一種Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米遞藥系統(tǒng)及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明一種Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米遞藥系統(tǒng)及其制備方法，該納米給藥系統(tǒng)是由以兩親性聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)嵌段共聚物為載體材料制備的聚合物納米粒、包載于該聚合物納米粒中的紫杉醇及聚合物納米粒表面修飾配體Pep-1多肽構(gòu)成。所述聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)嵌段共聚物是由馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)和單甲氧基聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)組成，采用Pep-1作為靶向功能分子，兩親性嵌段共聚物PEG-PLGA為載體材料，通過(guò)共價(jià)結(jié)合將Pep-1多肽修飾于載體材料上，再制備膠質(zhì)瘤靶向聚合物納米粒。能夠主動(dòng)靶向腦膠質(zhì)瘤，提高抗腫瘤藥物在腦膠質(zhì)瘤部位的攝取與蓄積，提高腦膠質(zhì)瘤治療效果。
【專利說(shuō)明】一種Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米遞藥系統(tǒng)及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明屬于腫瘤靶向與緩釋給藥系統(tǒng)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種膠質(zhì)瘤歸巢肽修飾的靶向納米遞釋系統(tǒng)，具體涉及一種新型多肽修飾聚合物納米粒載紫杉醇的腦膠質(zhì)瘤靶向納米遞釋系統(tǒng)及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，約占所有原發(fā)性神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的80%。膠質(zhì)瘤惡性程度高，預(yù)后非常差，治療效果不理想，目前針對(duì)惡性腫瘤的治療手段主要有手術(shù)治療、化學(xué)治療、放射治療等，其中化學(xué)治療是臨床中應(yīng)用非常普遍的治療方法，但絕大部分化療藥物不僅會(huì)殺死腫瘤細(xì)胞，還會(huì)破壞正常組織與細(xì)胞，產(chǎn)生較為嚴(yán)重的毒副作用。因此，利用聚合物納米粒作為藥物載體，是降低化療藥物毒副作用，提高藥物療效的最為有效的手段之一。
[0003]研究表明，血腦屏障的存在對(duì)于維持腦內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定有著重要的作用。它是由緊密連接的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜以及嵌入其中的周細(xì)胞、外圍的星形膠質(zhì)細(xì)胞共同組成的一種屏障結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)嚴(yán)重阻礙了腦膠質(zhì)瘤治療藥物向腫瘤部位的遞送，包括98%的小分子藥物和100%的大分子藥物。但是一些內(nèi)源性的配體可通過(guò)結(jié)合特定受體，利用受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，跨過(guò)血腦屏障，到達(dá)腦內(nèi)。所以，通過(guò)受體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)的納米遞藥系統(tǒng)為腦膠質(zhì)瘤治療提供了一條頗具潛力的途徑。
[0004]P印-l(CGEMGWVRC)是一段由噬菌體展示技術(shù)篩選出來(lái)的線性多肽。研究顯示，Pep-1可以透過(guò)BBB并特異性歸巢于腦膠質(zhì)瘤部位，在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面白介素13α 2受體(IL-13Rci 2)介導(dǎo)下內(nèi)化而被膠質(zhì)瘤細(xì)胞攝取。因此，以Pep-1肽作為腦膠質(zhì)瘤靶向遞藥系統(tǒng)的靶向功能多肽，具有非常大的應(yīng)用潛力。
[0005]紫杉醇(Paclitaxel，PTX)是臨床上廣泛應(yīng)用抗腫瘤藥物，研究結(jié)果顯示，PTX在體外對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，但是臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其抗膠質(zhì)瘤療效卻不明顯。主要是由于PTX在體內(nèi)難以透過(guò)血腦屏障和膠質(zhì)瘤屏障，對(duì)膠質(zhì)瘤無(wú)選擇性。另外PTX水溶性差，臨床上通過(guò)聚氧乙烯蓖麻油與無(wú)水乙醇以1:1的混合液溶解。但聚氧乙烯蓖麻油可促進(jìn)組胺釋放，常引起嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)和其他毒性反應(yīng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明目的是，鑒于目前紫杉醇制劑存在的缺陷，提供一種膠質(zhì)瘤歸巢肽介導(dǎo)的靶向納米遞藥系統(tǒng)及其制備方法，延長(zhǎng)藥物體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，增加藥物在腦膠質(zhì)瘤部位的蓄積，提高抗膠質(zhì)瘤療效，降低毒副作用，達(dá)到靶向治療增效目的。
