一種中藥藥物原料的制作方法
【專利摘要】本發明屬于醫藥【技術領域】,本發明公開了一種中藥藥物原料,其特征在于中藥藥物原料中銀杏內酯B含量大于等于97.0%小于100%,銀杏內酯A含量大于等于0.5%小于3%。本發明中藥藥物原料通過穩定性試驗和急性毒性試驗篩選獲得;研究表明,該中藥原料具有穩定性高、毒性低的優點。
【專利說明】一種中藥藥物原料
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥【技術領域】,具體涉及一種含有銀杏內酯B的藥物原料及其制備方法和制劑。
【背景技術】
[0002]銀杏(Ginkgo bilobal)系銀杏科植物,主產地為中國江蘇邳州、山東郯城、廣西桂林等,是中國特有的世界最 古老的起源久遠的珍稀樹種之一,是在地質時代曾占廣大面積的植物種族,1.5億年前第三紀有化石發現,300萬年前第四紀冰川期大部分滅絕后殘留下來至今的植物,屬國家一級保護植物。銀杏藥用價值主要在葉和果實,銀杏現代開發仍集中在銀杏葉上,銀杏葉性平,味甘、苦、潘,歸心、肺經,能斂肺、平喘、活血化淤、止痛,傳統中醫主要治療肺虛咳喘、冠心病、心絞痛等。隨銀杏葉現代藥理作用深入研究,臨床不僅用于治療心血管、呼吸、神經系統疾病,還發展治療視網膜疾病、腎病、糖尿病引起的器管組織病變、腫瘤及婦產科和口腔醫學等領域。
[0003]現代藥理學研究表明,銀杏具有清除自由基、抗脂質過氧化作用、改善腦缺血和中樞神經系統作用、顯著降低血清膽固醇和三酰甘油水平、拮抗血小板活化因子(PAF)作用、對心血管系統的作用、抗血栓與抗凝作用、對心臟作用、抗腫瘤等等,銀杏葉藥用價值突出。自上世紀60年代,心血管疾病發病率較高的美國、歐洲國家率先從中國古老樹種銀杏葉里提取銀杏黃酮與銀杏內酯,目前至少130多個國家銷售銀杏葉制劑。近5年來國內銀杏葉研究頗多,我國銀杏樹占全世界總量的70%以上,國外90%銀杏葉藥用貨來源我國,在崇尚自然、生命質量的21世紀,充分保護和利用這珍貴資源,采用現代高科技,系統研究開發應用銀杏葉制劑,防治疾病,前景積極可觀。
[0004]銀杏葉有廣泛生物活性,化學成分種類較多,為黃酮類、萜類、有機酸、生物堿、多糖類、酚類、氨基酸、留體化合物、微量元素等,但最主要是藥用價值成分萜類內酯和銀杏黃酮類。銀杏葉萜內酯類成分,分離得5個萜內酯類成分,分別為倍半萜類白果內酯(I)、二萜類銀杏內酯A(II)、銀杏內酯B(III)、銀杏內酯C(IV)、銀杏內酯J(V)。銀杏內酯分子為獨特十二碳骨架結構,有I個叔丁基和6個5元環。銀杏葉含近38種黃酮類化合物,銀杏黃酮類均衍生于母體化合物黃酮,以糖苷和甲基化形式存在。其中雙黃酮6種,黃酮苷元7種,黃酮苷17種,黃酮苷主要是槲皮素、山萘素、異鼠李素糖苷及兒茶素類。另有抗腫瘤成分聚戊烯醇。其中銀杏內酯B是一種活性強的血小板活化因子(PAF)拮抗劑,能競爭性地與PAF受體結合,抑制PAF的作用;因此,凡涉及與PAF相關的病癥,如:血栓形成、腦組織損傷、器官移植排斥、急性炎癥、心臟過敏、細胞內毒素及IgG導致的休克等,銀杏內酯B均有一定療效。
[0005]研究開發以銀杏內酯B為原料的中藥新藥,是醫藥科研工作者的重要工作。
【發明內容】
[0006]基于上述原因, 申請人:對于含有銀杏內酯B的中藥原料進行研究,研究結果表明,銀杏內酯B原料中銀杏內酯B含量大于等于97.0%小于100%,銀杏內酯A含量大于等于
0.5%小于3% ;該中藥原料具有穩定性高、毒性低的優點。
[0007]本發明通過下述技術方案實現的。
[0008]一種中藥藥物原料,中藥藥物原料中銀杏內酯B含量大于等于97.0%小于100%,銀杏內酯A含量大于等于0.5%小于3%。
[0009]其中中藥藥物原料中銀杏內酯B含量大于等于97.0 %小于100 %,銀杏內酯A含量大于等于2.0%小于3%。
[0010]上述所述的中藥藥 物原料制備成藥物制劑。
[0011]上述所述的中藥藥物原料的制備方法為:
[0012]取銀杏葉提取物,加入4-6倍量的乙酸乙酯,加熱至45_50°C,攪拌2小時,提取3次,合并提取液,過濾,濾液濃縮得浸膏,用2-3倍量的乙酸乙酯洗滌,洗滌后的浸膏上硅膠柱,先用石油醚-乙酸乙酯體積比為1:1溶劑,洗脫2-3個柱體積,洗脫液回收溶劑棄去,再用石油醚-乙酸乙酯體積比為15: 85溶劑洗脫,洗脫6-12個柱體積,收集洗脫液,回收溶劑至盡,干燥,加入干燥物重量2-5倍的無水乙醇,在0-5°C靜置12-24小時,過濾,濾液回收乙醇至盡,固體干燥,干燥物含水量小于等于4.5%,放入CO2超臨界萃取儀中,萃取釜壓力為10-12Mpa,萃取溫度為45-55°C,分離釜的壓力為4.0-5.0Mpa,溫度為30_40°C;萃取時間為2-3小時,保留萃取釜原料,得到中藥藥物原料。
[0013]上述所述的中藥藥物原料制備的藥物制劑。
[0014]上述所述的藥物制劑為口服制劑。
[0015]上述所述的藥物制劑為注射制劑。
[0016]上述所述的口服制劑包括片劑、膠囊劑或顆粒劑。
[0017]上述所述的注射制劑為注射液。
[0018]上述所述的注射液包括中藥藥物原料、無水乙醇和聚乙二醇400。
[0019]上述所述的注射液包括中藥藥物原料15-25重量份、無水乙醇150-160重量份和聚乙二醇400850-912重量份。
[0020]上述所述的注射液的制備方法為:
[0021]取聚乙二醇400加入無水乙醇中,混合完全,得到混合溶劑,取2 / 3體積量的混合溶劑,加入藥物原料,溶解完全,加入剩余的混合溶劑,攪拌均勻,過濾,灌裝、滅菌,即得。
[0022]上述所述的中藥藥物原料在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用。
[0023]上述所述的中藥藥物原料在制備治療/預防腦梗塞藥物中的應用。
[0024]上述所述的中藥藥物原料在制備治療冠心病心絞痛藥物中的應用。
[0025]本發明銀杏葉提取物符合中國藥典(2010年版,一部)“銀杏葉提取物”的質量標準(392-393頁),其檢測方法為藥典方法。
[0026]本發明下述試驗,是在多次創造性試驗的基礎上,根據本發明所要保護的技術方案,進行的結論性試驗。
[0027]一、穩定性試驗
[0028]1、試驗方案
[0029]試驗方案1:取銀杏葉提取物(總黃酮醇苷含量26.8%,萜類內酯以白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C的總量計7.2 % ),加入5倍量的乙酸乙酯,加熱至48°C,攪拌2小時,提取3次,合并提取液,過濾,濾液濃縮得浸膏,用2.5倍量的乙酸乙酯洗滌,洗滌后的浸膏上硅膠柱,先用石油醚-乙酸乙酯體積比為1:1溶劑,洗脫2.5個柱體積,洗脫液回收溶劑棄去,再用石油醚-乙酸乙酯體積比為15: 85溶劑洗脫,洗脫10個柱體積,收集洗脫液,回收溶劑至盡,干燥,加入干燥物重量3.5倍的無水乙醇,在2°C靜置18小時,過濾,濾液回收乙醇至盡,固體干燥,干燥物含水量3.0 %,放入CO2超臨界萃取儀中,萃取釜壓力為llMpa,萃取溫度為50°C,分離釜的壓力為4.5Mpa,溫度為35°C ;萃取時間為2.5小時,保留萃取釜原料,得到中藥藥物原料【原料中銀杏內酯B含量97.0%,銀杏內酯A含量2.8%,總雜質含量3.0%, 按照中國藥典(2010年版,一部)393頁萜類內酯含量測定方法檢測】;(總銀杏酸含量為l.Sppm)。
