一種提取高純度荷葉黃酮的方法
【專利摘要】本發明公開了一種提取高純度荷葉黃酮的方法，其包括，a、將含有荷葉黃酮的荷葉提取液經濃縮除雜得到濃縮液，加入純凈水稀釋濃縮液；b、將步驟a中稀釋后的溶液過大孔吸附樹脂柱，所采用的大孔吸附樹脂為XDA-6，將荷葉黃酮吸附在大孔吸附樹脂上，對該大孔吸附樹脂柱進行洗脫，濃縮洗脫液，經干燥得到荷葉黃酮。本發明的方法能夠獲得高純度的荷葉黃酮，方法簡單易行，生產成本低，適于工業化應用。
【專利說明】一種提取高純度荷葉黃酮的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種荷葉提取物的提取方法，特別是涉及一種提取高純度荷葉黃酮的方法。
【背景技術】
[0002]荷葉為睡蓮科植物蓮的葉子，為藥食兩用植物葉。荷葉中含有黃酮、生物堿等活性物質。黃酮類化合物具有降低心肌耗氧量、使冠脈和腦血管流量增加、抗腫瘤。軟化血管、降血糖、血脂等作用，同時還是一種天然的抗氧化劑，具有清除人體中超氧離子自由基、抗衰老、增強機體免疫力的生理活性。現代醫學研究表明，荷葉黃酮具有抗氧化、抗衰老、清熱、降血脂、降膽固醇以及治療心腦血管疾病等功能。
[0003]現有技術中對荷葉黃酮的提取主要為采用水提法或有機溶劑浸提法從荷葉中提取后，輔助其他方法進行提純分離，如柱層析法、薄層層析法、鉛鹽沉淀法等，但均存在不同的缺點而限制了工業化應用。目前的提取技術所得到的荷葉黃酮雜質含量高，導致荷葉黃酮含量較低，限制了荷葉黃酮的應用。
[0004]因此，急需開發一種荷葉黃酮的提取方法，以制得高純度荷葉黃酮。

【發明內容】

[0005]本發明要解決的技術問題是提供一種荷葉黃酮的提取方法，該方法能夠獲得高純度的荷葉黃酮，該方法簡單易行，生產成本低，適于工業化應用。
[0006]為解決上述技術問題，本發明提供了一種提取高純度荷葉黃酮的方法，其包括，
[0007]a、將含有荷葉黃酮的荷葉提取液經濃縮除雜得到濃縮液，加入純凈水稀釋濃縮液，所用的荷葉提取液可以采用已有技術中的方法對荷葉進行提取獲得含有荷葉黃酮的荷葉提取液，如水提或者極性有機溶劑提取，提取液的除雜濃縮可以采用超濾，，超濾膜可以采用十萬分子量超濾膜、一萬分子量超濾膜，優選采用一萬分子量超濾膜，荷葉提取液可以采用干荷葉獲得提取液，也可以采用新鮮荷葉獲得提取液；
[0008]b、將步驟a中稀釋后的溶液過大孔吸附樹脂柱，所采用的大孔吸附樹脂為XDA-6，將荷葉黃酮吸附在大孔吸附樹脂上，對該大孔吸附樹脂柱進行洗脫，濃縮洗脫液，經干燥得到荷葉黃酮。發明人在研究過程中發現大孔吸附樹脂XDA-6對荷葉黃酮具有優異的選擇吸附性能，采用XDA-6大孔吸附樹脂可以使分離得到的荷葉黃酮純度達到98%以上，XDA-6可以通過市場購買獲得，生產廠商如揚州制藥廠、西安藍曉科技有限公司等，XDA-6樹脂的比表面積為600!112/^，平均孔徑為100 Λ(Λ:音譯為〃埃〃，10的負10次方米，納米的十分之一)，偶極矩O. 4，平均粒徑50(^111，均一系數（090/1)40) I. 6。
