一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒及其制備方法，該方法是通過將紫錐菊提取物、金銀花葉提取物和黃芪提取物混合制得。本發明防治禽流感、提高雞群免疫的中藥選用藥材合理、顯效速度快、既能防治禽流感，又能提高雞群的免疫狀況，增強機體抗病毒能力，可以讓蛋雞自由采食，防止減蛋綜合癥引起的產蛋下降。同時還具有副作用小、成本低、藥物穩定性高等優點。本發明工藝簡單高效，易于操作。本發明提出的防治禽流感、提高雞群免疫的中藥的用途，用于防治禽流感、提高雞群免疫效果顯著。
【專利說明】一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于畜牧獸醫、中藥領域，具體涉及到一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒及其制備方法。
【背景技術】
[0002]禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類的急性、高度接觸性烈性傳染病。雞、火雞、鵪鶉等家禽及野鳥、水禽、海鳥等野禽均可感染，其臨床表現為呼吸系統疾病、蛋雞產蛋下降，甚至出現禽類大批死亡。當雞群受高致病力毒株感染時，發病率和死亡率可達50%~80%，甚至100%，給世界各國帶來了巨大的經濟損失。由于禽流感病毒表面的紅細胞凝集素和神經氨酸酶不斷發生變異，給疫苗預防帶來一定的困難，國內外常用的防治禽流感的藥物主要有金剛烷胺、金剛乙胺、病毒靈和病毒唑等，但毒副作用較大，且長期使用易產生耐藥性，同時導致產蛋雞產量下降。目前動物源性食品的藥物殘留問題已經限制了我國食品的出口，國家農業部已明令禁止使用西藥抗病毒成分用于畜牧業。相對于化學合成藥物而言，中藥不僅具有耐藥性低、副作用和不良反應少等優點，同時還有抑制病毒復制、調節免疫功能、改善血液循環、解熱鎮痛及抗菌消炎等功效。因此，從傳統中草藥中開發出對防治禽流感有效而不產生副作用的藥物已經成為研究熱點。
[0003]紫錐菊是原產于美洲的一類菊科野生花卉，在我國北京等地已引種栽培成功，其主要化學成分有咖啡酸衍生物、多糖及烷基酰胺類等物質。是國際上受到普遍重視的一種免疫促進和調節劑，通過激活免疫細胞提高機體自身免疫系統功能而用來治療和預防疾病。
[0004]金銀花葉為忍冬科植物忍冬的干燥葉，是金銀花種植的副產物，產量大約是金銀花的十倍。同花一樣，金銀花葉也主要含有揮發油、有機酸、黃酮、皂苷及鞣質等化合物。其抗病毒及抑菌活性與花蕾相當或 優于花蕾。金銀花葉可促進免疫細胞的增殖分化及淋巴細胞數量的增加，從而增強動物的細胞免疫和體液免疫功能，同時由于其價格低廉，在家禽養殖業中具有良好的應用前景。
[0005]黃芪為豆科植物膜莢黃芪和蒙古黃芪的干燥根，主要含有多糖類、皂苷類及黃酮類等物質。在養禽業，黃芪不僅作為促生長飼料添加劑，還具有增強機體免疫力、防治疾病、抗應激等作用。現代研究證實黃芪可以雙向調節機體免疫功能，促進免疫細胞產生干擾素，延緩細胞衰老、抗菌及抗疲勞，能增強機體的適應性和抗病力，同時具有明顯的抗流感病毒作用。本發明中選用黃芪配金銀花葉，補清結合，補不助熱，清不傷正。
[0006]申請公布號為CN101869706A的專利公開了一種由紫錐菊提取物、黃芪多糖組成的納米乳佐劑及其制備方法；申請公布號為CN101856385A的專利公開了一種含有紫錐菊提取物的組合物及其制備方法，主要包括紫雛菊1份、黃芪提取物2份和少量葉黃素。該組合物用以提高人體免疫力，但以上發明中均未涉及具體的提取物的制備方法。
[0007]申請公布號為CN101023976A的專利公開了一種以紫錐菊提取物和黃芪提取物為原料的具有抗病毒作用的藥物組合物及其制備方法，所述提取物的制備方法中紫錐菊采用55%乙醇提取，而黃芪采用30%乙醇滲漉；申請公布號為CN1704085A的專利公開了一種由紫錐菊和黃芪為原料組成的具有免疫調節作用的藥物組合物及其制備方法，該制劑僅用于改善機體免疫力。

【發明內容】

[0008]本發明要解決的第一個技術問題是提供一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒，該中藥副作用小、成本低、藥物穩定性高。
[0009]為解決第一個技術問題，本發明采用下述技術方案:
[0010]一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒，是由中藥提取物和藥學上可接受的輔料制成，其特征在于，所述中藥提取物包括下述重量份的原料:紫錐菊提取物30~45份、金銀花葉提取物30~45份和黃芪提取物20~40份。
