跨物種特異性CD3-ε結合結構域的制作方法【專利摘要】本發明涉及包含能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3(ε)鏈的表位的人類結合結構域的多肽以及產生所述多肽的方法。本發明還涉及編碼該多肽的核酸、包含該核酸的載體以及包含該載體的宿主細胞。在另一方面，本發明提供包含所述多肽的藥物組合物和所述多肽的醫學應用。在進一步方面，本發明提供鑒定包含能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε(CD3ε)的表位的跨物種特異性結合結構域的多肽的方法。【專利說明】跨物種特異性CD3-ε結合結構域[0001]本發明涉及包含能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類⑶3(ε)的表位的第一人類結合結構域的多肽以及產生所述多肽的方法。本發明還涉及編碼該多肽的核酸、包含該核酸的載體以及包含該載體的宿主細胞。在另一方面，本發明提供包含所述多肽的藥物組合物和所述多肽的醫學應用。[0002]T細胞識別受克隆型地分布的αβ和yδT細胞受體(TcR)介導，這些受體與肽MHC(pMHC)的肽負載分子相互作用(Davis&Bjorkman,Nature334(1988),395-402)。TcR的抗原特異性鏈不具備信號傳導結構域，但代替地偶合于保守的多亞基信號傳導器CD3(Call,Celllll(2002),967-979,Alarcon,Immunol.Rev.191(2003),38-46,MalissenImmunol.Rev.191(2003)，7-27)。TcR連接藉以直接傳達至信號傳導器的機制仍是T細胞生物學的根本問題(Alarcon,上述引文；Davis,CellllO(2002)，285-287)。看起來明顯的是，持續的T細胞響應牽涉共同受體接合、TcR低聚和免疫突觸中TcR-pMHC復合體的更高級的排列(Davis&vanderMerwe,Curr.Biol.11(2001),R289-R291,Davis,Nat.1mmunol.4(2003),217-224)。然而，很早的TcR信號傳導在不存在這些事件時發生，并可包括配體誘導的CD3ε構象變化(Alarcon,上述引文；Davis(2002)，上述引文；Gil，J.Biol.Chem.276(2001)，11174-11179,Gil,Celll09(2002)，901-912)。信號傳導復合體的ε、Y、δ和δ亞基彼此締合以形成⑶3的ε-Υ異二聚體、⑶3的ε-δ異二聚體和⑶3的δ-δ同二聚體(Call，上述引文)。不同研究已經揭示，⑶3分子對于αβTcR的適當細胞表面表達和正常T細胞發育是重要的(Berkhout，J.Biol.Chem.263(1988)，8528-8536，Wang,J.Exp.Med.188(1998)，1375-1380,Kappes,Curr.0pin.1mmunol.7(1995)，441-447)。小鼠CD3的εY異二聚體的胞外域片段的溶液結構顯示，εy亞基兩者都是C2_setIg結構域，它們彼此相互作用以形成異常的側-對-側二聚體構型(Sun，Celll05(2001),913-923)。盡管富含半胱氨酸的主干(stalk)表現為在驅使⑶3二聚化中起重要作用(Su，上述引文，Borroto,J.Biol.Chem.273(1998)，12807-12816)，但是通過CD3ε與CD3Y的細胞外結構域相互作用足以組裝這些蛋白與TcRP(Manolios,Eur.J.1mmunol.24(1994)，84-92,Manolios&Li,Immunol.CellBiol.73(1995)，532-536)。盡管仍有爭論，但TcR的優勢化學計量學最可能包含一個aPTcR、一個⑶3的εy異二聚體、一個⑶3的εδ異二聚體和一個⑶3的δδ同二聚體(Call,上述引文)。由于人類⑶3的εy異二聚體在免疫應答中的關鍵作用，近來解釋了結合于治療抗體0KT3的該復合體的晶體結構(Kjer-Nielsen，PNAS101,(2004)，7675-7680)。[0003]許多治療策略通過靶向TcR信號傳導、尤其是臨床上廣泛用于免疫抑制方案的抗人類⑶3的單克隆抗體(mAb)來調節T細胞免疫性。⑶3特異性小鼠mAb0KT3是第一個批準用于人類的mAb(Sgro,Toxicologyl05(1995)，23-29)，并且作為免疫抑制劑在臨床上廣泛用于移植(Chatenoud,Clin.Transplant?(1993),422-430,Chatenoud,Nat.Rev.1mmunol.3(2003)，123-132，Kumar,Transplant.Proc.30(1998)，1351-1352)、I型糖尿病(Chatenoud(2003)，上述引文)和銀屑病(Utset,J.Rheumatol.29(2002)，1907-1913)。而且，抗⑶3的mAb可誘導部分T細胞信號傳導和克隆無反應性(Smith,J.Exp.Med.185(1997)，1413-1422)。已在文獻中描述0KT3為有效的T細胞促分裂原(Vanffauve,J.1mmunol.124(1980),2708-18)以及有效的T細胞殺傷劑(Wong,Transplantation50(1990)，683-9)。0KT3以時間依賴性方式表現這兩種活性；在導致細胞因子釋放的T細胞早期激活之后，進一步施用時，0KT3在后來阻斷所有已知的T細胞功能。正是由于這種后來對T細胞功能的阻斷，0KT3得以作為免疫抑制劑如此廣泛應用在治療方案中，以減少或甚至消除同種異體移植組織排斥。[0004]0KT3逆轉同種異體移植組織排斥最有可能是通過阻斷所有T細胞的功能，T細胞在急性排斥中起主要作用。0KT3與人類T細胞膜中的CD3復合體反應并阻斷其功能，該CD3復合體與T細胞的抗原識別結構(TCR)締合并對信號轉導是必需的。TCR/CD3的哪個亞基被0KT3結合已經是很多研究的主題。盡管一些證據指出0KT3對TCR/⑶3復合體的ε亞基的特異性(Tunnacliffe,Int.1mmunol.1(1989)，546-50；Kjer-Nielsen,PNAS101,(2004)，7675-7680)。進一步的證據已經顯示，0KT3結合TCR/CD3復合體要求該復合體的其它亞基存在(Salmeron,J.1mmunol.147(1991),3047-52)。[0005]對⑶3分子有特異性的其它眾所周知的抗體列在Tunnacliffe,Int.1mmunol.1(1989)，546-50。如上所述，這種CD3特異性抗體能夠誘導各種T細胞應答，諸如淋巴因子的產生(Vonffussow,J.1mmunol.127(1981)，1197；Palacious,J.1mmunol.128(1982)，337)、增殖(Vanffauve,J.1mmunol.124(1980)，2708-18)和抑制性T細胞的誘導(Kunicka,在〃LymphocyteTypingII(淋巴細胞分型II)〃1(1986)，223)。即，取決于實驗條件，CD3特異性單克隆抗體可抑制或誘導細胞毒性(Leewenberg,J.1mmunol.134(1985),3770;Phillips,J.1mmunol.136(1986)1579；Platsoucas,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA78(1981)，4500；Itoh,Cell.1mmunol.108(1987)，283-96；Mentzer,J.1mmunol.135(1985),34；Landegren,J.Exp.Med.155(1982),1579；Choi(2001),Eur.J.1mmunol.31,94-106；Xu(2000),CellImmunol.200,16-26；Kimball(1995),Transpl.1mmunol.3,212-221)。[0006]盡管本領域中描述的許多⑶3抗體已被報道為識別⑶3復合體的⑶3ε亞基，但是它們中大多數實際上結合構象表位，并因此僅識別天然環境中的TCR的CD3e。構象表位的特征為存在兩個或更多個不連續的氨基酸殘基，它們在一級序列中是分開的，但當多肽折疊成天然蛋白/抗原時聚集到分子表面上(Sela,(1969)Sciencel66,1365和Laver,(1990)Cell61，553_6)。本領域中描述的被CD3e抗體結合的構象表位可分為兩組。在主要組中，所述表位由例如⑶3ε鏈和⑶3或⑶3δ鏈的兩個⑶3亞基形成。例如，若干研究中已發現，最廣泛使用的⑶3ε單克隆抗體003、1了31、此!11'1、706和1^11-4不結合于以⑶3-ε鏈單轉染的細胞。然而，這些抗體給以⑶3ε加CD3或⑶3δ的組合雙轉染的細胞染色(Tunnacliffe,上述引文；Law,Int.1mmunol.14(2002),389-400；Salmeron,J.1mmunol.147(1991)，3047-52；Coulie,Eur.J.1mmunol.21(1991)，1703-9)。在第二個較小的組中，構象表位在⑶3ε亞基本身中形成。這組的一個成員是例如mAbAPA1/1，其針對變性的CD3ε而產生(Risueno，Bloodl06(2005),601-8)。總之，本領域描述的大多數CD3ε抗體識別位于CD3的兩個或更多個亞基上的構象表位。因此，形成這些表位的三維結構的不連續的氨基酸殘基可位于CD3ε亞基本身上或位于CD3ε亞基和其它CD3亞基諸如CD3y或0)3δ上。[0007]關于⑶3抗體的另一個問題是已發現許多⑶3抗體為物種特異性的。抗⑶3單克隆抗體(如對任何其它單克隆抗體通常認為是適用的)通過高度特異性識別它們的靶分子而起作用。它們僅識別其靶CD3分子上的單個位點或表位。例如，對CD3復合體特異性的最廣泛使用和最佳表征的單克隆抗體之一是0KT-3。該抗體與黑猩猩CD3反應但不與其它靈長類諸如獼猴的⑶3同系物、或狗的⑶3反應(Sandusky等人，J.Med.Primatol.15(1986)，441-451)。抗CD3單克隆抗體UCHT-1也與黑猩猩的CD3反應但不與獼猴的CD3反應(自己的數據)。另一方面，也有識別獼猴抗原但不識別其人類對應物的單克隆抗體的實例。這一組的一個實例是針對獼猴⑶3的單克隆抗體FN-18(Uda等人，J.Med.Primatol.30(2001)，141-147)。有趣的是，已發現，由于獼猴CD3抗原的多態性，來自約12%食蟹猴的外周淋巴細胞缺少與抗恒河猴CD3單克隆抗體(FN-18)的反應性。Uda等人描述不與FN-18抗體反應的食蟹猴CD3序列中兩個氨基酸的置換，與和FN-18抗體反應的衍生自動物的CD3相比較(Uda等人，JMedPrimatol.32(2003),105-10;Uda等人，JMedPrimatol.33(2004)，34-7)。[0008]CD3單克隆抗體和其片段固有的這種區分能力即物種特異性是將其開發為治療人類疾病的治療劑的顯著障礙。為了獲得市場許可，任何新的候選藥物必須經過嚴格測試。這種測試可細分為臨床前階段和臨床階段:前者在動物中進行，而后者(進一步細分為通常已知的臨床I期、II期和III期)在人類患者中進行。臨床前測試的目的是證實候選藥物具有期望的活性和最重要地是安全的。只有已經在臨床前測試中證實了候選藥物在動物中的安全性和可能的效力時，該候選藥物才將會被相關監管機構批準在人類中進行臨床測試。可以以下三種方式測試候選藥物在動物中的安全性，(i)在相關物種中，即在候選藥物可識別直向同源抗原的物種中，(?)在包含人類抗原的轉基因動物中和(iii)通過使用可結合動物中存在的直向同源抗原的候選藥物的替代物。轉基因動物的限制是該技術一般限于嚙齒類動物。在嚙齒類動物和人類之間存在生理學的顯著差異，并且安全性結果不能容易地推測到人類。候選藥物的替代物的限制是與實際候選藥物相比不同的物質組成，以及所用動物通常是具有上述限制的嚙齒類動物。因此，在嚙齒類動物中產生的臨床前數據對于候選藥物具有有限的預測力。安全性測試的所選方法是使用相關物種，優選地為低等靈長類。本領域描述的適于在人類中治療干預的CD3結合分子目前的限制是，相關物種是高等靈長類，尤其是黑猩猩。黑猩猩被認為`是瀕危物種，并且由于其類似人類的特征，使用這種動物進行藥物安全性測試在歐洲已被禁止，而且在別處也被高度限制。[0009]本發明涉及一種多肽，其包含能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類⑶3ε(ε)鏈的表位的優選地為人類的結合結構域，其中所述表位是包括在由SEQIDN0.2、4、6或8組成的組中的氨基酸序列的一部分。顯示在SEQIDN0.2、4、6和8的序列及其功能片段是背景獨立的⑶3表位。[0010]本發明的益處是提供了一種多肽，所述多肽包含表現對人類和非黑猩猩靈長類CD3ε(ε)鏈的跨物種特異性的結合結構域，其可用于臨床前評價這些結合結構域在靈長類中的安全性、活性和/或藥物代謝動力學概況，并且可以相同形式作為人類的藥物。相同分子可用于臨床前動物研究以及人類臨床研究。這導致高度可比的結果和與物種特異性替代物分子相比大大提高的動物研究預測力。本發明中，意外地鑒定了CD3e細胞外結構域的N末端1-27個氨基酸殘基的多肽片段，所述多肽片段從其在CD3復合體中的天然環境中取出(并融合于異源氨基酸序列諸如EpCAM或免疫球蛋白Fe部分)時保持其三維結構完整性，這一點不同于本領域中描述的⑶3ε的所有其它已知表位。[0011]本發明中提供的⑶3表位的背景獨立性對應于⑶3ε的前27個N末端氨基酸或此27個氨基酸的段的功能片段。本文所用關于CD3表位的短語“背景獨立的”是指本文描述的創造性的結合分子/抗體分子的結合不導致抗原決定簇或表位周圍的構象、序列或結構的改變或修飾。相反，由常規CD3結合分子(如，W099/54440或W004/106380中公開的)所識別的CD3表位位于CD3ε鏈C末端至背景獨立的表位的N末端1_27氨基酸，其中它僅當被埋入ε鏈的其余部分且通過ε鏈與⑶3Y或δ鏈的異二聚化而保持在正確位置時才采取正確構象。[0012]作為本文提供的雙特異性結合分子的一部分并針對背景獨立的CD3表位產生(和指導)的抗CD3結合分子提供了令人驚訝的關于T細胞重新分布的臨床改進，以及因此提供了更有利的安全性概況。不受限于理論，由于該CD3表位是背景獨立的，其形成自主的自給自足的亞結構域而不太影響CD3復合體的其余部分，因此本文提供的CD3結合分子比識別背景依賴性CD3表位的常規CD3結合分子(如W099/54440中提供的分子)誘導CD3構象的較少變構改變。[0013]作為雙特異性結合分子一部分的本發明CD3結合分子的CD3表位的背景獨立性與以本發明CD3結合分子治療的初始階段中較少的T細胞重新分布有關，這導致與本領域已知的識別背景依賴性CD3表位的常規CD3結合分子相比本發明CD3結合分子的更佳的安全性概況。尤其是，由于以CD3結合分子治療的初始階段中的T細胞重新分布是CNS不良事件的主要風險因素，因此本發明的CD3結合分子通過識別背景獨立的而不是背景依賴性CD3表位而具有超過本領域已知的CD3結合分子的實質的安全性優勢。在以常規CD3結合分子治療的初始階段中具有關于T細胞重新分布的這種CNS不良事件的患者通常遭受精神混亂和定向障礙，在一些情況下也遭受小便失禁。精神混亂是精神狀態的改變，其中患者不能夠以他或她通常的清晰水平進行思考。所述患者通常難以集中精力，并且思維不僅變模糊和不清楚，還經常顯著地減慢。在以常規⑶3結合分子治療的初始階段中具有關于T細胞重新分布的CNS不良事件的患者也可能遭受失憶。經常地，精神混亂導致識別人和/或地點或判斷時間和日期的能力的喪失。定向障礙的感覺在精神混亂中是常見的，并且決策能力受損。在以常規CD3結合分子治療的初始階段中關于T細胞重新分布的CNS不良事件還可包括模糊的言語和/或選詞困難。該疾患可損害語言的表達和理解以及讀和寫。除了小便失禁，在一些患者中，眩暈和頭昏還可伴隨在以常規⑶3結合分子治療的初始階段中關于T細胞重新分布的CNS不良事件。[0014]所述⑶3ε的27個氨基酸的N末端多肽片段中三維結構的維持可用于產生優選地為人類的結合結構域，所述結合結構域在體外能夠結合于N末端CD3ε多肽片段并且在體內以相同結合親和力結合到T細胞上天然的CD3復合體(的CD3ε亞基)。這些數據有力地指出，本文所述的N末端片段形成類似于其在體內正常存在的結構的三級構象。進行了關于CD3ε的N末端多肽片段氨基酸1-27結構完整性的重要性的一個非常敏感的測試。將CD3ε的N末端多肽片段的氨基酸1-27的單個氨基酸改變為丙氨酸(丙氨酸掃描)以測試CD3ε的N末端多肽片段的氨基酸1-27對于輕微破壞的敏感性。作為本發明雙特異性結合分子一部分的CD3特異性抗體分子被用于測試與CD3ε的N末端多肽片段的氨基酸1-27的丙氨酸突變體的結合(參見所附的實施例5)。在所述片段N末端頂端的前五個氨基酸殘基和在CD3ε的Ν末端多肽片段的氨基酸1-27的位置23和25的兩個氨基酸的個別交換對于抗體分子的結合是關鍵的。將位置1-5區域中的包括殘基Q(位置1的谷氨酰胺)、D(位置2的天冬氨酸)、G(位置3的甘氨酸)、N(位置4的天冬酰胺)和E(位置5的谷氨酸)的氨基酸殘基置換為丙氨酸，破壞了本發明優選地為人類的結合分子與所述片段的結合。而對至少一些本發明的優選地為人類的結合分子而言，在所述片段C末端的兩個氨基酸殘基T(位置23的蘇氨酸)和I(位置25的異亮氨酸)減少對本發明的優選地為人類的結合分子的結合能。[0015]出乎意料地，已發現如此分離的優選地為人類的結合分子不僅識別人類CD3ε的Ν末端片段，還識別各種靈長類CD3e的相應同源片段，所述靈長類包括新世界猴(狨猴Marmoset、普通滅猴Callithrixjacchus;絨頂徑柳猴Saguinusoedipus;松鼠猴Saimirisciureus)和舊世界猴(食蟹稱猴Macacafascicularis,也稱為食蟹猴CynomolgusMonkey;或稱猴Macacamulatta,也稱為恒河猴RhesusMonkey)。因此，檢測到本發明⑶3結合分子的多靈長類特異性。以下序列分析證實，人類和靈長類在CD3e細胞外結構域的N末端有高度同源的序列段。[0016]在本發明中已發現，產生對⑶3ε特異性的優選地為人類的結合分子是可能的，其中相同的分子可用于臨床前動物測試，以及臨床研究和甚至人類治療。這是因為優選地為人類的結合分子的意外的鑒定，所述結合分子除了結合于人類CD3e(且因為與黑猩猩對應物可能的遺傳相似性)，還結合于非黑猩猩靈長類(包括新世界猴和舊世界猴)的所述抗原的同系物。如以下實施例所示，所述CD3e特異性的優選地為人類的結合分子可整合入雙特異性單鏈抗體以產生針對包括但不限于癌癥或免疫病癥的各種疾病的治療。因此，構建以在系統發生上(與人類相距)遠的物種中測試的替代的CD3ε結合結構域或包括替代的CD3e結合結構域的雙特異性單鏈抗體的需求消失了。結果是，可以將與預期在臨床測試以及隨后的市場許可和治療藥物施用中給人類施用的完全相同的分子用于動物臨床前測試。使用與后來施用于人類相同的分子用于臨床前動物測試的能力實際上消除或至少大大減少了在臨床前動物測試中獲得的數據對人類情況有受限的適用性的危險。簡言之，使用與將實際施用于人類的相同的分子在動物中獲得臨床前安全性數據對于確保數據對人類相關情況的適用性起很大作用。