一種用于治療阿爾茲海默癥的h102肽鼻腔溶液型噴霧劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種用于治療阿爾茨海默癥的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑及其制備方法；該鼻腔溶液型噴霧劑包含H102肽、吸收促進(jìn)劑、穩(wěn)定劑以及其它藥劑學(xué)上有效的輔料。本發(fā)明所述鼻腔溶液型噴霧劑制成凍干粉末形式，臨用前溶解成溶液后以噴霧方式給藥。試驗結(jié)果表明，所述鼻腔溶液型噴霧劑能明顯延長H102肽的體內(nèi)作用時間、顯著增加藥物的入腦量，可用于治療阿爾茲海默癥，改善阿爾茲海默癥患者記憶障礙、緩解病理癥狀。
【專利說明】一種用于治療阿爾茲海默癥的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種用于治療阿爾茨海默癥的H102肽鼻腔溶液型 噴霧劑及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 阿爾茨海默癥（Alzheimer' s disease,AD)是一種進(jìn)行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行 性疾病，目前已成為繼心血管病、癌癥和腦卒中后，第四位老年人的致死病因。隨著人口老 齡化進(jìn)程的加劇，AD的發(fā)病率日益上升，預(yù)計到2025年，AD患者的人數(shù)將達(dá)到3400萬。AD 已成為人類健康和生存質(zhì)量的嚴(yán)重威脅，是日益嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。
[0003] 目前已知，β片層結(jié)構(gòu)是普遍存在于蛋白質(zhì)中、重復(fù)出現(xiàn)的二級結(jié)構(gòu)之一；有研 究發(fā)現(xiàn)，在β-淀粉樣肽（β-amyloid peptide，AP)的二級結(jié)構(gòu)中，β片層結(jié)構(gòu)的形成是 Αβ產(chǎn)生聚集的必要條件，過多的β片層結(jié)構(gòu)會使Αβ的聚集加劇，產(chǎn)生神經(jīng)毒性，進(jìn)而引 發(fā)AD的進(jìn)展和惡化；因此，有效阻斷β片層的形成，已成為治療AD的一個新策略。
[0004] Η102肽為一條人工合成的β片層阻斷肽，體外研究證實，所述Η102肽能穩(wěn)定Αβ 空間結(jié)構(gòu)，抑制β片層形成，分解已形成的Αβ纖維；保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，提高神經(jīng)細(xì)胞的存活 率。有研究顯示，APP轉(zhuǎn)基因小鼠側(cè)腦室注射Η102肽后，可顯著改善其空間記憶障礙，表明 Η102肽具有治療AD的潛力。相關(guān)研究已申請中國發(fā)明專利一項（申請?zhí)枺?00810006598. X)。
[0005] 然而，所述H102肽體內(nèi)穩(wěn)定性差、不能透過血腦屏障，靜注無效；腦室注射給藥雖 有效，但技術(shù)復(fù)雜、患者順應(yīng)性差。上述一系列問題限制了 H102肽的實際應(yīng)用。
[0006] 近年來，鼻腔作為腦靶向遞藥途徑取得了迅速發(fā)展，已被廣泛用于多肽蛋白藥物 腦內(nèi)遞送的研究。動物或人體鼻腔給予神經(jīng)生長因子、霍亂毒素 B-神經(jīng)生長因子共軛結(jié)合 物、胰島素、胰島素樣生長因子-1等多肽蛋白藥物，已證實可繞過血腦屏障，沿嗅通路和三 叉神經(jīng)通路直接遞送入腦，發(fā)揮治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的作用。
[0007] 但迄今為止，尚未見有關(guān)用于治療阿爾茨海默癥的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑及 其制備方法的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種用于治療阿爾茨海默癥的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑； 該噴霧劑是以H102肽為活性物質(zhì)的鼻腔溶液型噴霧劑，具有給藥方便、均一，生物利用度 1?、治療效果好等優(yōu)點。