[0011]所述紫錐菊提取物是取紫錐菊藥材，加相當于紫錐菊8~14倍重量的濃度為40~80%的乙醇回流提取2~4次，每次0.5~2h，減壓回收乙醇，60°C濃縮至相對密度為1.03~1.20的溶液，經聚酰胺柱層析，濃度為40~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，制得。優選地，是取紫錐菊藥材，加12倍量50%乙醇回流提取3次，每次lh，減壓回收乙醇，60°C濃縮至相對密度為1.10的溶液，經聚酰胺柱層析，50%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎制得。
[0012]所述金銀花葉提取物是取金銀花葉藥材，加相當于金銀花8~14倍重量的濃度為50~90%的乙醇回流提取2~4次，每次I~3h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，制得。優選地，是取金銀花葉藥材，加14倍量60%乙醇溶液回流提取3次，每次lh，濾過，濾液合并，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，制得。
[0013]所述黃芪提取物，取黃芪藥材，加相當于黃芪6~12倍重量的水回流提取2~4次，每次I~3h，60°C減壓濃縮至相對密度為1.03~1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量達40~90%，離心，取沉淀，真空`干燥，粉碎，制得。優選地，是取黃芪藥材，加10倍量水回流提取3次，每次lh，減壓濃縮至60°C相對密度為1.10的溶液，再加95%乙醇至含醇量達80%,離心，取沉淀，真空干燥，粉碎，制得。
[0014]本發明要解決的第二個技術問題是提供一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒的制備方法，該方法簡單方便、易于操作，適合大規模生產。
[0015]為解決第二個技術問題，本發明采用下述技術方案:
[0016]一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒的制備方法，包括以下步驟:
[0017](I)取紫錐菊藥材，加相當于紫錐菊8~14倍重量的濃度為40~80%的乙醇回流提取2~4次，每次0.5~2h，減壓回收乙醇，60°C濃縮至相對密度為1.03~1.20的溶液，經聚酰胺柱層析，濃度為40~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，粉碎，制得紫錐菊提取物；
[0018](2)取金銀花葉藥材，加相當于金銀花8~14倍重量的濃度為50~90%的乙醇回流提取2~4次，每次I~3h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，粉碎，制得金銀花葉提取物:；
[0019](3)取黃芪藥材，加相當于黃芪6~12倍重量的水回流提取2~4次，每次I~3h，60°C減壓濃縮至相對密度為1.03~1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量達40~90%，離心，取沉淀，干燥，粉碎，制得黃芪提取物；
[0020](4)以重量計，將30~45份紫錐菊提取物、30~45份金銀花葉提取物和20~40份黃芪提取物混勻，加入藥學上可接受的輔料，制粒，干燥，即得。
[0021]優選地，輔料為蔗糖和糊精，且蔗糖和糊精的重量比為I~4:1 ;更優選地，蔗糖和糊精的重量比為3:1。
[0022]優選地，輔料與總提取物的重量比為1.2~2.0:1 ;更優選地，輔料與總提取物的重量比為2.0:1。
[0023]優選地，用50%~90%乙醇制粒；更優選地，用70%乙醇制粒。
[0024]上述防治禽流感、提高雞群免疫的中藥提取物中主要包括以下化合物:綠原酸、香葉木素、異鼠李素-3-0-葡萄糖苷、蘆丁、木犀草苷、洋薊酸、菊苣酸。
[0025]采用本生產工藝獲得的藥材提取物中綠原酸、木犀草苷和菊苣酸的含量較高，綠原酸、木犀草苷具有抗菌、消炎、抗病毒的作用而菊苣酸具有抗炎和增強免疫的功能。本發明中藥提取物的主要成分含量:金銀花提取物中綠原酸的含量為230~320mg/g，木犀草苷的含量為15mg/g~30mg/g ;紫錐菊提取物中菊苣酸的含量為180~230mg/g。因此運用本發明生產工藝提取得到的藥材提取物具有較好的藥效。
[0026]本發明具有如下有益效果:
[0027]本發明防治禽流感、提高雞群免疫的中藥選用藥材合理、顯效速度快、既能防治禽流感，又能提高雞群的免 疫狀況，增強機體抗病毒能力，可以讓蛋雞自由采食，防止減蛋綜合癥引起的產蛋下降。同時還具有副作用小、成本低、藥物穩定性高等優點。本發明工藝簡單高效，易于操作。本發明提出的防治禽流感、提高雞群免疫的中藥的用途，用于防治禽流感、提高雞群免疫效果顯著。