[0030]試驗方案2:取銀杏葉提取物(總黃酮醇苷含量27.9 %,萜類內酯以白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C的總量計7.9% ),加入4.5倍量的乙酸乙酯,加熱至45°C,攪拌2小時,提取3次,合并提取液,過濾,濾液濃縮得浸膏,用3倍量的乙酸乙酯洗滌,洗滌后的浸膏上硅膠柱,先用石油醚-乙酸乙酯體積比為1:1溶劑,洗脫3個柱體積,洗脫液回收溶劑棄去,再用石油醚-乙酸乙酯體積比為15: 85溶劑洗脫,洗脫11個柱體積,收集洗脫液,回收溶劑至盡,干燥,加入干燥物重量4.5倍的無水乙醇,在0°C靜置12小時,過濾,濾液回收乙醇至盡,固體干燥,干燥物含水量4.0%,放入CO2超臨界萃取儀中,萃取釜壓力為lOMpa,萃取溫度為55°C,分離釜的壓力為4.0Mpa,溫度為30°C ;萃取時間為3小時,保留萃取釜原料,得到中藥藥物原料【原料中銀杏內酯B含量98.5%,銀杏內酯A含量1.1 %,總雜質含量1.5%,按照中國藥典(2010年版,一部)393頁萜類內酯含量測定方法檢測】;(總銀杏酸含量為1.7ppm)。
[0031]試驗方案3:取銀杏葉提取物(總黃酮醇苷含量26.8%,萜類內酯以白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C的總量計6.7 % ),加入5.5倍量的乙酸乙酯,加熱至48 V,攪拌2小時,提取3次,合并提取液,過濾,濾液濃縮得浸膏,用2.5倍量的乙酸乙酯洗滌,洗滌后的浸膏上硅膠柱,先用石油醚-乙酸乙酯體積比為1:1溶劑,洗脫3個柱體積,洗脫液回收溶劑棄去,再用石油醚-乙酸乙酯體積比為15: 85溶劑洗脫,洗脫7個柱體積,收集洗脫液,回收溶劑至盡,干燥,加入干燥物重量3倍的無水乙醇,在5°C靜置24小時,過濾,濾液回收乙醇至盡,固體干燥,干燥物含水量5.0%,放入CO2超臨界萃取儀中,萃取釜壓力為10.5Mpa,萃取溫度為48°C,分離釜的壓力為4.5Mpa,溫度為35°C;萃取時間為2小時,保留萃取釜原料,得到中藥藥物原料【原料中銀杏內酯B含量96.5%,銀杏內酯A含量3.0%,總雜質含量3.5 %,按照中國藥典(2010年版,一部)393頁萜類內酯含量測定方法檢測】;(總銀杏酸含量為1.9ppm)。
[0032]試驗方案4:取銀杏葉提取物(總黃酮醇苷含量25.5 %,萜類內酯以白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C的總量計6.3% ),加入4倍量的乙酸乙酯,加熱至46°C,攪拌2小時,提取3次,合并提取液,過濾,濾液濃縮得浸膏,用3倍量的乙酸乙酯洗滌,洗滌后的浸膏上硅膠柱,先用石油醚-乙酸乙酯體積比為1:1溶劑,洗脫2-3個柱體積,洗脫液回收溶劑棄去,再用石油醚-乙酸乙酯體積比為15: 85溶劑洗脫,洗脫8個柱體積,收集洗脫液,回收溶劑至盡,干燥,加入干燥物重量2.5倍的無水乙醇,在2°C靜置16小時,過濾,濾液回收乙醇至盡,固體干燥,干燥物含水量4.8%,放入CO2超臨界萃取儀中,萃取釜壓力為llMpa,萃取溫度為48°C,分離釜的壓力為4.5Mpa,溫度為35°C;萃取時間為2小時,保留萃取釜原料,得到中藥藥物原料【原料中銀杏內酯B含量96.1%,銀杏內酯A含量3.2%,總雜質含量3.9%,按照中國藥典(2010年版,一部)393頁萜類內酯含量測定方法檢測】;(總銀杏酸含量為1.8ppm)。
[0033]試驗方案5:取銀杏葉提取物(總黃酮醇苷含量26.4%,萜類內酯以白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C的總量計8.9 % ),加入5倍量的乙酸乙酯,加熱至48°C,攪拌2小時,提取3次,合并提取液,過濾,濾液濃縮得浸膏,用2.5倍量的乙酸乙酯洗滌,洗滌后的浸膏上硅膠柱,先用石油醚-乙酸乙酯體積比為1:1溶劑,洗脫2.5個柱體積,洗脫液回收溶劑棄去, 再用石油醚-乙酸乙酯體積比為15: 85溶劑洗脫,洗脫10個柱體積,收集洗脫液,回收溶劑至盡,干燥,加入干燥物重量4倍的無水乙醇,在:TC靜置15小時,過濾,濾液回收乙醇至盡,固體干燥,干燥物含水量4.0 %,放入CO2超臨界萃取儀中,萃取釜壓力為11.5Mpa,萃取溫度為48°C,分離釜的壓力為4.5Mpa,溫度為35°C ;萃取時間為2.5小時,保留萃取釜原料,得到中藥藥物原料【原料中銀杏內酯B含量99.2%,銀杏內酯A含量