[0009]上述提取高純度荷葉黃酮的方法，其中，所述步驟a中含有荷葉黃酮的荷葉提取液的提取方法為，將重量比為1:8-25的干荷葉和質量濃度為30-70%的乙醇加入提取罐中，于30-80°C提取2-4次，每次提取1-2小時，合并提取液得到荷葉提取液。干荷葉是指含水量低于13% (質量)、沒有霉變的荷葉。[0010]上述提取高純度荷葉黃酮的方法，其中，將經過納濾得到的濃縮液加入純凈水進行稀釋，純凈水與濃縮液的重量比為90-100: I。
[0011]上述提取高純度荷葉黃酮的方法，其中，對吸附荷葉黃酮的大孔吸附樹脂的洗脫、濃縮和干燥方法為，用質量濃度為70%的乙醇洗脫所述大孔吸附樹脂柱上吸附的荷葉黃酮，將洗脫液通過100分子量的膜濃縮，得到被100分子量膜截留的濃縮液，濃縮液經噴霧干燥得到荷葉黃酮。采用100分子量膜對洗脫液進行濃縮，避免了加熱濃縮方法中高溫對荷葉黃酮活性的破壞，有效的保持了荷葉黃酮的活性。
[0012]本發明還提供了一種提取荷葉生物堿的方法，其包括，在前述提取高純度荷葉黃酮的方法中，在荷葉提取液經過大孔吸附樹脂XDA-6后，將流出液通過帶有酰胺基團的大孔吸附樹脂柱，大孔吸附樹脂優選為D306，荷葉生物堿被吸附在該大孔吸附樹脂上，之后對吸附荷葉生物堿的大孔吸附樹脂進行洗脫，濃縮洗脫液，經干燥得到荷葉生物堿。大孔吸附樹脂D306可以通過市場購買獲得，如揚州制藥廠生產的D306樹脂，D306樹脂的比表面積為800m2/g，平均孔徑為350 Λ (Λ :音譯為〃埃",10的負10次方米，納米的十分之一)，偶極矩 I. 4，平均粒徑 70(^111，均一系數（090/1)40) I. 6。
[0013]上述提取荷葉生物堿的方法，其中，對吸附荷葉生物堿的大孔吸附樹脂的洗脫、濃縮和干燥方法為，用質量濃度為70%的乙醇洗脫大孔吸附樹脂柱上吸附的荷葉生物堿，將洗脫液通過100分子量的膜濃縮，得到被100分子量膜截留的濃縮液，濃縮液經噴霧干燥得到荷葉生物堿。
[0014]本發明還提供了一種提取荷葉多糖的方法，其包括，在前述提取荷葉生物堿的方法中，在所述步驟a中將含有荷葉黃酮的荷葉提取液采用I萬分子量的超濾膜進行濃縮除雜；在大孔吸附樹脂吸附荷葉生物堿后，將經過吸附荷葉生物堿的大孔吸附樹脂的流出液經納濾膜或反滲透膜截留，得到密度為I. 12-1. 18g/cm3的截留液體，向截留液體中加入質量濃度為95%乙醇使液體中乙醇質量濃度達到70%，攪拌，靜置，得到多糖沉淀。納濾膜可以采用截留分子量為100分子量納濾膜或200分子量納濾膜。納濾膜或反滲透膜均可以市場購買獲得，采用的反滲透膜也即RO膜，可以采用美國陶氏化學生產的RO膜。該方法中采用I萬分子量的超濾膜將蛋白質、大分子多糖等大分子物質截留下來，含有荷葉黃酮、荷葉堿和多糖的物質通過超濾膜，經過兩次樹脂吸附，荷葉黃酮和荷葉堿分別被吸附在樹脂柱上，含有多糖的吸附余液在納濾膜或反滲透膜的作用下除去小分子物質，得到含有多糖的截留液體，該方法能夠分離得到10000分子量以下的多糖。本發明的方法采用納濾膜或反滲透膜分離多糖，尤其是將應用于水處理領域中的反滲透膜用于分離多糖，為荷葉多糖的分離提供了全新的方法，增加了獲得荷葉多糖的途徑，并且分離得到的多糖純度和收率均可以達到90%以上。
