專利名稱：具有腫瘤細胞靶向結合能力的短肽及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一組轉鐵蛋白受體結合肽，此類結合肽與高表達轉鐵蛋白受體的腫瘤細胞具有特異性高親和力，能夠作為腫瘤治療藥物的靶向載體，增加抗腫瘤藥物對腫瘤細胞的特異性作用。
背景技術：
轉鐵蛋白受體(TfR)介導的內吞作用是鐵吸收、儲存和利用的關鍵環節。Fe3+是核苷酸還原酶的一個輔因子，其主要功能之一是參與DNA復制的過程，對于細胞的生長是不可缺少的。關于Fe3+進入細胞內的機理，目前國內外公認的機理是，轉鐵蛋白攜帶Fe3+結合到表達轉鐵蛋白受體的細胞上，通過胞吞轉鐵蛋白-Fe3+-轉鐵蛋白受體復合物進入內含體，ATP依賴的質子泵把H+泵到內涵體，PH值降低到5.5，在低PH下，轉鐵蛋白受體改變構象釋放攜帶Fe3+的轉鐵蛋白。轉鐵蛋白一被釋放就會立刻到達細胞表面，接下來轉鐵蛋白、Fe3+、轉鐵蛋白受體復合物就會如此循環運輸Fe3+。正常情況下轉鐵蛋白結合Fe3+只會達到30%飽和的程度，通過轉鐵蛋白-轉鐵蛋白受體復合物進入細胞并不局限于Fe3+，鉍，硼，釕，锝都會通過轉鐵蛋白-轉鐵蛋白受體復合物進入細胞。轉鐵蛋白受體分子量約為90KDa，是II型跨膜糖蛋白，由胞外段、跨膜段與胞內段組成。到現在為止，已經發現了兩類轉鐵蛋白受體，TfRl與TfR2，在很多細胞包括血紅細胞、網織紅細胞、肝細胞、單核細胞以及血腦屏障都發現有TfRl，而TfR2有兩種轉錄形式存在(a -TfR2, β -TfR2)，而a -TfR2顯著表達在肝細胞上，β _TfR2在很多細胞上呈低表達。轉鐵蛋白受體幾乎在所有的細胞上都有表達但表達量不同。與緩慢增殖的非腫瘤細胞相比，轉鐵蛋白受體在腫瘤細胞上的表達顯著增加，這與腫瘤細胞快速分裂需攝入大量Fe3+有關。在很多腫瘤組織上與很多病例上都可以發現轉鐵蛋白受體是顯著上調的，其上調與腫瘤階段呈正相關，并且與治療效果也有關。在前列腺癌細胞、口腔癌細胞、和肝癌細胞上，轉鐵蛋白受體的表達量比非腫瘤細胞至少要高出100倍，轉鐵蛋白受體的分子數目可以達到10000個。因此，轉鐵蛋白受體是腫瘤診斷與治療的重要靶點。相關報道表明，把植物藥青蒿素、治療性蛋白、寡核苷酸序列及核糖體失活蛋白如蓖麻毒素等共價連接到轉鐵蛋白上，就能達到靶向治療作用，同時最大程度的降低了毒副作用。由Xenova開發的白喉毒素-轉鐵蛋白復合物已經用于治療腦腫瘤病人。與傳統的耐藥性治療效果相比，在一期與二期均起到的顯著性的抗腫瘤的作用(Weaver，M.J.Neurooncol.65, 3-13 (2003))。噬菌體展示技術是20世紀80年代興起的一項蛋白質相互作用的技術，其可以用來抗原表位篩選、診斷試劑研究、疫苗研究、藥物靶向研究。由于噬菌體展示技術可以將其表型與基因型聯系一起，利用其配體獨特的親和力，結構簡單，庫容量大，所以將目的蛋白或短肽篩選出來 再進一步開發成藥物成為極大的可能性(Kazuki N.Sugahara, etal.Science328，1031 (2010))。噬菌體展示技術已經成為開發藥物的快速有效的方法。
本發明通過噬菌體隨機展示7肽庫對轉鐵蛋白受體進行篩選，最終得到了一組具有生物活性的短肽，并驗證了此短肽與轉鐵蛋白受體具有良好的結合活性，能用于轉鐵蛋白受體的檢測和作為腫瘤治療藥物的靶向載體。

發明內容