[0009] 本發(fā)明所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑能解決目前多肽藥物在鼻腔中不穩(wěn)定、 易被鼻纖毛清除、透黏膜能力差的問題； 本發(fā)明所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，包含H102肽、吸收促進(jìn)劑、穩(wěn)定 齊[J，也可加入其它藥劑學(xué)上有效的輔料，如生物黏附劑、防吸附劑、抑菌劑、等滲調(diào)節(jié)劑、PH 調(diào)節(jié)劑等，其用量為藥劑學(xué)上所規(guī)定的常規(guī)用量； 本發(fā)明所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑中，所述H102肽的濃度為0. 0019Γ7. 5% (w/ v)，即每mL鼻腔噴霧劑中含H102肽10 mg?75 mg;優(yōu)選濃度為0. 0059Γ5. 6% (w/v)，即每 mL鼻腔噴霧劑中含H102肽50mg ~ 56 mg; 本發(fā)明中，為增加 H102肽透鼻黏膜的能力，所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑可加入下 述一種或多種吸收促進(jìn)劑：殼聚糖、環(huán)糊精、聚山梨酯； 本發(fā)明中，所述吸收促進(jìn)劑為殼聚糖，其分子量為5000~500000,優(yōu)選為 20000?200000 ;脫乙酰度為50%?97%，優(yōu)選為70%?95% ; 所述殼聚糖為選自由硝酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、鹽酸鹽和乙酸鹽 所組成的鹽的形式；所述殼聚糖還優(yōu)選為鹽酸鹽或谷氨酸鹽的形式；所述殼聚糖的用量為 0· 1%?5% (w/v)，優(yōu)選為 0· 2%?2% (w/v); 本發(fā)明中，所述吸收促進(jìn)劑為環(huán)糊精，選自a-環(huán)糊精、b-環(huán)糊精、g-環(huán)糊精、二甲 基-b_環(huán)糊精、隨機甲基化的b-環(huán)糊精、羥丙基-b-環(huán)糊精、磺丁基醚-b-環(huán)糊精中的 一種或多種；更優(yōu)選的是，環(huán)糊精選自由二甲基-b_環(huán)糊精（DM-bCD)、羥丙基-b-環(huán)糊精 (HP-bCD)、磺丁基醚-b-環(huán)糊精（SBE-bCD)及其混合物所組成的組；所述環(huán)糊精的用量為 0· 1%?50% (w/v)，優(yōu)選為 1%?25% (w/v); 本發(fā)明中，所述吸收促進(jìn)劑為聚山梨酯（吐溫），選自吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐 溫-80和吐溫-85的一種或多種，用量為0. 19Γ10% (w/v)，優(yōu)選為0. 29T5%(w/v)。
[0010] 本發(fā)明中，為增加 H102肽在鼻腔環(huán)境中的穩(wěn)定性，防止酶降解，所述的H102肽鼻 腔溶液型噴霧劑還可加入下述一種或多種穩(wěn)定劑：桿菌肽、乙二胺四乙酸（EDTA);其中，桿 菌肽的用量為〇. 5%?5%(W/v) ;EDTA的用量為0. 05%?2% (w/v); 本發(fā)明中，為減少鼻腔纖毛的清除率，延長H102肽在鼻腔的滯留時間從而增加其吸收 量，所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑中可加入下述一種或多種生物黏附劑：纖維素類衍生 物、卡波普、聚維酮（PVP K29/32);其中，所述纖維素類衍生物選自甲基纖維素（MC)、羧甲 基纖維素鈉（CMC-Na)、羥丙基甲基纖維素（HPMC)及其混合物；MC的粘度為400 mPa. s，用 量為 0.1%?2% (w/v) ;CMC-Na 的黏度為 600?1000 mPa.s，用量為 0.1%?2% (w/v) ;HPMC 的黏 度為 50?4000 mPa.s，用量為 0.25%?2% (w/v);卡波姆選自 Carbopol 934PXarbopol 940、 Carbopol 941、Carbopol 971P、Carbopol 974P 及其混合物；卡波姆的用量為 0.02%?2% (w/v)。PVP K29/32 的用量為 0· 1%?2% (w/v)。
[0011] 本發(fā)明中，所述的防吸附劑選自人血清白蛋白（HSA)、泊洛沙姆188 ;其中，HSA的 用量為0. 019Γ2% (w/v);泊洛沙姆188的用量為0. 01%?l%(w/v); 本發(fā)明中，所述的抑菌劑選自羥苯酯類、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇、醋酸洗必泰、硫 柳汞、苯扎氯胺、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸、山梨酸鈉（鉀）及其混合物，但必須要求抑菌 劑不影響制劑的理化性質(zhì)，在抑菌濃度范圍內(nèi)不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生較小的、臨床可以接受的鼻 黏膜刺激性和纖毛毒性； 