[0015]本發明的提取高純度荷葉黃酮的方法，具有如下有益效果：
[0016]I、本發明提取高純度荷葉黃酮的方法中，采用大孔吸附樹脂XDA-6對荷葉提取液中的荷葉黃酮進行吸附，使分離得到的荷葉黃酮純度達到98%以上，收率達90%以上，能夠直接用于醫藥領域，該方法簡單易行，生產成本低，適于工業化應用；
[0017]2、本發明在提取高純度荷葉黃酮的基礎上，能夠進一步分離提取荷葉生物堿和多糖，實現了對荷葉的深度開發綜合利用，提高了荷葉的附加值，并且分離得到的荷葉生物堿和多糖收率均可以達到90%以上；本發明在提取荷葉多糖的方法中采用納濾膜或反滲透膜分離多糖，尤其采用反滲透膜分離多糖，為從荷葉中分離多糖提供了新的分離途徑，并且提高了多糖的純度，使分離后的多糖純度可以達到90%以上。
【具體實施方式】
[0018]下面結合實施例詳細描述本發明。
[0019]實施例I
[0020]將干荷葉粉碎，在提取罐中加入I重量份的干荷葉和15重量份質量濃度為50%的乙醇，于50°C提取3次，每次提取I. 5小時，合并提取液，將提取液經過一萬分子量超濾膜超濾，得到通過一萬分子量超濾膜的濃縮液，向濃縮液中加入純凈水稀釋，純凈水與濃縮液的質量比為99:1，將稀釋后的溶液過XDA-6大孔吸附樹脂柱，荷葉黃酮被吸附在該大孔吸附樹脂柱上，用質量濃度為70%的乙醇洗脫大孔吸附樹脂柱上吸附的荷葉黃酮，將洗脫液通過100分子量的膜濃縮，得到被100分子量膜截留的濃縮液，濃縮液經噴霧干燥，得到荷葉黃酮粉末。荷葉黃酮純度即質量含量達到98. 36%，收率可達92. 7% (收率=噴霧干燥所得到的荷葉黃酮質量/干荷葉中所含黃酮質量)。
[0021]實施例2
[0022]將干荷葉粉碎，在提取罐中加入I重量份的干荷葉和25重量份質量濃度為30%，于80°C提取2次，每次提取2小時，合并提取液，將提取液經過十萬分子量超濾膜超濾，得到通過十萬分子量超濾膜的濃縮液，向濃縮液中加入純凈水稀釋，純凈水與濃縮液的質量比為100:1，將稀釋后的溶液過XDA-6大孔吸附樹脂柱，荷葉黃酮被吸附在該大孔吸附樹脂柱上，用質量濃度為70%的乙醇洗脫大孔吸附樹脂柱上吸附的荷葉黃酮，將洗脫液通過100分子量的膜濃縮，得到被100分子量膜截留的濃縮液，濃縮液經噴霧干燥，得到荷葉黃酮粉末。荷葉黃酮純度即質量含量 達到98. 17%，收率可達91. 7% (收率=噴霧干燥所得到的荷葉黃酮質量/干荷葉中所含黃酮質量)。
[0023]實施例3