[0007]本發(fā)明的目的還在于，針對(duì)膠質(zhì)瘤靶向遞藥系統(tǒng)都存在功能單一的缺陷，以既能透過(guò)血腦屏障又能特異性歸巢于腦膠質(zhì)瘤的Pep-1肽為靶向功能頭基，構(gòu)建腦膠質(zhì)瘤主動(dòng)靶向遞藥系統(tǒng)，具體涉及一種新型多肽介導(dǎo)的膠質(zhì)瘤靶向化療藥物遞釋系統(tǒng)及其制備方法。
[0008]本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)=Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)，是由以兩親性聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)嵌段共聚物為載體材料制備的聚合物納米粒、包載于該聚合物納米粒中的紫杉醇及聚合物納米粒表面修飾配體Pep-1多肽構(gòu)成。采用Pep-1多肽作為靶向頭基，聚(乳酸-羥基乙酸)聚合物為載體材料，通過(guò)兩親性聚合物連接Pep-1多肽構(gòu)建腦膠質(zhì)瘤祀向載體；所述的腦膠質(zhì)瘤祀向載體再進(jìn)一步包載紫杉醇，制成腦膠質(zhì)瘤靶向納米遞釋系統(tǒng)。
[0009]所述聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)嵌段共聚物是由馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)(Male-PEG-PLGA)和單甲氧基聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)(MePEG-PLGA)組成，上述單甲氧基聚乙二醇重均分子量為2000~7000，馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇重均分子量為3000~5000，聚(乳酸-羥基乙酸)重均分子量為10000~40000。
[0010]所述P印-1肽與馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇的摩爾比為I~10:1。
[0011]所述P印-1肽的氨基酸序列為CGEMGWVRC。
[0012]Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)的制備方法，先將P印-1肽與馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)聚合物通過(guò)共價(jià)結(jié)合連接，再將連接反應(yīng)后的材料與單甲氧基聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)聚合物按照下述比例通過(guò)乳化/溶劑蒸發(fā)法或者溶劑擴(kuò)散法制備成聚合物納米粒，并將紫杉醇包載于所述聚合物納米粒中。
[0013]所述P印-1肽與馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)共價(jià)結(jié)合方法包括以下步驟:將Male-PEG-PLGA溶于適量二甲基甲酰胺(DMF)中，滴加到適量磷酸鹽緩沖液中(pH:7.0~7.4)，再將P印-1多肽溶解于該磷酸鹽緩沖液中(pH:7.0~7.4)，攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)8~16小時(shí)，反應(yīng)后的溶液通過(guò)透析法除去未反應(yīng)的多肽，即得Pep (Acm) -PEG-PLGA ;在透析后的溶液中加入適量醋酸，滴加適量碘的甲醇溶液，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)0.5~2小時(shí)；將反應(yīng)后的溶液透析，凍干，即得Pep-PEG-PLGA。
[0014]在合成配體Pep-1肽時(shí),對(duì)其一端的半胱氨酸進(jìn)行Acm保護(hù)(C(Acm)GEMGWVRC),即合成P印-1 (Acm)肽；利用活潑的Male-PEG-PLGA與P印-1 (Acm)肽片段上未保護(hù)半胱氨酸殘基上的巰基反應(yīng)，形成化合物Pep (Acm) -PEG-PLGA，再經(jīng)過(guò)脫Acm保護(hù)基團(tuán)后得到P印-PEG-PLGA。材料具體合成步驟為:
[0015](I)將Male-PEG-PLGA溶于適量二甲基甲酰胺(DMF)中，滴加到適量磷酸鹽緩沖液中(pH: 7.0 ~7.4)。
[0016](2)將P印-1多肽加入適量磷酸鹽緩沖液中(pH: 7.0~7.4)，滴加到步驟(1)中的溶液中，攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)8~16小時(shí)，反應(yīng)后的溶液裝入透析袋中透析除去未反應(yīng)的多肽，即得P印(Acm) -PEG-PLGA。
[0017](3)在透析后的溶液中加入適量醋酸，滴加適量碘的甲醇溶液，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)
0.5~I小時(shí)，將反應(yīng)后的溶液透析，凍干，即得Pep-PEG-PLGA。
[0018]本發(fā)明中，Male-PEG-PLGA與P印-1多肽的摩爾比為1:1~10。