本發(fā)明中，所述的等滲調(diào)節(jié)劑選自氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、硼酸、硼砂、甘油 等，加入后調(diào)節(jié)鼻腔噴霧劑的滲透壓在28(T310 m〇S mol/L; 本發(fā)明中，所述的pH調(diào)節(jié)劑為緩沖溶液，選自以下幾類：磷酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖 液、枸櫞酸鹽緩沖液；所述PH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)鼻腔噴霧劑的pH至6~7 ; 本發(fā)明所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑為制成凍干粉末形式，臨用前加滅菌三蒸水 溶解后以噴霧方式給藥。
[0012] 本發(fā)明中，為防止在凍干和復(fù)溶的過程中H102肽活性的喪失，所述的H102肽鼻腔 溶液型噴霧劑可加入下述一種或多種凍干支架劑：葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、赤 蘚糖，用量為29Γ20% (w/v)。
[0013] 本發(fā)明的另一目的是提供所述H102肽鼻腔溶液型噴霧劑的制備方法， 所述H102肽鼻腔溶液型噴霧劑的制備方法，其特征在于，步驟為： (1) 取處方量約70%的緩沖溶液，加入生物黏附劑，使其充分溶脹，直至完全溶解； (2) 向上述步驟（1)中加入吸收促進(jìn)劑、抑菌劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干支架劑、 防吸附劑和H102肽，充分溶解后，添加緩沖液至全量； (3) 所述步驟（2)的藥液于0.22 μπι微孔濾膜過濾除菌，分裝至已滅菌的鼻噴霧瓶中 冷凍干燥； (4) 凍干完成后，取出，加帶有噴霧定量泵的瓶蓋，密閉低溫貯存，貼簽包裝。
[0014] 本發(fā)明所述的Η102肽鼻腔溶液型噴霧劑無鼻腔刺激性、4°C條件下穩(wěn)定，藥物凍 干粉復(fù)溶后可連續(xù)使用2周個月。
[0015] 本發(fā)明中，制備的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑通過SD大鼠鼻腔給藥實驗，結(jié)果表 明，其絕對生物利用度達(dá)109Γ35%，且鼻腔噴霧劑顯著促進(jìn)了 H102肽向腦部的轉(zhuǎn)運； 所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，經(jīng)AD模型大鼠鼻腔給藥，通過Morris水迷宮實驗 評價其對大鼠空間記憶障礙的改善作用，結(jié)果顯示，H102肽鼻腔溶液型噴霧劑能有效改善 AD模型大鼠的空間記憶能力，防止Ab斑塊沉積、減少海馬區(qū)神經(jīng)元的缺失、使乙酰膽堿酯 酶和膽堿乙酰化酶活力恢復(fù)至假手術(shù)水平，表明其能有效緩解AD的病理特征。
[0016] 本發(fā)明的用于治療阿爾茨海默癥的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑還具有如下突出優(yōu) 占· ① 所述鼻腔噴霧劑解決了 H02肽血中消除快（5min已檢測不到）、不能透過血腦屏障， 靜注無效的問題，使H102肽沿鼻-腦通路直接轉(zhuǎn)運入腦，提高了腦內(nèi)的藥量，有利于對AD 的防治； ② 鼻腔噴霧劑給藥方便，患者可自主用藥，特別適于AD這種需長期用藥的疾病。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1鼻腔給藥后腦組織和血中藥時曲線， 其中，A :處方7 ; B :處方10 ; C :處方13。
[0018] 圖2大鼠在Morris水迷宮實驗中的平均上臺潛伏期（mean土S.E.M，n=10)， * /XO. 05，與AD模型組有顯著差異。
[0019] 圖3大鼠海馬乙酰膽堿酯酶活力（mean土SD, n=3)， * /XO. 05，與AD模型組有顯著差異。
[0020] 圖4大鼠海馬Αβ斑塊染色結(jié)果（陽性斑塊用黑色箭頭指示）， 其中，A :AD模型組； B :假手術(shù)組； C :靜注 H102 ; D :鼻腔處方5 ; E :鼻腔處方7 ; F :鼻腔處方13。
[0021] 圖5鼻粘膜HE染色結(jié)果， 其中，A:生理鹽水（陰性對照）； B :1%去氧膽酸鈉溶液（陽性對照）； C :鼻腔處方4 ; D :鼻腔處方6 ; E :鼻腔處方8 ; F :鼻腔處方12。

【具體實施方式】
[0022] 本發(fā)明通過以下描述和實施例進(jìn)行說明，以下描述為非限制性的，并不限制本發(fā) 明的權(quán)利要求范圍。
[0023] 實施例1 根據(jù)表1制備以殼聚糖為吸收促進(jìn)劑的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑。
