一種治療脂肪肝的中藥組合物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發明提供了一種治療脂肪肝的中藥組合物及其制備方法和用途。所述治療脂肪肝的中藥組合物的原料藥為：柴胡5-50重量份、枳殼5-50重量份、茵陳15-150重量份、梔子4-50重量份、大黃2-30重量份、澤瀉15-150重量份、白術8-100重量份、半夏4-50重量份、厚樸4-50重量份、薏苡仁10-120重量份、白蔻仁2-30重量份、滑石8-100重量份、陳皮6-80重量份、川芎4-50重量份、香附6-80重量份、白芍10-120重量份、甘草2-30重量份。本發明組合物可顯著改善非酒精性脂肪肝臟的癥狀；通過提高脂聯素受體AdipoR2mRNA、AdipoR1mRNA表達達到改善非酒精性脂肪肝的效果；并對改善肝臟纖維化具有一定的作用。
【專利說明】一種治療脂肪肝的中藥組合物及其制備方法和用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種中藥組合物及其制備方法和用途，具體涉及一種治療脂肪肝的中藥組合物及其制備方法和用途，屬于醫藥領域。
【背景技術】
[0002]非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細胞內脂肪過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征，與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關的獲得性代謝應激性肝損傷。包括單純性脂肪肝(SFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相關肝硬化。隨著肥胖及其相關代謝綜合征全球化的流行趨勢，非酒精性脂肪性肝病現已成為歐美等發達國家和我國富裕地區慢性肝病的重要病因，普通成人NAFLD患病率10%~30%，其中10%~20%為NASH，后者10年內肝硬化發生率高達25%。

【發明內容】

[0003]本發明的第一個目的在于提供一種治療脂肪肝的中藥組合物。
[0004]本發明的第二個目的在于提供該組合物的制備方法。
[0005]本發明的第三個目的在于提供該組合物在制備治療脂肪肝藥物中的應用。
[0006]本發明的目的是通 過如下技術方案實現的:
[0007]—種治療脂肪肝的中藥組合物，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成:
[0008]柴胡5-50重量份、積殼5-50重量份、茵陳15-150重量份、桅子4_50重量份、大黃2-30重量份、澤瀉15-150重量份、白術8-100重量份、半夏4_50重量份、厚樸4_50重量份、薏該仁10-120重量份、白蘧仁2-30重量份、滑石8-100重量份、陳皮6_80重量份、川彎
4-50重量份、香附6-80重量份、白茍10-120重量份、甘草2_30重量份。
[0009]進一步,其原料藥組成為:
[0010]柴胡6_45重量份、積殼6_45重量份、茵陳18-120重量份、桅子5_40重量份、大黃3-25重量份、澤瀉18-120重量份、白術10-80重量份、半夏5_40重量份、厚樸5_40重量份、薏苡仁12-100重量份、白蘧仁3-25重量份、滑石10-80重量份、陳皮8_70重量份、川芎
5-40重量份、香附8-70重量份、白茍12-100重量份、甘草3_25重量份。
[0011]進一步,其原料藥組成為:
[0012]柴胡7-30重量份、積殼7-30重量份、茵陳20_90重量份、桅子6_30重量份、大黃4-20重量份、澤瀉20-90重量份、白術12-60重量份、半夏6_30重量份、厚樸6_30重量份、薏苡仁15-70重量份、白蘧仁4-20重量份、滑石12-60重量份、陳皮10-50重量份、川芎6_30重量份、香附10-50重量份、白茍15-70重量份、甘草4-20重量份。