[0019]所述乳化/溶劑蒸發(fā)法包括以下步驟:將一定量P印-PEG-PLGA、MePEG-PLGA和PTX溶于適量乙酸乙酯中，加入適量0.2%~1.0%泊洛沙姆188水溶液，間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑，分散到適量0.2%~1.0%泊洛沙姆188水溶液，攪拌，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，過(guò)膜，即得靶向納米粒。[0020]所述溶劑擴(kuò)散法包括以下步驟:將一定量P印-PEG-PLGA、MePEG-PLGA和PTX溶于適量丙酮中，滴加到適量0.2%~1.0%泊洛沙姆188水溶液中，攪拌，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮，過(guò)膜，即得靶向納米粒。
[0021]本發(fā)明中，紫杉醇與聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)聚合物納米粒的質(zhì)量比為1:10 ~20。
[0022]對(duì)本發(fā)明制備的用于治療腦部腫瘤的靶向納米遞藥系統(tǒng)進(jìn)行了體內(nèi)外評(píng)價(jià):
[0023]對(duì)本發(fā)明制備的Pep-1修飾的PEG-PLGA紫杉醇靶向納米粒進(jìn)行了細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)、體內(nèi)靶向性研究，結(jié)果表明，經(jīng)Pep-1修飾后，顯著增加了 PTX對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性，增加C6細(xì)胞的攝取能力，并且體內(nèi)靶向性研究結(jié)果證明提高了納米遞藥系統(tǒng)在腦內(nèi)膠質(zhì)瘤部位的蓄積，達(dá)到預(yù)期目的。而Pep-1肽目前主要只是用作細(xì)胞穿膜肽。將PTX制備成腫瘤主動(dòng)靶向給藥系統(tǒng)后，不僅能大大提高PTX溶解性，減少毒副作用，還可以增加PTX對(duì)腫瘤部位的選擇性，明顯提高PTX的抗腫瘤效果。采用Pep-1肽功能化的聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)(P^)-PEG-PLGA)和單甲氧基聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)(MePEG-PLGA)組成的兩親性嵌段共聚物為載體材料，分子量合適且承載功能強(qiáng)，對(duì)膠質(zhì)瘤靶向治療的效果好一能夠主動(dòng)靶向腦膠質(zhì)瘤，提高抗腫瘤藥物在腦膠質(zhì)瘤部位的攝取與蓄積，實(shí)現(xiàn)藥物跨過(guò)血腦屏障和腫瘤屏障向腦內(nèi)的遞釋，提高腦膠質(zhì)瘤治療效果。
[0024]1)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
[0025]采用MTT法測(cè)定Taxol和包載紫杉醇的NP、P印-NP對(duì)C6細(xì)胞的體外抑制情況，結(jié)果如圖5所示，Pep-1修飾的納米粒顯著增大了 PTX對(duì)C6細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。
[0026]2)細(xì)胞攝取
[0027]聚合物納米粒通過(guò)香豆素-6熒光標(biāo)記后考察載體系統(tǒng)的細(xì)胞定性攝取情況，結(jié)果如圖6所示，濃度為100,200和600 μ g/mL時(shí)，P印-NP組熒光強(qiáng)度(圖6中的B、D、F)明顯強(qiáng)于NP組(圖6中的A、C、E)，說(shuō)明Pep-1修飾增加了 C6細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取。
[0028]3 )體內(nèi)靶向性評(píng)價(jià)，
[0029]原位膠質(zhì)瘤小鼠分別尾靜脈注射0.15mg/kg香豆素_6標(biāo)記的NP和P印-NP，Ih后的腦組織切片熒光結(jié)果顯示(圖7)，Pep-NP在腦部腫瘤部位的熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于NP組，該結(jié)果表明Pep-1修飾后能增加遞藥系統(tǒng)在膠質(zhì)瘤部位的主動(dòng)靶向與蓄積。應(yīng)用Pep-NP的比應(yīng)用NP的兩組原位膠質(zhì)瘤小鼠，前者抗腫瘤作用明顯優(yōu)于后者。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0030]圖1為本發(fā)明所用載體材料核磁共振圖譜，其中，圖1A =Mal-PEG-PLGA,圖1B:Pep-PEG-PLGA ；
[0031]圖2本發(fā)明所用P印-1多肽的質(zhì)譜圖；
[0032]圖3為本發(fā)明膠質(zhì)瘤靶向給藥系統(tǒng)電鏡透射圖，其中A =NP-PTX, B =Pep-NP-PTX ；
[0033]圖4為本發(fā)明中C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞存活率柱狀圖；
[0034]圖5為本發(fā)明中C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的攝取熒光圖，其中，圖A和圖B濃度為IOOyg/mL，圖C和圖D濃度為200 μ g/mL,圖E和圖F濃度為600 μ g/mL,圖A、圖C、圖E是C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)NP的攝取情況，圖B、圖D、圖FC6膠質(zhì)瘤細(xì)胞是對(duì)Pep-NP的攝取情況；
[0035]圖6為本發(fā)明中納米粒在腦組織分布的熒光圖，黃色虛線為正常腦組織與膠質(zhì)瘤部位的邊界線，黃色箭頭指向的一側(cè)為膠質(zhì)瘤部位。