[0024]將干荷葉粉碎，在提取罐中加入I重量份的干荷葉和8重量份質量濃度為70%的乙醇，于30°C提取4次，每次提取I小時，合并提取液，將提取液經過一萬分子量超濾膜超濾，得到通過一萬分子量超濾膜的濃縮液，向濃縮液中加入純凈水稀釋，純凈水與濃縮液的質量比為100:1，將稀釋后的溶液過XDA-6大孔吸附樹脂柱，荷葉黃酮被吸附在該大孔吸附樹脂柱上，用質量濃度為70%的乙醇洗脫大孔吸附樹脂柱上吸附的荷葉黃酮，將洗脫液通過100分子量的膜濃縮，得到被100分子量膜截留的濃縮液，濃縮液經噴霧干燥，得到荷葉黃酮粉末。荷葉黃酮純度即質量含量達到98. 21%，收率可達92. 1% (收率=噴霧干燥所得到的荷葉黃酮質量/干荷葉中所含黃酮質量)。
[0025]實施例4
[0026]將鮮荷葉粉碎，在提取罐中加入I重量份的鮮荷葉和20重量份質量濃度為90%的乙醇，于60°C提取3次，每次提取I. 5小時，合并提取液，向提取液中加入石油醚，提取液與加入的石油醚的體積比為3:1，攪拌，靜置，得到含有乙醇和荷葉黃酮的萃余液層。
[0027]將含有乙醇和荷葉黃酮的萃余液通過一萬分子量超濾膜超濾，得到通過一萬分子量超濾膜的濃縮液，向濃縮液中加入純凈水稀釋，純凈水與濃縮液的質量比為99:1，將稀釋后的溶液過XDA-6大孔吸附樹脂柱，荷葉黃酮被吸附在該大孔吸附樹脂柱上，用質量濃度為70%的乙醇洗脫大孔吸附樹脂柱上吸附的荷葉黃酮，將洗脫液通過100分子量的膜濃縮，得到被100分子量膜截留的濃縮液，濃縮液經噴霧干燥，得到荷葉黃酮粉末。荷葉黃酮純度即質量含量達到98. 41%,收率可達93. 1% (收率=噴霧干燥所得到的荷葉黃酮質量/鮮荷葉中所含黃酮質量)。
[0028]實施例5提取荷葉生物堿
[0029]將從實施例I中XDA-6大孔吸附樹脂柱流出的流出液經過帶有酰胺基團的大孔吸附樹脂柱，大孔吸附樹脂采用D306，使荷葉生物堿被吸附在該大孔吸附樹脂柱上。用質量濃度為70%的乙醇洗脫D306大孔吸附樹脂柱上吸附的荷葉生物堿，將洗脫液通過100分子量的膜濃縮，得到被100分子量膜截留的濃縮液，濃縮液經噴霧干燥，得到荷葉生物堿粉末。荷葉生物堿純度即質量含量達到83. 2%，收率可達90. 9% (收率=噴霧干燥所得到的荷葉生物堿質量/干荷葉中所含荷葉生物堿質量)。
[0030]實施例6提取荷葉多糖
[0031]將實施例5中從D306大孔吸附樹脂柱流出的流出液經反滲透膜截留，除去小分子物質，得到被反滲透膜截留的密度為I. 15g/cm3的截留液體，向截留后的液體中加入質量濃度為95%乙醇使液體中乙醇質量濃度達到70%，攪拌，靜置，得到多糖沉淀，過濾干燥得到多糖。多糖純度即質量含量達到92. 5%，收率達到91. 8% (收率=過濾干燥所得到的多糖質量/干荷葉中所含多糖質量)。
[0032]實施例I中，經過超濾膜濃縮并經稀釋的液體中含有荷葉黃酮、荷葉生物堿和多糖，將稀釋液通過大孔吸附 樹脂XDA-6除去荷葉黃酮，之后流經大孔吸附樹脂D306除去荷葉生物堿，由于該兩種樹脂對荷葉黃酮和荷葉生物堿的高選擇性，使多糖基本不被二種樹脂吸附，大大提高了多糖的收 率。發明人在實驗過程中發現，雖然兩種樹脂在處理只含有多糖的溶液時能夠吸附多糖，但大孔吸附樹脂XDA-6在處理含有多糖和荷葉黃酮的溶液時，以及大孔吸附樹脂D306在處理含有多糖和荷葉生物堿的溶液時，表現出優異的選擇性，兩種樹脂在這種情況下僅吸附微量的多糖，參見表1和表2中實驗數據。