[0013]進一步,其原料藥組成為:
[0014]柴胡8-20重量份、積殼8-20重量份、茵陳22_50重量份、桅子7_20重量份、大黃4-10重量份、澤瀉22-50重量份、白術12-30重量份、半夏7_20重量份、厚樸7_20重量份、薏苡仁18-40重量份、白蘧仁4-10重量份、滑石12-30重量份、陳皮10-30重量份、川芎7_20重量份、香附10-30重量份、白芍18-40重量份、甘草4-10重量份。
[0015]更進一步，其原料藥組成為:
[0016] 柴胡10重量份、枳殼10重量份、茵陳30重量份、桅子9重量份、大黃6重量份、澤瀉30重量份、白術15重量份、半夏9重量份、厚樸9重量份、薏苡仁20重量份、白蘧仁6重量份、滑石15重量份、陳皮12重量份、川芎9重量份、香附12重量份、白芍20重量份、甘草6重量份；
[0017]或，柴胡9重量份、枳殼15重量份、茵陳25重量份、桅子12重量份、大黃5重量份、澤瀉40重量份、白術13重量份、半夏12重量份、厚樸8重量份、薏苡仁30重量份、白蘧仁5重量份、滑石25重量份、陳皮11重量份、川芎12重量份、香附11重量份、白芍30重量份、甘草5重量份；
[0018]或,柴胡15重量份、積殼9重量份、茵陳40重量份、桅子8重量份、大黃8重量份、澤瀉25重量份、白術25重量份、半夏8重量份、厚樸12重量份、薏苡仁18重量份、白蘧仁8重量份、滑石13重量份、陳皮20重量份、川芎8重量份、香附20重量份、白芍18重量份、甘草8重量份。
[0019]本發明所述大黃為制大黃；白術為炒白術；白芍為炒白芍。
[0020]本發明中藥組合物可以直接將上述比例的原料藥粉碎后混合制得，也可以按常規方法提取制備，還可以進一步純化精制，還可以進一步加入常規輔料按常規制劑工藝制備成顆粒劑、片劑、膠囊劑、滴丸劑、口服液、混懸液、乳濁液、注射劑。
[0021 ] 所述常規提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲漉提取中的一種或幾種方式；
[0022]所述提取溶劑為水或與水互溶的有機溶劑；進一步為甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；更進一步優選為50-90%的乙醇；更進一步優選為60-80%的乙醇；
[0023]所述純化精制方法包括水提醇沉、萃取或經過大孔樹脂柱、硅膠柱純化等；
[0024]所述常規輔料包括:填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質等。填充劑包括:淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括:淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括:淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括:甜味劑及各種香精；防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質包括:PEG6000，PEG4000,蟲蠟等。為使上述劑型能夠實現中藥藥劑學，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學》，上?？茖W出版社1997年12月第I版中各劑型記載的輔料)。
[0025]本發明所述中藥組合物除以上述原藥材形式投料外，還可以采用以提取物(有效部位)形式投料，因此本發明進一步公開了一種治療脂肪肝的中藥組合物:
[0026]一種治療脂肪肝的中藥組合物，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成:
[0027]柴胡提取物5-50重量份、枳殼提取物5-50重量份、茵陳提取物15-150重量份、桅子提取物4-50重量份、大黃提取物2-30重量份、澤瀉提取物15-150重量份、白術提取物8-100重量份、半夏提取物4-50重量份、厚樸提取物4-50重量份、薏苡仁提取物10-120重量份、白蘧仁提取物2-30重量份、滑石8-100重量份、陳皮提取物6-80重量份、川芎提取物4-50重量份、香附提取物6-80重量份、白芍提取物10-120重量份、甘草提取物2_30重量份。
[0028]進一步,其原料藥組成為:
[0029]柴胡提取物6-45重量份、枳殼提取物6-45重量份、茵陳提取物18-120重量份、桅子提取物5-40重量份、制大黃提取物3-25重量份、澤瀉提取物18-120重量份、炒白術提取物10-80重量份、半夏提取物5-40重量份、厚樸提取物5-40重量份、薏苡仁提取物12-100重量份、白蘧仁提取物3-25重量份、滑石10-80重量份、陳皮提取物8-70重量份、川芎提取物5-40重量份、香附提取物8-70重量份、炒白芍提取物12-100重量份、甘草提取物3_25重量份。
[0030]進一步,其原料藥組成為:
[0031]柴胡提取物7-30重量份、枳殼提取物7-30重量份、茵陳提取物20_90重量份、桅子提取物6-30重量份、制大黃提取物4-20重量份、澤瀉提取物20-90重量份、炒白術提取物12-60重量份、半夏提取物6-30重量份、厚樸提取物6-30重量份、薏苡仁提取物15-70重量份、白蘧仁提取物4-20重量份、滑石12-60重量份、陳皮提取物10-50重量份、川芎提取物6-30重量份、香附提取物10-50重量份、炒白芍提取物15-70重量份、甘草提取物4_20重量份。
[0032]更進一步，其 原料藥組成為:
[0033]柴胡提取物10重量份、枳殼提取物10重量份、茵陳提取物30重量份、桅子提取物9重量份、制大黃提取物6重量份、澤瀉提取物30重量份、炒白術提取物15重量份、半夏提取物9重量份、厚樸提取物9重量份、薏苡仁提取物20重量份、白蘧仁提取物6重量份、滑石15重量份、陳皮提取物12重量份、川芎提取物9重量份、香附提取物12重量份、炒白芍提取物20重量份、甘草提取物6重量份；
[0034]或，柴胡提取物9重量份、枳殼提取物15重量份、茵陳提取物25重量份、桅子提取物12重量份、制大黃提取物5重量份、澤瀉提取物40重量份、炒白術提取物13重量份、半夏提取物12重量份、厚樸提取物8重量份、薏苡仁提取物30重量份、白蘧仁提取物5重量份、滑石25重量份、陳皮提取物11重量份、川芎提取物12重量份、香附提取物11重量份、炒白芍提取物30重量份、甘草提取物5重量份；
[0035]或，柴胡提取物15重量份、枳殼提取物9重量份、茵陳提取物40重量份、桅子提取物8重量份、制大黃提取物8重量份、澤瀉提取物25重量份、炒白術提取物25重量份、半夏提取物8重量份、厚樸提取物12重量份、薏苡仁提取物18重量份、白蘧仁提取物8重量份、滑石13重量份、陳皮提取物20重量份、川芎提取物8重量份、香附提取物20重量份、炒白芍提取物18重量份、甘草提取物8重量份。
[0036]上述提取物可以是按常規方法提取制備得到的提取物，還可以是經進一步純化精制制備得到的有效部位；
[0037]所述常規提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲漉提取中的一種或幾種方式；
[0038]所述提取溶劑為水或與水互溶的有機溶劑；進一步為甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；更進一步優選為50-90%的乙醇；更進一步優選為60-80%的乙醇；
[0039]所述純化精制方法包括水提醇沉、萃取或經過大孔樹脂柱、硅膠柱純化等。