本發明的目的是提供一組新型轉鐵蛋白受體結合肽，其能夠與轉鐵蛋白受體專一結合，并能夠用于轉鐵蛋白受體的檢測和作為腫瘤治療藥物的靶向載體。本發明通過噬菌體隨機展示7肽庫對轉鐵蛋白受體進行篩選，最終得到了一組具有生物活性的短肽，對與轉鐵蛋白受體特異性結合的短肽的結構分析，確定了與轉鐵蛋白受體特異結合的氨基酸序列模式。轉鐵蛋白受體結合肽的篩選與鑒定按照下述步驟進行:(I)準備靶分子溶液，轉鐵蛋白受體用NaHCO3溶液稀釋16 μ g/ml包被酶標板，每孔150μ 1，4°C濕盒輕微震蕩孵育過夜。如果需要穩定靶分子溶液，也可使用其他相似強度的離子溶液。(2)挑取單克隆宿主菌大腸桿菌(購自New England Biolabs公司)ER2738于IOml含抗性的LB培養基里震蕩培養。(3)傾去包·被液并扣去殘余液，加進封閉液，封閉至少I小時。(4)棄去封閉液，0.1 % TBST洗脫快速洗脫6次，每次要徹底洗脫底部與邊緣的封閉液，均旋轉以使板或孔的底部及邊緣均被洗到，傾去緩沖液，倒置在干凈紙巾上拍甩以除去殘余溶液并注意防止干燥。(5)加上TBST稀釋的原始肽庫，每孔100 μ I加到已經包被好的板上上，室溫溫和震動60min。(6)潔凈紙傾除未結合噬菌體，倒置在干凈的試紙上扣去未結合肽。(7) 0.1 % TBST洗板，每次要換潔凈紙避免交叉污染。(8)非特異性洗脫緩沖液0.2MGlycine-HCL洗脫，輕微震蕩不超過10_20min，洗脫脫液轉入離心管中，并迅速用150 μ I pH9.1 IM Tris-HCL中和上述洗脫液。剩余洗脫物應當被擴增:將洗脫物加入到20ml ER2738培養物中(菌體應當處于對數前期)，37°C劇烈搖動培養4.5hr。(9)取 1μ I 測滴度。(10)擴增剩余洗脫物。擴增過程:將洗脫物加到20ml生長到對數期的ER2738宿主菌中。ER2738宿主菌過夜培養物以1: 100接種LB四環素中，把剩余洗脫物加進去，37°C,220rpm4.5 小時左右。(11) 12000rpm,4°C, IOmin離心，轉移上清到新離心管中重離心。(12)轉移上清80%到新離心管中，加1/6體積PEG8000/NaCL，4°C過夜。(13) 12000rpm, 15mim, 4°C, 15min離心，棄上清，重離心并移去殘余液。(14) ImlTBS重懸沉淀物，轉移到微量離心管中14000rpm，5min4°C(15)轉移上清到新離心管1/6體積PEG8000/NaCL重懸沉淀，置冰上15_60min。(16) 14000rpm, 10min4°C,棄上清重離心，并移去殘余液。(17)TBS重懸沉淀物，再次離心以除去不溶物，轉移上清到新管。
(18)測上述擴增噬菌體滴度。(19)并把此擴增的噬菌體用于下一輪的篩選。(20)進行第二輪篩選，用第一輪篩選擴增的洗脫物重復上述步驟；并注意延長洗脫時間、增大吐溫濃度、減小靶分子濃度等曬算因素。(21)在LB/IPTG/Xgal平板上測定第二輪淘選所得洗脫物擴增后的滴度。(22)第三輪篩選；(23)在LB/IPTG/Xgal平板上測定第三輪淘選所得洗脫物未擴增時的滴度。第三輪洗脫物不必再擴增，滴度測定時得到的噬菌斑可做測序用:只要注意平板培養時間不要超過18小時，培養時間過長容易出現缺失。其余洗脫物4°C貯存。(24)通過噬菌體ELISA鑒定，挑取OD值比對照高的單克隆。(25)從平板上挑取分隔良好的單克隆，對其采用competitive Elisa檢測，挑選陽性克隆，測序。 (26)根據測序結果，以化學方法合成對TfR親和力最高的噬菌體展示短肽序列。(27)標記FITC (異硫氰酸熒光素)，以高表達TfR的腫瘤細胞!fepG2細胞為靶細胞、低表達TfR的正常肝細胞L-o2為對照細胞，采用免疫熒光顯微(immunofluorescencemicroscopy),激光共聚焦顯微掃描(confocal laser scanning microscope),競爭性抑制結合試驗(competitive inhibition binding experiments)等方法檢驗此短肽與高表達TfR的!fepG2親和性。通過上述篩選過程，最終篩選獲得具有下列氨基酸序列的多肽:Ala-His-Leu-His-Asn-Arg-Ser(SEQ ID NO:1)；His-Glu-Asn-Gln-Thr-Arg-Gln(SEQ ID NO:2)；His-Ser-Ser-Leu-Gln-Thr-Pro(SEQ ID NO:3)；Met-Val-Pro-Pro-Arg-Leu-Leu(SEQ ID NO:4)。