[0033]表1
[0034]
【權利要求】
1.一種提取高純度荷葉黃酮的方法，其包括， a、將含有荷葉黃酮的荷葉提取液經濃縮除雜得到濃縮液，加入純凈水稀釋； b、將步驟a中稀釋后的溶液過大孔吸附樹脂柱，所采用的大孔吸附樹脂為XDA-6，將荷葉黃酮吸附在大孔吸附樹脂上，對該大孔吸附樹脂柱進行洗脫，濃縮洗脫液，經干燥得到荷葉黃酮。
2.如權利要求1所述的提取高純度荷葉黃酮的方法，其中，所述步驟a中含有荷葉黃酮的荷葉提取液的提取方法為，將重量比為1:8-25的干荷葉和質量濃度為30-70%的乙醇加入提取罐中，于30-80°C提取2-4次，每次提取1-2小時，合并提取液得到荷葉提取液。
3.如權利要求2所述的提取高純度荷葉黃酮的方法，其中，所述步驟a中，將所述荷葉提取液采用超濾膜超濾濃縮除雜，得到通過超濾膜的濃縮液。
4.如權利要求1或3所述的提取高純度荷葉黃酮的方法，其中，所述步驟a中，加入的純凈水與濃縮液的重量比為90-100: I。
5.如權利要求1或2所述的提取高純度荷葉黃酮的方法，其中，對吸附荷葉黃酮的大孔吸附樹脂XDA-6的洗脫、濃縮和干燥方法為，用質量濃度為70%的乙醇洗脫所述大孔吸附樹脂柱上吸附的荷葉黃酮，將洗脫液通過100分子量的膜濃縮，濃縮液經噴霧干燥得到荷葉黃酮。
6.一種提取荷葉生物堿的方法，其包括，在權利要求1-5中任一項所述的提取高純度荷葉黃酮的方法中，在荷葉提取液經過大孔吸附樹脂XDA-6后，將流出液通過帶有酰胺基團的大孔吸附樹脂柱，荷葉生物堿被吸附在該大孔吸附樹脂上，之后對吸附荷葉生物堿的大孔吸附樹脂進行洗脫，濃縮洗脫液，經干燥得到荷葉生物堿。
7.如權利要求6所述的提取荷葉生物堿的方法，其中，對吸附荷葉生物堿的大孔吸附樹脂的洗脫、濃縮和干燥方法為，用質量濃度為70%的乙醇洗脫大孔吸附樹脂柱上吸附的荷葉生物堿，將洗脫液通過100分子量的膜濃縮，濃縮液經噴霧干燥得到荷葉生物堿。
8.如權利要求6所述的提取荷葉生物堿的方法，其中，所述吸附荷葉生物堿的大孔吸附樹脂為D306。
9.一種提取荷葉多糖的方法，其包括，在權利要求6-8中任一項所述的提取荷葉生物堿的方法中，在所述步驟a中將含有荷葉黃酮的荷葉提取液采用I萬分子量的超濾膜進行濃縮除雜；在大孔吸附樹脂吸附荷葉生物堿后，將經過吸附荷葉生物堿的大孔吸附樹脂的流出液經納濾膜或反滲透膜截留，得到密度為I. 12-1. 18g/cm3的截留液體，向截留液體中加入質量濃度為95%乙醇使液體中乙醇質量濃度達到70%，攪拌，靜置，得到多糖沉淀。
10.如權利要求9所述的提取荷葉多糖的方法，其中，所述納濾膜為100分子量膜或200分子量膜。
【文檔編號】A61K36/62GK103479731SQ201310453086
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月27日 優先權日:2013年9月27日
【發明者】徐君, 周愛琴 申請人:徐君, 揚州寶蓮生物科技有限公司