相反，在常規方法中使用替代物分子，所述替代物分子必須與用于臨床前安全性評估的動物測試系統在分子水平相適應。因此，有待在人類治療中使用的分子實際上在序列上并且還可能在結構上不同于在藥物代謝動力學參數和/或生物活性臨床前測試中使用的替代物分子，其結果是在臨床前動物測試中獲得的數據對人類情況具有有限的適用性/可轉移性。使用替代物分子要求對全新的構建體進行構建、產生、純化和表征。這導致獲得該分子必需的額外的開發費用和時間。總之，除了將用于人類治療的實際藥物之外，必須單獨開發替代物，以至于不得不進行兩種分子的兩條開發線。因此，本文所述的表現跨物種特異性的人類結合分子或基于抗體的構建體的主要優勢是相同的分子可用于人類治療和臨床前動物測試。[0017]優選地，能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε鏈的表位的本發明的結合分子是人類來源的。此外，因為本發明的人類結合分子的人類來源，將結合分子施用于人類患者時最大可能程度地排除了針對所述結合分子的免疫反應的產生。[0018]作為本發明雙特異性結合分子一部分的優選地為人類的CD3ε特異性結合分子的另一主要優勢是它們在各種靈長類中臨床前測試的適用性。候選藥物在動物中的行為應理想地指示該候選藥物在施用于人類時的預期行為。結果是，從這種臨床前測試獲得的數據應該因此一般對于人類情況具有高預測力。然而，如從最近關于TGN1412(⑶28單克隆抗體)的I期臨床試驗的悲慘結果所認識到的，候選藥物在靈長類物種和人類中可能不同地作用:盡管在所述抗體的臨床前測試中在以食蟹猴進行的動物研究中已觀察到無或僅有有限的副作用，但是六個人類患者在施用所述抗體后發展了多器官衰竭(Lancet368(2006),2206-7)。這些不期望的反面事件的結果表明，將臨床前測試限于僅一種(靈長類)物種可能不是充分的。本發明的CD3e特異性人類結合分子結合于一系列新世界和舊世界猴的事實可能有助于克服上述情況中所面臨的問題。因此，本發明提供在開發和測試人類治療藥物時將物種效應差異最小化的手段和方法。[0019]使用作為本發明雙特異性結合分子一部分的優選地為人類的跨物種特異性CD3ε結合結構域，也不再需要使測試動物適應于意欲施用于人類的候選藥物，諸如例如，創造轉基因動物。所述CD3e特異性的優選地為人類的結合分子(或包含所述結合分子的雙特異性單鏈抗體)根據本發明的應用和方法展現出跨物種特異性，可直接用于非黑猩猩靈長類臨床前測試，且不需要對動物的任何遺傳操縱。如本領域技術人員公知的，將測試動物適應于候選藥物的方法通常具有危險，所述危險是指在臨床前安全性測試中獲得的結果由于動物的改變而對人類具有較少的代表性和預測性。例如，在轉基因動物中，轉基因編碼的蛋白通常高度過表達。因此，針對該蛋白抗原的抗體的生物活性獲得的數據對于所述蛋白在其中以低得多的、更生理水平表達的人類的預測價值可能是有限的。[0020]表現跨物種特異性的、CD3ε特異性的優選地為人類的結合分子(或包含所述結合分子的雙特異性單鏈抗體)的用途的進一步優勢是避免了作為瀕危物種的黑猩猩用于動物測試的事實。黑猩猩與人類的親緣關系最近，且最近基于基因組測序數據被歸類于人科動物(Wildman等人，PNAS100(2003)，7181)。因此，以黑猩猩獲得的數據通常被認為對于人類具有高度預測性。然而，因為其作為瀕危物種的狀態，可用于醫學實驗的黑猩猩的數量是高度受限的。如上所述的，`維持黑猩猩用于動物測試因此既昂貴又存在倫理問題。使用本發明的CD3ε特異性的優選地為人類的結合分子(或包含所述結合分子的雙特異性單鏈抗體)在臨床前測試期間避免了倫理異議和經濟負擔，并且不妨礙獲得的動物測試數據的質量，即適用性。基于此，使用CD3e特異性的優選地為人類的結合分子(或包含所述結合分子的雙特異性單鏈抗體)為在黑猩猩中進行的研究提供了合理的替代方案。[0021]本發明的CD3ε特異性的優選地為人類的結合分子(或包含所述結合分子的雙特異性單鏈抗體)的進一步優勢是在使用其作為動物臨床前測試的一部分時，例如在藥物代謝動力學動物研究過程中，抽取多個血液樣品的能力。與以較低等的動物例如小鼠相比，使用非黑猩猩靈長類能夠更容易地獲得多個血液抽取物。多個血液樣品的抽取允許連續測試血液參數以確定由本發明的優選地為人類的結合分子(或雙特異性單鏈抗體)誘導的生物效應。此外，多個血液樣品的抽取使研究者能夠評價如上定義的優選地為人類的結合分子(或包含所述結合分子的雙特異性單鏈抗體)的藥物代謝動力學概況。此外，可能由所述優選地為人類的結合分子(或包含所述結合分子的雙特異性單鏈抗體)誘導的反映在血液參數里的潛在副作用可在施用所述抗體期間抽取的不同血液樣品中測量。這允許測定本文定義的優選地為人類的結合分子(或包含所述結合分子的雙特異性單鏈抗體)的潛在毒性概況。[0022]表現跨物種特異性的本文定義的優選地為人類的結合分子(或雙特異性單鏈抗體)的優勢可簡略地概括如下:[0023]第一，用于臨床前測試的本文定義的優選地為人類的結合分子(或雙特異性單鏈抗體)與用于人類治療的結合分子是相同的。因此，不再需要開發藥物代謝動力學性質和生物活性可能不同的兩種獨立的分子。這是非常有利的，因為例如與常規的替代物方法相比之下藥物代謝動力學結果更直接地轉移和應用于人類環境。[0024]第二，使用本文定義的優選地為人類的結合分子(或雙特異性單鏈抗體)制備人類治療劑比替代物方法需要更低的成本和勞力。[0025]第三，本文定義的優選地為人類的結合分子(或雙特異性單鏈抗體)可用于不僅在一種靈長類物種中，而且在一系列不同的靈長類物種中的臨床前測試，從而限制靈長類和人類之間潛在的物種差異的風險。[0026]第四，避免把瀕危物種黑猩猩用于動物測試。[0027]第五，可抽取多個血液樣品用于大規模的藥物代謝動力學研究。[0028]第六，因為根據本發明優選實施方案的優選地為人類的結合分子的人類來源，當施用于人類患者時，針對所述結合分子的免疫反應的產生被最小化。排除了對來自非人類物種如小鼠的候選藥物特異性的抗體產生免疫應答的誘導，所述誘導導致針對鼠來源的治療分子的人類-抗-小鼠抗體(HAMA)的形成。`[0029]術語“蛋白”是本領域公知的，并且描述生物化合物。蛋白包含一個或多個氨基酸鏈(多肽)，借此氨基酸經由肽鍵彼此結合。本文所用的術語“多肽”描述一組分子，其由多于30個氨基酸組成。根據本發明，多肽的組包括“蛋白”，只要該蛋白由單個多肽組成。并且與所述定義一致，術語“多肽”描述蛋白片段，只要這些片段由多于30個氨基酸組成。多肽可進一步形成多聚體，諸如二聚體、三聚體和更高級的寡聚體，即由多于一個多肽分子組成。形成這種二聚體、三聚體等的多肽分子可為相同或不相同的。因此，這種多聚體的相應的更高級結構稱為同或異二聚體、同或異三聚體等。異多聚體(hereteromultimer)的一個實例是抗體分子，其在天然存在形式下由兩條相同的多肽輕鏈和兩條相同的多肽重鏈組成。術語“多肽”和“蛋白”還指天然修飾的多肽/蛋白，其中所述修飾通過例如翻譯后修飾如糖基化、乙酰化、磷酸化和類似修飾實現。這種修飾是本領域公知的。[0030]本文所用的“人類”和“人”是指物種智人(Homosapiens)。就本文所述的構建體的醫學應用而言，人類患者將以相同分子治療。[0031]與本發明分子在上下文中一起使用的術語“人類來源”描述可衍生自人類文庫或具有對應于人類等價物的結構/序列的分子。因此，具有對應于人類序列類似物的氨基酸序列的蛋白，如，具有在骨架中對應于人類種系序列的氨基酸序列的抗體片段，被理解為人類來源的分子。[0032]本文所用的“非黑猩猩靈長類”或“非黑猩靈長類”或其語法變體是指除了黑猩猩之外、即除了屬于黑猩猩屬的動物的任何靈長類，并且包括物種倭黑猩猩(Panpaniscus)和黑猩猩(Pantroglodytes),也稱為黑猩猩Anthropopithecustroglodytes或猴Simiasatyrus。“靈長類”、“靈長類物種”、“靈長類”或其語法變體表示分為原猴和類人猿兩種亞目的真哺乳亞綱哺乳動物目，并包括人、猿、猴和狐猴。具體地，本文所用的“靈長類”包括原猴亞目Strepsirrhini(非眼鏡猴的原猴)，其包括狐猴型下目Lemuriformes(本身包括鼠狐猴總科Cheirogaleoidea和狐猴總科Lemuroidea)、指猴型下目Chiromyiformes(本身包括指猴科Daubentoniidae)和懶猴型下目Lorisiformes(本身包括懶猴科Lorisidae和嬰猴科Galagidae)。本文所用的“靈長類”還包括簡鼻亞目Haploirhini，其包括跗猴型下目Tarsiiformes(本身包括跑猴科Tarsiidae)、類人猿下目Simiiformes(本身包括闊鼻小目Platyrrhini，或新世界猴，和狹鼻小目Catarrhini，其包括稱猴總科Cercopithecidea或舊世界猴)。[0033]本發明含義中，非黑猩猩靈長類物種可理解為狐猴、眼鏡猴、長臂猿、狨猴(屬于卷尾猴科Cebidae的新世界猴)或舊世界猴(屬于稱猴總科Cercopithecoidea)。[0034]本文所用的“舊世界猴”包括屬于獼猴總科Cercopithecoidea的任何猴，其本身細分為以下科:獼猴亞科Cercopithecinae，其主要是非洲的但包括亞洲和北非的各種獼猴屬；和疣猴亞科Colobinae，其包括大多數亞洲屬但也包括非洲疣猴。[0035]具體地，在獼猴亞科Cercopithecinae中，有利的非黑猩猩靈長類可來自長尾猴族Cercopithecini，在短肢猴屬Allenopithecus內(艾倫氏沼澤猴(Allen’sSwampMonkey)、短肢猴Allenopithecusnigroviridis);在侏長尾猴屬Miopithecus內(安哥拉侏長尾猴(AngolanTalapoin)、侏長尾猴Miopithecustalapoin;加蓬侏長尾猴(GabonTalapoin)、侏長尾猴Miopithecusogouensis);在赤猴屬Erythrocebus內(Patas猴、赤猴Erythrocebuspatas);在綠猴屬Chlorocebus內(綠猴、綠猴Chlorocebussabaceus；黑長尾猴(Grivet)、綠猴Chlorocebusaethiops；Bale山長尾黑顎猴(BaleMountainsVervet)、綠猴Chlorocebusdjamdjamensis；Tantalus猴、綠猴Chlorocebustantalus；長尾黑顎猴(VervetMonkey)、綠猴Chlorocebuspygerythrus；狗尾猴(Malbrouck)、綠猴Chlorocebuscynosuros);或在長尾猴屬Cercopithecus內(Dryas猴或Salongo猴、長尾猴Cercopithecusdryas；Diana猴、長尾猴Cercopithecusdiana；Ro1way猴、長尾猴Cercopithecusro1way;大斑鼻猴(GreaterSpot-nosedMonkey)、長尾猴Cercopithecusnictitans;藍猴、長尾猴Cercopithecusmitis;銀猴(SilverMonkey)、長尾猴Cercopithecusdoggetti;金猴(GoldenMonkey)、長尾猴Cercopithecuskandti；Sykes氏猴、長尾猴Cercopithecusalbogularis；Mona猴、長尾猴Cercopithecusmona；Campbe11氏Mona猴、長尾猴Cercopithecuscampbelli；Lowe氏Mona猴、長尾猴Cercopithecus1wei;有冠(Crested)Mona猴、長尾猴Cercopithecuspogonias；Wolf氏Mona猴、長尾猴Cercopithecuswolfi；Dent氏Mona猴、長尾猴Cercopithecusdenti；小斑鼻猴(LesserSpot-nosedMonkey)、長尾猴Cercopithecuspetaurista；白喉長尾猴(White-throatedGuenon)、長尾猴Cercopithecuserythrogaster、Sclater氏長尾猴、長尾猴Cercopithecussclateri;紅耳長尾猴、長尾猴Cercopithecuserythrotis；髭長尾猴(MoustachedGuenon)、長尾猴Cercopithecuscephus；紅尾猴、長尾猴Cercopithecusascanius；VHoest氏猴、長尾猴CercopithecusIhoesti；Preuss氏猴、長尾猴Cercopithecuspreussi;太陽尾猴(Sun-tailedMonkey)、長尾猴Cercopithecussolatus；Hamlyn氏猴或楽面猴(Owl-facedMonkey)、長尾猴Cercopithecushamlyni；DeBrazza氏猴、長尾猴Cercopithecusneglectus)。[0036]可選地，稱猴亞科Cercopithecinae和狒狒族Papionini中的有利的非黑猩猩靈長類可來自稱猴屬Macaca內(地中海(Barbary)稱猴、稱猴Macacasylvanus;獅尾稱猴、稱猴Macacasilenus;南方豚尾稱猴或Beruk、稱猴Macacanemestrina;北方豚尾稱猴、稱猴Macacaleonina；Pagai島稱猴或Bokko1、稱猴Macacapagensis;Siberut稱猴、稱猴Macacasiberu;沼澤稱猴(MoorMacaque)、稱猴Macacamaura;穿靴稱猴、稱猴Macacaochreata;Tonkean稱猴、稱猴Macacatonkeana;Heck氏稱猴、稱猴Macacahecki；Gorontalo稱猴、稱猴Macacanigriscens；Celebes有冠稱猴或黑“類人猿”、稱猴Macacanigra;食蟹猴(Cynomolgusmonkey)或吃螃蟹的稱猴或長尾稱猴或Kera、食蟹稱猴Macacafascicularis;短尾稱猴(Stump-tailedMacaque)或熊稱猴、稱猴Macacaarctoides；恒河稱猴、稱猴Macacamulatta;臺灣巖石稱猴(FormosanRockMacaque)、稱猴Macacacyclopis；日本稱猴、稱猴Macacafuscata；Toque稱猴、稱猴Macacasinica;冠毛稱猴(BonnetMacaque)、稱猴Macacaradiata;地中海稱猴、稱猴Macacasylvanmus;Assam稱猴、稱猴Macacaassamensis;西藏稱猴或Milne-Edwards氏稱猴、稱猴Macacathibetana；Arunachal稱猴或Munzala、稱猴Macacamunzala);在Lophocebus屬中(灰頰白眉猴、Lophocebusalbigena；Lophocebusalbigenaalbigena；Lophocebusalbigenaosmani；Lophocebusalbigenajohnstoni;黑色有冠白眉猴、Lophocebusaterrimus；0pdenbosch氏白眉猴、Lophocebusopdenboschi;高原白眉猴、Lophocebuskipunji);在狒狒屬Papio中(阿拉伯狒狒HamadryasBaboon、狒狒Papiohamadryas;幾內亞狒狒(GuineaBaboon)、狒狒Papiopapio;撤攬狒狒(OliveBaboon)、狒狒Papioanubis;黃狒狒、狒狒Papiocynocephalus;大狒狒(ChacmaBaboon)、狒狒Papioursinus);在獅尾狒狒屬中(獅尾狒狒、獅尾狒狒Theropithecusgelada);在白眉猴屬Cercocebus內(烏黑白眉猴SootyMangabey、白眉猴Cercocebusatys；白眉猴Cercocebusatysatys；白眉猴Cercocebusatyslunulatus;有領白眉猴(CollaredMangabey)、白眉猴Cercocebustorquatus;敏捷白眉猴(AgileMangabey)λ白眉猴Cercocebusagilis;金腹白眉猴(Golden-belliedMangabey)λ白眉猴Cercocebuschrysogaster、塔納河白眉猴(TanaRiverMangabey)、白眉猴Cercocebusgaleritus;測、氏白眉猴(SanjeMangabey)、白眉猴Cercocebussanjei)；或在山魁屬Mandrillus中(山魁(Mandrill)、山魁Mandrillussphinx;鬼狒(Drill)、山MMandrillusleucophaeus)。[0037]最優選的是食蟹稱猴Macacafascicularis(也稱為食蟹猴(Cynomolgusmonkey)，因此在實施例中稱為“食蟹猴”)和稱猴Macacamulatta(恒河猴(rhesusmonkey)，稱為“恒河猴”("rhesus"))。