具有上述氨基酸序列的多肽可以專一性與轉鐵蛋白受體結合。對本發明短肽的研究結果表明，本發明篩選得到的短肽可以作為腫瘤治療藥物的靶向載體，將其與腫瘤治療藥物結合，例如與抗腫瘤多肽或蛋白融合，可以介導這些藥物靶向結合到腫瘤細胞上，從而提高作用效果，并減少了對正常的細胞的殺傷與毒副作用，例如，將上述短肽與麻瘋樹毒蛋白(curcin)融合，可用于治療肝癌和乳腺癌(研究表明，肝癌和乳腺癌細胞表面轉鐵蛋白受體的表達遠遠高于正常細胞(參見，Daniels TR, Delgado T, Rodriguez JA,Helguera G，Penichet ML:The transferrin receptor part I:Biology and targetingwith cytotoxic antibodies for the treatment of cancer.Clin Immunol 2006,121 (2):144-158)。另外，轉鐵蛋白受體結合肽作為生物制劑也存在著潛在的應用價值，例如作為配體用作轉鐵蛋白受體的親和純化，FITC標記的此短肽則可以用于探針檢測轉鐵蛋白受體的存在，也可以檢測腫瘤細胞的增殖與轉移。根據轉鐵蛋白受體結合肽的氨基酸序列，可能存在多種獲取含此種短肽的方法，例如化學方法合成(固相合成、液相合成)，或者用基因重組的方法生產得到該短肽。因此，本發明涉及下述各項:1.一種轉鐵蛋白受體結合肽，其氨基酸序列為SEQ ID N0:l，2，3或4。2.第I項所述的轉鐵蛋白受體結合肽在制備用于治療腫瘤的藥物中的應用。
3.第2項所述的應用，其中所述腫瘤是在腫瘤細胞表面表達轉鐵蛋白受體的腫瘤。4.第3項所述的應用，其中所述腫瘤選自肝癌或乳腺癌。5.一種腫瘤治療藥物，其包括有效量的第I項的轉鐵蛋白受體結合肽作為腫瘤治療藥物的靶向載體。6.第5項所述的腫瘤治療藥物，其中所述腫瘤是在腫瘤細胞表面表達轉鐵蛋白受體的腫瘤。7.第6項所述的腫瘤治療藥物，其中所述腫瘤選自肝癌或乳腺癌。8.一種檢測轉鐵蛋白受體的試劑，所述試劑包含有效量的第I項所述的轉鐵蛋白受體結合肽。


從下面結合附圖的詳細描述中，本發明的上述特征和優點將更明顯，其中:圖1A為HPLC檢測體外有機合成短肽的純度；圖1B為MS檢測體外有機合成短肽的分子量；圖2A為免疫熒光檢測本發明的短肽(即，轉鐵蛋白受體結合肽)-麻瘋樹毒蛋白融合蛋白與高表達轉鐵蛋白受體的肝癌細胞株HepG2細胞表面結合；

圖2B為免疫熒光檢測本發明的短肽-麻瘋樹毒蛋白融合蛋白與正常肝細胞株L02細胞表面結合。
具體實施例方式下面結合實施例和附圖對本發明進一步說明，但是本領域技術人員應該理解，這些具體的實施例僅是舉例說明，并不限制本發明的精神和范圍。需要說明的是，本領域技術人員應該理解，下述實施例中所用的試劑、酶類等除特別說明外，均為可從試劑公司商購的分析純級別的試劑或酶類。實施例1短妝Ala-His-Leu-His-Asn-Arg-Ser, His-Glu-Asn-Gln-Thr-Arg-Gln,Hi s-Ser-Ser-Leu-Gln-Thr-Pro, Met-Val-Pro-Pro-Arg-Leu-Leu 的化學合成采用CS936多肽合成儀(美國CSBio公司)，Fmoc固相合成法合成上述短肽，合成過程主要包括下述步驟:a.去保護:用哌唳(piperidine,上海紫一試劑廠)溶液去除氨基的保護基團；b.激活與交聯:下一個氨基酸的羧基被激活劑HBTU(HCTU/HITU)+NMM所激活溶解，激活的單體與游離的氨基反應交聯，形成肽鍵；c.循環:a、b兩步反應反復循環直到整條肽鏈合成完畢；d.洗脫和脫保護:根據肽鏈所含的殘基不同，用不同的脫樹脂溶劑從柱上洗脫下來，其保護基團被一種脫保護劑(TFA)洗脫和脫保護；e.合成好的短肽經過Varian Prostar210純化柱(美國VARIAN公司)純化,純化的過程中米用 UV-Vis-detector:Varian Prostar345 (美國 VARIAN 公司)檢測；f.采用System Gold HPLC (美國貝克曼公司)驗證純度達到99%以上；