0.5%,總雜質含量0.7%,按照中國藥典(2010年版,一部)393頁萜類內酯含量測定方法檢測】;(總銀杏酸含量為1.4ppm)。
[0034]試驗方案6:取銀杏葉提取物(總黃酮醇苷含量26.4%,萜類內酯以白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C的總量計8.6 % ),加入5倍量的乙酸乙酯,加熱至48°C,攪拌2小時,提取3次,合并提取液,過濾,濾液濃縮得浸膏,用3倍量的乙酸乙酯洗滌,洗滌后的浸膏上硅膠柱,先用石油醚-乙酸乙酯體積比為1:1溶劑,洗脫3個柱體積,洗脫液回收溶劑棄去,再用石油醚-乙酸乙酯體積比為15: 85溶劑洗脫,洗脫10個柱體積,收集洗脫液,回收溶劑至盡,干燥,加入干燥物重量4倍的無水乙醇,在4°C靜置14小時,過濾,濾液回收乙醇至盡,固體干燥,干燥物含水量3.5%,放入CO2超臨界萃取儀中,萃取釜壓力為lOMpa,萃取溫度為50°C,分離釜的壓力為4.5Mpa,溫度為35°C ;萃取時間為2.5小時,保留萃取釜原料,得到中藥藥物原料【原料中銀杏內酯B含量99.6%,銀杏內酯A含量0.3%,總雜質含量0.4%,按照中國藥典(2010年版,一部)393頁萜類內酯含量測定方法檢測】;(總銀杏酸含量為1.4ppm)。
[0035]上述銀杏內酯B藥物原料中總銀杏酸的含量均小于2ppm。【檢測方法按照中國藥典(2010年版,一部)393頁銀杏葉提取物中總銀杏酸的檢測方法】
[0036]取上述不同試驗方案原料20g,輔料無水乙醇155g和聚乙二醇400880g ;制備方法:取聚乙二醇400加入無水乙醇中,混合完全,得到混合溶劑,取2 / 3體積量的混合溶劑,加入藥物原料,溶解完全,加入剩余的混合溶劑,攪拌均勻,過濾,灌裝、滅菌,即得。
[0037]2、試驗方法
[0038](I)光照試驗:取不同試驗方案原料制備的制劑,置于藥品強光照射試驗箱,于照度4500Lx±500Lx條件下放置10天,在第10天取樣,檢測,結果與O月數據相比較。
[0039](2)高溫試驗:取不同試驗方案原料制備的制劑,置于小燒杯中,密封膜封口。將其置于電熱鼓風干燥箱,在60°C 土 1°C條件下放置10天,于第10天取樣檢測,結果與O月數據相比較。
[0040](3)高濕試驗:取不同試驗方案原料制備的制劑,置于小燒杯中,分別置于盛有NaCl飽和溶液和KNO3飽和溶液的密閉干燥器,濕度條件分別為RH75%。將其分別置于電熱鼓風干燥箱,在25°C ±1°C條件下放置10天,于第10天取樣檢測,結果與O月數據相比較。
[0041]3、檢測方法
[0042]【含量測定】
[0043]照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VID)測定
[0044]色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以四氫呋喃:甲醇:水(10: 25: 75)為流動相;用蒸發光散射檢測器檢測(參考條件:漂移管溫度:105°C;氮氣或空氣流速:2.9L / min)。理論塔板數按銀杏內酯B峰計算應不低于2000。另取銀杏內酯A對照品0.2mg,用Iml甲醇溶解,配制成0.2mg/ml的銀杏內酯A對照溶液,注入液相色譜儀,供試品溶液與銀杏內酯A對照品溶液主峰保留時間一致的色譜峰為銀杏內酯A,供試品溶液主峰與 銀杏內酯A峰的分離度應符合規定。
[0045]對照品溶液的制備精密稱取銀杏內酯B對照品(105°C干燥至恒重)適量,加甲醇制成Iml約含5mg的溶液,搖勻,即得。
[0046]供試品溶液的制備精密稱取樣品適量,置5ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成Iml約含5mg的溶液,即得。