【具體實施方式】
[0028]實施例1
[0029](I)取紫錐菊藥材，加12倍量50%乙醇回流提取3次，每次lh，減壓回收乙醇，濃縮至60°C相對密度為1.10的溶液，經聚酰胺柱層析，50%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫錐菊提取物。
[0030](2)取金銀花葉藥材，加14倍量60%乙醇溶液回流提取3次，每次lh，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得金銀花葉提取物。
[0031](3)取黃芪藥材，加10倍量水回流提取3次，每次lh，減壓濃縮至60°C相對密度為1.10的溶液，再加95%乙醇至含醇量達80%，離心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黃芪提取物。
[0032](4)取上述紫錐菊提取物42.6g，金銀花葉提取物41.lg，黃芪提取物36.3g，然后加入輔料(重量比為3:1的蔗糖和糊精)，混合均勻，總提取物與輔料重量比為1:2，用濃度為70%的乙醇制粒，60°C烘干，整粒，即得產品。
[0033]所述的三種藥材提取物，經硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇系統梯度洗脫，所得組份再經聚酰胺柱色譜、凝膠柱色譜、反相C18柱色譜、HPLC制備色譜及高速逆流色譜等現代分離手段，進行進一步分離，并結合理化性質和IR、MS、1H-NMR、13C-NMR等現代波譜方法，鑒定得提取物中主要包括以下化合物:綠原酸、香葉木素、異鼠李素-3-0-葡萄糖苷、蘆丁、木犀草苷、洋薊酸、菊苣酸7種化合物。金銀花提取物中綠原酸的含量為320mg/g，木犀草苷的含量為30mg/g ;紫錐菊提取物中菊苣酸的含量為230mg/g。
[0034]實施例2
[0035](I)取紫錐菊藥材，加12倍量50%乙醇回流提取3次，每次lh，減壓回收乙醇，濃縮至60°C相對密度為1.10的溶液，經聚酰胺柱層析，50%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫錐菊提取物。
[0036](2)取金銀花葉藥材，加14倍量60%乙醇溶液回流提取3次，每次lh，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得金銀花葉提取物。
[0037](3)取黃芪藥材，加10倍量水回流提取3次，每次1.5h，減壓濃縮至60°C相對密度為1.10的溶液，再加95%乙醇至含醇量達80%，離心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黃芪提取物。
[0038](4)取上述紫錐菊提取物39.7g，金銀花葉提取物40.3g，黃芪提取物35.2g，加入輔料(重量比為4:1的蔗糖和糊精)，混合均勻，總提取物與輔料重量比為1:1.2，用濃度為70%的乙醇制粒，60°C烘干，整粒，即得產品。鑒定得提取物中主要包括以下化合物:綠原酸、香葉木素、異鼠李素-3-0-葡萄糖苷、蘆丁、木犀草苷、洋薊酸、菊苣酸7種化合物。金銀花提取物中綠原酸的含量為310mg/g，木犀草苷的含量為25mg/g ;紫錐菊提取物中菊苣酸的含量為206mg/g。
[0039]實 施例3
[0040](I)取紫錐菊藥材，加10倍量50%乙醇回流提取3次，每次lh，減壓回收乙醇，濃縮至60°C相對密度為1.20的溶液，經聚酰胺柱層析，50%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫錐菊提取物。
[0041](2)取黃芪藥材，加12倍量水回流提取2次，每次3h，減壓濃縮至60°C相對密度為1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量達70%，離心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黃芪提取物。
[0042](3)將上述紫錐菊提取物42.6g，黃芪提取物36.3g，與輔料(重量比為1:1的蔗糖和糊精)混合均勻，總提取物與輔料重量比為1: 1.6，60%乙醇制粒，60°C烘干，整粒，包裝，即得產品。鑒定得提取物中主要包括以下化合物:綠原酸、異鼠李素-3-0-葡萄糖苷、洋薊酸、菊苣酸4種化合物。金銀花提取物中綠原酸的含量為283mg/g，木犀草苷的含量為28mg/g ；紫錐菊提取物中菊苣酸的含量為230mg/g。
[0043]實施例4