g.米用 Thermo Finnigan LCQ deca XP plus (美國 Thermo 公司)檢測合成短妝的分子量。圖1A 和 IB 分別顯示了 Ala-His-Leu-His-Asn-Arg-Ser (SEQ ID NO:1)短肽的純度與分子量檢測結果，與理論值吻合。實施例2His-Glu-Asn-Gln-Thr-Arg-Gln (SEQ ID NO:2)短肽的 His-tag 融合多肽的表達與純化根據短肽的氨基酸序列推導其堿基序列，并合成其互補的序列，退火后將其連接到載體PET-22b (Invitrogen公司)上的Nde I/Xho I的酶切位點，將得到的重組構建體轉化DH5a感受態細胞(Invitrogen公司)，挑取單克隆并做菌落PCR，測序(上海英俊生物公司)。再回收將經過測序鑒定正確的重組子，將其轉化入宿主菌E.coli BL21(購自上海北諾生物科技有限公司)，將此表達菌液以1: 50(v/v)接種到含有100 μ g/ml氨芐青霉素(Sigma公司)的LB培養基中，220rpm，37°C，搖菌4小時，待其OD值達到0.6左右，加進IPTG誘導表達4小時，離心去上清收集菌體，冰上超聲破碎此菌體。12000rpm，4°C，離心10分鐘。收集上清，使用N1-NTA親和層析得到該短肽的His-tag融合多肽。實施例3ELISA檢測噬菌體展示短肽與轉鐵蛋白受體特異性、專一性結合用由PBS 稀釋濃度為 2 μ g/ml>4 μ g/ml>8 μ g/ml、16 μ g/ml、32 μ g/ml、64 μ g/ml、128 μ g/ml的轉鐵蛋白受體(購自美國R&D公司)包被96孔酶標板(Corning公司),每孔150μ1，留有幾個孔作為不包被轉鐵蛋白受體的空白對照，4°C緩慢搖床過夜，傾去包被液，加進PBS稀釋的I % BSA封閉液，封閉I小時。分別加入終滴度為IxiO11Pfu/ml的展示本發明的短肽的噬菌體100 μ 1，室溫緩慢搖床結合I小時。0.1 % PBST洗滌6次，加入HRP-抗Μ13抗體(NEB公司)100μ1(1: 5000稀釋)，37 °C孵育40分鐘，PBST洗滌6次后加入顯示·底物TMB(碧云天公司)50μ I顯色10分鐘，IM H2SO4終止顯色，酶標儀 450nm 檢測 OD 值。展不序列為 Ala-His-Leu-His-Asn-Arg-Ser (SEQ ID NO:1) >His-Glu-Asn-Gln-Thr-Arg-Gln(SEQ ID NO:2), His-Ser-Ser-Leu-Gln-Thr-Pro(SEQ IDNO:3)和 Met-Val-Pro-Pro-Arg-Leu-Leu (SEQ ID NO:4)的噬菌體的 OD 值分別為 0.7108、
0.9953,0.8965和0.8324，表明其與轉鐵蛋白受體具有較高的特異性、專一性結合能力。實施例4ELISA檢測His-tag融合肽與轉鐵蛋白受體特異性、專一性結合。用由PBS 稀釋濃度為 2 μ g/ml>4 μ g/ml>8 μ g/ml、16 μ g/ml、32 μ g/ml、64 μ g/ml、128 μ g/ml、256 μ g/ml的轉鐵蛋白受體(美國R&D公司)包被96孔酶標板(Corning,公司)，每孔150μ 1，同時設置不包被轉鐵蛋白受體的空白對照，4°C緩慢搖床過夜，傾去包被液，加進PBS稀釋的I % BSA封閉液，封閉I小時。加入PBS稀釋1.0y M His-tag融合肽(SEQ ID NO:2，由實施例2獲得)，室溫結合I小時。0.1 %的PBST洗滌6次后，加入鼠源的抗組氨酸標簽的抗體(上海江萊生物科技有限公司)(I: 2000稀釋)，37°C孵育40分鐘，PBST洗滌6次后，加入HRP標記的羊抗鼠抗體(上海江萊生物科技有限公司)100 μ 1,37°C孵育40min，PBST洗滌6次后加入顯示底物TMB (碧云天公司)50 μ I顯色10分鐘，IM H2SO4終止顯色，酶標儀450nm檢測OD值，OD值為0.9025，表明該肽(SEQ ID NO:2)與轉鐵蛋白受體具有較高的特異性、專一性結合能力。
