一種組分中藥研究的新方法
【專利摘要】一種組分中藥研究的新方法，運(yùn)用有機(jī)溶劑提取中藥，獲得中藥總提取物，將總提取物和各極性部位取物的不同組合分別灌服動(dòng)物，獲得相應(yīng)入血成分譜圖，確定入血成分與各部位提取物的對(duì)應(yīng)關(guān)系；將亞部位提取物進(jìn)行不同組合，研究入血成分與各亞部位的對(duì)應(yīng)關(guān)系；對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的各亞部位進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行單體分離，研究單體與入血成分的對(duì)應(yīng)關(guān)系，進(jìn)行成分組合，并最終獲得組分中藥。本發(fā)明的研究方法所獲得的組分中藥，化學(xué)成分明確、可吸收入血、量效關(guān)系清楚、符合中醫(yī)藥本質(zhì)的組分中藥。
【專利說明】一種組分中藥研究的新方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于針對(duì)中藥組分新藥研發(fā)的方法，具體涉及一種組分中藥研究的新方法。
技術(shù)背景
[0002]對(duì)于組分中藥的研究目前通常采用的方法有以下幾種:一是傳統(tǒng)組分中藥研究采用化學(xué)成分分離和藥理作用相結(jié)合的研究方法，存在以下問題:(1)其獲得的化學(xué)成分體外顯示有活性，但這些成分能否被吸收入血而發(fā)揮臨床作用還有待商榷；(2)中藥化學(xué)成分復(fù)雜，常常存在越分離活性越弱，甚至活性消失的情況，常常以失敗告終；(3)分離得到的中藥成分與原中藥是否等效性問題。
[0003]二是血清藥物化學(xué)研究中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的方法。中藥大多口服，需經(jīng)過機(jī)體的吸收轉(zhuǎn)化入血而發(fā)揮臨床作用。血清藥物化學(xué)即通過對(duì)入血成分進(jìn)行研究，從而獲得中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。中藥入血成分?jǐn)?shù)量有限，入血成分可能是中藥體外的原形成分，也可能是體外成分的代謝產(chǎn)物，因此其必然來源于中藥體外分離的化學(xué)成分，即入血成分與中藥體外分離的化學(xué)成分之間存在一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。因此，我們提出通過入血成分追蹤尋找與其相對(duì)應(yīng)的體外中藥組分的研究方法，進(jìn)而探索各種成分的最佳配比，組合成與原中藥等效的組分中藥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明為解決現(xiàn)有組分中藥研究的不足，提供一種有效的研究方法。
[0005]本發(fā)明采取以下技術(shù)方案，一種組分中藥研究的新方法，其步驟如下:
1)運(yùn)用有機(jī)溶劑提取中藥，獲得中`藥總提取物，再按照極性進(jìn)行萃取分離，使用萃取溶劑獲得各極性部位提取物，將部位提取物進(jìn)行不同組合，將總提取物和各極性部位取物的不同組合分別灌服動(dòng)物，獲得相應(yīng)入血成分譜圖，進(jìn)行比較分析，確定入血成分與各部位提取物的對(duì)應(yīng)關(guān)系；
2)對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的部位進(jìn)一步分離，獲得各亞部位提取物，將亞部位提取物進(jìn)行不同組合，研究入血成分與各亞部位的對(duì)應(yīng)關(guān)系；
3)對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的各亞部位進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過模糊數(shù)學(xué)分析，按照各亞部位的貢獻(xiàn)大小，確定其量效關(guān)系，從而間接獲得入血成分的相互作用關(guān)系；
4)按照步驟1-3，運(yùn)用藥理活性結(jié)合化學(xué)分離的方法，繼續(xù)對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的各個(gè)亞部位進(jìn)行單體分離，研究單體與入血成分的對(duì)應(yīng)關(guān)系，進(jìn)行成分組合，并最終獲得組分中藥。
[0006]進(jìn)一步地，所述有機(jī)溶劑為乙醇、水、醋酸乙酯、正丁醇、丙酮或其中至少二項(xiàng)的組
口 ο
[0007]進(jìn)一步地，所述萃取溶劑為石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇或其中至少二項(xiàng)的組
口 ο[0008]進(jìn)一步地，所述各極性部位提取物是指對(duì)中藥采用50-95%的乙醇進(jìn)行提取，其提取液經(jīng)石油醚、醋酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，分別獲得的提取物。
[0009]進(jìn)一步地，所述各亞部位提取物是對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的部位進(jìn)一步分離，分別獲得的提取物。
[0010]本發(fā)明的研究方法所獲得的組分中藥，化學(xué)成分明確、可吸收入血、量效關(guān)系清楚、符合中醫(yī)藥本質(zhì)的組分中藥。
【具體實(shí)施方式】
[0011]以下對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。本發(fā)明是以入血成分研究目標(biāo)，依次尋找入血成分與體外部位、亞部位、單體成分的對(duì)應(yīng)關(guān)系，并通過與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的體外亞部位的相互關(guān)系研究，進(jìn)而明確入血成分的相互作用關(guān)系，從而開發(fā)出化學(xué)成分明確、可吸收入血、量-效關(guān)系清楚、符合中醫(yī)藥本質(zhì)的組分中藥。
[0012]獲取各部位提取物:對(duì)中藥采用50-95%的乙醇進(jìn)行提取，提取液經(jīng)石油醚、醋酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，分別獲得各部位； 入血成分與體外物質(zhì)組的對(duì)應(yīng)關(guān)系研究:對(duì)體外分離單體與入血成分的對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)行研究，最終確定入血成分與單體的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
