra活性。附著至納米復合物的bCD酶直至注射后48小時都是有活性的井能夠在這些實驗的整個時間過程中有效地將無毒的前體藥物5-FC轉化為有毒的5-FU。[0135]本發明的針對Chk的siRNA，引起tCho信號的減弱，其用1HMRSI是體內可見的。質子和19FMRS技術是無創的并容易向臨床轉化。此處，本發明顯示通過分別采集19F光譜和用1HMRSI采集tCho圖(map)無創評價腫瘤中5-FC至5-FU的轉化與下調Chk的效カ是可能的。[0136]為了安全地實現系統治療，重要的是控制毒性種類被遞送的部位-優先地在腫瘤內，留下正常的組織未被損傷。該控制通過本發明的納米復合物分子被實現，并能夠通過顯像測量納米復合物的遞送。對尋找轉移性疾病的有效治療還具有迫切需求，由于其通常變成治療難治的。本文所公開的并且攜帶多模式顯像報告物的靶向納米復合物分子與siRNA和前體藥物酶一起，對于癌癥的治療診斷顯像是有用的，所述癌癥包括，例如，轉移性PC。本發明的納米復合物分子提供了面對許多癌癥亞型的平臺技術和可選的治療靶標。使用siRNA下調特定的通路還提供了選擇性靶向癌細胞同時避開正常組織的難得的機會。本文描述的納米復合物分子平臺具有遞送多種siRNA的能力。本文描述的策略對下調多藥耐藥性通路或修復酶可以是有用的，目的是增加化學治療或放射治療的效力、安全性和效率。[0137]本文所引用的所有的參考文獻，包括出版物、專利申請和專利在此通過引用被并入，其程度如同每一個參考文獻通過引用單獨和特定被并入，且在本文完整地闡述。[0138]在描述本發明(特別是在以下的權利要求的上下文中)的上下文中術語“一(a)”和“一(an)”和“該(the)”和類似指示物的使用被解釋為包括單數和復數二者，除非本文另外說明或根據上下文明顯矛盾。除非另外注釋，術語“包含(comprising)”、"具有(having)”、“包括(including)”和“包含(containing)”被解釋為開放式的術語(B卩，指“包括，但不限于”)。除非本文另外說明，本文所列舉的值的范圍僅意圖作為分別提及落入該范圍的每一個單獨的值的速記方法，且每一個單獨的值如同本文分別列舉其一樣被并入本說明書。本文所描述的所有方法可以以任何適合的順序被執行，除非本文另外說明或另外根據上下文明顯矛盾。除非另外聲稱，本文提供的任何和所有實例或示例性語言(例如，“諸如”)的使用，僅意圖更好地闡述本發明并不造成對本發明范圍的限制。本說明書的任何語言都不應被解釋為表明任何未要求保護的要素對本發明的實施必不可少。[0139]本文描述了本發明的優選的實施方案，包括本發明人已知關于實施本發明的最佳實施方式。當閱讀前文描述后，那些優選的實施方案的變化形式將對本領域普通技術人員變得明顯。本發明人預期技術人員視情況采用此類變化形式，且本發明人打算本發明以除了如本文所特定描述的之外被實施。因此，本發明包括此處所附權利要求中所列舉的主題的適用法律所允許的所有的修改和等同物。此外，除非本文另外說明或另外根據上下文明顯矛盾，本發明包含以上所描述的要素`以其所有可能變化形式的任何組合。【權利要求】1.一種納米復合物分子，所述納米復合物分子包含:a)前體藥物酶部分；b)報告物部分；c)酶抑制劑部分；和d)革巴向劑。2.—種納米復合物分子，所述納米復合物分子包含前體藥物部分、報告物部分、酶部分和靶向劑，其中，所述前體藥物酶部分包含酶；所述報告物部分包含與染料連接的多聚-L-賴氨酸載體和用放射性同位素標記的連接至聚乙烯亞胺(PEI):聚乙二醇(PEG)共聚物的螯合劑；和所述祀向劑以高親和カ結合祀細胞膜蛋白。