[0038]在疣猴亞科Colobinae中，有利的非黑猩猩靈長類可來自非洲群，在疣猴屬Colobus中(黑色撫猴、撫猴Colobussatanas;安哥拉撫猴、撫猴Colobusangolensis；王撫猴(KingColobus)、撫猴Colobuspolykomos；熊撫猴(UrsineColobus)、撫猴Colobusvellerosus;披斗篷撫猴(MantledGuereza)、撫猴Colobusguereza)；在紅撫猴屬Piliocolobus中(西方紅撫猴、紅撫猴Piliocolobusbadius;紅撫猴Piliocolobusbadiusbadius;紅撫猴Piliocolobusbadiustemminckii;紅撫猴Piliocolobusbadiuswaldronae；Pennant氏撫猴、紅撫猴Piliocolobuspennantii;紅撫猴Piliocolobuspennantiipennantii;紅撫猴Piliocolobuspennantiiepieni；紅撫猴Piliocolobuspennantiibouvieri；Preuss氏紅撫猴、Piliocolobuspreussi；Thollon氏紅撫猴、Piliocolobustholloni;中非紅撫猴、紅撫猴Piliocolobusfoai;紅撫猴Piliocolobusfoaifoai;紅撫猴Piliocolobusfoaiellioti;紅撫猴Piliocolobusfoaioustaleti;紅撫猴Piliocolobusfoaisemlikiensis;紅撫猴Piliocolobusfoaiparmentierorum;烏干達紅撫猴、紅撫猴Piliocolobustephrosceles；Uzyngwa紅撫猴、紅撫猴Piliocolobusgordonorum;Zanzibar紅撫猴、紅撫猴Piliocolobuskirkii;塔納河紅撫猴、紅撫猴Piliocolobusrufomitratus);或在綠撫猴屬Procolobus中(橄欖撫猴OliveColobus、綠撫猴Procolobusverus)0[0039]在疣猴亞科Colobinae中，有利的非黑猩猩靈長類可選地來自葉猴(葉片猴子)群，在長尾葉猴屬Semnopithecus內(尼泊爾灰葉猴(NepalGrayLangur)、長尾葉猴Semnopithecusschistaceus;克什米爾灰葉猴、長尾葉猴Semnopithecusajax；Tarai灰葉猴、長尾葉猴Semnopithecushector、北方平原灰葉猴、長尾葉猴Semnopithecusentellus;黑腳灰葉猴、長尾葉猴Semnopithecushypoleucos;南方平原灰葉猴、長尾葉猴Semnopithecusdussumieri;族毛灰葉猴(TuftedGrayLangur)、長尾葉猴Semnopithecuspriam);在烏葉猴屬Trachypithecus的T.vetulus群中(紫臉葉猴、烏葉猴Trachypithecusvetulus；Nilgiri葉猴、烏葉猴Trachypithecusjohnii);在烏葉猴屬Trachypithecus的T.cristatus群中(爪口圭Lutung、烏葉猴Trachypithecusauratus；銀色葉猴或銀色Lutung、烏葉猴Trachypithecuscristatus;印度支那Lutung、烏葉猴Trachypithecusgermaini；TenasserimLutung、烏葉猴Trachypithecusbarbei)；在烏葉猴屬Trachypithecus的T.0bscurus群中(暗色葉猴(DuskyLeafMonkey)或眼鏡葉猴(SpectacledLeafMonkey)、烏葉猴Trachypithecusobscurus；Phayre氏葉猴、烏葉猴Trachypithecusphayrei);在烏葉猴屬Trachypithecus的T.piIeatus群中(戴帽葉猴、烏葉猴Trachypithecuspileatus；Shortridge氏葉猴、烏葉猴Trachypithecusshortridgei；Gee氏金色葉猴、烏葉猴Trachypithecusgeei);在烏葉猴屬Trachypithecus的T.francoisi群中(Francois氏葉猴、烏葉猴Trachypithecusfrancoisi；Hatinh葉猴、烏葉猴Trachypithecushatinhensis；白頭葉猴、烏葉猴TrachypithecuspoIiocephalus;老挺葉猴、烏葉猴Trachypithecuslaotum;DeIacour氏葉猴、烏葉猴TrachypithecusdeIacouri；印度支那黑色葉猴、烏葉猴Trachypithecusebenus);或在葉猴屬Presbytis中(蘇門答臘葉猴(SumatranSurili)、葉猴Presbytismelalophos;帶紋葉猴(BandedSurili)、葉猴Presbytisfemoralis;沙撈越葉猴(SarawakSurili)、Presbytischrysomelas；白腿葉猴(White-thighedSurili)、葉猴Presbytissiamensis；白客頁葉猴(White-frontedSurili)、葉猴Presbytisfrontata；爪口圭葉猴(JavanSurili)、葉猴Presbytiscomata；Thomas氏葉猴、葉猴Presbytisthomasi；Hose氏葉猴、葉猴Presbytishosei;栗紅葉猴(MaroonLeafMonkey)、葉猴Presbytisrubicunda;孟他維葉猴(MentawaiLangur)或Joja、葉猴Presbytispotenziani;納土納島葉猴(NatunaIslandSurili)、葉猴Presbytisnatunae)。[0040]在疣猴亞科Colobinae中，有利的非黑猩猩靈長類可選地來自怪鼻猴群，在白臀葉猴屬Pygathrix中(紅腿白臀葉猴(Red-shankedDouc)、白臀葉猴Pygathrixnemaeus；黑腿白臀葉猴、白臀葉猴Pygathrixnigripes;灰腿白臀葉猴、白臀葉猴Pygathrixcinerea);在仰鼻猴屬Rhinopithecus中(金色扁鼻猴(GoldenSnub-nosedMonkey)、金絲猴Rhinopithecusroxellana;黑色扁鼻猴、滇金絲猴Rhinopithecusbieti;灰色扁鼻猴、金絲猴Rhinopithecusbrelichi；Tonkin扁鼻葉猴、越南金絲猴Rhinopithecusavunculus);在長鼻猴屬Nasalis中(長鼻猴(ProboscisMonkey)、長鼻猴Nasalislarvatus);或在豚尾葉猴屬Simias中(豚尾葉猴(Pig-tailedLangur)、豚尾葉猴Simiasconcolor)。[0041]本文所用的術語“狨猴(marmoset)”表示狨屬Callithrix的任何新世界猴，例如屬于狨亞屬Callithrix(sic!)的大西洋狨猴(常見狨猴、狨Callithrix(Callithrix)jacchus;黑色族毛滅猴(Black-tuftedMarmoset)、叢尾滅Callithrix(Callithrix)penicillata；Wied氏滅猴、滅Callithrix(Callithrix)kuhlii；白頭滅猴、滅Callithrix(Callithrix)geoffroyi;黃頭滅猴(Buffy-headedMarmoset)、滅Callithrix(Callithrix)fIaviceps；黃色族毛滅猴(Buffy-tuftedMarmoset)、滅Callithrix(Callithrix)aurita);屬于Mico亞屬的亞馬遜狨猴(RioAcari狨猴、狨Callithrix(Mico)acariensis；Manicore滅猴、滅Callithrix(Mico)manicorensis；銀色滅猴、滅Callithrix(Mico)argentata；白滅猴、滅Callithrix(Mico)leucippe；Emilia氏狨猴、狨Callithrix(Mico)emiliae;黑頭狨猴、狨Callithrix(Mico)nigriceps；Marca氏滅猴、滅Callithrix(Mico)marcai；黑尾滅猴、滅Callithrix(Mico)melanura；Santarem狨猴、白肩狨Callithrix(Mico)humeralifera；Maues狨猴、狨Callithrix(Mico)mauesi;金白滅猴、黃肢滅Callithrix(Mico)chrysoleuca；Hershkovitz氏滅猴、滅Callithrix(Mico)intermedia；Satere滅猴、滅Callithrix(Mico)saterei)；屬于Callibella亞屬的Roosmalens氏倭滅猴(Callithrix(Callibella)humilis);或屬于倭滅亞屬Cebuella的侏儒滅猴(PygmyMarmoset)(Callithrix(Cebuella)pygmaea)。[0042]其它屬的新世界猴包括檉柳猴屬Saguinus的絹毛猴(tamarin)(包括域頂檉柳猴S.0edipus群、赤掌檉柳猴S.midas群、黑須檉柳猴S.nigricollis群、長須檉柳猴S.mystax群、兩色檉柳猴S.bicolor群和烙印檉柳猴S.1nustus群)和松鼠猴屬Samiri的松鼠猴(如，松鼠猴Saimirisciureus、巴拿馬松鼠猴Saimirioerstedi1、馬河松鼠猴Saimiriustus、亞馬遜松鼠猴Saimiriboliviensis、黑松鼠猴Saimirivanzolini)。[0043]關于本發明的術語“結合結構域”表征與給定靶結構/抗原/表位特異性結合/相互作用的多肽的結構域。因此，結合結構域是“抗原相互作用位點”。根據本發明，術語“抗原相互作用位點”定義多肽的基序，其能夠與特異性抗原或特異性抗原組，如，不同物種中的相同抗原特異性相互作用。所述結合/相互作用還理解為定義“特異性的識別”。根據本發明，術語“特異性地識別”是指抗體分子能夠與抗原(如，本文定義的人類CD3抗原)的至少兩個、優選地至少三個、更優選地至少四個氨基酸特異性相互作用和/或結合。這種結合可以“鎖鑰原則”的特異性示例。因此，作為其一級、二級或三級結構的結果以及所述結構二級修飾的結果，結合結構域的氨基酸序列中的特異性基序與抗原彼此結合。抗原相互作用位點與其特異性抗原的特異性相互作用可同樣導致所述位點與抗原的簡單結合。而且，抗原相互作用位點與其特異性抗原的特異性相互作用可選地導致信號的啟動，如，因為抗原構象改變、抗原寡聚化等的誘導作用。根據本發明的結合結構域的一個優選實例是抗體。結合結構域可為單克隆或多克隆抗體或衍生自單克隆或多克隆抗體。[0044]術語“抗體”包括仍保留結合特異性的衍生物或其功能片段。產生抗體的技術是本領域公知的并描述于，如，Harlow和Lane,“Antibodies,ALaboratoryManual(抗體，實驗室手冊)”，ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988和Harlow和Lane“UsingAntibodies:ALaboratoryManual(使用抗體:實驗室手冊)”ColdSpringHarborLaboratoryPress,1999。術語“抗體”還包括免疫球蛋白(Ig)的不同類(即IgA、IgG、IgM、IgD和IgE)和亞類(諸如IgGl、IgG2等)。這些抗體可用于，例如本發明的多肽或融合蛋白的免疫沉淀、親和純化和免疫定位，以及監測這種多肽例如在重組原核或真核細胞培養物或生物體中的存在和量。[0045]術語“抗體”的定義還包括諸如嵌合、單鏈和人源化抗體以及抗體片段尤其是如Fab片段的實施方案。抗體片段或衍生物還包括F(ab’)2、Fv、scFv片段或包括僅一個可變結構域的單結構域抗體、單可變結構域抗體或免疫球蛋白單可變結構域，所述可變結構域可為獨立于其它V區或結構域而特異性地結合抗原或表位的VH或VL;參見，例如，Harlow和Lane(1988)和(1999)，上述引文。這種免疫球蛋白單可變結構域不僅包括分離的抗體單可變結構域多肽，還包括更大的多肽，其中所述更大的多肽包括抗體單可變結構域多肽序列的一個或多個單體。[0046]各種程序是本領域已知的并可用于產生這種抗體和/或片段。因此，可通過模擬肽來產生(抗體)衍生物。進一步，描述單鏈抗體生產的技術(尤其參見美國專利4，946，778)可適于產生對所選多肽具有特異性的單鏈抗體。而且，轉基因動物可用于表達對本發明的多肽和融合蛋白具有特異性的人源化抗體。為了制備單克隆抗體，可使用提供由連續細胞系培養物所產生的抗體的任何技術。這種技術的實例包括雜交瘤技術(K6h丨er和Milstein恥丨11代256(1975)，495-497)、三源雜交瘤技術、人類8細胞雜交瘤技術(Kozbor,ImmunologyToday4(1983),72)和產生人類單克隆抗體的EBV雜交瘤技術(Cole等人，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy(單克隆抗體和癌癥治療)，AlanR.Liss,Inc.(1985)，77-96)。在BIAcore系統中所用的表面等離子體共振可用于增加噬菌體抗體的效力，所述噬菌體抗體結合于靶多肽諸如CD3ε的表位(Schier,HumanAntibodiesHybridomas7(1996),97-105；Malmborg,J.1mmunol.Methodsl83(1995),7-13)。在本發明上下文中還設想，術語“抗體”包括可在下文所述的宿主中表達的抗體構建體，如可通過尤其是病毒或質粒載體轉染和/或轉導的抗體構建體。[0047]根據本發明使用的術語“特異性相互作用”是指結合(結構域)分子與多肽不產生或不顯著產生交叉反應，其中所述多肽具有與那些被結合分子結合的多肽相似的結構，且可能被表達在與感興趣的多肽相同的細胞中。可測試一組被研究的結合分子的交叉反應性，例如通過評估所述組的結合分子在常規條件下的結合(參閱例如Harlow和Lane,Antibodies:ALaboratoryManual(抗體:實驗室手冊)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988和UsingAntibodies:ALaboratoryManual(使用抗體:實驗室手冊)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,1999)。結合結構域與特異性抗原的特異性相互作用的實例包括配體對其受體的特異性。所述定義特別地包括配體的相互作用，其中所述配體與其特異性受體結合后誘導信號。也特別包括于所述定義中的所述相互作用的實例為抗原決定簇(表位)與抗體的結合結構域(抗原結合位點)的相互作用。[0048]本文所用的術語“跨物種特異性”或“物種間特異性”是指本文所述的結合結構域與人類和非黑猩猩靈長類中相同的靶分子的結合。因此，“跨物種特異性”或“物種間特異性”應理解為對不同物種中表達的相同分子X但不對除了X以外的分子的物種間反應性。識別如人類CD3S的單克隆抗體對非黑猩猩靈長類CD3e如獼猴CD3ε的跨物種的特異性可例如由FACS分析確定。以以下方式進行FACS分析:測試相應的單克隆抗體對分別地表達所述人類和非黑猩猩靈長類CD3ε抗原的人類和非黑猩猩靈長類細胞如獼猴細胞的結合。合適的測定顯示于以下實施例。[0049]本文所用的CD3ε表示作為T細胞受體的一部分表達的分子，并具有現有技術中通常描述的含義。在人類中，其包括單獨或獨立組合形式的所有已知⑶3亞基，例如⑶3ε、⑶3δ、⑶3Y、⑶3δ、⑶3α和⑶3β。本文所指的非黑猩猩靈長類的⑶3抗原是，例如，食蟹稱猴MacacafascicularisCD3和稱猴MacacamulattaCD3。在食蟹稱猴Macacafascicularis中，其包括CD3εFN-18陰性和CD3εFN-18陽性、CD3Y和CD3δ。在獼猴Macacamulatta中，其包括⑶3ε、⑶3Y和⑶3δ。優選地，本文所用的所述⑶3是⑶3ε。[0050]人類CD3ε表示在GenBank登錄號ΝΜ_000733中，并包括SEQIDN0.1。人類CD3Y表示在GenBank登錄號ΝΜ_000073中。人類CD3δ表示在GenBank登錄號ΝΜ_000732中。[0051]食蟹獼猴Macacafascicularis的CD3ε^FN-18陰性”(即因為上述的多態性而不被單克隆抗體FN-18識別的⑶3ε)表示在GenBank登錄號ΑΒ073994中。[0052]食蟹稱猴Macacafascicularis的CD3ε“FN-18陽性”(即被單克隆抗體FN-18識別的CD3ε)表不在GenBank登錄號ΑΒ073993中。食蟹稱猴Macacafascicularis的CD3Y表示在GenBank登錄號AB073992中。食蟹獼猴Macacafascicularis的CD3δ表示在GenBank登錄號ΑΒ073991中。[0053]可由本領域中描述的重組技術鑒定和分離獼猴Macacamulatta的各⑶3ε、y和δ同系物的核酸序列和氨基酸`序列(Sambrook等人MolecularCloning:ALaboratoryManual(分子克隆:實驗室手冊)；ColdSpringHarborLaboratoryPress,第3版2001)。經適當修改，這可適用于本文定義的其它非黑猩猩靈長類的⑶3ε、Y和δ同系物。在所附的實施例中描述了普通狨猴Callithrixjacchus、松鼠猴Saimirisciureus和絨頂檉柳猴Saguinusoedipus的氨基酸序列的鑒定。普通狨猴Callithrixjacchus的0)3ε細胞外結構域的氨基酸序列描繪在SEQIDNO:3中，絨頂檉柳猴Saguinusoedipus的氨基酸序列描繪在SEQIDN0:5中，且松鼠猴Saimirisciureus的氨基酸序列描繪在SEQIDNO:7中。[0054]與上述一致，術語“表位”定義抗原決定簇，其被以上定義的結合分子特異性地結合/鑒定。結合結構域或分子可特異性地與構象或連續表位結合/相互作用，這對靶結構如人類和非黑猩猩靈長類CD3e鏈是獨特的。多肽抗原的構象或不連續表位表征為兩個或更多個不連續的氨基酸殘基的存在，其中所述氨基酸殘基在一級序列中是分開的，但當多肽折疊成天然蛋白/抗原時在分子表面上聚集(Sela,(1969)Sciencel66,1365和Laver,(1990)Cell61，553_6)。對表位有貢獻的兩個或更多個不連續的氨基酸殘基存在于一個或多個多肽鏈的分開的部分上。當多肽鏈折疊為三維結構以構成表位時，這些殘基在分子表面上聚集。相反，連續或線性表位由兩個或更多個不連續的氨基酸殘基組成，其中所述氨基酸殘基存在于多肽鏈的單個線性區段中。本發明中，“背景依賴性”CD3表位是指所述表位的構象。僅當被埋入ε鏈的其余部分且由ε鏈與CD3Y或δ鏈異二聚化而保持在正確位置時，位于CD3e鏈的這種背景依賴性表位可產生其正確構象。相反，本文提供的背景獨立的CD3表位是指CD3ε的N末端1_27氨基酸殘基多肽或其功能片段。當從CD3復合體中的天然環境取出時，這種N末端1-27氨基酸殘基多肽或其功能片段保持其三維結構完整性和正確構象。因此，作為⑶3ε細胞外結構域的一部分的N末端1-27氨基酸殘基多肽或其功能片段的背景獨立性，代表與W02004/106380中關于制備人類結合分子的方法描述的⑶3ε表位完全不同的表位。所述方法使用單獨表達的重組⑶3ε。這種單獨表達的重組⑶3ε的構象不同于其天然形式中采用的構象，即，其中TCR/⑶3復合體的⑶3ε亞基作為與TCR/⑶3復合體的⑶3δ或⑶3Y亞基的非共價復合體的一部分存在的形式。當這種單獨表達的重組CD3ε蛋白用作從抗體文庫選擇抗體的抗原時，從該文庫鑒定對這種抗原具有特異性的抗體，盡管這種文庫不包含對自體抗原/自身抗原具有特異性的抗體。這是因為以下事實:單獨表達的重組CD3e蛋白不存在于體內；其不是自身抗原。因此，表達特異性針對該蛋白的抗體的B細胞亞群在體內還未被耗盡；從這種B細胞構建的抗體文庫將含有對單獨表達的重組CD3ε蛋白具有特異性的抗體的遺傳物質。[0055]然而，由于背景獨立的N末端1-27氨基酸殘基多肽或其功能片段是以其天然形式折疊的表位，按照本發明的結合結構域不能由基于W004/106380中描述的方法的方法鑒定。因此，在測試中可驗證，W02004/106380中公開的結合分子不能結合于⑶3ε鏈的N末端1-27氨基酸殘基。因此，常規抗⑶3結合分子或抗⑶3抗體分子(如，W099/54440中公開的)結合CD3ε鏈的位置比本文提供的背景獨立的N末端1-27氨基酸殘基多肽或功能片段距C末端更近。現有技術抗體分子0ΚΤ3和UCHT-1在氨基酸殘基35至85之間也具有對TCR/⑶3復合體的ε亞基的特異性，且因此這些抗體的表位也是距C末端更近。此外，UCHT-1在氨基酸殘基43至77之間的區結合于CD3ε鏈(Tunnacliffe,Int.1mmunol.1(1989),546-50；Kjer-Nielsen,PNAS101,(2004)，7675-7680；Salmeron,J.1mmunol.147(1991)，3047-52)。因此，現有技術的抗CD3分子不結合于且不直接針對本文定義的背景獨立的N末端1-27氨基酸殘基表位(或其功能片段)。[0056]為了產生包括在本發明多肽例如本文定義的雙特異性單鏈抗體中的優選地為人類的結合結構域，可使用例如結合于人類CD3ε和非黑猩猩靈長類CD3ε(如，獼猴CD3ε)二者的單克隆抗體。[0057]在本發明多肽的優選實施方案中，所述非黑猩猩靈長類是舊世界猴。