[0044](I)取紫錐菊藥材，加8倍量80%乙醇回流提取4次，每次0.5h，減壓回收乙醇，濃縮至60°C相對密度為1.10的溶液，經聚酰胺柱層析，90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫錐菊提取物。
[0045](2)取金銀花葉藥材，加8倍量90%乙醇溶液回流提取4次，每次lh，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得金銀花葉提取物。
[0046](3)取黃芪藥材，加8倍量水回流提取4次，每次lh，減壓濃縮至60°C相對密度為1.10的溶液，再加95%乙醇至含醇量達40%，離心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黃芪提取物。
[0047](4)取上述紫錐菊提取物42.6g，金銀花葉提取物41.lg，黃芪提取物36.3g，加入輔料(重量比為3:1的蔗糖和糊精)，混合均勻，總提取物與輔料重量比為1:2，90%乙醇制粒，60°C烘干，整粒，包裝，即得。鑒定得提取物中主要包括以下化合物:綠原酸、香葉木素、異鼠李素-3-0-葡萄糖苷、蘆丁、木犀草苷、洋薊酸、菊苣酸7種化合物。[0048]實施例5
[0049](I)取紫錐菊藥材，加12倍量40%乙醇回流提取2次，每次2h，減壓回收乙醇，濃縮至60°C相對密度為1.20的溶液，經聚酰胺柱層析，50%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫錐菊提取物。
[0050](2)取金銀花葉藥材，加10倍量70%乙醇溶液回流提取3次，每次2h，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得金銀花葉提取物。
[0051](3)取黃芪藥材，加6倍量水回流提取4次，每次lh，減壓濃縮至60°C相對密度為1.03的溶液，再加95%乙醇至含醇量達90%，離心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黃芪提取物。
[0052](4)取上述紫錐菊提取物42.6g，金銀花葉提取物41.lg，黃芪提取物36.3g，加入輔料(重量比為4:1的蔗糖和糊精)，混合均勻，總提取物與輔料重量比為1:2，50%乙醇制粒，60°C烘干，整粒，包裝，即得。鑒定得提取物中主要包括以下化合物:綠原酸、香葉木素、異鼠李素-3-0-葡萄糖苷、蘆丁、木犀草苷、洋薊酸、菊苣酸7種化合物。
[0053]實施例6
[0054](I)取紫錐菊藥材，加14倍量60%乙醇回流提取2次，每次2h，減壓回收乙醇，濃縮至60°C相對密度為1.03的溶液，經聚酰胺柱層析，90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得紫錐菊提取物。
[0055](2)取金銀花葉藥材，加14倍量50%乙醇溶液回流提取2次，每次3h，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，得金銀花葉提取物。
[0056](3)取黃芪藥材，加10倍量水回流提取2次，每次3h，減壓濃縮至60°C相對密度為
1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量達40%，離心，取沉淀，真空干燥，粉碎，得黃芪提取物。
`[0057](4)取上述紫錐菊提取物43.3g，金銀花葉提取物43.9g，黃芪提取物35.8g，加入輔料(重量比為4:1的蔗糖和糊精)，混合均勻，總提取物與輔料重量比為1:2，50%乙醇制粒，60°C烘干，整粒，包裝，即得。鑒定得提取物中主要包括以下化合物:綠原酸、香葉木素、異鼠李素-3-0-葡萄糖苷、蘆丁、木犀草苷、洋薊酸、菊苣酸7種化合物。
[0058]實施例7
[0059]防治禽流感、提高雞群免疫的中藥的抗流感病毒試驗
[0060]a.試驗藥物及材料
[0061]SPF級昆明種小鼠，18~22g，雌雄各半，山東大學實驗動物中心提供。恒溫水浴鍋、不銹鋼桶、秒表。病毒唑(利巴韋林)，四川百利藥業有限責任公司，批號111005。
[0062]b.試驗方法
[0063]流感病毒鼠肺適應株(FM1)，由中國微生物菌種保藏管理委員會醫學病毒中心提供，使用前接種10日齡雞胚，常規培養48h收集尿囊液，測定血凝滴度為1:1280。測定其對小鼠的半數致死量(LD50)。
[0064]I對小鼠流感病毒性肺炎的影響