【具體實(shí)施方式】
[0036]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述，具體實(shí)施例是在本發(fā)明的優(yōu)選條件下進(jìn)行。所述方法如無(wú)特別說(shuō)明均為常規(guī)方法，所述原材料如無(wú)特別說(shuō)明均能從公開商業(yè)途徑而得。
[0037]膠質(zhì)瘤歸巢肽介導(dǎo)的靶向納米遞藥系統(tǒng)采用乳化/溶劑蒸發(fā)法制備的步驟:
[0038]將一定量P印-PEG-PLGA、MePEG-PLGA和PTX溶于適量乙酸乙酯中，加入適量
0.2%~1.0%泊洛沙姆188水溶液，間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑，分散到適量0.2%~
1.0%泊洛沙姆188水溶液，攪拌，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，過(guò)膜，即得納米粒。
[0039]或采用溶劑擴(kuò)散法制備納米粒:將一定量P印-PEG-PLGA、MePEG-PLGA和PTX溶于適量丙酮中，滴加到適量0.2%~1.0%泊洛沙姆188水溶液中，攪拌，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮，過(guò)膜，即得納米粒。
[0040]實(shí)施例1:P印-PEG-PLGA的合成
[0041]稱取20mg Mal-PEG (3500)-PLGA (38000)，溶于 2mL DMF 中，滴加到 8mL 磷酸鹽緩沖液(pH: 7.0)中，攪拌，形成納米粒溶液。稱取Pep-1 (Acm)多肽，溶于2mL磷酸鹽緩沖液(pH: 7.0)中，將多肽溶液滴加 到納米粒溶液中(Male與Pep-1 (Acm)摩爾比為1: 3)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，攪拌，反應(yīng)12h。將反應(yīng)后的納米粒溶液透析，去除未反應(yīng)的多肽。在透析過(guò)后的納米粒溶液中加入ImL醋酸，滴加適量碘的甲醇溶液，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)0.5小時(shí)。將反應(yīng)后的納米粒溶液透析，凍干，即得P印-PEG-PLGA。
[0042]實(shí)施例2:乳化/溶劑蒸發(fā)法
[0043]將Img PTX 與 MePEG (2000) -PLGA (38000): Pep-PEG-PLGA (38000) =9: I 加入到乙酸乙酯中溶解，加入適量1%泊洛沙姆188水溶液，間斷超聲(200W，5min)形成水包油(0/W)乳劑，分散到適量0.5%泊洛沙姆188水溶液，攪拌，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，分別用
0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過(guò)濾，即得納米粒。
[0044]納米粒溶液外觀澄清，有明顯的藍(lán)色乳光。激光粒度分析表明，所得納米粒子以94.25nm為有效直徑呈正態(tài)分布，多分散性為0.117。掃描電鏡下觀察該納米粒具有規(guī)整的球形外觀，在溶液中分散良好，并具有較好的穩(wěn)定性。納米粒包封率為77.3%，載藥量為
3.77%。
[0045]實(shí)施例3:溶劑擴(kuò)散法
[0046]將1mg PTX 與 MePEG (2000) -PLGA (38000): Pep-PEG-PLGA (38000) =9: I 加入到丙酮中溶解，滴加到適量1%泊洛沙姆188水溶液中，攪拌，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮，分別用
0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過(guò)濾，即得納米粒。
[0047]納米粒外觀澄清，有明顯的藍(lán)色乳光。激光粒度分析表明，所得納米粒子以106.45nm為有效直徑呈正態(tài)分布，多分散性為0.165。掃描電鏡下觀察該納米粒具有規(guī)整的球形外觀，在溶液中分散良好，并具有較好的穩(wěn)定性。納米粒包封率為23.4%，載藥量為
1.14%。
[0048]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出:對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù) 范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)，其特征在于該納米給藥系統(tǒng)是由以兩親性聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)嵌段共聚物為載體材料制備的聚合物納米粒、包載于該聚合物納米粒中的紫杉醇及聚合物納米粒表面修飾配體Pep-1多肽構(gòu)成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Pep-1肽修飾的膠質(zhì)瘤靶向納米遞藥系統(tǒng)，其特征是:所述聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)嵌段共聚物是由馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)(Male-PEG-PLGA)和單甲氧基聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)(MePEG-PLGA)組成，上述單甲氧基聚乙二醇重均分子量為2000~7000，馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇重均分子量為3000~5000，聚(乳酸-羥基乙酸)重均分子量為10000~40000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)，其特征是:所述多肽P印-1與馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇的摩爾比為I~10:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)，其特征是:所述多肽Pep-1的氨基酸序列為CGEMGWVRC。