Plga改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，包括以下步驟：步驟1，用羧甲基殼聚糖、人重組脂聯(lián)素、人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白、三磷酸鈉制備載藥殼聚糖微球；步驟2，選用新生小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端作為骨原料，通過改性劑對骨原料行改性，然后800℃～1100℃溫度條件下煅燒改性后的骨原料以徹底去除骨材料的免疫抗原性，獲得改性煅燒骨粉；步驟3，用聚乳酸-羥基乙酸、改性煅燒骨粉和載藥殼聚糖微球制備PLGA改型載生物因子微球骨替代材料。本發(fā)明方法所制備的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料具有一定形態(tài)和機(jī)械強(qiáng)度，同時(shí)能緩釋促進(jìn)骨形成的生物活性因子，又能在骨缺損局部釋放鈣、磷離子。
【專利說明】PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)用生物材料制備【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種載生物因子且緩釋的具有高活性的骨缺損修復(fù)材料的制備方法，該材料可應(yīng)用于機(jī)體骨缺損的修復(fù)。
【背景技術(shù)】
[0002]脂聯(lián)素(Adiponectin，APN)是動(dòng)物及人類脂肪細(xì)胞分泌的一種激素，由247個(gè)氨基酸組成，存在2種受體(AdipoRl和AdipoR2)，成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞均表達(dá)脂聯(lián)素受體。體外實(shí)驗(yàn)證明，脂聯(lián)素激活A(yù)dipoRl / JNK, AdipoRl / p38信號(hào)通路誘導(dǎo)人成骨細(xì)胞的增殖及分化，促進(jìn)其成骨功能。同時(shí)，脂聯(lián)素處理小鼠單核細(xì)胞后，可抑制NF-kappa B通路的激活，進(jìn)而抑制小鼠單核細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化成熟。體內(nèi)動(dòng)物研究亦表明，過表達(dá)脂聯(lián)素的腺病毒轉(zhuǎn)染C57BL/6J小鼠后，成骨細(xì)胞功能被激活，破骨細(xì)胞骨吸收作用被抑制，最終表現(xiàn)為骨量增加。上述研究表明，脂聯(lián)素在骨代謝過程中起重要的調(diào)控作用。
[0003]骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins, BMPs)是目前發(fā)現(xiàn)唯一能夠單獨(dú)誘導(dǎo)成骨的生長因子，其中以BMP-2的成骨能力最強(qiáng)。但它們半衰期短，局部應(yīng)用時(shí)很快被稀釋和代謝。
[0004]生物可降 解脂肪族聚酯材料PLGA (聚乳酸-羥基乙酸共聚物)作為骨組織工程材料已經(jīng)引起廣泛關(guān)注。PLGA是一種優(yōu)良的體內(nèi)可吸收降解的醫(yī)用高分子材料，可被機(jī)體分解為乳酸，后經(jīng)代謝以二氧化碳和水排出體外，無任何殘留。PLGA對人體不致敏、無毒、無刺激，并且易加工，已獲得FDA認(rèn)證，并作為醫(yī)用生物材料在臨床上廣泛應(yīng)用，如用于制作可吸收手術(shù)縫合線、接骨板和螺釘、血管吻合器和藥物緩釋載體。
[0005]但脂肪族聚酯材料類材料的惰性表面沒有可供細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別的特定位置信息，并存在親水性和細(xì)胞親和性不足等缺點(diǎn)，影響了成骨細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞在其表面的黏附生長，成為制約其作為理想組織工程支架材料的主要障礙之一。納米羥基磷灰石(nHA)和β磷酸三鈣微結(jié)構(gòu)類似于天然骨基質(zhì)，并與天然骨內(nèi)無機(jī)礦物質(zhì)有相近的尺寸，有助于人體細(xì)胞和大分子對其識(shí)別，從而可提高材料的生物活性、利用度和生物相容性；同時(shí)nHA釋放的鈣和磷等離子可以參與骨代謝，能更好地促進(jìn)骨的形成，但由于其強(qiáng)度低，脆性大，使應(yīng)用受限。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供PLGA (聚乳酸-羥基乙酸共聚物)改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，所制得的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料是一種機(jī)械強(qiáng)度較高，易于降解同時(shí)具有骨誘導(dǎo)特性的新型骨修復(fù)材料。
[0007]—種PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于:所述方法包括以下步驟:
[0008]步驟1，制備載藥殼聚糖微球:將1500~2000重量份羧甲基殼聚糖溶于酸性溶液中形成第一溶液；將I~2重量份人重組脂聯(lián)素(recombinant human globularadiponectin，rh-gAPN)和I~2重量份人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白(rhBMP-2)在酸性溶液中溶解形成第二溶液；將第一溶液和第二溶液溶于含2wt%斯盤-80的液體石蠟中，于室溫(20~25°C)下攪拌均勻形成乳液；將交聯(lián)劑緩慢滴入上述乳液中，通過攪拌使交聯(lián)充分完成；依次用石油醚、異丙醇和雙蒸水反復(fù)洗滌交聯(lián)后的產(chǎn)物，凍干后即得載藥殼聚糖微球；
[0009]步驟2，選用小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端作為骨原料，經(jīng)去離子水充分蕩洗后利用改性劑對骨原料行改性，使骨基質(zhì)的Ca/P原子比降至1.66~1.5 ;然后在800°C~1100°C溫度條件下煅燒改性后的骨原料徹底去除骨材料的免疫抗原性，獲得改性煅燒骨粉；所述小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端優(yōu)選新生小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端或月齡I至3的小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端。
[0010]步驟3，將5~8重量份聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氧六環(huán)中，加入2~6重量份改性煅燒骨粉，充分?jǐn)嚢韬蠹尤隝~5重量份所述載藥殼聚糖微球并充分?jǐn)噭颍谷肫矫笾杏诶鋬鲞^夜，凍干后即得PLGA改型載生物因子微球骨替代材料。
[0011]如上所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，優(yōu)選的:步驟1，制備載藥殼聚糖微球:將1750重量份羧甲基殼聚糖溶于酸性溶液中形成第一溶液；將I重量份人重組脂聯(lián)素和I重量份人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白在酸性溶液中溶解形成第二溶液；將第一溶液和第二溶液溶于含2wt%斯盤-80的液體石蠟中，于室溫下攪拌均勻形成乳液；將交聯(lián)劑緩慢滴入上述乳液中，通過攪拌使交聯(lián)充分完成；依次用石油醚、異丙醇和雙蒸水反復(fù)洗滌交聯(lián)后的產(chǎn)物，凍干后即得載藥殼聚糖微球。
[0012]如上所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，優(yōu)選的:步驟3，將4重量份聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氧六環(huán)中，加入6重量份改性煅燒骨粉，充分?jǐn)嚢韬蠹尤?重量份載藥 殼聚糖微球并充分?jǐn)噭颍谷肫矫笾杏赺20°C冷凍過夜，凍干72h后即得PLGA改型載生物因子微球骨替代材料。
[0013]如上所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，優(yōu)選的:所述改性煅燒骨粉的骨基質(zhì)晶相羥基磷灰石:β -磷酸三鈣=1:3。
[0014]如上所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，優(yōu)選的:所述酸性溶液是體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液。
[0015]如上所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，優(yōu)選的:所述改性劑選自磷酸氫二銨、磷酸二氫銨和磷酸中的一種或幾種。
[0016]如上所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，優(yōu)選的:所述交聯(lián)劑為三磷酸鈉水溶液，優(yōu)選質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%。
[0017]本發(fā)明方法所制備的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料中:微球直徑均勻，載藥支架孔徑大小合適并相互穿通，支架材料對成骨細(xì)胞前體細(xì)胞具有促增殖作用。另外，PLGA改型載生物因子微球骨替代材料是一種新穎的雙因子緩釋復(fù)合載體，對于研究雙因子緩釋時(shí)的協(xié)同效應(yīng)具有重要意義。
[0018]本發(fā)明方法有機(jī)結(jié)合各種骨缺損修復(fù)材料，制備了滿足臨床上骨缺損修復(fù)時(shí)的要求的骨替代材料，即本發(fā)明方法所制備的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料具有一定形態(tài)和機(jī)械強(qiáng)度，同時(shí)能緩釋促進(jìn)骨形成的生物活性因子，又能在骨缺損局部釋放鈣、磷離子。【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1所制備的載藥殼聚糖微球示意圖；
