具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法
【專利摘要】具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法，本發明涉及復合納米粒子的制備方法。本發明要解決光動力學診斷與治療存在光敏劑熒光信號，強度不強，腫瘤組織的選擇性攝取不高，導致光敏劑在正常組織中的累積效應高，甚至在暗光下發生光化反應的問題。方法：一、制備二氧化硅包覆的磁性四氧化三鐵納米粒子；二、制備卟啉化合物；三、制備硅烷試劑鍵聯的卟啉化合物；四、制備卟啉-葉酸化合物；五、制備具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子。本發明基于磁性四氧化三鐵卟啉復合納米粒子具有集磁流體熱療、磁靶向性和光動力學療法于一體作為腫瘤的治療手段。本發明用于制備具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子。
【專利說明】具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及復合納米粒子的制備方法。
【背景技術】[0002]腫瘤熱療已成為繼手術、放療、化療之后的一種全新治療腫瘤的“綠色療法”。熱療不但對腫瘤細胞有直接的細胞毒效應，還可以和化療、放療聯合使用，可以增強化療、放療的療效，提高機體的免疫力，抑制腫瘤的轉移。然而常用的熱療方法因其對腫瘤的靶向能力差，易導致治療區周圍組織的溫度升高而產生損傷，在臨床應用中受到限制，隨著納米技術的發展，德國學者Jordan提出一種新的熱療法一納米磁流體熱療(magnetic fluidhyperthermia, MFH)治療腫瘤取得了重要進展，此方法的優點就是靶向定位升溫，即無磁粒子的組織不受損傷；另一發面，磁性納米粒子的磁靶向性可以將鍵聯在表面的卟啉類光敏劑累積在病灶部位，從而提高卟啉類光敏劑在病灶部位的累積效應。光動力學診斷與治療是利用一些光敏藥物可以優先富集于腫瘤部位，通過適當波長的光照射光敏藥物，利用光敏藥物的光動力反應對腫瘤進行診斷和治療。通過檢測光敏劑產生的熒光可檢測肉眼無法觀測到的早期癌或癌前病變，具有無創、快速、客觀、可記錄、可重復等特點，并可通過特征性熒光指示腫瘤的浸潤程度，進行腫瘤的定位診斷，使對腫瘤的治療更徹底。光動力學治療是一種微創的腫瘤治療方法，具有抗瘤譜廣、適應癥廣、可多次重復治療、能選擇性殺傷腫瘤細胞，較大限度地保留正常器官和組織的功能；與化療和放療聯合使用有一定的協同作用、光動力學療法與手術聯合使用，能縮小手術范圍和減少術后復發等優點。然而光動力學診斷與治療目前還存在一些缺點。比如:(I)最顯著問題就是光敏劑熒光信號強度不強；
[2]腫瘤組織的選擇性攝取不高，導致光敏劑在皮膚等其它正常組織中的存在，甚至在暗光下也發生光化反應；(3)光敏藥物一般為卟啉類衍生物，大多數水溶性不好，靜脈注射后血液中藥物濃度的波動常常不可避免。因此，只能在限定的時間內給藥，且劑量有限，很難達到滿意的療效。

【發明內容】

[0003]本發明要解決光動力學診斷與治療存在光敏劑熒光信號強度不強，腫瘤組織的選擇性攝取不高，導致光敏劑在皮膚等其它正常組織中的累積效應高，甚至在暗光下也發生光化反應的問題，而提供的具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法。
[0004]具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法，具體是按照以下步驟進行的:
[0005]一、采用FeCl3.6H20配制濃度為0.lmol/L的FeCl3溶液，采用FeSO4.4H20配制濃度為0.lmol/L的FeSO4溶液；
[0006]在氮氣保護和機械攪拌條件下，按照Fe3+與Fe2+摩爾比為2:1，將IOOmL濃度為
0.lmol/L的FeCl3溶液和50mL濃度為0.lmol/L的FeSO4溶液混合，得到FeCl3和FeSO4的混合溶液，再采用濃度為lmol/L的鹽酸調節pH值為5，然后加入質量濃度為25%的氨水溶液，直到混合溶液出現黑色沉淀，再繼續攪拌lh，得到固液混合液；
[0007]在外加磁場作用下，將固液混合液的上層廢液傾去，再用去離子水沖洗沉淀物，得到Fe3O4磁性納米粒子；將Fe3O4磁性納米粒子分散在濃度為0.4mol/L的NaCl水溶液中至Fe3O4磁性納米粒子的濃度為7.5mg/mL,得到混液A，然后取IOmL混液A加入30mL溶有
1.5mL四乙氧基硅烷的乙醇溶液中，然后依次加入30mL去離子水、30mL無水乙醇和2.5mL質量濃度為28%的氨水，再繼續攪拌90min，然后通過磁分離除去上層清夜，再用二次蒸餾水和乙醇混合液洗滌磁性納米粒子3次，得到二氧化硅包覆的磁性四氧化三鐵納米粒子；
[0008]二、將150mg四羥基苯基卟啉化合物、2g無水碳酸鉀和40mLN, N- 二甲基甲酰胺混合，利用裝有冰鹽水的磁力攪拌器攪拌10分鐘，然后加入1.5mL的氯乙酰氯，在冰鹽浴條件下繼續反應4.5h，再加入90mL~IIOmL 二次蒸餾水，然后用IOOmL 二氯甲烷進行萃取，取下層溶液；
[0009]將所得下層溶液用無水硫酸鈉干燥24h，再用旋轉蒸發儀蒸干溶劑，得到氯乙酰氯取代的不同卟啉化合物混合物，然后采用硅膠柱色譜進行分離，以純的二氯甲烷為淋洗劑，得到第一色譜帶的化合物，再以二氯甲烷和甲醇體積比為100:1的二氯甲烷和甲醇混合溶液為淋洗劑，得到第二色譜帶的化合物，然后以二氯甲烷和甲醇體積比為100:1.5的二氯甲烷和甲醇混合淋洗劑為洗脫劑，得到第三色譜帶的化合物，再以二氯甲烷和甲醇體積比為100:1.8的二氯甲烷和甲醇混合淋洗劑為洗脫劑，得到第四色譜帶的化合物，.再以二氯甲烷和甲醇體積比為100:2.5的二氯甲烷和甲醇混合淋洗劑為洗脫劑，得到第五色譜帶的
,......化合物1，其中，化合物I的結構式為.