[0024] 表I H102肽鼻腔溶液型噴霧劑處方（w/v %)

【權(quán)利要求】
1. 一種用于治療阿爾茨海默癥的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，包含H102 肽、吸收促進(jìn)劑、穩(wěn)定劑以及其它藥劑學(xué)上有效的輔料； 其中， 所述H102肽的濃度為0. 0019Γ7. 5% w/v，即每mL鼻腔噴霧劑中含H102肽10 mg?75 mg ； 所述吸收促進(jìn)劑選自殼聚糖、環(huán)糊精和聚山梨酯中的一種或多種； 所述穩(wěn)定劑選自桿菌肽和乙二胺四乙酸中的一種或多種。
2. 按權(quán)利要求1所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述H102肽的濃度為 0. 0059Γ5. 6% w/v。
3. 按權(quán)利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的吸收促進(jìn) 劑為殼聚糖。
4. 按權(quán)利要求3所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述殼聚糖的分子量 為5000?500000 ;脫乙酰度為50%?97%。
5. 按權(quán)利要求4所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述殼聚糖選自由硝 酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、乳酸鹽、枸櫞酸鹽、鹽酸鹽和酒石酸鹽所組成的鹽的形式。
6. 按權(quán)利要求5所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述殼聚糖為鹽酸鹽 或谷氨酸鹽的形式。
7. 按權(quán)利要求6所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述殼聚糖的用量為 0·1%?5% w/v。
8. 按權(quán)利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的吸收促 進(jìn)劑選自環(huán)糊精，選自a-環(huán)糊精、b-環(huán)糊精、g-環(huán)糊精、二甲基-b-環(huán)糊精、隨機甲基化的 b_環(huán)糊精、羥丙基-b-環(huán)糊精或磺丁基醚-b-環(huán)糊精中的一種或多種。
9. 按權(quán)利要求8所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述環(huán)糊精選自二甲 基-b_環(huán)糊精、羥丙基-b-環(huán)糊精或磺丁基醚-b-環(huán)糊精中的一種或多種。
10. 按權(quán)利要求9所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述環(huán)糊精的用量為 0·1%?50% w/v。
11. 按權(quán)利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的吸收促進(jìn) 劑選自聚山梨酯，選自吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80和吐溫-85中的一種或多種。
12. 按權(quán)利要求11所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述聚山梨酯的用 量為 0· 1%?10% w/v。
13. 按權(quán)利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的穩(wěn)定劑中 桿菌肽的用量為〇. 5%?5% w/v ;EDTA的用量為0. 05%?2% w/v。
14. 按權(quán)利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的藥劑學(xué)上 有效的輔料包括生物黏附劑、防吸附劑、抑菌劑、等滲調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑和凍干支架劑，其用 量為藥劑學(xué)上所規(guī)定的常規(guī)用量。
15. 按權(quán)利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的生物粘附劑 選自纖維素類衍生物、卡波普、聚維酮PVP K29/32中的一種或多種。
16. 按權(quán)利要求15所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的生物黏附劑 為纖維素類衍生物，選自甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和羥丙基甲基纖維素中的一種或多 種。