在所述多肽的更優選實施方案中，所述舊世界猴是狒狒屬(Papiogenus)稱猴屬(Macaquegenus)的猴。最優選地，所述稱猴屬的猴是阿薩姆(Assamese)稱猴(Macacaassamensis)、地中海猴(Macacasylvanus)、冠毛稱猴(Macacaradiata)、穿靴稱猴或蘇拉威西(Sulawesi)穿靴稱猴(Macacaochreata)、蘇拉威西有冠(crested)稱猴(Macacanigra)、臺灣巖石稱猴(Macacacyclopsis)、日本雪稱猴或日本稱猴(Macacafuscata)、食蟹猴或食蟹稱猴或長尾稱猴或爪睡稱猴(食蟹稱猴Macacafascicularis)、獅尾稱猴(Macacasilenus)、豚尾稱猴(Macacanemestrina)、恒河稱猴(稱猴Macacamulatta)、西藏稱猴(Macacathibetana)、Tonkean稱猴(Macacatonkeana)、Toque稱猴(Macacasinica)、短尾稱猴或紅臉稱猴或熊猴(Macacaarctoides)、或沼澤稱猴(Macacamaurus)。最優選地,所述狒狒屬的猴是阿拉伯狒狒、Papiohamadryas;幾內亞狒狒、Papiopapio;橄欖狒狒、Papioanubis;黃狒狒、Papiocynocephalus;大狒狒、Papioursinus。[0058]在本發明多肽的可選優選實施方案中，所述非黑猩猩靈長類是新世界猴。在多肽的更優選實施方案中，所述新世界猴是Callithrix屬(狨猴)>Saguinus屬或Samiri屬的猴。最優選地，所述Callithrix屬的猴是普通狨猴Callithrixjacchus,所述Saguinus屬的猴是絨頂檉柳猴Saguinusoedipus且所述Samiri屬的猴是松鼠猴Saimirisciureus。[0059]如本文上述的，本發明多肽以第一結合結構域結合人類和非黑猩猩靈長類⑶3ε(ε)鏈的表位，其中所述表位是包含在由如SEQIDΝ0.2、4、6或8所示的27個氨基酸殘基組成的組中的氨基酸序列的一部分或其功能片段。[0060]與本發明一致，對本發明多肽優選地是，所述表位是包含26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6或5個氨基酸的氨基酸序列的一部分。[0061]更優選地，其中所述表位至少包含氨基酸序列Gln-Asp-Gly-Asn-Glu(Q-D-G-N-E-D)。[0062]在本發明中，N末端1-27氨基酸殘基的功能片段是指所述功能片段仍是背景獨立的表位，當從其CD3復合體中的天然環境取出(并融合于異源氨基酸序列諸如EpCAM或免疫球蛋白Fc部分，如實施例3.1顯示的)時，保持其三維結構完整性。在⑶3ε的27個氨基酸Ν末端多肽或其功能片段中的三維結構的維持可用于產生結合結構域，所述結合結構域在體外結合于Ν末端CD3ε多肽片段并且以相同的結合親和力在體內結合于Τ細胞上的天然CD3復合體(的CD3ε亞基)。在本發明中，Ν末端1_27氨基酸殘基的功能片段是指本文提供的CD3結合分子仍可以背景獨立的方式結合于這種功能片段。本領域技術人員懂得用于確定表位的哪個氨基酸殘基被這種抗CD3結合分子識別的表位定位方法(如，丙氨酸掃描)。[0063]在本發明優選實施方案中，本發明多肽包含能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3e鏈的表位的(第一)結合結構域和能夠結合于細胞表面抗原的第二結合結構域。[0064]本文所用的術語“細胞表面抗原”表示展示在細胞表面的分子。在大多數情形中，該分子將位于細胞的質膜中或質膜之上以使該分子的至少一部分在三級形式上保持從細胞外的可接近性。位于質膜中的細胞表面分子的非限制性實例是跨膜蛋白，其在它的三級構象中包含親水性和疏水性的區。在此處，至少一個疏水區允許細胞表面分子嵌入或插入細胞的疏水質膜，而親水區在質膜的任一側分別地延伸入胞質和細胞外間隙。位于質膜上的細胞表面分子的非限制性實例是已在半胱氨酸殘基處修飾以具有棕櫚酰基的蛋白、已在C末端半胱氨酸殘基處修飾以具有法呢基的蛋白或已在C末端修飾以具有糖基磷脂酰肌醇(“GPI”)錨的蛋白。這些基團允許蛋白共價連接到質膜的外表面，在那里其保持可接近性以被細胞外分子諸如抗體識別。細胞表面抗原的實例包括EGFR、EGFRvII1、MCSP、碳酸酐酶IX(CAIX)、CD30、CD33、Her2/neu、IgE、CD44v6和Muc_l。此外，相應的細胞表面抗體的實例包括對特定疾病或疾患，即癌癥、自身免疫疾病或包括病毒感染的感染性疾病的特征性的抗原。因此，術語“細胞表面抗原”明確地包括病毒蛋白質例如暴露于感染的細胞表面的天然的、未加工的病毒蛋白(被描述尤其是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和HIV-1的包膜蛋白)。[0065]細胞毒性T細胞的一種防御功能是感染病毒的細胞的破壞，因此，本發明的雙特異性結合分子激活和重定向細胞毒性T細胞而不考慮它們本身特異性的獨特性質對于慢性病毒感染的廣闊領域具有很大影響。對于這些感染中的大多數而言，消除持續感染的細胞是治愈的唯一機會。針對慢性CMV和EBV感染，目前開發了繼承性T細胞療法(Rooney,C.Μ.,等人，Useofgene-modifiedvirus-specificTlymphocytestocontrolEpstein-Barr-virus-relatedlymphoproliferation(使用基因修飾的病毒特異性T淋巴細胞控制Epstein-Barr病毒相關的淋巴組織增生).Lancet,1995.345(8941):ρ.9-13；Walter,Ε.Α.等人，ReconstitutionofcellularimmunityagainstcytomegalovirusinrecipientsofallogeneicbonemarrowbytransferofT—cellclonesfromthedonor(通過轉移來自供者的T細胞克隆在受者同種異體骨髓中針對巨細胞病毒重構細胞免疫性).NEnglJMed,1995.333(16):p.1038-44)。[0066]慢性乙型肝炎感染顯然是最受關注和最有回報的適應癥之一。全世界有3.5億至4億人感染HBV。慢性HBV肝炎的當前治療仍是干擾素Y和核苷或核苷酸類似物，是具有顯著副作用諸如引起肝炎發作、發熱、肌痛、血小板減少和抑郁的長期治療。盡管現在有多于4種批準的治療方案，但很少能實現消除病毒。慢性乙型肝炎中持續的炎癥在多于25%的患者中導致肝硬化和肝細胞癌。而且，高達40%的慢性乙型肝炎患者將死于嚴重并發癥，造成每年全世界60萬至100萬的死亡。[0067]HBV，即嗜肝DNA病毒的原型，是包膜病毒，其松弛的環狀(rc)基因組被逆轉錄成RNA前基因組。感染后，所述rcDNA進入肝細胞核，在那里其被完成為包含四個重疊讀碼框的共價閉環DNA(cccDNA)。其作為前基因組RNA和三個亞基因組RNA的轉錄模板。所述RNA前基因組作為mRNA起作用以翻譯病毒核芯和聚合酶蛋白。感染的細胞連續地從cccDNA產生HBV表面蛋白(HBsAg)，甚至當HBV復制終止時。HBsAg由小(S)表面蛋白和大(L)表面蛋白組成，其中小表面蛋白有非常少的中部部分。HBVS和L兩者均靶向內質網(ER)膜，從那里其在膜囊中由反面高爾基器向質膜運輸(Gorelick,F.S.和C.Shugrue,Exitingtheendoplasmicreticulum(退出內質網).MolCellEndocrinol,2001.177(1-2):p.13-8)。S和L蛋白在復制HBV的肝細胞表面上持久地表達，如最近顯示的(Chu，C.M.和Y.F.Liaw,MembranestainingforhepatitisBsurfaceantigenonhepatocytes:asensitiveandspecificmarkerofactiveviralreplicationinhepatitisB(月干細胞上乙型肝炎表面抗原的膜染色:乙型肝炎中活性病毒復制的敏感和特異性標記).JClinPathol,1995.48(5):ρ.470-3)。[0068]將包膜蛋白暴露于細胞表面的原型病毒是乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和HIV-1，它們都代表全球巨大的疾病負擔。對于HIV-1病毒適應癥，最近已顯示，以具有Fv抗體構建體的嵌合TCR修飾的T細胞可殺死HIV-1感染的靶細胞，其中所述Fv抗體構建體指向gpl20包膜蛋白(Masiero,S.,等人，T_cellengineeringbyachimericT-cellreceptorwithantibody-typespecificityfortheHIV~lgpl20(使用具有對HIV-lgpl20的抗體類型特異性的嵌合T細胞受體的T細胞工程化)，GeneTher，2005.12(4):p.299-310)。在肝炎DNA病毒中，乙型肝炎病毒(HBV)表達包膜蛋白復合體HBsAg,所述HBsAg從附加型(episomal)cccDNA連續地產生,甚至當HBV復制下降時也一樣。[0069]作為完整的S和LHBV蛋白在細胞表面上的表達使得它們可以被抗體接近，這是當患者從感染的急性階段恢復并從循環的HBsAg改變為抗HB時血清轉化的標志。如果未發生血清轉化，在長期的高活性抗病毒治療后，多達30%的肝細胞也繼續表達HBVS蛋白。因此，除了特異性識別細胞內加工的HBV肽并被MHC分子呈遞在細胞表面的T淋巴細胞之外，其它形式的T細胞接合是可行的，目標為完整表面蛋白諸如從細胞膜外可接近的S和L抗原。使用識別乙型肝炎病毒小(S)和大(L)包膜蛋白的單鏈抗體片段，已經產生人工T細胞受體，其允許將移植的T細胞導向感染的肝細胞，并且在與抗原接觸后允許這些T細胞被激活以分泌細胞因子并殺死感染的肝細胞。[0070]這種方法的限制是，(i)T細胞需要細胞外操縱，(ii)用于轉移T細胞受體的逆轉錄病毒可能導致T細胞中的插入性誘變，和(iii)一旦T細胞被轉移，細胞毒性響應不能被限制。[0071]為了克服這些限制，可產生雙特異性單鏈抗體分子，其包含對人類和非黑猩猩靈長類CD3e抗原具有結合特異性的第一結構域(如本發明上下文提供的)以及對感染的肝細胞的HBV或HCV包膜蛋白具有結合特異性的第二結構域，并且這些在本發明范圍內。[0072]在本發明中，還優選的是，第二結合結構域結合于人類細胞表面抗原和/或非黑猩猩靈長類的細胞表面抗原。[0073]為了產生本發明的多肽例如本文定義的雙特異性單鏈抗體的第二結合結構域，可使用結合于相應的人類和/或非黑猩猩靈長類細胞表面抗原的單克隆抗體。例如，本文定義的雙特異性多肽的適當的結合結構域可由本領域中描述的重組方法衍生自跨物種特異性單克隆抗體。結合于人類細胞表面抗原和非黑猩猩靈長類中所述細胞表面抗原的同系物的單克隆抗體可由FACS測定按上文所述進行測試。對本領域技術人員明顯的是，跨物種特異性抗體還可由文獻中描述的雜交瘤技術產生(Milstein和K0hlcr,Nature256(1975)，495-7)。例如，小鼠可選地以人類和非黑猩猩靈長類CD33免疫。經雜交瘤技術從這些小鼠分離產生跨物種特異性抗體的雜交瘤細胞并由FACS按上述進行分析。雙特異性多肽例如本文所述的表現跨物種特異性的雙特異性單鏈抗體的產生和分析顯示在以下實施例中。表現跨物種特異性的雙特異性單鏈抗體的優點包括下列各點。[0074]對本發明多肽尤其優選的是，能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε鏈的表位的第一結合結構域包括VL區，其中所述VL區包括選自以下的⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3:[0075](a)SEQIDN0.27所示的CDR-L1、SEQIDN0.28所示的CDR-L2和SEQIDN0.29所示的CDR-L3；[0076](b)SEQIDN0.117所示的CDR_L1、SEQIDN0.118所示的CDR-L2和SEQIDN0.119所示的⑶R-L3;和[0077](c)SEQIDN0.153所示的CDR-Ll、SEQIDN0.154所示的CDR-L2和SEQIDN0.155所示的CDR-L3。[0078]可變區，即可變輕鏈(“L”或“VL”)和可變重鏈(“H”或“VH”)在本領域中理解為提供抗體的結合結構域。該可變區包含互補決定區。[0079]術語“互補決定區”(CDR)在本領域公知決定抗體的抗原特異性。術語“⑶R-L”或“LCDR”是指VL中的CDR,而術語“CDR-H”或“HCDR”是指VH中的CDR0[0080]在本發明多肽的可選地優選實施方案中，能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類⑶3ε鏈的表位的第一結合結構域包括VH區，其中所述VH區包括選自以下的⑶R-H1、CDR-H2和CDR-H3:[0081](a)SEQIDN0.12所示的CDR-HUSEQIDN0.13所示的CDR-H2和SEQIDN0.14所示的CDR-H3；[0082](b)SEQIDN0.30所示的CDR-H1、SEQIDN0.31所示的CDR-H2和SEQIDN0.32所示的CDR-H3；[0083](c)SEQIDN0.48所示的CDR-H1、SEQIDN0.49所示的CDR-H2和SEQIDN0.50所示的CDR-H3；[0084](d)SEQIDN0.66所示的CDR-H1、SEQIDN0.67所示的CDR-H2和SEQIDN0.68所示的CDR-H3；[0085](e)SEQIDN0.84所示的CDR-H1、SEQIDN0.85所示的CDR-H2和SEQIDN0.86所示的CDR-H3；[0086](f)SEQIDN0.102所示的CDR_H1、SEQIDN0.103所示的CDR-H2和SEQIDN0.104所示的CDR-H3；[0087](g)SEQIDN0.120所示的CDR_H1、SEQIDN0.121所示的CDR-H2和SEQIDN0.122所示的CDR-H3；[0088](h)SEQIDN0.138所示的CDR_H1、SEQIDN0.139所示的CDR-H2和SEQIDN0.140所示的CDR-H3；[0089](i)SEQIDN0.156所示的CDR_H1、SEQIDN0.157所示的CDR-H2和SEQIDN0.158所示的CDR-H3;和[0090](j)SEQIDN0.174所示的CDR_H1、SEQIDN0.175所示的CDR-H2和SEQIDN0.176所示的CDR-H3。[0091]還優選地，能夠結合于人類`和非黑猩猩靈長類⑶3ε鏈的表位的結合結構域包括VL區，其中所述VL區選自由SEQIDN0.35、39、125、129、161或165所示的VL區組成的組。[0092]可選地優選地，能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類⑶3ε鏈的表位的第一結合結構域包括VH區，其中所述VH區選自由SEQIDN0.15、19、33、37、51、55、69、73、87、91、105、109、123、127、141、145、159、163、177或181所示的VH區組成的組。[0093]更優選地，本發明多肽特征為能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε鏈的表位的第一結合結構域，其包括選自由以下組成的組的VL區和VH區:[0094](a)SEQIDN0.17或21所示的VL區和SEQIDN0.15或19所示的VH區；[0095](b)SEQIDN0.35或39所示的VL區和SEQIDN0.33或37所示的VH區；[0096](c)SEQIDN0.53或57所示的VL區和SEQIDN0.51或55所示的VH區；[0097](d)SEQIDN0.71或75所示的VL區和SEQIDN0.69或73所示的VH區；[0098](e)SEQIDN0.89或93所示的VL區和SEQIDN0.87或91所示的VH區；[0099](f)SEQIDN0.107或111所示的VL區和SEQIDN0.105或109所示的VH區；[0100](g)SEQIDN0.125或129所示的VL區和SEQIDN0.123或127所示的VH區；[0101](h)SEQIDN0.143或147所示的VL區和SEQIDN0.141或145所示的VH區；[0102](i)SEQIDN0.161或165所示的VL區和SEQIDN0.159或163所示的VH區；和[0103](j)SEQIDN0.179或183所示的VL區和SEQIDN0.177或181所示的VH區。[0104]根據本發明多肽的優選實施方案，成對的VH-區和VL-區是以單鏈抗體(scFv)的形式存在。所述VH和VL區以VH-VL或VL-VH的順序排列。優選地，所述VH區N末端定位于連接體序列。所述VL區C末端定位于連接體序列。[0105]本發明上述多肽的優選實施方案特征為，能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε鏈的表位的第一結合結構域，其包括選自由SEQIDNO:23、25、41、43、59、61、77、79、95、97、113、115、131、133、149、151、167、169、185或187組成的組的氨基酸序列。[0106]本發明進一步涉及上述的多肽，其中所述第二結合結構域結合于細胞表面抗原，其優選地是腫瘤抗原。[0107]本文所用的術語“腫瘤抗原”可理解為呈現在腫瘤細胞上的那些抗原。這些抗原可被呈現在細胞表面上，具有通常與分子的跨膜和胞質部分結合在一起的細胞外部分。這些抗原有時可僅被腫瘤細胞呈現而不被正常細胞呈現。腫瘤抗原可專門地在腫瘤細胞上表達或與正常細胞相比可代表腫瘤特異性突變。這種情況下，它們被稱為腫瘤特異性抗原。更常見的是被腫瘤細胞和正常細胞呈現的抗原，它們被稱為腫瘤相關性抗原。與正常細胞相比這些腫瘤相關性抗原可過表達，或因為腫瘤組織與正常組織相比具有較不緊湊的結構而容易用于腫瘤細胞中的抗體結合。本文所用的腫瘤抗原的非限制性實例是EGFR(Liu,Br.J.Cancer82/12(2000)，1991-1999；Bonner,Semin.Radiat.0ncol.12(2002),11-20；Kiyota,0ncology63/l(2002),92-98；Kuan,BrainTumorPathol.17/2(2000)，71-78)、EGFRvI11(Kuan,BrainTumorPathol.17/2(2000)，71-78)、碳酸酐酶IX(MN/CAIX)(Uemura,Br.J.Cancer81/4(1999),741-746；Longcaster,CancerRes.61/17(2001)，6394-6399；Chia,J.Clin.0ncol.19/16(2001)，3660-3668；Beasley,CancerRes.61/13(2001),5262-5267)、CD33(Abutalib,CurrPharmBiotechnol.7(2006)，343-69)、MCSP(Campoli,CritRevImmunol.24(2004),267-96)或IgE(Infuhr,Allergy60(2005),977-85)。