[0040]本發明還提供了上述中藥組合物在制備治療脂肪肝藥物中的應用。
[0041]進一步，所述脂肪肝為非酒精性脂肪肝。
[0042]更進一步，所述中藥組合物在制備改善非酒精性脂肪肝肝臟纖維化藥物中的應用。
[0043]本發明研究表明，本發明組合物可顯著改善非酒精性脂肪肝臟的癥狀；通過提高脂聯素受體AdipoR2mRNA、AdipoRlmRNA表達達到改善非酒精性脂肪肝的效果；并對改善肝臟纖維化具有一定的作用。
[0044]實驗例I本發明組合物對非酒精性脂肪肝大鼠肝臟病理變化的影響
[0045]I實驗材料
[0046]1.1實驗動物
[0047]清潔級健康雄性SD大鼠購自北京維通利華實驗動物技術有限公司(許可證號SCXK (京)2012-0001 )，體重約180土 10g，45只，詞養于北京中醫藥大學東直門醫院SPF級動物實驗中心。采用標準化光照及飲食。
[0048]1.2高脂飼料
[0049]高脂飼料購自北京科澳協力飼料有限公司(許可證號SCXK (京)2009-0012)。高脂飼料由88%普通飼料+2%膽固醇+10%豬油組成，為SPF級飼料，真空包裝，IOKg/包，鈷60滅菌，常溫保存。(普通飼料的熱量組成為:碳水化合物、脂肪、蛋白質分別占65.5%、10.3%和24.2% ;高脂飼料熱量組成為:碳水化合物、脂肪、蛋白質分別占總熱量的53%、27.4%和
19.6%ο)
[0050]1.3實驗藥物
[0051]本發明藥物組合物，按實施例1方法制備，至Iml藥液相當于2g生藥量。
[0052]1.4主要試劑
[0053]10%水合氯酵(北京化學試劑有限公司)，甲醛溶液分析醇(國藥集團化學試劑有限公司)，二甲苯(北京化學試劑有限公司)，伊紅染料、蘇木精(北京化學試劑有限公司)，油紅O試劑(Sigma)，生理鹽水(北京雙鶴藥業有限責任公司)。
[0054]1.5主要儀器
[0055]全自動石賭包埋機(Leica),全自動石錯切片機(Leica),顯微鏡(Olympus),顯微照相系統(Olympus),冰凍病理切片機(Leica),分析天平,超低溫保存冰箱(Sanyo),電子天平(上海第二天平儀器廠)，標尺。
[0056]1.6主要試劑的配制
[0057]油紅O染液:油紅O原液30ml，蒸餾水20ml，二者混合lOmin，真空過濾待用。
[0058]磷鑰酸水溶 液:磷鑰酸lg，蒸餾水100mL，混勻待用。
[0059]2實驗方法
[0060]2.1分組設計
[0061]適應性飼養一周后，開始給予高脂飼料喂養造模，自造模之日起，采用隨機數字表法，隨機選取9只大鼠作為正常對照組。其余大鼠以高脂飼料造模，至第7周，采用隨機數字表法，將造模大鼠隨機分為模型組8只、干預組27只。干預組又分為本發明組合物低劑量組(10ml/kg) 9只、中劑量組(20ml/kg) 9只、高劑量組(30ml/kg) 9只。
[0062]2.2造模方法
[0063]以高脂飼料飼養大鼠12周的方法誘導非酒精性脂肪肝(NAFLD)。模型組與干預組每天給予充足的高脂飼料讓其自由進食。
[0064]2.3給藥方式
[0065]于造模后第4周隨機麻醉后處死模型組大鼠I只，取肝臟組織作病理檢測，觀察造模情況。干預組在高脂飼料喂養6周后，即自第7周開始以本發明組合物干預治療，低劑量組按10ml/kg、中劑量組按20ml/kg、高劑量組按30ml/kg分別灌胃給藥,分別相當于60Kg體重成人用藥量的6倍、12倍、18倍；正常對照組與模型組大鼠予以生理鹽水按10ml/kg灌胃，各組均每日灌胃I次。實驗至12周末(即療程6周)，禁食不禁水24小時后，腹主動脈取血后取材。
[0066]2.4觀察各組大鼠肝臟組織病理形態學變化