【權利要求】
1.具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法，其特征在于具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法，具體是按照以下步驟進行的: 一、采用FeCl3.6H20配制濃度為0.lmol/L的FeCl3溶液，采用FeSO4.4H20配制濃度為 0.lmol/L 的 FeSO4 溶液； 在氮氣保護和機械攪拌條件下，按照Fe3+與Fe2+摩爾比為2:1，將IOOmL濃度為0.1mol/L的FeCl3溶液和50mL濃度為0.lmol/L的FeSO4溶液混合，得到FeCl3和FeSO4的混合溶液，再采用濃度為lmol/L的鹽酸調節pH值為5，然后加入質量濃度為25%的氨水溶液，直到混合溶液出現黑色沉淀，再繼續攪拌lh，得到固液混合液； 在外加磁場作用下，將固液混合液的上層廢液傾去，再用去離子水沖洗沉淀物，得到Fe3O4磁性納米粒子；將Fe3O4磁性納米粒子分散在濃度為0.4mol/L的NaCl水溶液中至Fe3O4磁性納米粒子的濃度為7.5mg/mL,得到混液A，然后取IOmL混液A加入30mL溶有1.5mL四乙氧基硅烷的乙醇溶液中，然后依次加入30mL去離子水、30mL無水乙醇和2.5mL質量濃度為28%的氨水，再繼續攪拌90min，然后通過磁分離除去上層清夜，再用二次蒸餾水和乙醇混合液洗滌磁性納米粒子3次，得到二氧化硅包覆的磁性四氧化三鐵納米粒子； 二、將150mg四羥基苯基卟啉化合物、2g無水碳酸鉀和40mLN,N-二甲基甲酰胺混合,利用裝有冰鹽水的磁力攪拌器攪拌10分鐘，然后加入1.5mL的氯乙酰氯，在冰鹽浴條件下繼續反應4.5h，再加入90mL~IlOmL 二次蒸餾水，然后用IOOmL 二氯甲烷進行萃取，取下層溶液； 將所得下層溶液用無水硫酸鈉干燥24h，再用旋轉蒸發儀蒸干溶劑，得到氯乙酰氯取代的不同卟啉化合物混合物，然后采用硅膠柱色譜進行分離，以純的二氯甲烷為淋洗劑，得到第一色譜帶的化合物，再以二氯甲烷和甲醇體積比為100:1的二氯甲烷和甲醇混合溶液為淋洗劑，得到第二色譜帶的化合物，然后以二氯甲烷和甲醇體積比為100:1.5的二氯甲烷和甲醇混合淋洗劑為洗脫劑，得到第三色譜帶的化合物，再以二氯甲烷和甲醇體積比為100:1.8的二氯甲烷和甲醇混合淋洗劑為洗脫劑，得到第四色譜帶的化合物，.再以二氯甲烷和甲醇體積比為100:2.5的二氯甲烷和甲醇混合淋洗劑為洗脫劑，得到第五色譜帶的化 合物1，其中，化合物I的結構式為
2.根據權利要求1所述的具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟一中采用二次蒸餾水和乙醇的體積比為1:1的二次蒸餾水和乙醇混合液洗滌。
3.根據權利要求1所述的具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟二中加入IOOmL 二次蒸餾水。
4.根據權利要求1所述的具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟三中在避光條件下磁力攪拌24h。
5.根據權利要求1所述的具有靶向性四氧化三鐵-卟啉復合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟四中在溫度為-20°C條件下抽濾。
【文檔編號】A61K47/48GK103550162SQ201310520140
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月29日 優先權日:2013年10月29日
【發明者】郭喜明, 郭斌, 陳磊 申請人:哈爾濱工業大學