一種抗豬偽狂犬病的組合物、飼料添加劑、制備方法及應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種抗豬偽狂犬病的組合物、飼料添加劑、制備方法及應用，其中組合物包括以下重量份數的組分：抗豬偽狂犬病卵黃抗體94-98份、抗豬偽狂犬病轉移因子1-2份；飼料添加劑包括以下重量份數的組分：抗豬偽狂犬病卵黃抗體94-98份、抗豬偽狂犬病轉移因子1-2份、防腐劑0.01-0.02份、滅活劑0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、維生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。本發明將抗豬偽狂犬病卵黃抗體與抗豬偽狂犬病轉移因子復配，可以顯著提高防治豬偽狂犬病的效果，具有針對性強，常溫保存時間長，抗體效價高，生物活性良好的優點。
【專利說明】—種抗豬偽狂犬病的組合物、飼料添加劑、制備方法及應用

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種抗豬偽狂犬病的組合物，同時還涉及含有該組合物的飼料添加劑、制備方法及應用，屬于飼料添加劑領域。

【背景技術】
[0002]隨著社會的發展和人民生活水平的提高，越來越多人將目光投向食品安全問題。豬業在我國養殖業中占有較重的份額，僅河南省2009年產出的豬肉就達410.32萬噸，由此可以知道，我國每年對于豬肉的需求量非常大。但是隨著豬肉需求的逐年遞增，在養豬過程中也出現越來越多的問題，其中豬偽狂犬病是一種急性傳染性疾病，給養豬業造成了巨大的經濟損失。
[0003]偽狂犬病毒屬于皰疫病毒科(Herpesviridae)、豬皰疫病毒屬，病毒粒子為圓形，直徑150-180nm，核衣殼直徑為105_110nm。病毒粒子的最外層是病毒囊膜，它是由宿主細胞衍生而來的脂質雙層結構。囊膜表面有長約8-lOnm呈放射狀排列的纖突。
[0004]偽狂犬病毒基因組是線狀雙鏈DNA分子，大小約150kb，平均G+C含量高達74%，具有典型的皰疹病毒基因組結構特征，由獨特長區段、獨特短區段及位于US兩側的末端重復序列(TR)和內部重復序列(IR)組成。
[0005]目前常見的防治豬偽狂犬病的方法較多，主要是使用西藥、接種免疫、中草藥防治。其中西藥使用的泛濫給豬產品食用帶來了極大的飲食隱患，藥物殘留已經成為影響豬產品安全的主要因素之一。接種免疫早期效果較好，但是需要多次接種，操作麻煩，成本較高，容易造成斷奶豬產生應激反應；而且疫苗對于保藏條件要求較高，需要在2-8°C條件下冷藏，室溫條件下一段時間則失去效果。中草藥飼料添加劑也是目前的研究方向之一，但是由于中草藥的種類較多，相同的中藥材對不同的禽畜疾病的作用差異很大，且中草藥對疾病的免疫效果極其有限，因此其應用也具有一定的局限性。注射卵黃抗體也是較為常見的一種方法，但是單一注射卵黃抗體的免疫效果有時候不能滿足實際需求。


【發明內容】

[0006]本發明的目的是提供一種抗豬偽狂犬病的組合物，能夠有效防治豬偽狂犬病。
[0007]為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是提供一種抗豬偽狂犬病的組合物，該組合物包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體94-98份、抗豬偽狂犬病轉移因子1_2份。
[0008]所述抗豬偽狂犬病的組合物,包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體95-97份、抗豬偽狂犬病轉移因子1-2份。
[0009]卵黃抗體是一種免疫球蛋白，由于機體受到外界抗原的刺激而產生的一種應激產物，可以和相應抗原結合，消除病因。
[0010]本發明將豬疫苗免疫接種健康的雞群，可以使蛋黃中產生有效的抗豬偽狂犬病卵黃抗體，同時減少了毒株返祖的可能性。
[0011]轉移因子攜帶有致敏淋巴細胞的特異性免疫信息，能夠將特異性免疫信息呈遞給受體淋巴細胞，使受體無活性的淋巴細胞轉變為特異性致敏淋巴細胞，從而激發受體細胞介導的免疫反應。
[0012]本發明將抗豬偽狂犬病卵黃抗體與抗豬偽狂犬病轉移因子復配，可以顯著提高防治豬偽狂犬病的效果，具有針對性強，常溫下保存時間長，抗體效價高，生物活性良好的優點。經動物實驗表明:本發明抗豬偽狂犬病卵黃抗體與抗豬偽狂犬病轉移因子的組合物，防治豬偽狂犬病的效果要明顯優于單一使用抗豬偽狂犬病卵黃抗體、抗豬偽狂犬病轉移因子或豬偽狂犬病疫苗凍干粉和轉移因子聯用的效果。
[0013]本發明的目的還在于提供一種含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑。
[0014]本發明所采用的技術方案還在于提供一種含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑，所述飼料添加劑包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體94-98份、抗豬偽狂犬病轉移因子1-2份、防腐劑0.01-0.02份、滅活劑0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、維生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。
[0015]所述飼料添加劑包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體95-97份、抗豬偽狂犬病轉移因子1-2份、防腐劑0.01-0.02份、滅活劑0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、維生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。
[0016]所述滅活劑為甲醛。
[0017]所述防腐劑為硫柳汞。