[0013]入血成分與體外物質(zhì)組的對(duì)應(yīng)關(guān)系研究:以入血成分質(zhì)和量不變?yōu)檠芯磕繕?biāo)，依次對(duì)體外分離部位、亞部位、單體與入血成分的對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)行研究，最終確定入血成分與單體的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
[0014]入血成分的相互作用關(guān)系研究:對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的各亞部位進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過模糊數(shù)學(xué)分析，按照各亞部位的貢獻(xiàn)大小，明確其量效關(guān)系進(jìn)行成分組合，并最終獲得組分中藥。
[0015]實(shí)施例:本發(fā)明采取如下研究步驟:
1、總提取物和部位提取物的獲得:使用70%乙醇水溶液，按料液比1:8熱回流提取某種中藥，濃縮提取液回收乙醇，得乙醇總提物，將總提取物依次以石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，每種溶劑萃取3次，得到石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、和水四種部位提取物，將總提取物和各部位提取物凍干得粉末。以甲醇溶解，搖勻，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，于-20°C保存，入液質(zhì)聯(lián)用儀分析。
[0016]2、配制動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所需樣品:精確稱取總提物、各部位提取物粉末適量，采用CMC-Na溶解，制備每毫升含I克生藥的劑量，備用。
[0017]3、最佳采血時(shí)間的確定:取SD大鼠24只(180-220 g)，隨機(jī)分組，每組6只，分成2組，其中I組為空白對(duì)照組，按照實(shí)驗(yàn)組劑量給予等量0.5 % CMC-Na水溶液lmL，實(shí)驗(yàn)組6只以5g生藥每千克大鼠的劑量總提物給藥3次，每次間隔30分鐘，于給藥后30、60、90分鐘后分別從眼靜脈叢取血，每組混合后，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取上清液ImL經(jīng)過經(jīng)活化的SPE柱中用ImL水洗脫，ImL甲醇洗脫，37度水浴以氮?dú)獯蹈伞Ｊ褂靡嘿|(zhì)聯(lián)用儀分析，結(jié)果表明，末次給藥后30分鐘為最佳采血時(shí)間。
[0018]4、入血成分的獲取:將總提物的入血成分譜和各部位提取物成分譜圖進(jìn)行比較，確定五種入血成分。
[0019]5、入血成分與體外物質(zhì)組的對(duì)應(yīng)關(guān)系研究:其中四種是原型入血，一種是代謝入血，其分別與醋酸乙酯和正丁醇部位相對(duì)應(yīng)。[0020]6、將醋酸乙酯部位和正丁醇部位分別用硅膠分離，獲得4種亞部位提取物，再以入血成分質(zhì)和量不變?yōu)檠芯磕繕?biāo)，對(duì)體外分離亞部位與入血成分的對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)行研究，確定入血成分與I1、II1、IV亞部位提取物具有對(duì)應(yīng)關(guān)系。
【權(quán)利要求】
1.一種組分中藥研究的新方法，其特征在于，其步驟如下: 1)運(yùn)用有機(jī)溶劑提取中藥，獲得中藥總提取物，再按照極性進(jìn)行萃取分離，使用萃取溶劑獲得各極性部位提取物，將部位提取物進(jìn)行不同組合，將總提取物和各極性部位提取物的不同組合分別灌服動(dòng)物，獲得相應(yīng)入血成分譜圖，進(jìn)行比較分析，確定入血成分與各部位提取物的對(duì)應(yīng)關(guān)系； 2)對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的部位進(jìn)一步分離，獲得各亞部位提取物，將亞部位提取物進(jìn)行不同組合，研究入血成分與各亞部位的對(duì)應(yīng)關(guān)系； 3)對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的各亞部位進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過模糊數(shù)學(xué)或灰關(guān)聯(lián)度分析，按照各亞部位的貢獻(xiàn)大小，確定其量效關(guān)系，從而間接獲得入血成分的相互作用關(guān)系； 4)按照步驟1-3，運(yùn)用藥理活性結(jié)合化學(xué)分離的方法，繼續(xù)對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的各亞部位進(jìn)行單體分離，研 究單體與入血成分的對(duì)應(yīng)關(guān)系，進(jìn)行成分組合，并最終獲得組分中藥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組分中藥研究的新方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為乙醇、水、醋酸乙酯、正丁醇、丙酮或其中至少二項(xiàng)的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組分中藥研究的新方法，其特征在于，所述萃取溶劑為石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇或其中至少二項(xiàng)的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組分中藥研究的新方法，其特征在于，所述各極性部位提取物是指對(duì)中藥采用50-95%的乙醇進(jìn)行提取，其提取液經(jīng)石油醚、醋酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，分別獲得的提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組分中藥研究的新方法，其特征在于，所述各亞部位提取物是對(duì)與入血成分具有對(duì)應(yīng)關(guān)系的部位進(jìn)一步分離，分別獲得的提取物。
【文檔編號(hào)】A61K49/00GK103736105SQ201410010353
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月10日
【發(fā)明者】劉可越, 劉海軍, 姜登釗 申請(qǐng)人:九江學(xué)院