[0108]優選地腫瘤抗原選自EGFR、EGFRvII1、MCSP,EpCAM、碳酸酐酶IX(CAIX)、CD30、CD33、Her2/neu、CD44v6和Muc-1。[0109]EGFR(也稱為c-erbl或HER1)屬于erbB受體酪氨酸激酶家族。當通過結合來自生長因子EGF家族的配體而被活化時，EGFR分別地與第二個EGFR或erbB受體家族的另一成員同二聚化或異二聚化，經由促分裂原活化的蛋白激酶和其它轉錄因子而啟動信號傳導級聯，導致增殖、分化和修復(Olayioye，EMBOJ.19(2000)，3159-67)。EGFR在許多上皮癌中過表達，包括結腸直腸癌、乳腺癌、肺癌和頭頸癌(Mendelsohn，J.Clin.0ncol.21(2003)，2787-99;Mendelsohn，J.Clin.0ncol.20(18，增刊)(2002)，1S—13S;Prewett,Clin.CancerRes.8(2002)，994-1003)。在惡性腫瘤細胞中EGFR的過表達和/或突變導致激酶活性的組成型活化，造成增殖、血管生成、侵入、轉移、和細胞凋亡的抑制(Mendelsohn(2003)，上述引文；Ciardiello,Clin.CancerRes.7(2001)，2958-70；Perez-Soler,0ncologist9(2004)，58-67)。靶向EGFR的細胞外配體結合結構域或細胞內酪氨酸激酶信號傳導級聯的單克隆抗體已經顯示作為抗腫瘤祀的效力(Laskin,CancerTreat.Review30(2004)，1-17)。例如，競爭性地抑制EGFR的細胞外結構域以抑制受體的配體激活的西妥昔單抗(Erbitux)，即EGFR的一種人源化單克隆抗體，在2004年被食品和藥品管理局(FDA)批準與拓撲異構酶抑制劑伊立替康(irinotecan)聯合使用以治療轉移性結腸癌。[0110]黑素瘤相關性細胞表面硫酸軟骨素蛋白聚糖(proteoglycane)(MCSP),也稱為高分子量黑素瘤相關性抗原(HMW-MAA)或黑素瘤相關性蛋白聚糖，是細胞表面的多于450kDa的大的蛋白聚糖，包含250kDa的糖蛋白核芯和與其相連的糖胺聚糖鏈(Pluschke,PNAS93(1996),9710；Nishiyama,J.CellBiol.114(1991)，359)。MCSP的準確功能還未知。其可作為介導與細胞外基質(ECM)的細胞相互作用的粘附受體并很可能牽涉在血管生成、組織侵入和細胞擴展中(Burg,CancerRes.59(1999),2869；Iida,J.Biol.Chem.276(2001),18786;Eisenmann,Nat.CellBiol.1(1999),507；Iida,CancerRes.55(1995)，2177;Campoli(2004)，上述引文)。MCSP可增強a4bl整聯蛋白對配體的結合，且MCSP活化可由cdc42-和p130cas-依賴性機制增強整聯蛋白介導的細胞擴展。MCSP經由硫酸軟骨素與MT3-MMP締合，這可降解各種ECM-蛋白。其可特異性地定位MT3-MMP于細胞ECM-粘附位點。因此，看起來兩種分子都是I型膠原的侵入和I型明膠的降解所需的(Iida(2001)，上述引文)。MSCP是黑素瘤的主要標志物，在那里其在腫瘤細胞表面上高度表達。其被至少90%的黑素瘤損傷表達(Natali，J.Natl.CancerInst.72(1984)，13)。在所有黑素瘤相關性抗原中，MCSP展示最低程度的不均一性(Natali,CancerRes.45(1985)，2883)。不同于通常為MCSP陽性的表面擴展的黑素瘤(頻率:60%)、有結節的黑素瘤(頻率:20%)和惡性雀斑樣黑素瘤(頻率:10%)的原發腫瘤(RezaZiail987CancerRes.47:2474)，肢端雀斑樣黑素瘤的原發腫瘤(頻率:5%)常常是MCSP陰性的(Kageshita,CancerRes.51(1991)，1726)。目前，美國每年有53.600例新診斷出的黑素瘤病例(2002)。總的來說黑素瘤發生率在增加。[0111]在本發明的優選實施方案中，所述多肽是雙特異性單鏈抗體分子。[0112]如果候選藥物是雙特異性抗體，例如雙特異性單鏈抗體，那么本文上述的關于用于臨床前研究的替代物分子開發的問題進一步加劇。這種雙特異性抗體要求被識別的兩種抗原對給定動物物種都是跨物種特異性的，以允許在這種動物中進行安全性測試。[0113]如上文所述的，本發明提供多肽，其包括能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類⑶3ε鏈的表位的第一結合結構域和能夠結合于細胞表面抗原的第二結合結構域，其中所述第二結合結構域優選地還結合于人類和非黑猩猩靈長類的細胞表面抗原。雙特異性單鏈抗體分子作為滿足本發明的優選多肽的需求的候選藥物的優點是這種分子在臨床前動物測試中以及在臨床研究中和甚至在人類治療中的用途。在本發明跨物種特異性的雙特異性單鏈抗體的優選實施方案中，結合于細胞表面抗原的第二結合結構域是人類來源的。在根據本發明的跨物種特異性的雙特異性分子中，結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε鏈表位的結合結構域以VH-VL或VL-VH的順序位于雙特異性分子的Ν末端或C末端。以第一和第二結合結構域中VH和VL鏈的不同排列形式存在的根據本發明的跨物種特異性的雙特異性分子的實例描述于所附的實施例。[0114]本文所用的“雙特異性單鏈抗體”指的是包括兩個結合結構域的單多肽鏈。每個結合結構域包括來自抗體重鏈的一個可變區(“VH區”)，其中所述第一結合結構域的VH區特異性地結合于CD3ε分子，而所述第二結合結構域的VH區特異性地結合于細胞表面抗原，如以下更詳細地描述的。所述兩個結合結構域任選地由短多肽間隔區彼此連接。多肽間隔區的非限制性實例是Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(G-G-G-G-S)和其重復序列。每個結合結構域可另外包括來自抗體輕鏈的一個可變區(“VL區”)，在第一和第二結合結構域各自中的VH區和VL區由多肽連接體彼此連接，例如EP623679B1中公開和要求保護的類型的多肽連接體，但在任何情況下足夠長以允許第一結合結構域的VH區和VL區與第二結合結構域的VH區和VL區彼此配對，以使它們一起能夠特異性地結合于對應的第一和第二分子。[0115]根據本發明優選實施方案，以上表征的雙特異性單鏈抗體分子在第二結合結構域中包含一組如下的序列作為⑶RH1、⑶RH2、⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3，所述序列選自由以下組成的組:SEQIDNO:189-194、SEQIDNO:201-206、SEQIDNO:219-224、SEQIDNO:237-242、SEQIDNO:255-260、SEQIDNO:273-279,SEQIDNO:382-384和387-389、SEQIDNO:400-402和405-407、SEQIDNO:418-420和423-425、SEQIDNO:436-438和441-443、SEQIDNO:454-456和459-461、SEQIDNO:472-474和477-479、SEQIDNO:490-492和495-497、SEQIDNO:508-510和513-515、[0116]SEQIDNO:530-532和1568-1570、SEQIDNO:545-547和550-552、SEQIDNO:559-561和564-566、[0117]SEQIDNO:577-579和582-584、[0118]SEQIDNO:615-617和620-622、SEQIDN0:633_635、638、639和1571、SEQIDNO:650-652和655-657、SEQIDNO:668-670和673-675、SEQIDNO:682-684和687-689、SEQIDNO:696-698和701-703、SEQIDN0:710_712和715-717、SEQIDNO:724-726和729-731、SEQIDNO:738-740和743-745、SEQIDNO:752-754和757-759、SEQIDNO:766-768和771-773、SEQIDNO:780-782和785-787、SEQIDNO:794-796和799-801、SEQIDN0:808-810和813-815、SEQIDNO:822-824和827-829、SEQIDN0:836_838和841-843、SEQIDNO:850-852和855-857、[0119]SEQIDNO:866-868和871-873、SEQIDNO:884-886和889-891、SEQIDNO:902-904和907-909、SEQIDNO:920-922和925-927、SEQIDNO:938-940和943-945、SEQIDNO:956-958和961-963、SEQIDNO:974-976和979-981、SEQIDN0:992_994和997-999,SEQIDNO:1006-1008和1011_1013、SEQIDNO:1020-1022和1025_1027、SEQIDNO:1034-1036和1039-1041、SEQIDNO:1048-1050和1053-1055、SEQIDNO:1062-1064和1067-1069、SEQIDNO:1`076-1078和1081-1083、SEQIDNO:1090-1092和1095-1097、[0120]SEQIDNO:1114-1116和1119-1121、SEQIDNO:1128-1130和1133_1135、SEQIDNO:1141-1143和1146-1148、SEQIDNO:1155-1157和1160-1162、SEQIDNO:1169-1171和1174-1176、SEQIDNO:1183-1185和1188-1190、SEQIDNO:1197-1199和1202-1204、SEQIDNO:1211-1213和1216-1218、SEQIDNO:1125-1227和1230-1232、SEQIDNO:1239-1241和1244-1246、SEQIDNO:、1253-1255和1258-1260、SEQIDNO:1267-1269和1272-1274、SEQIDNO:1281-1283和1286-1288、SEQIDNO:1295-1297和1300-1302、SEQIDNO:1309-1311和1314-1316、SEQIDNO:1323-1325和1328-1330、SEQIDNO:1343-1345和1348-1350、SEQIDNO:1361-1363和1366_1368、SEQIDNO:1375-1377和1380-1382、SEQIDNO:1389-1391和1394-1396、SEQIDNO:1403-1405和1408-1410、SEQIDNO:1417-1419和1422-1424、SEQIDNO:1431-1433和1436_1438、SEQIDNO:1445-1447和1450-1452、SEQIDNO:1459-1461和1464-1466、SEQIDNO:1473-1475和1478-1480、SEQIDNO:1486-1491、SEQIDNO:1492-1497、[0121]SEQIDNO:1505-1507和1510-1512、SEQIDNO:1531-1533和1536_1538、SEQIDNO:1573-1575和1578-1580、SEQIDNO:1591-1593和1596-1598、SEQIDNO:1605-1607和1610-1612JPSEQIDNO:1619-1621、1624_1626、SEQIDNO:1634-1636和1639-1641和SEQIDNO:1652-1654、SEQIDNO:1657-1659和SEQIDNO:1669-1674。[0122]本發明的特別優選實施方案與以上表征的多肽有關，其中所述雙特異性單鏈抗體分子包括選自以下的序列:[0123](a)SEQIDN0.291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345或347、393、395、397、411、413、415、429、431、433、447、449、451、465、467、469、483、485、487、501、503、505、519、521、523、1336、1338、1340、538、540、542、556、570、572、574、588、590、592、626、628、630、643、645、647、661、663、665、679、693、707、721、735、749、763、777、791、805、819、833、847、861、863、877、879、881、895、897、899、913、915、917、931、933、935、949、951、953、967、969、971、985、987、989、1003、1017、1031、1045、1059、1073、1087、1101、1125、1138、1152、1166、1180、1194、1208、1222、1236、1250、1264、1278、1292、1306、1320、1334、1354、1356、1358、1372、1386、1400、1414、1428、1442、1456、1470、1484、1500、1502、1518、1520、1522、1524、1526、1528、1544、1546、1548、1550、1552、1554、1556、1558、1560、1562、1564、1566、1586、1588、1602、1616、1630、1647、1649或1663任一所示的氨基酸序列；和[0124](b)SEQIDN0.292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346或348、394、396、398、412、414、416、430、432、434、448、450、452、466、468、470、484、486、488、502、504、506、520、522、524、1337、1339、1341、539、541、543、557、571、573、575、589、591、593、627、629、631、644、646、648、662、664、666、680、694、708、722、736、750、764、778、792、806、820、834、848、862、864、878、880、882、896、898、900、914、916、918、932、934、936、950、952、954、968、970、972、986、988、990、1004、1018、1032、1046、1060、1074、1088、1102、1126、1139、1153、1167、1181、1195、1209、1223、1237、1251、1265、1279、1293、1307、1321、1335、1355、1357、1359、1373、1387、1401、1415、1429、1443、1457、1471、1485、1501、1503、1519、1521、1523、1525、1527、1529、1545、1547、1549、1551、1553、1555、1557、1559、1561、1563、1565、1567、1587、1589、1603、1617、1631、1648、1650或1664任一所不的核酸序列編碼的氨基酸序列。[0125]在本發明優選實施方案中，雙特異性單鏈抗體對于CD3ε和對于其第二結合結構域識別的細胞表面抗原是跨物種特異性的。在更優選的實施方案中，這些雙特異性單鏈抗體對于人類和非黑猩猩靈長類⑶3ε和對于人類和非黑猩猩靈長類MCSP、EGFR、EGFRvII1、碳酸酐酶IX、CD30、CD33、IgE、CD44v6、Muc_l、HBV和HCV是跨物種特異性的。在可選的實施方案中，本發明提供了一種編碼本發明上述多肽的核酸序列。[0126]本發明還涉及一種載體，其包括本發明的核酸分子。[0127]許多合適的載體為分子生物學領域的技術人員所公知，其選擇應基于功能目的，并包括質粒、粘粒、病毒、噬菌體和遺傳工程中常規使用的其他載體。可使用本領域技術人員熟知的方法來構建多種質粒和載體，參閱例如Sambrook等(上述引文中)和Ausubel,CurrentProtocolsinMolecularBiology(分子生物學最新方案)，GreenPublishingAssociatesandWileyInterscience,Ν.Y.(1989),(1994)中描述的技術。可選地，本發明多核苷酸和載體可重建入脂質體用于遞送至靶細胞中。如下文更詳細討論的，使用克隆載體來分離單獨的DNA序列。相關的序列可轉移進入表達載體，在該表達載體中需要特定多肽的表達。一般的克隆載體包括pBluescriptSK、pGEM、pUC9、pBR322和pGBT9。一般的表達載體包括pTRE、pCAL-n-EK、pESP-1、p0P13CAT。[0128]優選地，所述載體包括核酸序列，所述核酸序列是和編碼本文定義的單鏈抗體構建體的核酸序列可操作地連接的調節序列。[0129]術語“調節序列”是指DNA序列，其對于實現與它們連接的編碼序列的表達是必須的。這類控制序列的性質根據宿主生物體而不同。在原核生物中，控制序列通常包括啟動子、核糖體結合位點和終止子。在真核生物中，控制序列通常包括啟動子、終止子和在一些情況下的增強子、反式激活蛋白或轉錄因子。術語“控制序列”旨在包括至少其存在對于表達是必要的所有組件(component),并還可包括另外的有利組件。[0130]術語“可操作地連接”是指其中如此表述的組件的相互關系允許它們按照其預期方式起作用的并列。與編碼序列“可操作地連接”的控制序列以下述方式連接:編碼序列的表達在與控制序列相適合的條件下完成。在控制序列為啟動子的情況下，優選使用雙鏈核酸對于技術人員是清楚的。[0131]因此，所述載體優選地是表達載體。“表達載體”是可用于轉化選定的宿主并提供編碼序列在選定宿主中表達的構建體。表達載體可以是例如克隆載體、二元載體或整合型載體。表達包括核酸分子優選地轉錄為可翻譯的mRNA。本領域技術人員熟知保證原核和/或真核細胞中表達的調節元件。在真核細胞的情況下，它們通常包括保證轉錄起始的啟動子和可選的保證轉錄結束和轉錄物穩定的多聚腺苷酸信號。允許在原核宿主細胞中表達的可能調節元件包括例如大腸桿菌中的PljUacUrP或tac啟動子,而允許在真核宿主細胞中表達的調節元件實例為酵母中的AOXl或GALl啟動子或哺乳動物和其他動物細胞中的CMV、SV40、RSV啟動子(勞氏肉瘤病毒)、CMV增強子、SV40增強子或球蛋白內含子。[0132]除負責轉錄起始的元件外，這類調節元件還可包括位于多核苷酸下游的轉錄終止信號，例如SV40多聚腺苷酸位點或tk多聚腺苷酸位點。另外，根據使用的表達系統，可以向所述核酸序列的編碼序列添加前導序列，所述前導序列能夠將多肽定向至細胞區室或將其分泌進入培養基，這些是本領域所熟知的，還參閱附帶的實施例。前導序列在適當的階段與翻譯起始和終止序列裝配，并優選為能夠指導翻譯的蛋白質或其一部分分泌進入周質間隙或細胞外培養基的前導序列。任選地，異源序列可編碼包括賦予期望特性的N末端鑒定肽的融合蛋白，其中所述特性例如被表達的重組產物的穩定或簡化的純化，見上文。