[0067]于造模第4周隨機選取I只大鼠，取材進行HE染色、油紅O染色及Masson三重染色觀察肝臟病理形態。至療程6周末，禁食不禁水24小時后，稱重，10%水合氯酸(0.35ml/100g)腹腔注射麻醉，剖開腹腔，肉眼觀察肝臟的形態、色澤等情況，并于冰上快速摘取肝臟，生理鹽水清洗，稱肝濕重，按照前述方法計算肝指數，取肝臟右葉1/2用錫紙包裹，快速送病理科制作冰凍切片，行油紅O染色；并取肝臟右葉其余1/2，用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋 ，常規切片作HE染色和Masson三重染色。顯微鏡下觀察，每張切片取5個IOX 10低倍鏡視野。
[0068]2.4.1油紅O染色方法
[0069]①用蒸餾水浸洗冰凍切片?，②60%異丙醇浸洗0.5min ;③油紅O染液染色15min ；
④60%異丙醇漂洗5s;⑤流水沖洗，再用蒸餾水洗；⑥蘇木素復染0.5min.自來水沖洗，再用蒸餾水洗；⑧中性樹膠封固。
[0070]2.4.2HE 染色方法
[0071]①肝臟組織用4%多聚甲醛固定24~48h 50%、60%、70%、80%、90%、95%酒精梯度脫水各30min，100%酒精30minX2次；③二甲苯透明Ih ;④二甲苯、52°C石蠟等量混合液預浸30min，再浸蠟3h ;⑤包埋，再于4°C冰箱過夜。作4 μ m切片，46°C撈片后，放入72°C烘箱內烤片4h ;⑥二甲苯脫蠟5~10minX2次；? 100%酒精5minX2次，95%、90%、85%、80%、75%酒精各5min，自來水洗3min ;⑧蘇木精染色3min，自來水沖洗lmin，1%鹽酸酒精分化20s，自來水沖洗2min終止分化并反藍，伊紅染色30s，自來水洗30s，70%、80%、90%、95%酒精各脫水lmin、100%酒精脫水2minX2次，二甲苯透明2minX2次；⑨中性樹膠封固。
[0072]2.4.3Masson三重染色方法
[0073]①石蠟切片脫蠟至水，蒸餾水洗；②地衣紅染液染色60min，蒸餾水洗3min ;③蘇木素染液染色5min，再用鹽酸分化水洗返藍，蒸餾水洗麗春紅、酸性復紅液染色IOmin ；
⑤冰醋酸水溶液浸洗lmin，蒸餾水洗；⑥磷鑰酸水溶液浸洗5min至膠原纖維為無色；⑦冰醋酸水溶液浸洗30s，再在亮綠染液染色Imin ;⑧冰醋酸水溶液浸洗30s 無水乙醇脫水，二甲苯透明；⑩中性樹膠封固。
[0074]3實驗結果
[0075]于造模第4周，隨機取材I只，行HE染色和冰凍切片油紅O染色，光鏡下觀察可見肝臟組織彌漫性大泡性脂肪變，肝細胞氣球樣變，胞漿內充滿著大量大小不等脂滴，可見片狀紅染區域，提示NAFLD造模成功。
[0076]于干預結束取材，進行病理觀察分析如下所述。
[0077]3.1肉眼觀察
[0078]正常對照組:肝臟外觀形態大小正常，呈紅褐色，表面光滑有光澤，邊緣銳利，質韌，與周圍組織無粘連，腎周和附睪周圍含有少量脂肪組織。
[0079]模型組:肝臟體積明顯增大，肝葉形態飽滿，重量明顯增加，呈紅黃相間或略顯蒼白，包膜緊張，表面粗糙，呈油膩感，邊緣圓鈍，質地軟，與周圍組織有明顯粘連，腎周和附睪周圍含有大量脂肪組織。
[0080]本發明組合物低劑量組:肝臟體積明顯增大，肝葉形態飽滿，重量明顯增加，呈磚紅色或紅黃白相間，表面粗糙，呈油膩感，邊緣鈍，質地軟，與周圍組織輕度粘連，腎周和附睪周圍含有大量脂肪組織。
[0081]本發明組合物中劑量組:肝臟體積增大，肝葉形態略飽滿，重量增加，呈磚紅色或紅黃白相間，表面略粗糙，略呈油膩感，邊緣略頓，質稍韌，與周圍組織稍有粘連，腎周和附睪周圍含少有量脂肪組織。
[0082]本發明組合物高劑量組:肝臟體積近似正常對照組，呈磚紅色，表面略光滑，稍油膩感，邊緣略銳利，質稍韌，與周圍組織無粘連，腎周和附睪周圍含少有量脂肪組織。 [0083]3.2HE染色結果
[0084]正常對照組:肝臟組織結構完整、清晰，匯管區小動脈、小靜脈及膽管結構正常，肝索以中央靜脈為中心呈放射狀排列，結構清楚，界板完整，肝索與肝竇比例正常，肝細胞沿著肝竇呈放射狀，排列整齊，肝細胞為單核或雙核，核結構清晰無異常，胞漿粉染，顆粒大小均勻一致，無明顯炎癥改變。