[0065]將體重為18~22g的小鼠60只，隨機分為5組，雌雄各半，每組12只。第I組為正常對照組、第2組為病毒對照組，第3組為試驗I組，第4組為試驗2組，第5組為病毒唑對照組。藥物組(第3-5組)于感染前Id開始滴鼻給藥，0.05ml/次，2次/d，連續5d，對照組(第1-2組)給予同體積蒸餾水滴鼻。各組在乙醚輕度麻醉下流感病毒以LD50量感染鼠肺，感染后96h處死，稱體重后，取出全肺，用生理鹽水洗凈，并用干凈濾紙吸掉殘余鹽水，稱重，計算肺指數值(每100g體重的肺質量，即肺指數=肺質量/體重X 100)和肺指數抑制率[(病毒對照組平均肺指數一藥物組平均肺指數)/病毒對照組平均肺指數X100%]，結果見表1:
[0066]表1對小鼠流感病毒感染小鼠肺指數的影響
[0067](x±J, n=i2)
[0068]
【權利要求】
1.一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒，是由中藥提取物和藥學上可接受的輔料制成，其特征在于，所述中藥提取物包括下述重量份的原料:紫錐菊提取物30~45份、金銀花葉提取物30~45份和黃芪提取物20~40份。
2.根據權利要求1所述的防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒，其特征在于，所述紫錐菊提取物是取紫錐菊藥材，加相當于紫錐菊8~14倍重量的濃度為40~80%的乙醇回流提取2~4次，每次0.5~2h，減壓回收乙醇，60°C濃縮至相對密度為1.03~1.20的溶液，經聚酰胺柱層析，濃度為40~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，粉碎制得。
3.根據權利要求1所述的防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒，其特征在于，所述金銀花葉提取物是取金銀花葉藥材，加相當于金銀花8~14倍重量的濃度為50~90%的乙醇回流提取2~4次，每次I~3h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，粉碎制得。
4.根據權利要求1所述的防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒，其特征在于，所述黃芪提取物是取黃芪藥材，加相當于黃芪6~12倍重量的水回流提取2~4次，每次I~3h，60°C減壓濃縮至相對密度為1.03~1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量達40~90%，離心，取沉淀，干燥，粉碎制得。
5.一種防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)取紫錐菊藥材，加相當于紫錐菊8~14倍重量的濃度為40~80%的乙醇回流提取2~4次，每次0.5~2h，減壓回收乙醇，60°C濃縮至相對密度為1.03~1.20的溶液，經聚酰胺柱層析，濃度為40~80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，粉碎，制得紫錐菊提取物； (2)取金銀花葉藥材，加相當于金銀花8~14倍重量的濃度為50~90%的乙醇回流提取2~4次，每次I~3h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，干燥，粉碎，制得金銀花葉提取物:； (3)取黃芪藥材，加相當于黃芪6~12倍重量的水回流提取2~4次，每次I~3h，60°C減壓濃縮至相對密度為1.03~1.20的溶液，再加95%乙醇至含醇量達40~90%，離心，取沉淀，干燥，粉碎，制得黃芪提取物； (4)以重量計，將30~45份紫錐菊提取物、30~45份金銀花葉提取物和20~40份黃芪提取物混勻，加入藥學上可接受的輔料，制粒，干燥，即得。
6.根據權利要求5所述的防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒的制備方法，其特征在于，所述輔料為蔗糖和糊精，且蔗糖和糊精的重量比為I~4:1。
7.根據權利要求5或6所述的防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒的制備方法，其特征在于，輔料與總提取物的重量比為1.2~2.0:1。
8.根據權利要求5所述的防治禽流感、提高雞群免疫的中藥顆粒的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，用50%~90%乙醇制粒。
【文檔編號】A61P31/16GK103610738SQ201310669657
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月10日 優先權日:2013年12月10日
【發明者】楊鵬 申請人:濟南三峰生物工程有限責任公司