實施例5噬菌體與短肽競爭結合表腫瘤細胞表面轉鐵蛋白受體根據Zvezdana Popovic (Zvezdana Popovic Douglas M.Templeton, Molecularand Cellular Biochemistry 265:37_45，2004.)，!fepG2 細胞表面表達有轉鐵蛋白受體，將HepG2細胞(購自上海細胞庫)吹打均勻，每孔接種I X IO6個細胞到細胞培養板里。待貼壁后無血清處理3小時，I % BSA封閉I小時。將系列稀釋的短肽(0.00001mM，0.0OOlmM，
0.001mM,0.0lmM,0.1mM)(即由實施例1獲得的四種短肽)與！fepG2細胞在37°C共孵育3小時。同時做空白對照，M13Wild(購自New England Biolabs公司)對照，L_02(正常肝細胞，購自上海細胞庫)對照。將用細胞培養基稀釋、終滴度達到10npfu/ml的噬菌體與上述細胞共作用2小時，用磷酸鹽緩沖液洗滌非特異性噬菌體，再用0.2M pH2.2的甘氨酸鹽酸洗脫特異性噬菌體，最后在LB/Xgal/IPTG平板(在含有LB固體平板上滴加40ul2% X-Gal和7ul20% IPTG，然后涂布均勻)計數噬菌體滴度。抑制率=(對照滴度-實驗滴度)/對照滴度X 100 %。結果顯不，短妝Ala-His-Leu-His-Asn-Arg-Ser (SEQ ID NO: I),His-Glu-Asn-Gln-Thr-Arg-Gln(SEQ ID NO:2), His-Ser-Ser-Leu-Gln-Thr-Pro(SEQ IDNO:3)，Met-Val-Pro-Pro-Arg-Leu-Leu(SEQ ID NO:4)對噬菌體的抑制率分別為 65.3%,73.1%>62.5%和68.4%，表明其具有顯著的競爭結合作用。實施例6His-Glu-Asn-Gln-Thr-Arg-Gln(SEQ ID NO:2)增強麻瘋樹毒蛋白(curcin)對腫瘤細胞的靶向結合能力將HepG2細胞(購自上海細胞庫)吹打均勻，每孔接種I X IO6個細胞到共聚焦培養皿里，過夜生長貼壁；次日，3.7%多聚甲醛固定細胞15min，磷酸鹽緩沖液洗滌2遍，甲醇孵育lOmin，，山羊血清(購自杭州四季青公司)封閉I小時；用FITC標記的本發明的短肽-麻瘋樹毒蛋白融合蛋白(該融合蛋白通過常規的基因工程方法獲得)與細胞相互作用
1.5hs,磷酸鹽緩沖液洗漆2遍；DAPI (sigma公司)與細胞作用30min,磷酸鹽緩沖液洗漆2遍；激光共聚焦儀(德國蔡斯公司)檢測短肽-麻瘋樹毒蛋白融合蛋白與細胞的定位，并設置人正常肝細胞株L02(購自上海細胞庫)作為對照。結果如圖2A和圖2B所示，短肽-麻瘋樹毒蛋白融合蛋白結合于聞表達轉鐵蛋白受:體的HepG2細胞表面，部分進入細胞質中，L02正常細胞表面未觀察到與短肽-麻瘋樹毒蛋白融合蛋白結合，此結果表明，該短肽增強了麻瘋樹毒蛋白對腫瘤細胞的靶向結合能力。實施例7Ala-His-Leu-His-Asn-Arg-Ser (SEQ ID NO:1)增強麻瘋樹毒蛋白(curcin)對腫瘤細胞的增殖抑制作用。取對數生長期的!fepG2細胞，胰酶消化后，調整細胞濃度為6X IO4個細胞/ml，10% FBS,5% CO2在96孔培養板中每孔加入IOOul細胞懸液。37。。