[0018]本發明將抗豬偽狂犬病組合物和多種輔料進行復配，并通過調整輔料的成分、控制其用量，進一步延長了卵黃抗體的保存時間，保證了卵黃抗體常溫下較長時間內的活性，降低了飼料添加劑的保存和運輸成本，使用方便，具有廣泛的應用前景。
[0019]本發明的目的還在于提供一種抗豬偽狂犬病的飼料添加劑的制備方法。
[0020]本發明所采用的技術方案還在于提供一種抗豬偽狂犬病的飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟:
[0021 ] (I)將豬偽狂犬病病毒增殖并滅活制備成疫苗，免疫健康雞群制得高免蛋，將高免蛋經過消毒、酸化處理、離心處理得到含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液；
[0022](2)取含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液與抗豬偽狂犬病轉移因子原液、防腐齊U、滅活劑、硒、維生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再凍干即得。
[0023]所述含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑的制備方法，具體包括以下步驟:
[0024](I)將豬偽狂犬病病毒增殖并滅活制備成疫苗，每間隔7天對健康產蛋雞群進行免疫，共免疫三次，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當抗體效價達到1:256時，收集高免蛋，將收集的高免蛋進行清理、消毒，晾干備用；
[0025](2)分離高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分攪拌，得到卵黃抗體溶液；在卵黃抗體溶液加入pH=4.9-5.2的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵黃抗體溶液體積的8倍，混勻，靜置沉淀，取上清液；
[0026](3)在上清液中按體積分數0.8%加入NaCl和Na2SO4的混合物，15000rpm離心20min，得到含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液，其中，NaCl和Na2SO4的混合物中NaCl和Na2SO4的質量比為4:1;
[0027](4)取步驟(3)含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液，加入抗豬偽狂犬病轉移因子原液；
[0028](5)用0.45 μ m的濾膜對步驟(4)所得混合液過濾，截流分子量大于200KD的大分子物質，再將濾液經0.22 μ m濾膜過濾，留濾液；
[0029](6)將步驟(5)的濾液濃縮，使濾液濃縮至2.5mL/500羽份；
[0030](7)向步驟(6)的濃縮液中加入防腐劑、滅活劑、硒、維生素、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸，并在-80°C條件下充分冷凍；
[0031](8)將步驟(7)的濃縮液凍干即得。
[0032]本發明的制備方法簡單，操作方便，降低了人力物力成本，也便于工業化的推廣。
[0033]本發明的目的還在于提供一種飼料添加劑在制備抗豬偽狂犬病的飼料中的應用。
[0034]本發明所采用的技術方案還在于提供一種飼料添加劑在制備抗豬偽狂犬病的飼料中的應用，所述飼料添加劑的加入量為飼料總重量的0.2-0.6%。
[0035]將少量本發明的飼料添加劑加入飼料中，即可有效防治豬偽狂犬病。

【具體實施方式】
[0036]本發明采用的抗豬偽狂犬病轉移因子原液的制備方法如下:
[0037](I)用滅菌后的生理鹽水將用豬偽狂犬病病毒抗原免疫過的豬脾臟，去其表面筋、脂肪等組織，再用生理鹽水沖洗；
[0038](2)將步驟(I)處理后的豬脾臟破碎，加入2倍預冷的PBS緩沖液，用組織勻漿儀將其勻質；
[0039](3)將勻漿液用超聲破碎儀處理5-10min ；
[0040](4)將步驟(3)的破碎液pH值調至5.5左右，5000-6000rpm離心30min，收集上清液；
[0041](5)將上清液用微濾膜過濾，截留分子量7000道爾頓的物質，收集上清液；
[0042](6)將步驟(5)的上清液用除菌濾膜過濾，得到抗豬偽狂犬病轉移因子原液，4°C保存備用。
[0043]實施例1
[0044]本實施例的抗豬偽狂犬病的組合物,包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體95份、抗豬偽狂犬病轉移因子2份。
[0045]本實施例的含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑,包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體95份、抗豬偽狂犬病轉移因子2份、硫柳汞0.02份、甲醛0.2份、硒0.05份、維生素Cl份、聚乙烯吡咯烷酮2份、甘氨酸0.5份。
[0046]本實施例的抗豬偽狂犬病的飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟:
[0047]( I)將豬偽狂犬病病毒鄂A標準株增殖并滅活制備成疫苗，每間隔7天對健康產蛋雞群進行免疫，共免疫三次，第一次免疫健康雞群接種滅活疫苗1.5mL，第二次、第三次免疫接種加量I倍，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當抗體效價達到1:256時，收集高免蛋，將收集的高免蛋進行清理、消毒，晾干備用；
[0048](2)分離高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分攪拌，得到卵黃抗體溶液；在卵黃抗體溶液加入pH=5.0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵黃抗體溶液體積的8倍，混勻，靜置沉淀，取上清液；