[0085]模型組:肝臟組織可見重度彌漫性大泡性脂肪變，肝細胞氣球樣變，肝索排列紊舌L無放射狀排列，肝細胞腫脹，胞漿內充滿著大量大小不等脂滴，肝細胞核明顯偏位，炎癥明顯，肝細胞內可見中性粒細胞浸潤，小葉內可見部分壞死灶，炎性細胞浸潤至匯管區，可見大量炎性細胞聚集。
[0086]本發明組合物低劑量組:肝臟組織可見肝組織輕度彌漫性大泡性脂肪變，肝細胞氣球樣變明顯減少，部分肝細胞內有細小脂滴，肝細胞腫脹不明顯，未見肝細胞壞死和炎性細胞浸潤。
[0087]本發明組合物中劑量組:肝細胞脂肪變不明顯，無氣球樣變，肝小葉和肝血竇結構清晰，細胞結構完整，未見肝細胞壞死和炎性細胞浸潤。
[0088]本發明組合物高劑量組:肝細胞脂肪變不明顯，無氣球樣變，肝小葉和肝血竇結構清晰，細胞結構完整，未見肝細胞壞死和炎性細胞浸潤。
[0089]3.3Masson三重染色結果
[0090]正常對照組:肝小葉結構完整，無纖維組織增生。
[0091]模型組:可見匯管區、匯管區周圍、竇周纖維化，纖維間隔內纖維組織增生明顯，有炎細胞浸潤，但未形成假小葉。
[0092]本發明組合物低劑量組:肝纖維化較模型組減輕，炎性細胞浸潤及結締組織形成減少，纖維間隔變薄，未見假小葉。[0093]本發明組合物中劑量組:肝纖維化較模型組明顯減輕，炎性細胞浸潤及結締組織形成明顯減少，纖維間隔顯著變薄，未見假小葉。
[0094]本發明組合物高劑量組:肝纖維化較模型組明顯減輕，炎性細胞浸潤及結締組織形成明顯減少，纖維間隔顯著變薄，未見假小葉。
[0095]3.4油紅O染色結果
[0096]正常對照組:肝臟背景呈淡藍色，無明顯脂滴著色，未見明顯紅色區域。
[0097]模型組:肝組織可見大片紅色區域，顏色較深，顯示肝細胞胞漿內脂滴彌漫、分布密集，肝小葉內脂滴融合成片，小葉內含脂滴細胞數/總細胞數約為43-54%。
[0098]本發明組合物低劑量組:可見紅色區域減少，顏色變淺，小葉內含脂滴細胞數/總細胞數約為35-45%。
[0099]本發明組合物中劑量組:可見紅色區域顯著減少，顏色明顯變淺，小葉內含脂滴細胞數/總細胞數約為2-10%。
[0100]本發明組合物高劑量組:可見紅色區域顯著減少，顏色明顯變淺，小葉內含脂滴細胞數/總細胞數約為2-8%。
[0101]4 結論 [0102]上述肝臟病理觀察結果顯示，模型組呈現典型的NAFLD表現，本發明組合物可使其明顯改善。
[0103]實驗例2本發明組合物對非酒精性脂肪肝大鼠AdipoR2、AdipoRl表達的影響
[0104]I實驗材料
[0105]1.1實驗動物及藥物
[0106]同實驗例I。
[0107]1.2主要試劑
[0108]超純RNA提取試劑盒(CWbi0.C0.Ltd), HiF1-MMLV cDNA第一鏈合成試劑盒(Cffbi0.C0.Ltd), PCR Mixture (CWbi0.C0.Ltd), DNasel (CWbi0.C0.Ltd), DEPC (Sigma),擴增引物(北京環亞泰克生物醫學技術有限公司)，DNA Marker (Santa Cruz),組織裂解液(北京索萊寶科技有限公司)，瓊脂糖(Promega)。
[0109]1.3主要儀器
[0110]超純水系統(Mi 11 ipore ),高速低溫離心機(Eppendorf ), PCR擴增儀(杭州博日科技有限公司)，電泳儀(Amersham),垂直電泳槽(Amersham),凝膠成像圖像分析系統(MediaCybernetics),半干轉膜儀(Amersham),電熱恒溫水浴箱(北京市六一儀器廠)。
[0111]1.4主要試劑的配制
[0112]丙烯酞胺凝膠貯備液:將29.2g丙烯酞胺溶解在60ml雙蒸去離子水中，加入0.SgN, N-亞甲雙丙烯酞胺，再用雙蒸水定容至100mL，過濾，4°C避光保存于棕色瓶中。