，10% FBS, 5% CO2培養24小時后細胞貼壁生長，棄去培養液，加入短肽-融合蛋白，分5個劑量組，分別為2.5 μ g/ml>5 μ g/ml>10 μ g/ml>20 μ g/ml、40 μ g/ml,同時設不加融合蛋白的對照組,孵育48小時，加入20μ 1MTT， 繼續孵育4小時，每孔加入150ul 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10分鐘，使結晶物充分溶解。在490nm波長下檢測其OD值，計算半數抑制率IC5(I。同時做麻瘋樹毒蛋白單體的對照實驗。結果表明，curcin和該短肽-curcin融合蛋白對HepG2細胞的IC5tl分別為0.137nmol和0.562nmol,該短肽-curcin融合蛋白對HepG2細胞的IC5tl顯著低于curcin。實施例8His-Glu-Asn-Gln-Thr-Arg-Gln(SEQ ID NO:2)增強麻瘋樹毒蛋白(curcin)對腫瘤細胞的增殖抑制作用。取對數生長期的!fepG2細胞，胰酶消化后，調整細胞濃度為6X IO4個細胞/ml，10% FBS,5% CO2在96孔培養板中每孔加入IOOul細胞懸液。37。。，10% FBS, 5% CO2培養24小時后細胞貼壁生長，棄去培養液，加入短肽-curcin融合蛋白，分5個劑量組，分別為2.5 μ g/ml>5 μ g/ml、10 μ g/ml>20 μ g/ml>40 μ g/ml,同時設不加融合蛋白的對照組,孵育48小時，加入20 μ 1MTT，繼續孵育4小時，每孔加入150ul 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10分鐘，使結晶物充分溶解。在490nm波長下檢測其OD值，計算半數抑制率IC5(I。同時做麻瘋樹毒蛋白的對照實驗。結果表明，curcin和該短肽-curcin融合蛋白對HepG2細胞的IC50分別為0.153nmol和0.546nmol，該短肽-curcin融合蛋白對H印G2細胞的IC50顯著低于Curcin0。應該理解，盡 管參考其示例性的實施方案，已經對本發明進行具體地顯示和描述，但是本領域的普通技術人員應該理解，在不背離由后附的權利要求所定義的本發明的精神和范圍的條件下，可以在其中進行各種形式和細節的變化，可以進行各種實施方案的任意組合。
權利要求
1.一種轉鐵蛋白受體結合肽，其氨基酸序列為SEQ ID N0:l，2，3或4。
2.權利要求I所述的轉鐵蛋白受體結合肽在制備用于治療腫瘤的藥物中的應用。
3.權利要求2所述的應用，其中所述腫瘤是在腫瘤細胞表面表達轉鐵蛋白受體的腫瘤。
4.權利要求3所述的應用，其中所述腫瘤選自肝癌或乳腺癌。
5.一種腫瘤治療藥物，其包括有效量的權利要求I的轉鐵蛋白受體結合肽作為腫瘤治療藥物的靶向載體。
6.權利要求5所述的腫瘤治療藥物，其中所述腫瘤是在腫瘤細胞表面表達轉鐵蛋白受體的腫瘤。
7.權利要求6所述的腫瘤治療藥物，其中所述腫瘤選自肝癌或乳腺癌。
8.—種檢測轉鐵蛋白受體的試劑，所述試劑包含有效量的權利要求I所述的轉鐵蛋白受體結合肽。
全文摘要
本發明公開了一組轉鐵蛋白受體結合肽，其氨基酸序列如下Ala-His-Leu-His-Asn-Arg-Ser、His-Glu-Asn-Gln-Thr-Arg-Gln、His-Ser-Ser-Leu-Gln-Thr-Pro、Met-Val-Pro-Pro-Arg-Leu-Leu。本發明的轉鐵蛋白受體結合肽在體內和體外均能結合轉鐵蛋白受體，能用于轉鐵蛋白受體的檢測、作為腫瘤治療藥物的靶向載體等方面，在醫學與生物學研究領域得到廣泛的應用。
文檔編號A61P35/00GK103254280SQ20131007327
公開日2013年8月21日 申請日期2013年3月7日 優先權日2013年3月7日
發明者鄭青, 徐單單, 熊耀玲, 黃亞東, 蘇志堅, 許華, 張齊好, 項琪 申請人:廣州暨南大學醫藥生物技術研究開發中心, 暨南大學