在本文中，合適的表達載體為本領域已知，例如Okayama-BergcDNA表達載體pcDVl(Pharmacia)、pCDMS、pRc/CMV、pcDNAl、pcDNA3(In-vitrogene)、pEF-DHFR、pEF-ADA或pEF-neo(Mack等人PNAS(1995)92,7021-7025和Raum等人，CancerTmmunolImmunother(2001)50(3),141-150)或pSPORTl(GIBCOBRL)。[0133]優選地，所述表達控制序列為能夠轉化或轉染真核宿主細胞的載體中的真核啟動子系統，但也可以使用原核宿主的控制序列。載體整合進適當的宿主中后，所述宿主就被保持在適合核苷酸序列高水平表達的條件下,并根據需要隨后收集并純化本發明的多肽,參閱例如附帶的實施例。[0134]可用來表達細胞周期相互作用蛋白質的另一表達系統為昆蟲系統。在一個這類系統中，使用苜猜銀紋夜蛾Autographacalirornica核型多角體病毒(AcNPV)作為在秋夜蛾Spodopterafrugiperda細胞中或粉紋夜蛾TrichoPlusia幼蟲中表達外源基因的載體。可將所述核酸分子的編碼序列克隆進該病毒的非必需區(例如多角體蛋白基因)并置于多角體蛋白啟動子控制之下。所述編碼序列的成功插入將使得多角體蛋白基因失活并產生缺少外殼蛋白外殼的重組病毒。然后使用重組病毒來感染其中表達本發明蛋白的秋夜蛾細胞或粉紋夜蛾幼蟲(Smith,J.Virol.46(1983),584;Engelhard,Proc.Nat.Acad.Sc1.USA91(1994)，3224-3227)。[0135]其他調節元件可包括轉錄和翻譯增強子。有利地，本發明上述載體包括可選擇的(selectable)和/或可取得的(scorable)標志物。[0136]用于選擇轉化的細胞和例如植物組織和植物的可選擇的標志物基因對本領域技術人員是熟知的，并包括例如以抗代謝物抗性作為選擇基礎的賦予甲氨蝶吟抗性的dhrr(Reiss,PlantPhysiol.(LifeSc1.Adv.)13(1994),143-149);賦予氨基糖苷類新霉素、卡那霉素和巴龍霉素抗性的npt(Herrera-Estrella,EMBOJ.2(1983)，987-995)和賦予潮霉素抗性的hygro(Marsh,Gene32(1984),481-485)。已描述了其他的可選擇的基因，即允許細胞使用吲哚代替色氨酸的trpB，允許細胞使用組氨醇(histinol)代替組氨酸的hisD(Hartman,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85(1988)，8047)，允許細胞使用甘露糖的甘露糖-6-磷酸異構酶(W094/20627)和賦予鳥氨酸脫羧酶抑制劑2-(二氟甲基)_DL_鳥氨酸DFM0抗性的0DC(鳥氨酸脫羧酶)(McConlogue,1987，在CurrentCommunicationsinMolecularBiology(現代分子生物學通訊)，ColdSpringHarborLaboratory編輯)或來自土曲霉(Aspergillusterreus)的賦予殺稻痕素(BlasticidinS)抗性的脫氨基酶(Tamura,Biosc1.Biotechnol.Biochem.59(1995),2336-2338)。[0137]有用的可取得的標志物也為本領域技術人員所知，并可商業獲得。有利的是，所述標志物為編碼熒光素酶(Giacomin，P1.Sc1.116(1996)，59-72;Scikantha,J.Bact.178(1996)，121)、綠色熒光蛋白(Gerdes,FEBSLett.389(1996)，44-47)或β_葡糖醛酸酶(Jefferson，EMBOJ.6(1987)，3901-3907)的基因。該實施方案特別適用于簡單快速篩選含有所述載體的細胞、組織和生物體。[0138]如上所述，為了例如純化以及基因治療的目的，可單獨或作為載體的一部分使用所述核酸分子，以在細胞中表達本`發明多肽。將含有編碼本發明上述任一多肽的DNA序列的核酸分子或載體引入細胞，所述細胞隨后產生感興趣的多肽。以通過離體或體內技術向細胞引入治療基因為基礎的基因療法是基因轉移最重要的應用之一。用于體外或體內基因療法的合適的載體、方法或基因遞送系統描述于文獻中并為本領域技術人員所知；參閱例如Giordano,NatureMedicine2(1996),534-539；Schaper,Circ.Res.79(1996),911-919；Anderson,Science256(1992),808-813；Verma,Nature389(1994),239；Isner,Lancet348(1996),370-374；Muhlhauser,Circ.Res.77(1995),1077-1086；Onodera,Blood91(1998),30-36；Verma,GeneTher.5(1998),692-699；Nabel,Ann.Ν.Y.Acad.Sc1.811(1997)，289-292；Verzeletti,Hum.GeneTher.9(1998)，2243-51；Wang,NatureMedicine2(1996)，714-716；W094/29469;W097/00957、US5,580，859；US5,589,466；或Schaper,CurrentOpinioninBiotechnology(生物技術最新觀點)7(1996),635-640。所述核酸分子和載體可設計為用于直接引入細胞或通過脂質體或病毒載體(例如腺病毒、逆轉錄病毒)引入細胞。優選所述細胞為種系細胞、胚細胞或卵細胞或由此衍生的細胞，最優選所述細胞為干細胞。胚胎干細胞的實例可以為特別是如Nagy,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90(1993)，8424-8428中所述的干細胞。[0139]本發明還提供用本發明載體轉化或轉染的宿主。可通過向宿主中引入本發明上述載體或本發明上述核酸分子而產生所述宿主。至少一種載體或至少一種核酸分子在所述宿主中的存在可介導編碼上述單鏈抗體構建體的基因的表達。[0140]上述被引入宿主的本發明核酸分子或載體可以整合進宿主基因組或其可以保持在染色體之外。[0141]宿主可以是任何原核或真核細胞。[0142]術語“原核生物”旨在包括所有可以用DNA或RNA分子轉化或轉染以表達本發明蛋白的細菌。原核宿主可包括革蘭氏陰性菌以及革蘭氏陽性菌，例如大腸桿菌、傷寒沙門氏菌(S.typhimurium)、粘質沙雷氏桿菌(Serratiamarcescens)和枯草桿菌(Bacillussubtilis)。術語“真核的”旨在包括酵母、高等植物、昆蟲和優選哺乳動物細胞。取決于重組產生方法中使用的宿主，本發明多核苷酸編碼的蛋白可以是糖基化的或可以是非糖基化的。特別優選使用含有本發明多肽的編碼序列的質粒或病毒，并用遺傳學手段向其中融合了N末端FLAG標簽和/或C末端His標簽。優選所述FLAG標簽長度為約4到8個氨基酸，最優選8個氨基酸。可使用本領域普通技術人員公知的任何技術將上述多核苷酸用于轉化或轉染宿主。此外，用于制備融合的、可操作地連接的基因并在例如哺乳動物細胞和細菌中表達它們的方法為本領域所公知(Sambrook，上述引文)。[0143]優選所述宿主為細菌或昆蟲、真菌、植物或動物細胞。[0144]特別設想，所述宿主可以是哺乳動物細胞。特別優選的宿主細胞包括CHO細胞、COS細胞、骨髓瘤細胞系如SP2/0或NS/0。如附帶的實施例中所演示的，特別優選的是CHO細胞作為宿主。[0145]更優選所述宿主為人細胞或人細胞系，例如per.c6(Kroos,Biotechnol.Prog.，2003，19:163-168)。[0146]在進一步的實施方案中，本發明因此涉及用于產生本發明多肽的方法，所述方法包括在允許表達本發明多肽的條件下培養本發明宿主并從培養物中回收產生的多肽。[0147]轉化的宿主可以在發酵罐中`生長并根據本領域已知技術培養以達到最佳細胞生長。然后可從生長培養基、細胞裂解產物或細胞膜成分中分離本發明多肽。可通過任何常規方法例如制備型色譜分離和免疫分離來離析和純化例如微生物所表達的本發明多肽，其中所述免疫分離例如涉及抗如本發明多肽標簽的單克隆或多克隆抗體的使用或如附帶的實施例中所述的。[0148]本領域已知用于宿主培養的允許表達的條件依賴于這類方法中使用的宿主系統和表達系統/載體。本領域已知為達到允許重組多肽表達的條件而需進行修飾的參數。因此，本領域技術人員可以無需更多的創造性投入即可確定合適的條件。[0149]表達后可根據本領域標準程序純化本發明多肽，所述方法包括硫酸銨沉淀、親和層析柱、柱層析、凝膠電泳和類似手段，參閱Scopes,“ProteinPurification(蛋白純化)”，Springer-Verlag,N.Y.(1982)。對于制藥用途而言，優選具有至少約90%到95%均一性的大致純的多肽，更優選98%到99%或更高均一性的大致純的多肽。如所期望地部分純化或純化至均一后，可將本發明多肽用于治療(包括體外地)或用于開發和實施測定程序。此外，用于從培養物中回收本發明多肽的方法實例在附帶的實施例中詳細描述。[0150]此外，本發明提供一種組合物，其含有本發明多肽或用如上公開的方法產生的多肽。優選地，所述組合物為藥物組合物。[0151]根據本發明，術語“藥物組合物”是指用于對患者，優選人類患者施用的組合物。本發明特別優選的藥物組合物包含針對背景獨立的CD3表位并針對其產生的結合分子。優選地，藥物組合物包括載體、穩定劑和/或賦形劑的合適制劑。在優選的實施方案中，藥物組合物包括用于腸胃外、透皮、腔內、動脈內、鞘內和/或鼻內施用或通過直接注射進組織中的組合物。特別設計所述組合物通過輸注或注射施用給患者。可通過不同的路徑施用適當的組合物，例如通過靜脈內、腹膜內、皮下、肌內、局部或真皮內施用。尤其是，本發明提供合適組合物的不間斷施用。作為非限制性實例，不間斷、即連續的施用可通過小泵系統來實現，其中所述小泵系統被戴在患者中，以計量流入患者體內的治療劑。包含針對本發明的背景獨立的CD3表位并針對其產生的結合分子的藥物組合物可通過使用所述泵系統而施用。此類泵系統通常為本領域已知，并且通常依賴于定期更換的、含有待注入治療劑的藥筒。當在此泵系統中更換藥筒時，不間斷地流入患者體內的治療劑會隨之發生暫時中斷。在這種情況下，替換藥筒之前的施用階段和替換藥筒之后的施用階段仍被認為在本發明的藥物治療手段和方法的含義范圍內，并且共同組成此類治療劑的一種“不間斷的施用”。[0152]本發明的這些針對背景獨立的⑶3表位并針對其產生的結合分子的連續或不間斷的施用可以是通過流體遞送設備或小泵系統而靜脈內或皮下施用的，其中所述流體遞送設備或小泵系統包括一個用來將流體從儲器中推出的流體推動裝置和一個用來驅動所述推動裝置的驅動裝置。用于皮下施用的泵系統可包括用以穿透患者皮膚并遞送合適組合物到患者身體的針頭或插管。所述泵系統可獨立于靜脈、動脈或血管直接固定或連接于患者皮膚，從而允許泵系統和患者皮膚之間直接接觸。泵系統可連接到患者皮膚持續24小時至數天。泵系統可為小尺寸的，并帶有一個小容積的儲器。作為非限制性實例，待施用的合適藥物組合物的儲器的容積可為0.lml至50ml。[0153]所述連續施用可以是通過貼在皮膚上并以一定時間間隔進行更換的貼片來透皮進行。本領域技術人員知道適合這個目的藥物遞送貼片系統。應當注意，透皮施用尤其適合連續施用，因為更換第一張用完的貼片可以通過同時將其替換為第二張新貼片來方便地實現，例如貼在緊鄰第一張用完的貼片的皮膚表面上，并且在除去第一張貼片前立即進行。流動中斷問題或電池故障問題都未出現。[0154]包含尤其是針對背景獨立的CD3表位并針對其產生的結合分子的本發明組合物還可包含藥學上可接受的載體。合適藥物載體的實例是本領域公知的并包括溶液，如，磷酸鹽緩沖鹽水溶液、水、乳液諸如油/水乳液、各種類型的潤濕劑、無菌溶液、脂質體等。通過公知的常規方法可配制包含這種載體的組合物。制劑可包含碳水化合物、緩沖溶液、氨基酸和/或表面活性劑。碳水化合物可為非還原性糖，優選地為海藻糖、蔗糖、八硫酸酯(octasulfate)、山梨醇或木糖醇。這種制劑可用于靜脈內或皮下連續施用，帶有和/或不帶有泵系統。氨基酸可為帶電荷的氨基酸，優選地為賴氨酸、乙酸賴氨酸、精氨酸、谷氨酸和/或組氨酸。表面活性劑可為優選地具有>1.2KD的分子量的去污劑，和/或優選地具有>3KD的分子量的聚醚。優選去污劑的非限制性實例是吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80或吐溫85。優選聚醚的非限制性實例是PEG3000、PEG3350、PEG4000或PEG5000。用于本發明的緩沖系統可具有優選5-9的pH，并可包括檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、磷酸鹽、組氨酸和乙酸鹽。本發明的組合物可以合適劑量施用于受治療者，合適劑量如，通過向非黑猩猩靈長類例如獼猴施用增加的劑量的表現本文所述的跨物種特異性的本發明多肽的劑量增強研究而確定。如上所述，表現本文所述的跨物種特異性的本發明多肽可有利地以相同形式用于非黑猩猩靈長類的臨床前測試和作為人類藥物。這些組合物還可聯合其它蛋白性質和非蛋白性質的藥物施用。這些藥物可與包含本文定義的多肽的本發明組合物同時地施用或以定期的間隔和劑量在施用所述多肽之前或之后分開地施用。由主治醫師和臨床因素確定給藥方案。如醫藥領域中眾所周知，用于任意一個患者的劑量依賴于多種因素，包括患者身材大小、體表面積、年齡、將施用的特定化合物、性別、施用時間和途徑、一般健康和同時施用的其它藥物。用于腸胃外施用的制劑包括無菌水性溶液或非水性溶液、懸浮液和乳液。非水性溶劑的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和可注射有機酯類如油酸乙酯。水性載體包括水、醇/水溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩沖介質。腸胃外運載體包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格氏或不揮發性油。靜脈內運載體包括流體和營養物補充劑、電解質補充劑(如基于林格氏葡萄糖的那些)及其類似物。還可存在防腐劑和其它添加劑例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體及諸如此類。另外，本發明的組合物可以包含蛋白質性質的載體，例如血清白蛋白或免疫球蛋白，其優選地是人類來源的。可以設想，除了本文定義的本發明多肽之外，本發明的組合物還可以包含其他生物活性劑，這依賴于該組合物的計劃用途。此類劑可以是作用于胃腸系統的藥物、作為細胞生長抑制劑的藥物、防止高尿酸血癥(hyperurikemia)的藥物、抑制免疫反應的藥物(例如皮質類固醇)、調節炎性反應的藥物、作用于循環系統的藥物和/或本領域中已知的諸如細胞因子的劑。[0155]本文定義的藥物組合物的生物活性可例如通過細胞毒性測定確定，如在以下實施例、W099/54440或Schlereth等人描述的(CancerImmunol.1mmunother.20(2005),1-12)。本文所用的“效力”或“體內效力”是指對本發明藥物組合物治療的響應，其使用例如標準化的NCI響應標準。使用本發明藥物組合物治療的成功或體內效力是指組合物對其預期目的的有效性，即組合物導致其期望效應即消耗病理性細胞如腫瘤細胞的能力。體內效力可由對各自的疾病實體確立的標準方法監測，其中所述方法包括但不限于白細胞計數、微分(differentials)、熒光激活細胞分選術、骨髓穿刺。此外，可使用多種疾病特異性臨床化學參數和其它已確立的標準方法。而且，可以使用例如計算機輔助的X射線斷層術、X射線、核磁共振X射線斷層術(如，基于國家癌癥研究所標準的響應評估[ChesonBD,HorningSJ,CoiffierB,ShippMA,FisherRI,ConnorsJM,ListerTA,VoseJ,Grillo-LopezA,HagenbeekA,CabanillasF,KlippenstenD,Hiddemannff,CastellinoR,HarrisNL,ArmitageJO,Carterff,HoppeR,CanellosGP.Reportofaninternationalworkshoptostandardizeresponsecriteriafornon-Hodgkin’slymphomas(標準化非霍奇金淋巴瘤響應標準的國際研討會報告)。NCI發起的國際研討會.JClinOncol.1999Apr;17(4):1244])、正電子發射X射線斷層術掃描、白細胞計數、微分、熒光激活細胞分選術、骨髓穿刺、淋巴結活體解剖/組織學和多種淋巴瘤特異性的臨床化學參數(例如乳酸脫氫酶)以及其它已確立的標準方法。[0156]開發藥物諸如本發明藥物組合物中的另一主要挑戰是藥物代謝動力學性質的可預測的調節。為此，建立候選藥物的藥物代謝動力學概況，即實現特定藥物治療給定疾患的能力的藥物代謝動力學參數的概況。影響藥物治療特定疾病實體的能力的藥物的藥物代謝動力學參數包括但不限于:半衰期、分布容積、肝首過代謝和血清結合度。給定藥劑的效力可被上述各參數影響。[0157]“半衰期”指50%的被施用的藥物通過生物過程例如代謝、排泄等消除所用的時間。[0158]“肝首過代謝”指藥物首次接觸肝時即在肝中首過期間被代謝的傾向。“分布容積”指藥物經身體各區室如細胞內和細胞外間隙、組織和器官等的保留度，和藥物在這些區室中的分布。“血清結合度”指藥物與血清蛋白諸如白蛋白相互作用和結合的傾向，導致減少或失去藥物生物活性。[0159]藥物代謝動力學參數還包括給定量的所施用藥物的生物利用度、滯后時間(Tlag)、Tmax、吸收率、更多起效(moreonset)和/或Cmax。[0160]“生物利用度”指藥物在血液區室中的量。[0161]“滯后時間”指在藥物的施用和它在血液或血漿中被檢測和測量到之間的時間延遲。[0162]“Tmax”是達到藥物最大血液濃度的時間，而“Cmax”是以給定藥物獲得的最大血液濃度。達到所述藥物的生物效應所需的血液或組織濃度的時間受所有參數影響。如Schlereth等人的出版物(CancerImmunol.1mmunother.20(2005),1-12)也陳述了表現跨物種特異性的本發明多肽的優選實施方案即雙特異性單鏈抗體的藥物代謝動力學參數，其可在如上列出的非黑猩猩靈長類中進行的臨床前動物測試中確定。[0163]本文所用的術語“毒性”是指藥物顯露在不良事件或嚴重不良事件中的毒性效應。這些副作用可能指施用后藥物的全身耐受性的缺乏和/或局部耐受性的缺乏。毒性還可包括藥物導致的致畸或致癌效應。[0164]本文所用的術語“安全性”、“體內安全性”或“耐受性”定義了在藥物施用后當即(局部耐受性)和長期應用中不引起嚴重不良事件的藥物施用。“安全性”、“體內安全性”或“耐受性”可在例如治療和隨訪期中以規律的間隔評估。測量包括臨床評估如器官表現，以及實驗室異常的篩查。臨床評估可以被實施并偏向于根據NC1-CTC和/或MedDRA標準記錄/編碼的正常發現。器官表現可包括例如不良事件通用術語標準v3.0(CTCAE)中所列的標準，諸如過敏反應/免疫學、血液/骨髓、心律不齊、凝結，及諸如此類。