[0049](3)在上清液中按體積分數0.8%加入NaCl和Na2SO4的混合物，15000rpm離心20min，得到含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液，其中，NaCl和Na2SO4的混合物中NaCl和Na2SO4的質量比為4:1;
[0050](4)取步驟(3)含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液，加入抗豬偽狂犬病轉移因子原液；
[0051](5)用0.45 μ m的濾膜對步驟(4)所得混合液過濾，截流分子量大于200KD的大分子物質，再將濾液經0.22 μ m濾膜過濾，留濾液；
[0052](6)將步驟(5)的濾液濃縮，使濾液濃縮至2.5mL/500羽份；
[0053](7)向步驟(6)的濃縮液中加入硫柳汞、甲醛、硒、維生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸，并在-80°C條件下充分冷凍；
[0054](8)將步驟(7)的濃縮液凍干即得。
[0055]實施例2
[0056]本實施例的抗豬偽狂犬病的組合物,包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體97份、抗豬偽狂犬病轉移因子I份。
[0057]本實施例的含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑，包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體97份、抗豬偽狂犬病轉移因子I份、硫柳汞0.015份、甲醛0.3份、硒0.1份、維生素C0.5份、聚乙烯吡咯烷酮I份、甘氨酸I份。
[0058]本實施例的抗豬偽狂犬病的飼料添加劑的制備方法同實施例1，不同之處在于各組分的用量。
[0059]實施例3
[0060]本實施例的抗豬偽狂犬病的組合物,包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體96份、抗豬偽狂犬病轉移因子1.5份。
[0061 ] 本實施例的含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑，包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體96份、抗豬偽狂犬病轉移因子1.5份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、維生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.8份。
[0062]本實施例的抗豬偽狂犬病的飼料添加劑的制備方法同實施例1，不同之處在于各組分的用量。
[0063]對比例I
[0064]本對比例的抗豬偽狂犬病飼料添加劑,包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體96份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、維生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮
1.5份、甘氨酸0.5份。
[0065]對比例2
[0066]本對比例的抗豬偽狂犬病飼料添加劑,包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病轉移因子1.5份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、維生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.5份。
[0067]對比例3
[0068]本實施例的含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑,包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病疫苗凍干粉96份、抗豬偽狂犬病轉移因子1.5份。
[0069]實驗例I
[0070]本發明飼料添加劑的質量檢測
[0071]實驗方法:將本發明的飼料添加劑保存在37 °C培養箱中，保存24個月，分別I周、2周、I月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后，用瓊脂擴散(AGP)法，測定每個時間點取樣品的卵黃抗體效價變化，結果見表I。
[0072]表I常溫放置不同時間段效價的變化(項目:HPV)
[0073]
M Il M |2 周 |1 月 |2 月~|4 月 |8 月~|12 月 |16 月 |20 月 |24 月實施例1~ I:32 I:32 I:32 I:32 I:32 I:16 I ；16 I:16 I:16 I:16
實施例 2~ I:32 I:32 I:32 I:32 I:32 I:32 I ；16 I:16 I:16 I:16
實施例 3~ I:32 I:32 I:32 I:32 I:32 I:16 I ；16 I:16 I:16 I:16
[0074]質量標準:
[0075][性狀]本品為淡黃色，呈致密的團塊。
[0076][支原體檢驗]按《中國獸藥典》進行，無支原體生長。
[0077][外源病毒檢驗]按《中國獸藥典》進行，符合規定。
[0078][安全檢驗]用7日齡雛雞5只，肌肉注射5羽份，觀察2周，應全部健活，注射部位沒有病變。
[0079][剩余水分測定]按《中國獸藥典》進行，符合獸用生物制品通則規定。
[0080][保質期]根據常溫效價檢測實驗結果，可以存放2年。
[0081]實驗例2
[0082]本發明的飼料添加劑預防豬偽狂犬病的效果分析