[0113]濃縮膠緩沖液:將6.0g Tris溶解于60ml雙蒸去離子水中，用HCl調整PH至6.8，用雙蒸水定容至100ml，4°C保存。
[0114]分離膠緩沖液:將18.15g Tris溶解于50ml雙蒸去離子水中，用HCl調整pH至
8.8，雙蒸水定容至100ml，4°C保存。
[0115]10%SDS:將IOg SDS溶于90ml雙蒸去離子水中，再用雙蒸水定容至100ml。
[0116]IOX電泳緩沖液:將30.3g Tris、144.09甘氨酸和10.0g SDS用雙蒸水定容至1000ml，用時用雙蒸水稀釋10倍。
[0117]10%過硫酸胺:將1.0g過硫酸胺溶于IOml雙蒸去離子水中。
[0118]轉移緩沖液:甘氨酸14.4g，Tris3.03g溶于0.4L雙蒸去離子水中。
[0119]加樣緩沖液:0.5M Tris-HCI (pH6.8) 1.25ml, 10%SDS2.0ml,0.5% 溴酚藍 0.5ml,甘油2.5ml，蒸餾水3.25ml，混勻后置室溫保存。
[0120]DEPC水:將DEPClml溶于1000ml雙蒸水中搖勻，置室溫下過夜，次日高壓20min，冷卻后置于4°C冰箱保存。
[0121]L 5引物設計
[0122]脂聯素受體AdipoR2、AdipoRl引物由北京環亞泰克生物醫學技術有限公司合成。相關引物用Primerf軟件在線設計，并在基因庫中進行比對，合成引物序列如表1所示。
[0123]表1大鼠肝臟脂聯素受體RT-PCR引物序列
[0124]
【權利要求】
1.一種治療脂肪肝的中藥組合物，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 柴胡5-50重量份、枳殼5-50重量份、茵陳15-150重量份、桅子4_50重量份、大黃2_30重量份、澤灣15-150重量份、白術8-100重量份、半夏4-50重量份、厚樸4_50重量份、薏該仁10-120重量份、白蘧仁2-30重量份、滑石8-100重量份、陳皮6_80重量份、川芎4_50重量份、香附6-80重量份、白茍10-120重量份、甘草2-30重量份。
2.如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 柴胡6-45重量份、枳殼6-45重量份、茵陳18-120重量份、桅子5_40重量份、大黃3_25重量份、澤灣18-120重量份、白術10-80重量份、半夏5-40重量份、厚樸5_40重量份、薏該仁12-100重量份、白蘧仁3-25重量份、滑石10-80重量份、陳皮8_70重量份、川芎5_40重量份、香附8-70重量份、白茍12-100重量份、甘草3-25重量份。
3.如權利要求2所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 柴胡7-30重量份、枳殼7-30重量份、茵陳20-90重量份、桅子6_30重量份、大黃4_20重量份、澤瀉20-90重量份、白術12-60重量份、半夏6-30重量份、厚樸6_30重量份、薏苡仁15-70重量份、白蘧仁4-20重量份、滑石12-60重量份、陳皮10-50重量份、川芎6_30重量份、香附10-50重量份、白茍15-70重量份、甘草4-20重量份。
4.如權利要求3所 述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 柴胡10重量份、枳殼10重量份、茵陳30重量份、桅子9重量份、大黃6重量份、澤瀉30重量份、白術15重量份、半夏9重量份、厚樸9重量份、薏苡仁20重量份、白蘧仁6重量份、滑石15重量份、陳皮12重量份、川芎9重量份、香附12重量份、白芍20重量份、甘草6重量份； 或，柴胡9重量份、枳殼15重量份、茵陳25重量份、桅子12重量份、大黃5重量份、澤瀉40重量份、白術13重量份、半夏12重量份、厚樸8重量份、薏苡仁30重量份、白蘧仁5重量份、滑石25重量份、陳皮11重量份、川芎12重量份、香附11重量份、白芍30重量份、甘草5重量份； 或，柴胡15重量份、枳殼9重量份、茵陳40重量份、桅子8重量份、大黃8重量份、澤瀉25重量份、白術25重量份、半夏8重量份、厚樸12重量份、薏苡仁18重量份、白蘧仁8重量份、滑石13重量份、陳皮20重量份、川芎8重量份、香附20重量份、白芍18重量份、甘草8重量份。