可檢測的實驗室參數包括例如血液學、臨床化學、凝結概況和尿分析，以及其它體液諸如血清、血漿、淋巴液或脊髓液、液體及類似物的檢查。因此可評價安全性，如通過身體檢查、成像技術(即超聲波、X-射線、CT掃描、磁共振成像(MRI))、使用技術設備的其它測量(即心電圖)、生命特征、通過測量實驗室參數并記錄不良事件。例如，根據本發明的用途和方法在非黑猩猩靈長類中的不良事件可通過組織病理學和/或組織化學方法檢查。[0165]本文所用的術語“有效的和無毒的劑量”是指本文定義的雙特異性單鏈抗體的可耐受劑量，所述劑量足夠高以導致病理性細胞的清除、腫瘤的消除、腫瘤的收縮或疾病的穩定，而不會或基本不會導致主要的毒性效應。這種有效的和無毒的劑量可通過如本領域中描述的劑量增強研究來確定，并應低于引起嚴重不良事件(劑量限制性毒性，DLT)的劑量。[0166]以上術語在例如Preclinicalsafetyevaluationofbiotechnology-derivedpharmaceuticalsS6(生物技術衍生的藥品的臨床前安全性評估S6)；ICHHarmonisedTripartiteGuideline(ICH協調的三方準則);1997年7月16日的ICHSteeringCommitteemeeting(ICH指導委員會會議)中也被提及。[0167]此外，本發明涉及包含本發明多肽的藥物組合物(即包含能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε鏈的表位的至少一個結合結構域的多肽，其中所述表位是包括在由根據本發明或根據本發明方法產生的SEQIDN0.2、4、6或8組成的組中的氨基酸序列的一部分)，其用于預防、治療或改善選自增生性疾病、腫瘤性疾病或免疫性病癥的疾病。優選地，所述藥物組合物還包含載體、穩定劑和/或賦形劑的合適制劑。[0168]本發明的進一步方面涉及本文以上定義的或根據以上定義的方法產生的多肽用于制備預防、治療或改善疾病的藥物組合物的用途。優選地，所述疾病是增生性疾病、腫瘤性疾病或免疫病癥。進一步優選地,所述腫瘤性疾病是惡性疾病，優選地為癌癥。[0169]在本發明多肽用途的另一優選實施方案中，所述藥物組合物適于聯合另外的藥物施用，即作為綜合療法的一部分。在所述綜合療法中，活性劑可任選地與本發明多肽包括在相同藥物組合物中，或可包括在分開的藥物組合物中。在后一種情況中，所述分開的藥物組合物適于在施用包含本發明多肽的藥物組合物之前、同時或之后施用。另外的藥物或藥物組合物可為非蛋白質性質的化合物或蛋白質性質的化合物。在另外的藥物是蛋白質性質的化合物的情況下，蛋白質性質的化合物能夠為免疫效應細胞提供活化信號是有利的。[0170]優選地，所述蛋白質性質的化合物或非蛋白質性質的化合物可與本發明多肽、上文定義的核酸分子、上文定義的載體、或上文定義的宿主同時地或非同時地施用。[0171]本發明另一方面涉及在需要其的受治療者中預防、治療或改善疾病的方法，所述方法包括施用本發明有效量的藥物組合物的步驟。優選地，所述疾病是增生性疾病、腫瘤性疾病或免疫病癥。甚至更優選地，所述腫瘤性疾病是惡性疾病，優選地為癌癥。[0172]在本發明方法的另一優選實施方案中，所述藥物組合物適于聯合另外的藥物施用，即作為綜合療法的一部分。在所述綜合療法中，活性劑可任選地與本發明多肽包括在相同藥物組合物中，或可包括在分開的藥物組合物中。在后一種情況中，所述分開的藥物組合物適于在施用包含本發明多肽的藥物組合物之前、同時或之后施用。另外的藥物或藥物組合物可為非蛋白質性質的化合物或蛋白質性質的化合物。在另外的藥物是蛋白質性質的化合物的情況下，蛋白質性質的化合物能夠為免疫效應細胞提供活化信號是有利的。[0173]優選地，所述蛋白質性質的化合物或非蛋白質性質的化合物可與本發明的多肽、上文定義的核酸分子、上文定義的載體、或上文定義的宿主同時地或非同時地施用。[0174]對本發明上述方法優選地，所述受治療者是人類。[0175]在進一步方面，本發明涉及一種試劑盒，其包括本發明的多肽、本發明的核酸分子、本發明的載體或本發明的宿主。[0176]本發明進一步以下列項目為特征:[0177]第I項.一種鑒定多肽的方法，所述多肽包含能夠結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε(CD3ε)表位的跨物種特異性的結合結構域，該方法包括以下步驟:[0178](a)將該多肽與經由C末端固定于固相的最多27個氨基酸的CD3ε細胞外結構域的N末端片段接觸，其中所述N末端片段包含氛基酸序列Gln-Asp-Gly-Asn-Glu-Glu-Met-Gly(SEQIDN0.381)或Gln-Asp-Gly-Asn-Glu-Glu-1le-Gly(SEQIDN0.382)；[0179](b)從所述片段洗脫結合的多肽；和[0180](C)從(b)的洗脫物分離所述多肽。[0181]優選地，本發明上述方法鑒定的多肽是人類來源的。[0182]本“鑒定多肽的方法”理解為從多個多肽候選物分離對CD3ε的細胞外結構域片段具有相同特異性的一個或多個不同多肽的方法以及從溶液中純化多肽的方法，其中所述片段在它的N末端包括氨基酸序列Gln-Asp-Gly-Asn-Glu-Glu-Met-Gly(SEQIDN0.381)或Gln-Asp-Gly-Asn-Glu-Glu-1le-Gly(SEQIDN0.382)。分離對CD3ε細胞外結構域片段具有相同特異性的一個或多個不同多肽的方法的非限制性實施方案包括選擇抗原特異性結合實體的方法，如，通常用于雜交瘤篩選、篩選瞬時/穩定轉染的真核宿主細胞克隆或用在噬菌體展示方法中的淘選方法。用于從溶液中純化多肽的后一方法的非限制性實例是例如從培養物上清液或從這種培養物的制品純化重組表達的多肽。[0183]如上所述，用于本發明方法的片段是靈長類CD3ε分子細胞外結構域的Ν末端片段。不同靈長類的⑶3ε分子細胞外結構域的氨基酸序列描繪在SEQIDN0:l、3、5和7。Ν末端八聚體的兩種形式描繪在SEQIDNO:381和382。優選地該N末端對于將被本發明方法鑒定的多肽的結合是自由地可用的。在本發明上下文中術語“自由地可用的”理解為沒有另外的基序(motives)諸如His-標簽。這種His-標簽對本發明方法鑒定的結合分子的干擾描述于所附的實施例6和34。[0184]根據本發明方法，所述片段經由其C末端固定于固相。本領域技術人員將易于和不需要任何創造性勞動地按照本發明方法所用的實施方案來選擇合適的固相支持體。固相支持體的實例包括但不限于基質例如珠(如，瓊脂糖珠、瓊脂糖凝膠珠、聚苯乙烯珠、葡聚糖珠)、板(培養板或多孔板(MultiWellplate))以及已知的例如來自Biacore?的芯片。將片段固定/固定化于所述固相支持體的手段和方法的選擇取決于所述固相支持體的選擇。固定/固定化的常用方法是經由N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)酯偶合。支持這種偶合的化學原理以及固定/固定化的可選方法是本領域技術人員已知的，例如來自Hermanson,“BioconjugateTechniques”，AcademicPress,Inc.(1996)。為了固定于/固定化到色譜支持體上，常用以下手段:NHS活化的瓊脂糖凝膠(如，GELifeScience-Amersham的HiTrap-NHS)、CnBr活化的瓊脂糖凝膠(如，GELifeScience-Amersham)、NHS活化的葡聚糖珠(Sigma)或活化的聚甲基丙烯酸酯。這些試劑還可用于批處理方法。此外，包括氧化鐵的葡聚糖珠(如，從Miltenyi可得)可用于批處理方法。這些珠可以和用于將所述珠從溶液分離的磁體聯合使用。多肽可通過使用NHS活化的羧甲基葡聚糖固定在Biacore芯片(如CM5芯片)上。合適的固相支持體的進一步實例是胺反應性的多孔板(如NuncImmobilizer?板)。[0185]根據本發明方法，所述CD3ε細胞外結構域片段可直接或經由一段氨基酸偶合于固相支持體，其中所述一段氨基酸可為連接體或另一蛋白/多肽部分。可選地，CD3e細胞外結構域可經由一個或多個銜接分子間接偶合。[0186]洗脫結合于固定的表位的肽的手段和方法是本領域公知的。從洗脫物分離所鑒定的多肽的方法也如此。[0187]與本發明一致，從多個多肽候選物分離對在其N末端包含氨基酸序列Gln-Asp-Gly-Asn-Glu-Glu-X-Gly的CD3ε細胞外結構域片段具有相同特異性的一個或多個不同多肽的方法可包括選擇抗原特異性實體的如下方法的一個或多個步驟:[0188]⑶3ε特異性結合分子可選自抗體衍生的所有組成成分。噬菌體展示文庫可基于標準程序構建，例如在“PhageDisplay:ALaboratoryManual(卩遼菌體展示:實驗室手冊)，，；編輯Barbas,Burton,Scott&Silverman;ColdSpringHarborLaboratoryPress,2001中所公開的。抗體文庫中抗體片段的型式可為scFv，但通常還可為Fab片段或甚至是單結構域抗體片段。對于抗體片段的分離，可使用原初抗體片段文庫。為了在隨后治療應用中選擇潛在的低免疫原性的結合實體，人類抗體片段文庫可有利于直接選擇人類抗體片段。在一些情形下，它們可形成合成抗體文庫的基礎(Knappik等人，JMol.Biol.2000,296:57ff)。相應的型式可為Fab、scFv(如下述的)或結構域抗體(dAbJnHolt等人，TrendsBiotechnol.2003,21:484ff綜述的)。[0189]本領域還已知的是，在許多情形下，沒有針對靶抗原的可用的免疫人類抗體源。因此，將動物以靶抗原免疫并從動物組織如脾臟或PBMC分離相應的抗體文庫。N末端片段可被生物素酰化(biotinylated)或共價連接于蛋白如KLH或牛血清白蛋白(BSA)。根據常用方法，嚙齒類動物被用于免疫。出于其它原因，非人類來源的一些免疫抗體的所有組成成分可尤其有利，其中所述原因例如衍生自駱駝狀物種的單結構域抗體(VHH)的存在(如描述于Muyldermans,JBiotechnol.74:277；DeGenst等人，DevComoImmunol.2006，30:187ff)。因此,抗體文庫相應的型式可為Fab、scFv(如下述的)或單結構域抗體(VHH)。[0190]在一種可能的方法中，十周大的來自balb/cxC57black雜交的Fl小鼠可以例如表達跨膜EpCAM的全細胞免疫，其中所述EpCAM以翻譯融合的方式在N末端展示成熟⑶3ε鏈的N末端氨基酸I至27。可選地，小鼠可以1-27⑶3ε-Fe融合蛋白免疫(相應的方法描述在所附的實施例2)。加強免疫后，可獲取血液樣品并可在例如FACS分析中測試針對CD3陽性T細胞的抗體血清滴度。通常，免疫動物中的血清滴度顯著高于未免疫動物中的血清滴度。[0191]免疫的動物可形成構建免疫抗體文庫的基礎。這種文庫的實例包括噬菌體展示文庫。這種文庫可通常基于標準程序構建，例如“PhageDisplay:ALaboratoryManual(卩遼菌體展不:實驗室手冊)”；編輯Barbas,Burton,Scott&Silverman;ColdSpringHarborLaboratoryPress,2001中所公開的。[0192]由于產生更多種多樣的抗體文庫，所述非人類抗體也可經由噬菌體展示而被人源化，其中所述抗體文庫可隨后在選擇期間富集結合子。[0193]在噬菌體展示方法中，使用相應的抗原作為靶分子，展示抗體文庫的噬菌體池中的任一個形成了選擇結合實體的基礎。分離抗原特異性的抗原結合噬菌體的核心步驟稱為淘選。因為抗體片段在噬菌體表面上的展示，該一般方法稱為噬菌體展示。所選擇的一個優選方法是使用小蛋白，諸如翻譯地融合于噬菌體展示的scFv的N末端的絲狀噬菌體N2結構域。本領域已知的可用于分離結合實體的另一展示方法是核糖體展示方法(綜述于Groves&Osbourn,ExpertOpinBiolTher.2005,5:125ff；Lipovsek&Pluckthun,JTmmunolMethods2004,290:52ff)。[0194]為了證明scFv噬菌體粒子結合于1-27⑶3ε-Fe融合蛋白，可以PEG(聚乙二醇)從相應的培養物上清液收集攜帶克隆的scFv所有組成成分的噬菌體文庫。ScFv噬菌體粒子可與固定化的CD3εFe融合蛋白一起孵化。固定化的CD3εFe融合蛋白可包被于固相。可洗脫結合實體，且洗脫物可用于感染新鮮的未感染的細菌宿主。成功地被編碼人類scFv片段的噬菌粒拷貝轉導的細菌宿主可再次進行羧芐青霉素抗性選擇，并接著被例如VCMS13輔助噬菌體感染而開始第二輪抗體展示和體外選擇。通常總共進行4至5輪選擇。[0195]分離的結合實體的結合可使用流式細胞測定在攜帶融合到表面展示的EpCAM的N末端⑶3ε序列的⑶3ε陽性Jurkat細胞、HPBall細胞、PBMC或被轉染的真核細胞上測試(參見所附實施例4)。[0196]第2項.根據第1項的方法，其中所述多肽包括鑒定的結合結構域，其作為能夠結合于細胞表面抗原的第一結合結構域和第二結合結構域。[0197]為了產生本發明方法鑒定的多肽(如本文定義的雙特異性單鏈抗體)的第二結合結構域，可使用結合于人類和非黑猩猩靈長類的相應細胞表面抗原的單克隆抗體。本文所定義的雙特異性多肽的適當的結合結構域例如可通過本領域所述重組方法衍生自跨物種特異性的單克隆抗體。可用上述FACS測定來測試結合到人類細胞表面抗原和所述細胞表面抗原在非黑猩猩靈長類中的同系物的單克隆抗體。文獻中所述雜交瘤技術(Milstein和Kohler,Nature256(1975),495-7)也可被用來生成跨物種特異性的抗體。例如，小鼠可被人類和非黑猩猩靈長類⑶33交替免疫。經雜交瘤技術可從這些小鼠分離產生跨物種特異性抗體的雜交瘤細胞并由FACS按上述進行分析。本文所述展現跨物種特異性的雙特異性多肽例如雙特異性單鏈抗體的產生和分析被顯示在下述實施例中。展現跨物種特異性的雙特異性單鏈抗體的優點包括如下列舉的要點。[0198]第3項.根據第2項的方法，其中所述第二結合結構域結合于人類和非黑猩猩靈長類的細胞表面抗原。[0199]第4項.根據第1至3任何一項的方法，其中所述第一結合結構域是抗體。[0200]第5項.根據第4項的方法，其中所述抗體是單鏈抗體。[0201]第6項.根據第2至5任何一項的方法，其中所述第二結合結構域是抗體。[0202]第7項.根據第`1至6任何一項的方法，其中所述⑶3ε的細胞外結構域的片段由具有SEQIDN0.2、4、6或8所示的任何一個氨基酸序列的多肽的一個或多個片段組成。[0203]第8項.根據第7項的方法，其中所述片段長度為8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27個氨基酸殘基。[0204]第9項.根據第1至8任何一項的方法，其中所述鑒定方法是篩選多個多肽的方法，其中所述多肽包括結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε的表位的跨物種特異性結合結構域。[0205]第10項.根據第1至8任何一項的方法，其中所述鑒定方法是純化/分離多肽的方法，其中所述多肽包括結合于人類和非黑猩猩靈長類CD3ε的表位的跨物種特異性結合結構域。[0206]第11項.最多27個氨基酸的⑶3ε細胞外結構域的Ν末端片段用于產生跨物種特異性結合結構域的用途，其中所述片段包括氨基酸序列Gln-Asp-Gly-Asn-Glu-Glu-Met-Gly(SEQIDN0.381)或Gln-Asp-Gly-Asn-Glu-Glu-1le-Gly(SEQIDN0.382)。根據本發明的所述用途，優選地，所產生的跨物種特異性結合結構域是人類來源的。[0207]第12項.根據第11項的用途，其中所述跨物種特異性結合結構域是抗體。[0208]第13項.根據第12項的用途，其中所述抗體是單鏈抗體。[0209]第14項.根據第12至13項的用途，其中所述抗體是雙特異性抗體。[0210]這些和其他實施方案通過本發明的描述和實施例而被公開和包括。免疫學中的重組技術和方法在例如以下文獻中被描述:Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual(分子克隆:實驗室手冊)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,第3版2001;Lefkovits,ImmunologyMethodsManual,TheComprehensiveSourcebookofTechniques(免疫學方法手冊，綜合技術參考資料)，AcademicPress,1997；Golemis,Protein-ProteinInteractions:AMolecularCloningManual(蛋白質-蛋白質相互作用:分子克隆手冊)，ColdSpringLaboratoryPress,2002。關于根據本發明所使用的抗體、方法、用途和化合物中任一個的進一步的文獻可從公共圖書館和數據庫使用例如電子設備檢索。例如，在互聯網上可獲得的公共數據庫“Medline”可以被使用，例如在http://www.ncb1.nlm.nih.gov/PubMed/medline.html。例如http://www.ncb1.nlm.nih.gov/或列在EMBL服務主頁http://www.embl.de/services/index,html的進一步的數據庫和網址是本領域技術人員已知的，并也可使用例如http://www.google,com而獲得。[0211]附圖顯示:[0212]圖1[0213]靈長類⑶3ε的N末端氨基酸1_27與異源的可溶蛋白的融合。[0214]圖2[0215]此圖顯示在瞬時轉染的293細胞上清液中，檢測由融合到人類IgGl的鉸鏈和FeY部分的成熟人類⑶3ε鏈的N末端氨基酸1-27和C末端6組氨酸標簽組成的構建體的存在的ELISA測定中測量的四個重復樣品的平均吸收值。標注“27aahu⑶3E”的第一個柱顯示所述構建體的平均吸收值，標注“irrel.SN”的第二個柱顯示被作為陰性對照的無關構建體轉染的293細胞上清液的平均值。所述構建體獲得的值與陰性對照獲得的值的比較清晰地證明了重組構建體的存在。[0216]圖3[0217]此圖顯示在檢測以在細胞周質表達的單鏈抗體的粗制品形式存在的跨物種特異性的抗CD3結合分子與構建體的結合的ELISA測定中測量的四個重復樣品的平均吸收值，其中所述構建體包括融合到人類IgGl的鉸鏈和FeY部分的成熟人類CD3ε鏈的N末端1-27氨基酸和C末端His6標簽。柱從左到右顯示稱為A2JHLP、I2CHLPE2MHLP、F70HLP、G4HHLP、H2CHLP、ElLHLP、F12QHLP、F6AHLP和HlEHLP的特異性的平均吸收值。標注“陰性對照”的最右邊的柱顯示作為陰性對照的鼠抗人類CD3抗體的單鏈制品的平均吸收值。所述抗CD3特異性所獲得的值與陰性對照所獲得的值的比較清晰地證明了抗CD3特異性與成熟人類CD3ε鏈的N末端1-27氨基酸的強結合。[0218]圖4[0219]靈長類⑶3ε的N末端氨基酸1_27與異源的膜結合蛋白的融合。[0220]圖5[0221]檢測重組跨膜融合蛋白的存在的FACS測定中被測試的不同轉染子的直方重疊圖，其中所述重組跨膜融合蛋白由食蟹猴EpCAM和人類、狨猴、絹毛猴、松鼠猴和家豬各自的⑶3ε鏈的N末端1-27氨基酸組成。從左至右和從上至下的直方重疊圖分別顯示表達包括人類27聚體(mer)、狨猴27聚體、絹毛猴27聚體、松鼠猴27聚體和豬27聚體的構建體的轉染子的結果。