17. 按權(quán)利要求16所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述MC的黏度為 400 mPa. s，用量為0· 1%?2% w/v ;所述CMC-Na的黏度為600?1000 mPa. s，用量為0· 1%?2% w/v ;所述HPMC的黏度為50?4000 mPa. s，用量為0· 25%?2% w/v。
18. 按權(quán)利要求15所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的生物黏附劑 為卡波姆，選自 Carbopol 934P、Carbopol 940、Carbopol 941、Carbopol 971P 和 Carbopol 974P中的一種或多種；卡波姆的用量為0. 029Γ2% w/w。
19. 按權(quán)利要求15所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的生物黏附劑 為聚維酮，用量為〇. 1%~2% w/v。
20. 按權(quán)利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的防吸附劑選 自人血清白蛋白和泊洛沙姆188中的一種或多種；其中，所述HSA的用量為0. 19Γ2% w/v ; 泊洛沙姆188的用量為0. 19Γ1% w/v。
21. 按權(quán)利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的抑菌劑選自 羥苯酯類、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇、醋酸洗必泰、硫柳汞、苯扎氯胺、苯甲酸、苯甲酸鈉、 山梨酸和山梨酸鈉（鉀）中的一種或多種，所述的抑菌劑不影響制劑的理化性質(zhì)，在抑菌 濃度范圍內(nèi)不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生較小的、臨床可接受的鼻黏膜刺激性和纖毛毒性。
22. 按權(quán)利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的等滲調(diào)節(jié)劑 選自氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、硼酸、硼砂和甘油中的一種或多種，加入后調(diào)節(jié)鼻腔 噴霧劑的滲透壓在280?310 mOs mol/L。
23. 按權(quán)利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于所述的pH調(diào)節(jié)劑為 緩沖溶液，選自磷酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液；所述pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)鼻腔 噴霧劑的pH至6~7。
24. 按權(quán)利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的凍干支架劑 選自葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、赤蘚糖中的一種或多種，用量為29Γ20% w/v。
25. 按權(quán)利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑，其特征在于，所述的鼻腔噴霧 劑制成凍干粉末形式，使用前加滅菌三蒸水溶解后以噴霧方式給藥。
26. 權(quán)利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型噴霧劑的制備方法，其特征在于，其包括 步驟： (1) 取配方量70%的緩沖溶液，加入生物黏附劑，使其充分溶脹，直至完全溶解； (2) 向上述步驟（1)中加入吸收促進(jìn)劑、抑菌劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干支架劑、 防吸附劑和H102肽，充分溶解后，添加緩沖液至全量； (3) 所述步驟（2)的藥液于0.22 μπι微孔濾膜過濾除菌，分裝至已滅菌的鼻噴霧瓶中 冷凍干燥； (4) 凍干完成后，取出，加帶有噴霧定量泵的瓶蓋，密閉低溫貯存，貼簽包裝。
【文檔編號】A61K47/18GK104274818SQ201310279216
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2013年7月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月4日
【發(fā)明者】張奇志, 邵夏炎, 譚遠(yuǎn)貞, 蔣新國, 徐淑梅 申請人:復(fù)旦大學(xué)