[0083]本實驗例所用的普通飼料為市售常規飼料。
[0084]實驗方法:選取2月齡豬800只，其中100只作為攻毒組隔離飼養，喂食普通飼料，100只作為空白組隔離飼養，喂食普通飼料，300只作為對照組分為3組，每組100只，隔離飼養，分別喂食添加了添加量為0.6%的對比例1-3的飼料添加劑的普通飼料，另外300只作為試驗組，分成3組，每組100只，分別喂食添加了添加量為0.6%的實施例1-3的飼料添加劑的普通飼料。飼養方式為自由采食，自由飲水，24h后，取試驗組、對照組和攻毒組的豬肌注接種稀釋后的豬偽狂犬病病毒液，記錄120h后的患病情況，結果如表2所示。
[0085]表2本發明的飼料添加劑預防豬偽狂犬病的效果分析
[0086]

【權利要求】
1.一種抗豬偽狂犬病的組合物，其特征在于，所述組合物包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體94-98份、抗豬偽狂犬病轉移因子1-2份。
2.根據權利要求1所述的一種抗豬偽狂犬病的組合物，其特征在于，所述組合物包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體95-97份、抗豬偽狂犬病轉移因子1-2份。
3.一種含有如權利要求1所述的抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑，其特征在于，所述飼料添加劑包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體94-98份、抗豬偽狂犬病轉移因子1-2份、防腐劑0.01-0.02份、滅活劑0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、維生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。
4.根據權利要求3所述的含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑，其特征在于，所述飼料添加劑包括以下重量份數的組分:抗豬偽狂犬病卵黃抗體95-97份、抗豬偽狂犬病轉移因子1-2份、防腐劑0.01-0.02份、滅活劑0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、維生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。
5.根據權利要求3所述的含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑，其特征在于，所述滅活劑為甲醛。
6.根據權利要求3所述的含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑，其特征在于，所述防腐劑為硫柳汞。
7.—種如權利要求3所述的含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)采用豬偽狂犬病病毒制備疫苗，免疫健康雞群制得高免蛋，將高免蛋經過消毒、酸化處理、離心處理得到含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液； (2)取含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液與抗豬偽狂犬病轉移因子原液、防腐劑、滅活劑、硒、維生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再凍干即得。
8.根據權利要求7所述的含有抗豬偽狂犬病的組合物的飼料添加劑的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟: (1)將豬偽狂犬病病毒增殖并滅活制備成疫苗，每間隔7天對健康產蛋雞群進行免疫，共免疫三次，第二次免疫后開始檢測抗體效價，當抗體效價達到1:256時，收集高免蛋，將收集的高免蛋進行清理、消毒，晾干備用； (2)分離高免蛋卵黃，加入等體積的無菌水，充分攪拌，得到卵黃抗體溶液；在卵黃抗體溶液加入pH=4.9-5.2的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵黃抗體溶液體積的8倍，混勻，靜置沉淀，取上清液； (3)在上清液中按體積分數0.8%加入NaCl和Na2SO4的混合物，15000rpm離心20min,得到含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液，其中，NaCl和Na2SO4的混合物中NaCl和Na2SO4的質量比為4:1 ； (4)取步驟(3)含有抗豬偽狂犬病卵黃抗體的上清液，加入抗豬偽狂犬病轉移因子原液； (5)用0.45 μ m的濾膜對步驟(4)所得混合液過濾，截流分子量大于200KD的大分子物質，再將濾液經0.22 μ m濾膜過濾，留濾液； (6)將步驟(5)的濾液濃縮，使濾液濃縮至2.5mL/500羽份； (7)向步驟(6)的濃縮液中加入防腐劑、滅活劑、硒、維生素、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸，并在-80°C條件下充分冷凍； (8)將步驟(7)的濃縮液凍干即得。
9.一種如權利要求3所述的飼料添加劑在制備抗豬偽狂犬病的飼料中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述飼料添加劑的加入量為飼料總重量的 0.2-0.6%ο
【文檔編號】A61P31/22GK104162158SQ201310313408
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2013年7月24日 優先權日:2013年7月24日
【發明者】吳紅云, 趙小中, 郭俊清 申請人:河南聯合英偉飼料有限公司