在單個重疊圖上，細線代表用含有2%的FCS而非抗FlagM2抗體的PBS孵化的樣品作為陰性對照，而粗線顯示用抗FlagM2抗體孵化的樣品。對于每種構建體，所述直方重疊圖顯示抗FlagM2抗體對轉染子的結合，其清楚地證明所述重組構建體在轉染子上的表達。[0222]圖6[0223]檢測以在細胞周質表達的單鏈抗體的粗制品形式存在的跨物種特異性抗CD3結合分子與分別融合到食蟹猴EpCAM的人類、狨猴、絹毛猴和松鼠猴CD3ε鏈Ν末端氨基酸1-27結合的FACS測定中被測試的不同轉染子的直方重疊圖。[0224]圖6Α:[0225]從左至右和從上至下的直方重疊圖顯示表達包括人類27聚體的1-27⑶3-EpCAM的轉染子的結果，使用被分別稱為H2CHLP、F12QHLP、E2MHLP和G4HHLP的CD3特異性結合分子測試。[0226]圖6B:[0227]從左至右和從上至下的直方重疊圖顯示表達包括狨猴27聚體的1-27⑶3-EpCAM的轉染子的結果，使用被分別稱為H2CHLP、F12QHLP、E2MHLP和G4HHLP的CD3特異性結合分子測試。[0228]圖6C:[0229]從左至右和從上至下的直方重疊圖顯示表達包括絹毛猴27聚體的l-27CD3-EpCAM的轉染子的結果，使用被分別稱為H2CHLP、F12QHLP、E2MHLP和G4HHLP的CD3特異性結合分子測試。[0230]圖6D:[0231]從左至右和從上至下的直方重疊圖顯示表達包括松鼠猴27聚體的l-27CD3-EpCAM的轉染子的結果，使用被分別稱為H2CHLP、F12QHLP、E2MHLP和G4HHLP的CD3特異性結合分子測試。[0232]圖6E:[0233]從左至右和從上至下的直方重疊圖顯示表達包括豬27聚體的1-27⑶3-EpCAM的轉染子的結果，使用被分別稱為H2CHLP、F12QHLP、E2MHLP和G4HHLP的CD3特異性結合分子測試。[0234]在單個重疊圖上，細線代表用鼠抗人類CD3抗體的單鏈制品孵化的樣品作為陰性對照，而粗線顯示用所示相應的抗CD3結合分子孵化的樣品。考慮到對豬27聚體轉染子的結合的缺乏和顯示在圖5中的構建體的表達水平，直方圖的重疊圖顯示被測試的完全跨物種特異性的人類雙特異性單鏈抗體的抗CD3特異性對表達包括分別融合到食蟹猴EpCAM的人類、狨猴、絹毛猴和松鼠猴CD3ε鏈Ν末端氨基酸1-27的重組跨膜融合蛋白的細胞的特異性強結合，并因此顯示所述抗CD3結合分子的多靈長類跨物種特異性。[0235]圖7[0236]在被轉染的鼠EL4T細胞上檢測人類⑶3ε的FACS測定。圖像分析顯示直方圖的重疊圖。粗線顯示用抗人類CD3抗體UCHT-1孵化的被轉染細胞。細線代表用小鼠IgGl同種型對照孵化的細胞。抗CD3抗體UCHT1的結合清楚地顯示人類CD3ε鏈在被轉染的鼠EL4T細胞的細胞表面的表達。[0237]圖8[0238]在丙氨酸掃描實驗中跨物種特異性的抗CD3抗體與丙氨酸突變體的結合。在單獨的圖中，柱從左到右顯示以對數刻度任意單位的野生型轉染子(WT)和位置1至27的所有丙氨酸突變體的計算結合值。所述結合值用下式計算:[0239]【權利要求】1.一種多肽，其包含作為抗原相互作用位點的能夠結合于人類和普通絨猴、絨頂檉柳猴或松鼠猴⑶3ε鏈的表位的結合結構域，其中所述表位是包括在由SEQIDN0.2、4、6或8組成的組中的氨基酸序列的一部分，并且至少包含氨基酸序列Gln-Asp-Gly-Asn-Glu。2.根據權利要求1所述的多肽，其中所述表位是包括在由SEQIDN0.2、4、6和8組成的組中的氨基酸序列的一部分，并且至少包含氨基酸序列Gln-Asp-Gly-Asn-Glu。3.根據權利要求1或2中任一項所述的多肽，其中所述多肽還包含能夠結合于細胞表面抗原的第二結合結構域。4.根據權利要求1至3中任一項所述的多肽，其中所述第一結合結構域包含VL區，所述VL區包含選自以下的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3:(a)SEQIDN0.27所示的CDR-LUSEQIDN0.28所示的CDR-L2和SEQIDN0.29所示的CDR-L3；(b)SEQIDN0.117所示的CDR-L1、SEQIDN0.118所示的CDR-L2和SEQIDN0.119所示的CDR-L3;和(c)SEQIDN0.153所示的CDR-L1、SEQIDN0.154所示的CDR-L2和SEQIDN0.155所示的CDR-L3。5.根據權利要求1至3中任一項所述的多肽，其中所述第一結合結構域包含VH區，所述VH區包含選自以下的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3:(a)SEQIDN0.12所示的CDR-HUSEQIDN0.13所示的CDR-H2和SEQIDN0.14所示的CDR-H3；(b)SEQIDN0.30所示的CDR-HUSEQIDN0.31所示的CDR-H2和SEQIDN0.32所示的CDR-H3；(c)SEQIDN0.48所示的CDR-HUSEQIDN0.49所示的CDR-H2和SEQIDN0.50所示的CDR-H3；(d)SEQIDN0.66所示的CDR-HUSEQIDN0.67所示的CDR-H2和SEQIDN0.68所示的CDR-H3；(e)SEQIDN0.84所示的CDR-HUSEQIDN0.85所示的CDR-H2和SEQIDN0.86所示的CDR-H3；(f)SEQIDN0.102所示的CDR-H1、SEQIDN0.103所示的CDR-H2和SEQIDN0.104所示的CDR-H3；(g)SEQIDN0.120所示的CDR-H1、SEQIDN0.121所示的CDR-H2和SEQIDN0.122所示的CDR-H3；(h)SEQIDN0.138所示的CDR-H1、SEQIDN0.139所示的CDR-H2和SEQIDN0.140所示的CDR-H3；(i)SEQIDN0.156所示的CDR-H1、SEQIDN0.157所示的CDR-H2和SEQIDN0.158所示的CDR-H3;和(j)SEQIDN0.174所示的CDR-H1、SEQIDN0.175所示的CDR-H2和SEQIDN0.176所示的CDR-H3。6.根據權利要求1至4中任一項所述的多肽，其中所述第一結合結構域包含VL區，所述VL區選自由SEQIDN0.35、39、125、129、161或165所示的VL區組成的組。7.根據權利要求1至3和5中任一項所述的多肽，其中所述第一結合結構域包含VH區，所述VH區選自由SEQIDN0.15、19、33、37、51、55、69、73、87、91、105、109、123、127、141、145、159、163、177或181所示的VH區組成的組。8.根據權利要求1至7中任一項所述的多肽，其中所述第一結合結構域包含VL區和VH區，所述VL區和VH區選自由以下組成的組:(a)SEQIDN0.17或21所示的VL區和SEQIDN0.15或19所示的VH區；(b)SEQIDN0.35或39所示的VL區和SEQIDN0.33或37所示的VH區；(c)SEQIDN0.53或57所示的VL區和SEQIDN0.51或55所示的VH區；(d)SEQIDN0.71或75所示的VL區和SEQIDN0.69或73所示的VH區；(e)SEQIDN0.89或93所示的VL區和SEQIDN0.87或91所示的VH區；(f)SEQIDN0.107或111所示的VL區和SEQIDN0.105或109所示的VH區；(g)SEQIDN0.125或129所示的VL區和SEQIDN0.123或127所示的VH區；(h)SEQIDN0.143或147所示的VL區和SEQIDN0.141或145所示的VH區；(i)SEQIDN0.161或165所示的VL區和SEQIDN0.159或163所示的VH區；和(j)SEQIDN0.179或183所示的VL區和SEQIDN0.177或181所示的VH區。9.根據權利要求8所述的多肽，其中所述第一結合結構域包含選自由SEQIDNO:23、25、41、43、59、61、77、79、95、97、113、115、131、133、149、151、167、169、185或187組成的組的氨基酸序列。10.根據權利要求3至9中任一項所述的多肽，其中所述細胞表面抗原是腫瘤抗原。11.根據權利要求3至10中任一項所述的多肽，其中所述多肽是雙特異性單鏈抗體分子。12.根據權利要求11所述的多肽，其中所述雙特異性單鏈抗體分子在所述第二結合結構域中包含一組如下的序列作為⑶RH1、⑶RH2、⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3，所述序列選自由以下組成的組:SEQIDNO:189-194,SEQIDNO:201-206,SEQIDNO:219-224,SEQIDNO:237-242、SEQIDNO:255-260、SEQIDNO:273-279、SEQIDNO:382-384和387-389、SEQIDNO:400-402和405-407、SEQIDNO:418-420和423-425、SEQIDNO:436-438和441-443、SEQIDNO:454-456和459-461、SEQIDNO:472-474和477-479、SEQIDNO:490-492和495-497、SEQIDN0:508-510和513-515、SEQIDNO:530-532和1568至1570、SEQIDNO:545-547和550-552、SEQIDNO:559-561和564-566、SEQIDNO:577-579和582-584、SEQIDNO:615-617和620-622、SEQIDNO:633_635、638、639和1571、SEQIDNO:650-652和655-657、SEQIDNO:668-670和673-675、SEQIDNO:682-684和687-689、SEQIDNO:696-698和701-703、SEQIDN0:710_712和715-717、SEQIDNO:724-726和729-731、SEQIDNO:738-740和743-745、SEQIDNO:752-754和757-759、SEQIDNO:766-768和771-773、SEQIDNO:780-782和785-787、SEQIDNO:794-796和799-801、SEQIDN0:808-810和813-815、SEQIDNO:822-824和827-829、SEQIDNO:836_838和841-843、SEQIDNO:850-852和855-857、SEQIDNO:866-868和871-873、SEQIDNO:884-886和889-891、SEQIDNO:902-904和907-909、SEQIDNO:920-922和925-927、SEQIDNO:938-940和943-945、SEQIDNO:956-958和961-963、SEQIDNO:974-976和979-981、SEQIDNO:992-994和997-999、SEQIDNO:1006-1008和1011-1013、SEQIDNO:1020-1022和1025-1027、SEQIDNO:1034-1036和1039-1041、SEQIDNO:1048-1050和1053-1055、SEQIDNO:1062-1064和1067-1069、SEQIDNO:1076-1078和1081-1083、SEQIDNO:1090-1092和1095-1097、SEQIDNO:1114-1116和1119-1121、SEQIDNO:1128-1130和1133-1135、SEQIDNO:1141-1143和1146-1148、SEQIDNO:1155-1157和1160_1162、SEQIDNO:1169-1171和1174-1176、SEQIDNO:1183-1185和1188-1190、SEQIDNO:1197-1199和1202-1204、SEQIDNO:1211-1213和1216-1218、SEQIDNO:1125-1227和1230_1232、SEQIDNO:1239-1241和1244-1246、SEQIDNO:1253-1255和1258_1260、SEQIDNO:1267-1269和1272_1274、SEQIDNO:1281-1283和1286-1288、SEQIDNO:1295-1297和1300_1302、SEQIDNO:1309-1311和1314-1316、SEQIDNO:1323-1325和1328-1330、SEQIDNO:1343-1345和1348-1350、SEQIDNO:1361-1363和1366-1368、SEQIDNO:1375-1377和1380-1382、SEQIDNO:1389-1391和1394_1396、SEQIDNO:1403-1405和1408-1410、SEQIDNO:1417-1419和1422-1424、SEQIDNO:1431-1433和1436-1438、SEQIDNO:1445-1447和1450-1452、SEQIDNO:1459-1461和1464_1466、SEQIDNO:1473-1475和1478-1480、SEQIDNO:1486-1491、SEQIDNO:1492-1497、SEQIDNO:1505-1507和1510-1512、SEQIDNO:1531-1533和1536-1538、SEQIDNO:1573-1575和1578-1580、SEQIDNO:1591-1593和1596-1598、SEQIDNO:1605-1607和1610-1612、SEQIDNO:1619-1621和1624_1626、SEQIDNO:1634-1636和1639-1641和SEQIDNO:1652-1654、SEQIDNO:1657-1659和SEQIDNO:1669-1674。13.根據權利要求11所述的多肽，其中所述雙特異性單鏈抗體分子包含選自以下的序列:(a)SEQIDN0:291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、.319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、393、395、397、411、.413、415、429、431、433、447、449、451、465、467、469、483、485、487、501、503、505、519、521、.523、1336、1338、1340、538、540、542、556、570、572、574、588、590、592、626、628、630、643、.645、647、661、663、665、679、693、707、721、735、749、763、777、791、805、819、833、847、861、.863、877、879、881、895、897、899、913、915、917、931、933、935、949、951、953、967、969、971、.985、987、989、1003、1017、1031、1045、1059、1073、1087、1101、1125、1138、1152、1166、1180、.1194、1208、1222、1236、1250、1264、1278、1292、1306、1320、1334、1354、1356、1358、1372、.1386、1400、1414、1428、1442、1456、1470、1484、1500、1502、1518、1520、1522、1524、1526、.1528、1544、1546、1548、1550、1552、1554、1556、1558、1560、1562、1564、1566、1586、1588、.1602、1616、1630、1647、1649或1663任一所不的氛基酸序列；和(b)SEQIDN0:292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、.320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、394、396、398、412、.414、416、430、432、434、448、450、452、466、468、470、484、486、488、502、504、506、520、522、`524、1337、1339、1341、539、541、543、557、571、573、`575、`589、591、593、627、629、631、644、`646、648、662、664、666、680、694、708、722、736、750、`764、778、792、806、820、834、848、862、`864、878、880、882、896、898、900、914、916、918、932、`934、936、950、952、954、968、970、972、`986、988、990、1004、1018、1032、1046、1060、1074、1088、`1102、1126、1139、1153、1167、1181、`I195、1209、1223、1237、1251、1265、1279、1293、1307、`1321、1335、1355、1357、1359、1373、`1387、1401、1415、1429、1443、1457、1471、1485、1501、`1503、1519、1521、1523、1525、1527、`1529、1545、1547、1549、1551、1553、1555、1557、1559、`1561、1563、1565、1567、1587、1589、`1603、1617、1631、1648、1650或1664任一所示的核酸序列編碼的氨基酸序列。14.一種核酸序列，其編碼如權利要求1至13任一項所定義的多肽。15.—種載體，其包含如權利要求14所定義的核酸序列。16.一種宿主細胞，其是用權利要求15所定義的載體轉化或轉染的。17.一種用于產生根據權利要求1至13任一項的多肽的方法，所述方法包括在允許如權利要求1至13任一項所定義的多肽表達的條件下培養權利要求16所定義的宿主并從培養物回收產生的多肽。18.—種藥物組合物，其包含根據權利要求1至13任一項所述的多肽。19.根據權利要求18所述的藥物組合物，其還包含載體、穩定劑和/或賦形劑的合適制劑。20.根據權利要求1至13任一項所定義的多肽或根據權利要求17所述的方法產生的多肽在制備用于預防、治療或改善選自增生性疾病、腫瘤性疾病或免疫病癥的疾病的藥物組合物中的用途。21.根據權利要求20所述的用途，其中所述腫瘤性疾病是惡性疾病。22.根據權利要求20或21所述的用途，其中所述藥物組合物適于與另外的藥物聯合施用。23.—種試劑盒，其包含如權利要求1至13任一項所定義的多肽、如權利要求14所定義的核酸分子、如權利要求15所定義的載體或如權利要求16所定義的宿主細胞。24.—種背景獨立的⑶3ε表位，其中所述表位包含SEQIDN0.2、4、6、或8的氨基酸1-27。25.根據權利要求24所述的背景獨立的⑶3ε表位在產生能夠結合于SEQIDN0.2、`4、6、或8的氨基酸1-27的結合結構域中的用途。【文檔編號】A61P35/00GK103694350SQ201310520125【公開日】2014年4月2日申請日期:2008年4月3日優先權日:2007年4月3日【發明者】馬賽厄斯·克林格,托拜厄斯·勞姆,桃瑞絲·勞,蘇珊娜·曼高德,羅曼·基謝爾,拉爾夫·魯特布瑟,帕特里克·霍夫曼,彼得·庫菲申請人:安進研發（慕尼黑）股份有限公司