一種抗腫瘤藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗腫瘤藥物組合物，特別涉及一種含有黃花夾竹桃次苷甲和腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體（TNF-related apoptosis-inducing ligand;TRAIL）的抗腫瘤藥物組合物，提供了上述組合物及其在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)花夾竹桃次苷甲或其藥用鹽和TRAIL聯(lián)用能夠起到協(xié)同抗腫瘤的效果，為開發(fā)抗腫瘤藥物提供了新的思路。
【專利說明】一種抗腫瘤藥物組合物

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種抗腫瘤藥物組合物，特別涉及一種含有黃花夾竹桃次苷甲和腫瘤 壞死因子相關凋亡誘導配體（TNF-relatedapoptosis-inducingligand;TRAIL)的抗腫瘤 藥物組合物。

【背景技術】
[0002] 黃花夾竹桃（Thevetiaperuviana)是一種種植很廣的觀賞灌木。曾經(jīng)被用作 毒藥或者墮胎藥。其種子被人或者動物誤食以后，會表現(xiàn)出明顯的心臟毒性，甚至可以引 起死亡。其癥狀表現(xiàn)為數(shù)小時內出現(xiàn)惡心，嘔吐，眼花，腹痛，腹瀉，瞳孔放大及抽搐等。其 毒性成分主要包含在黃花夾竹桃的種子里，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，這些毒性成分包括黃花夾竹桃 次苷甲、洋地黃苷、黃夾次苷丁以及腦素等[Kohlsetal.，2012，Phytochemistry75:ll 4~27;LangandSun, 1964,YaoXueXueBaoll:464-72;Miyagawaetal. , 2009,JNat Prod72:1507-11;Wangetal.， 1981，YaoXueXueBaol6:379-84]。
[0003] 黃花夾竹桃次苷甲（peruvoside;encordin;cannogenin)又稱黃夾次苷甲，針葉 狀結晶（甲醇-乙醇中），旋光度-71.7° (c=l. 54,甲醇），熔點為161?164°C，易溶于 丙酮、氯仿，微溶于乙醇、甲醇，難溶于水。黃花夾竹桃次苷甲起初是作為強心苷而使用。 近年來，一些研究發(fā)現(xiàn)黃花夾竹桃次苷甲還具有抗腫瘤方面的活性，例如Li等設計了一 種高通量篩選策略，通過高通量測序，篩選到一種中藥單體-黃花夾竹桃次苷甲，它可以 同時有效抑制雄激素敏感和抗性的兩種前列腺癌細胞，而不引發(fā)嚴重的細胞毒性[Liet al.，2012,ProcNatlAcadSciUSA109:4609-14]。
[0004] 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體（以下簡稱TRAIL)屬腫瘤壞死因子超家族成員， TRAIL最大的優(yōu)點是它可以選擇性地誘導腫瘤細胞凋亡，而對正常細胞沒有毒副作用；但 是，在很多情況下，細胞會產生對TRAIL的抗性。
[0005] 發(fā)明人在研究過程中驚奇地發(fā)現(xiàn)，黃花夾竹桃次苷甲和TRAIL在聯(lián)用時，具有協(xié) 同抗腫瘤效果作用。


【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明要解決的技術問題是：提供一種抗腫瘤藥物組合物。
[0007] 本發(fā)明的第一方面提供了一種抗腫瘤藥物組合物，其含有黃花夾竹桃次苷甲或其 藥用鹽和TRAIL。
[0008] 優(yōu)選的，所述的藥物組合物僅含有黃花夾竹桃次苷甲或其藥用鹽和腫瘤壞死因子 相關凋亡誘導配體作為有效成分；其他的成分可以選用藥學上常用的各種輔料，輔料的種 類和數(shù)量可以根據(jù)所需制備的藥物劑型而決定，本領域技術人員無需經(jīng)過創(chuàng)造性的勞動即 可得到。
[0009] 在本發(fā)明的另一方面提供了上述藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
[0010] 優(yōu)選的，本發(fā)明提供的是上述藥物組合物在制備治療非小細胞肺癌藥物中的應 用。
[0011] 優(yōu)選的，本發(fā)明提供的是上述藥物組合物在制備治療具有細胞凋亡抗性的腫瘤的 藥物中的應用。
[0012] 本發(fā)明所述的藥用鹽，具體的可列舉上述化合物與鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸 等無機酸的鹽，與甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒 石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、對甲基苯磺酸等有機酸和天門氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸的 酸形成的鹽。
[0013] 本發(fā)明的有益效果：首次發(fā)現(xiàn)花夾竹桃次苷甲或其藥用鹽和TRAIL聯(lián)用能夠起到 協(xié)同抗腫瘤的效果，詳細考察了黃花夾竹桃次苷甲與TRAIL聯(lián)合使用對腫瘤細胞形態(tài)的影 響、抑制腫瘤細胞活力、促進腫瘤細胞凋亡。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0014] 圖1為黃花夾竹桃次苷甲、黃花夾竹桃次苷甲與TRAIL聯(lián)用對A549細胞形態(tài)的影 響對比圖。A549細胞用溶劑對照或者不同濃度的TRAIL(5,10,20,40,80ng/ml)，以及25nM 黃花夾竹桃次苷甲與不同濃度的TRAIL(5，10，20，40，80ng/ml)聯(lián)合使用，處理24h后在顯 微鏡（1X71，Olympus,Tokyo,Japan)下用20X物鏡觀察并拍照。
[0015] 圖2為不同濃度的黃花夾竹桃次苷甲與TRAIL聯(lián)合使用時CI指數(shù)曲線圖。
[0016] 圖3為黃花夾竹桃次苷甲與TRAIL聯(lián)合使用處理后A549細胞的DNAladder結 果。A549細胞分別用溶解對照或者不同濃度的黃花夾竹桃次苷甲（3. 125,6. 25,12. 5nM)以 及聯(lián)合使用40ng/ml的TRAIL和不同濃度的黃花夾竹桃次苷甲（3. 125,6. 25,12. 5nM)處理 24h后進行DNAladder實驗。10iig/ml的順鉬處理組作為陽性對照，所獲得DNA樣品使用 2%的瓊脂糖凝膠電泳，然后使用伯樂GelDocXR+凝膠系統(tǒng)（USA)進行拍照。
[0017] 圖4-A為不同濃度的黃花夾竹桃次苷甲與TRAIL聯(lián)合使用處理后A549細胞的流 式細胞實驗結果圖。使用溶劑對照或者不同濃度的黃花夾竹桃次苷甲（3. 125,6. 25,12. 5， 25, 50nM)與40ng/ml的TRAIL聯(lián)合處理A549細胞，染色后避光孵育20min，然后用流式細 胞儀（BectonDickinson,USA)進行分析，每個樣品收集細胞數(shù)為10000個。
[0018] 圖4-B為凋亡細胞比例柱形圖，數(shù)據(jù)表示方法為平均數(shù)土標準差，并進行T檢驗。 *表示資料在P〈〇. 05的條件下，顯著低于對照，**表示資料在p〈0. 01的條件下，顯著低于 對照。