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)的制備方法，其特征是:先將Pep-1多肽與馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)聚合物通過(guò)共價(jià)結(jié)合連接，再將反應(yīng)后的材料與單甲氧基聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)聚合物按照一定比例通過(guò)乳化/溶劑蒸發(fā)法或者溶劑擴(kuò)散法制備成聚合物納米粒，并將紫杉醇包載于所述聚合物納米粒中。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于所述P印-1多肽與馬來(lái)酰亞胺聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)共價(jià)結(jié)合方法包括以下步驟:將Male-PEG-PLGA溶于適量二甲 基甲酰胺中，滴加到適量磷酸鹽緩沖液中(pH:7.0~7.4)，再將P印-1多肽溶解于該磷酸鹽緩沖液中(pH:7.0~7.4)，攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)8~16小時(shí)，反應(yīng)后的溶液通過(guò)透析法除去未反應(yīng)的多肽，即得Pep (Acm) -PEG-PLGA0在透析后的溶液中加入適量醋酸，滴加適量碘的甲醇溶液，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)0.5~2小時(shí)；將反應(yīng)后的溶液透析，凍干，即得Pep-PEG-PLGA。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于所述乳化/溶劑蒸發(fā)法包括以下步驟:將一定量Pep-PEG-PLGA、MePEG-PLGA和PTX溶于適量乙酸乙酯中，加入適量0.2%~1.0%泊洛沙姆188水溶液，間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑，分散到適量0.2%~1.0%泊洛沙姆188水溶液，攪拌，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯，過(guò)膜，即得靶向納米粒。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于所述溶劑擴(kuò)散法包括以下步驟:將一定量P印-PEG-PLGA、MePEG-PLGA和PTX溶于適量丙酮中，滴加到適量0.2%~1.0%泊洛沙姆188水溶液中，攪拌，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮，過(guò)膜，即得靶向納米粒。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的Pep-1肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于在合成配體肽Pep-1時(shí)，對(duì)其一端的半胱氨酸進(jìn)行Acm保護(hù)(C (Acm) GEMGWVRC)，即合成P印-1 (Acm)肽；利用活潑的Male-PEG-PLGA與P印-1 (Acm)肽片段上未保護(hù)半胱氨酸殘基上的巰基反應(yīng)，形成化合物Pep (Acm) -PEG-PLGA，再經(jīng)過(guò)脫Acm保護(hù)基團(tuán)后得到Pep-PEG-PLGA ;合成步驟為: (I)將Male-PEG-PLGA溶于適量二甲基甲酰胺(DMF)中，滴加到適量磷酸鹽緩沖液中(pH: 7.0 ~7.4)； (2)將P印-1多肽加入適量磷酸鹽緩沖液中(pH:7.0~7.4)，滴加到步驟(1)中的溶液中，攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)8~16小時(shí)，反應(yīng)后的溶液裝入透析袋中透析除去未反應(yīng)的多肽，即得 P印(Acm) -PEG-PLGA ； (3)在透析后的溶液中加入適量醋酸，滴加適量碘的甲醇溶液，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)0.5~I小時(shí)，將反應(yīng)后的溶液透析，凍干，即得Pep-PEG-PLGA。
10.根據(jù)權(quán) 利要求5 - 9之一所述的Pep-ι肽修飾的腦膠質(zhì)瘤靶向納米給藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于紫杉醇與聚乙二醇-聚(乳酸-羥基乙酸)聚合物納米粒的質(zhì)量比為1:10 ~20。
【文檔編號(hào)】A61K9/51GK103655517SQ201310586482
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月19日
【發(fā)明者】辛洪亮, 徐群為, 王寶彥, 呂玲燕, 王中元, 吳 琳, 趙越 申請(qǐng)人:南京醫(yī)科大學(xué)