3.根據權利要求1或2中任一項所述的納米復合物分子，其中所述前體藥物酶部分包含酶細菌胞嘧啶脫氨酶(bCD)。4.根據權利要求1至3中任一項所述的納米復合物分子，其中所述報告物部分包含與Cy5.5染料連接的多聚-L-賴氨酸載體。5.根據權利要求1至4中任一項所述的納米復合物組合物，其中所述報告物部分包含用mIn標記的連接至PEI=PEG共聚物的DOTA部分。6.根據權利要求1至4中任一`項所述的納米復合物組合物，其中所述報告物部分包含用Gd3+標記的連接至PE1:PEG共聚物的DOTA部分。7.根據權利要求1至6中任一項所述的納米復合物組合物，其中所述靶向劑是對感興趣的靶細胞膜蛋白特異性的小分子或抗體。8.根據權利要求1至7中任一項所述的納米復合物組合物，其中所述靶向劑是前列腺癌靶細胞膜蛋白前列腺特異性膜抗原(PSMA)特異性的。9.根據權利要求1至8中任一項所述的納米復合物組合物，其中所述靶向劑是(2-(3-[1-羧基-5-[7-(2，5-二氧-吡咯烷-1-基氧羰基)-庚酰氨基]-戊基]-脲基)-戊二酸。10.根據權利要求1至9中任一項所述的納米復合物組合物，其中所述酶抑制劑是靶細胞中過量表達的酶特異性的。11.根據權利要求1至10中任一項所述的納米復合物組合物，其中所述靶細胞是癌細胞。12.根據權利要求1至11中任一項所述的納米復合物組合物，其中所述酶抑制劑部分包含至少ー種多核糖核苷酸分子。13.根據權利要求12所述的納米復合物組合物，其中所述至少ー種多核苷酸分子選自由以下組成的組:單鏈RNA;雙鏈RNA;微-RNA(miRNA);短-發夾RNA(shRNA)；siRNA;和/或其RNA類似物。14.根據權利要求1至13中任一項所述的納米復合物組合物，其中所述酶抑制劑抑制膽堿激酶(Chk)酶。15.根據權利要求12至13中任一項所述的納米復合物組合物，其中所述至少一種多核苷酸分子是siRNA。16.ー種藥物組合物，所述藥物組合物包含ー種或多種根據權利要求1至15中任ー項所述的納米復合物組合物和藥學上可接受的載體。17.ー種藥物組合物，所述藥物組合物包含ー種或多種根據權利要求1至15中任ー項所述的納米復合物組合物、藥學上活性的化合物和藥學上可接受的載體。18.—種調節宿主細胞或細胞群中靶基因表達的方法，所述方法包括以足夠調節所述宿主細胞或細胞群中靶基因表達的量向所述細胞或細胞群施用根據權利要求1至15中任一項所述的納米復合物組合物、或根據權利要求16或17所述的藥物組合物。19.根據權利要求18所述的方法，其中當與非癌性細胞相比時，癌細胞中的所述靶基因被上調。20.根據權利要求1至15中任一項所述的納米復合物分子以有效的量制備藥劑的用途，所述藥劑優選用作治療受試者中疾病的藥劑。21.根據權利要求20所述的用途，其中所述藥劑還包含藥學上可接受的載體。22.根據權利要求20或21所述的用途，其中所述藥劑還包含第二治療劑。23.根據權利要求20至22中任一項所述的用途，其中所述疾病是前列腺癌。【文檔編號】A61K48/00GK103561773SQ201280025485【公開日】2014年2月5日申請日期:2012年3月30日優先權日:2011年3月31日【發明者】馬丁·波姆珀,扎維爾·布杰瓦拉,陳志航,聰·李,斯瑞達·尼瑪加達,瑪麗-弗蘭斯·佩內,S·雷申請人:約翰霍普金斯大學