【具體實施方式】
[0019] 實施例1黃花夾竹桃次苷甲與TRAIL聯(lián)合使用對A549細胞形態(tài)的影響
[0020] 發(fā)明人首先考察了黃花夾竹桃次苷甲與TRAIL聯(lián)合使用對A549細胞形態(tài)的影響。 A549腫瘤細胞是一種對細胞凋亡抵抗的腫瘤細胞株。將對數(shù)期的A549細胞給以溶劑對照， 不同濃度TRAIL(5,10, 20,40,80ng/ml)或者不同濃度的TRAIL與25nM的黃花夾竹桃次苷 甲聯(lián)合使用。給藥24h后拍照觀察。實驗結果如圖1所示。隨著TRAIL濃度逐漸升高，發(fā) 明人可以看到懸浮變圓的細胞逐漸增多；對數(shù)期的A549細胞給以25nM的黃花夾竹桃次苷 甲處理后，只有少量的細胞懸浮變圓。當將25nM的黃花夾竹桃次苷甲與不同濃度的黃花夾 竹桃次苷甲聯(lián)合使用后，發(fā)現(xiàn)懸浮變圓的細胞明顯增多。由此可見，黃花夾竹桃次苷甲可以 顯著增強TRAIL對A549細胞的抑制作用。
[0021] 實施例2黃花夾竹桃次苷甲與TRAIL聯(lián)合使用協(xié)抑制A549細胞活力
[0022] 為了進一步評價兩藥聯(lián)合使用是否具有協(xié)同作用，發(fā)明人將不同濃度的黃花夾 竹桃次苷甲（〇,3. 13,6.25，12.5,25,50，100nM)和不同濃度的TRAIL(0? 15,0.31，0.62， 1. 23nM)單用及聯(lián)合使用后，使用MTT法檢測A549細胞活力的變化，結果如表1.兩種藥物 均表現(xiàn)出良好的劑量依賴性地抑制A549細胞增殖的效應；合用時抑制效應明顯增強。
[0023] 發(fā)明人利用中效原理進行了分析，對表1結果進行回歸分析，得出各實驗組的線 性方程式（Y=a+bX)和相關系數(shù)（R)，計算兩藥單用及合用時的中效濃度Dm(表2)。結果表 明黃花夾竹桃次苷甲的中效濃度為22. 72nM，TRAIL的中效濃度為116. 2nM，兩藥合用時中 效濃度為10. 87nM。根據(jù)計算公式得出兩藥合用指數(shù)CI。，結果如圖2。兩藥聯(lián)用的CI指數(shù) 小于1，表明，兩藥聯(lián)合使用，對A549細胞的活力具有協(xié)同作用。
[0024] 表1黃花夾竹桃次苷甲和TRAIL單用及合用對A549細胞增殖抑制作用
[0025] TablellnhibitioneffectsofperuvosideandTRAILonA549cells(n=3)

【權利要求】
1. 一種抗腫瘤藥物組合物，其特征在于，它含有黃花夾竹桃次苷甲或其藥用鹽和腫瘤 壞死因子相關凋亡誘導配體。
2. 如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，僅含有黃花夾竹桃次苷甲或其藥用 鹽和腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體作為有效成分。
3. 如權利要求1或2所述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
4. 如權利要求1或2所述的藥物組合物在制備治療非小細胞肺癌藥物中的應用。
5. 如權利要求1或2所述的藥物組合物在制備治療具有細胞凋亡抗性的腫瘤的藥物中 的應用。
【文檔編號】A61K38/17GK104383520SQ201310360139
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2013年8月19日 優(yōu)先權日:2013年8月19日
【發(fā)明者】華子春, 張鵬, 黃啟來 申請人:江蘇靶標生物醫(yī)藥研究所有限公司, 鎮(zhèn)江菩提生物醫(yī)藥有限公司