[0047]測定法分別精密吸取對照品溶液5μ 1、10μ 1,供試品10 μ I,注入色譜儀,測定,按照外標法計算C2tlH24Oltl的含量,即得。
[0048]【有關物質】
[0049]照含量測定項下的方法,取樣品適量,精密稱定,加甲醇溶解,制成每Iml含5mg的溶液⑴;精密量取溶液(1)0.3ml,用甲醇稀釋成10ml,制成每Iml含0.15mg的溶液(2)。用含量測定項下的色譜條件和溶液,取10 μ I注入液相色譜儀,調整儀器靈敏度,使主成分色譜峰高度達記錄儀的滿標度;再分別取溶液(I)和(2)各10μ 1,進樣。記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。
[0050]4、試驗結果:
[0051](I)含量及有關物質檢測見表1-3
[0052]表1光照試驗結果
[0053]
【權利要求】
1.一種中藥藥物原料,其特征在于中藥藥物原料中銀杏內酯B含量大于等于97.0%小于100%,銀杏內酯A含量大于等于0.5%小于3%。
2.根據權利要求1所述的一種中藥原料,其中中藥藥物原料中銀杏內酯B含量大于等于97.0 %小于100 %,銀杏內酯A含量大于等于2.0 %小于3 %。
3.根據權利要求1或2所述的一種中藥藥物原料,其特征在于中藥藥物原料制備成藥物制劑。
4.根據權利要求1或2所述的一種中藥藥物原料,其中中藥藥物原料的制備方法為: 取銀杏葉提取物,加入4-6倍量的乙酸乙酯,加熱至45-50°C,攪拌2小時,提取3次,合并提取液,過濾,濾液濃縮得浸膏,用2-3倍量的乙酸乙酯洗滌,洗滌后的浸膏上硅膠柱,先用石油醚-乙酸乙酯體積比為1:1溶劑,洗脫2-3個柱體積,洗脫液回收溶劑棄去,再用石油醚-乙酸乙酯體積比為15: 85溶劑洗脫,洗脫6-12個柱體積,收集洗脫液,回收溶劑至盡,干燥,加入干燥物重量2-5倍的無水乙醇,在0-5°C靜置12-24小時,過濾,濾液回收乙醇至盡,固體干燥,干燥物含水量小于等于4.5%,放入CO2超臨界萃取儀中,萃取釜壓力為10-12Mpa,萃取溫度為45-55°C,分離釜的壓力為4.0-5.0Mpa,溫度為30_40°C ;萃取時間為2-3小時,保留萃取釜原料,得到中藥藥物原料。
5.根據權利要求1或2所述的一種中藥藥物原料,其特征在于中藥藥物原料制備的藥物制劑。
6.根據權利要求3所述的一種中藥藥物原料,其中藥物制劑為口服制劑。
7.根據權利要求3所述的一種中藥藥物原料,其中藥物制劑為注射制劑。
8.根據權利要求 6所述的一種中藥藥物原料,其中口服制劑包括片劑、膠囊劑或顆粒 劑。
9.根據權利要求7所述的一種中藥藥物原料,其中注射制劑為注射液。
10.根據權利要求9所述的一種中藥藥物原料,其中注射液包括中藥藥物原料、無水乙醇和聚乙二醇400。
11.根據權利要求10所述的一種中藥藥物原料,其中注射液包括中藥藥物原料15-25重量份、無水乙醇150-160重量份和聚乙二醇400850-912重量份。
12.根據權利要求11所述的一種中藥藥物原料,其中注射液的制備方法為: 取聚乙二醇400加入無水乙醇中,混合完全,得到混合溶劑,取2 / 3體積量的混合溶劑,加入藥物原料,溶解完全,加入剩余的混合溶劑,攪拌均勻,過濾,灌裝、滅菌,即得。
13.根據權利要求1或2所述的一種中藥藥物原料在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用。
14.根據權利要求1或2所述的一種中藥藥物原料在制備治療/預防腦梗塞藥物中的應用。
15.根據權利要求1或2所述的一種中藥藥物原料在制備治療冠心病心絞痛藥物中的應用。
【文檔編號】A61P9/00GK103739612SQ201310727556
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月26日 優先權日:2013年12月26日
【發明者】朱吉滿 申請人:哈爾濱譽衡藥業股份有限公司