5.如權利要求1-4任一所述的中藥組合物的制備方法，該方法是直接將上述比例的原料藥粉碎后混合制得，或按常規提取工藝提取制備，或提取后進一步純化精制，或純化精制后進一步加入常規輔料按常規制劑工藝制備成顆粒劑、片劑、膠囊劑、滴丸劑、口服液、混懸液、乳濁液、注射劑。
6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述常規提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲漉提取中的一種或幾種方式； 所述提取溶劑為水或與水互溶的有機溶劑； 所述純化精制方法包括水提醇沉、萃取或經過大孔樹脂柱純化、硅膠柱純化。
7.一種治療脂肪肝的中藥組合物，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 柴胡提取物6-45重量份、枳殼提取物6-45重量份、茵陳提取物18-120重量份、桅子提取物5-40重量份、制大黃提取物3-25重量份、澤瀉提取物18-120重量份、炒白術提取物10-80重量份、半夏提取物5-40重量份、厚樸提取物5-40重量份、薏苡仁提取物12-100重量份、白蘧仁提取物3-25重量份、滑石10-80重量份、陳皮提取物8-70重量份、川芎提取物5-40重量份、香附提取物8-70重量份、炒白芍提取物12-100重量份、甘草提取物3_25重量份。
8.如權利要求7所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 柴胡提取物10重量份、枳殼提取物10重量份、茵陳提取物30重量份、桅子提取物9重量份、制大黃提取物6重量份、澤瀉提取物30重量份、炒白術提取物15重量份、半夏提取物9重量份、厚樸提取物9重量份、薏苡仁提取物20重量份、白蘧仁提取物6重量份、滑石15重量份、陳皮提取物12重量份、川芎提取物9重量份、香附提取物12重量份、炒白芍提取物20重量份、甘草提取物6重量份； 或，柴胡提取物9重量份、枳殼提取物15重量份、茵陳提取物25重量份、桅子提取物12重量份、制大黃提取物5重量份、澤瀉提取物40重量份、炒白術提取物13重量份、半夏提取物12重量份、厚樸提取物8重量份、薏苡仁提取物30重量份、白蘧仁提取物5重量份、滑石25重量份、陳皮提取物11重量份、川芎提取物12重量份、香附提取物11重量份、炒白芍提取物30重量份、甘草提取物5重量份； 或，柴胡提取物15重量份、枳殼提取物9重量份、茵陳提取物40重量份、桅子提取物8重量份、制大黃提取物8重量份、澤瀉提取物25重量份、炒白術提取物25重量份、半夏提取物8重量份、厚樸提取物12重量份、薏苡仁提取物18重量份、白蘧仁提取物8重量份、滑石13重量份、陳皮提取物20重量份、川芎提取物8重量份、香附提取物20重量份、炒白芍提取物18重量份、甘草提取物8重量份。
9.如權利要求1-8任一所述中藥組合物在制備治療脂肪肝藥物中的應用。
10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，所述脂肪肝為非酒精性脂肪肝。
【文檔編號】A61K9/10GK103933411SQ201410092880
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年3月13日 優先權日:2014年3月13日
【發明者】魏瑋 申請人:魏瑋