[0020]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1改性煅燒骨粉XRD衍射結(jié)果圖；
[0021]圖3為本發(fā)明實(shí)施例1PLGA改型載生物因子微球骨替代材料示意圖；
[0022]圖4為本發(fā)明PLGA改型載生物因子微球骨替代材料體外緩釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0023]圖5為本發(fā)明PLGA改型載生物因子微球骨替代材料對成骨細(xì)胞增殖能力的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0024]以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0025]實(shí)施例1
[0026]PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法包括以下步驟:
[0027]制備載藥殼聚糖微球:將900mg羧甲基殼聚糖溶于29ml體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液中形成第一溶液； 將500 μ g人重組脂聯(lián)素和500 μ g重量份人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白(本實(shí)施例中為rhBMP-2,Genscript Pharmaceuticals,Korea)在Iml體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液中溶解形成第二溶液；將第一溶液和第二溶液溶于300ml含2wt%斯盤-80的液體石蠟中，于室溫下攪拌均勻形成乳液；將70mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的TPP溶液緩慢滴入上述乳液中，通過攪拌使交聯(lián)充分完成；依次用石油醚、異丙醇和雙蒸水反復(fù)洗滌交聯(lián)后的產(chǎn)物，凍干后即得載藥殼聚糖微球，其電鏡掃描圖如圖1所示。
[0028]選用新生小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端作為骨原料，經(jīng)去離子水充分蕩洗后利用磷酸氫二銨對骨原料行改性，使骨基質(zhì)的Ca/P原子比降至1.5 ;然后在1000°C溫度條件下煅燒改性后的骨原料徹底去除骨材料的免疫抗原性，獲得改性煅燒骨粉。如圖2所示，XRD衍射結(jié)果圖表明，改性煅燒骨粉的骨基質(zhì)晶相羥基磷灰石:β_磷酸三鈣=1:3。
[0029]將720mg聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于12ml 二氧六環(huán)中，加入1080mg改性煅燒骨粉，充分?jǐn)嚢韬蠹尤?00mg載藥殼聚糖微球并充分?jǐn)噭颍谷肫矫笾杏?20°C冷凍過夜，凍干72h后即得PLGA改型載生物因子微球骨替代材料，其電鏡掃描圖片如圖3所示。
[0030]實(shí)施例2
[0031]PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法包括以下步驟:
[0032]制備載藥殼聚糖微球:將1500mg羧甲基殼聚糖溶于40ml體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液中形成第一溶液；將Img人重組脂聯(lián)素和Img重量份人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白(本實(shí)施例中為rhBMP-2,Genscript Pharmaceuticals,Korea)在2ml體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液中溶解形成第二溶液；將第一溶液和第二溶液溶于500ml含2wt%斯盤-80的液體石蠟中，于室溫下攪拌均勻形成乳液；將含5mg三磷酸鈉的溶液緩慢滴入上述乳液中，通過攪拌使交聯(lián)充分完成；依次用石油醚、異丙醇和雙蒸水反復(fù)洗滌交聯(lián)后的產(chǎn)物，凍干后即得載藥殼聚糖微球。
[0033]選用新生小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端作為骨原料，經(jīng)去離子水充分蕩洗后利用磷酸二氫銨對骨原料行改性，使骨基質(zhì)的Ca/P原子比降至1.6 ;然后在800°C溫度條件下煅燒改性后的骨原料徹底去除骨材料的免疫抗原性，獲得改性煅燒骨粉。[0034]將500mg聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于IOml 二氧六環(huán)中，加入600mg改性煅燒骨粉，充分?jǐn)嚢韬蠹尤?00mg載藥殼聚糖微球并充分?jǐn)噭颍谷肫矫笾杏赺20°C冷凍過夜，凍干72h后即得PLGA改型載生物因子微球骨替代材料。
[0035]實(shí)施例3
[0036]PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法包括以下步驟:
[0037]制備載藥殼聚糖微球:將2000mg羧甲基殼聚糖溶于50ml體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液中形成第一溶液df2mg人重組脂聯(lián)素和2mg重量份人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白(本實(shí)施例中為rhBMP-2,Genscript Pharmaceuticals,Korea)在5ml體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液中溶解形成第二溶液；將第一溶液和第二溶液溶于600ml含2wt%斯盤-80的液體石蠟中，于室溫下攪拌均勻形成乳液；將含8mg三磷酸鈉的溶液緩慢滴入上述乳液中，通過攪拌使交聯(lián)充分完成；依次用石油醚、異丙醇和雙蒸水反復(fù)洗滌交聯(lián)后的產(chǎn)物，凍干后即得載藥殼聚糖微球。
[0038]選用新生小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端作為骨原料，經(jīng)去離子水充分蕩洗后利用磷酸對骨原料行改性，使骨基質(zhì)的Ca/P原子比降至1.66 ;然后在1100°C溫度條件下煅燒改性后的骨原料徹底去除骨材料的免疫抗原性，獲得改性煅燒骨粉。
[0039]將800mg聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于12ml 二氧六環(huán)中，加入200mg改性煅燒骨粉，充分?jǐn)嚢韬蠹尤?OOmg載藥殼聚糖微球并充分?jǐn)噭颍谷肫矫笾杏?20°C冷凍過夜，凍干72h后即得PLGA改型載生物因子微球骨替代材料。
[0040]實(shí)施例4
[0041]PLGA改型微球骨替代材料的制備方法包括以下步驟:
[0042]制備空白殼聚糖微球:將900mg羧甲基殼聚糖溶于29ml體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液中形成第一溶液；將第一溶液溶于300ml含2wt%斯盤-80的液體石蠟中，于室溫下攪拌均勻形成乳液；將含3.5mg三磷酸鈉的溶液緩慢滴入上述乳液中，通過攪拌使交聯(lián)充分完成；依次用石油醚、異丙醇和雙蒸水反復(fù)洗滌交聯(lián)后的產(chǎn)物，凍干后即得空白殼聚糖微球。
[0043]選用新生小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端作為骨原料，經(jīng)去離子水充分蕩洗后利用磷酸氫二銨對骨原料行改性，使骨基質(zhì)的Ca/P原子比降至1.5 ;然后在1000°C溫度條件下煅燒改性后的骨原料徹底去除骨材料的免疫抗原性，獲得改性煅燒骨粉。
[0044]將720mg聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于12ml 二氧六環(huán)中，加入1080mg改性煅燒骨粉，充分?jǐn)嚢韬蠹尤?00mg空白殼聚糖微球并充分?jǐn)噭颍谷肫矫笾杏赺20°C冷凍過夜，凍干72h后即得PLGA改型微球骨替代材料。
[0045]實(shí)驗(yàn)例I
[0046]PLGA改型載生物因子微球骨替代材料體外生物活性因子緩釋檢測
[0047]將50mg實(shí)施例1制備的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料和5mLPBS緩沖液加入到離心管中，置于37°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，IOd內(nèi)每天同一時(shí)間取樣I次，取樣前先將樣品懸浮液于12000r/min下高速離心5min，取液50 μ L，用BCA法檢測PLGA改型載生物因子微球骨替代材料中生物活性因子的釋放量。每次取樣后向離心管中補(bǔ)加新鮮配的PBS緩沖液50 μ L。圖4所示的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的生物活性因子在體外穩(wěn)定緩釋至少可達(dá)60天。用實(shí)施例2和實(shí)施例3制備的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，生物活性因子在體外穩(wěn)定緩釋至少可達(dá)56天。[0048]實(shí)驗(yàn)例2
[0049]PLGA改型載生物因子微球骨替代材料對成骨細(xì)胞增殖能力的影響
[0050]在96孔板中每孔加入5 X IO5個(gè)MC3T3細(xì)胞，隔日加入實(shí)施例1制備的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的浸提液，于10%FBS的DMEM中復(fù)合培養(yǎng)24和48小時(shí)后終止培養(yǎng)，利用CCK8試劑盒進(jìn)行檢測，得到各組實(shí)驗(yàn)的OD值。以實(shí)施例4制備的PLGA改型微球骨替代材料為陰性對照，每個(gè)樣品設(shè)5個(gè)復(fù)孔。使用本方法制備的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料，將其浸提液處理成骨細(xì)胞的前體細(xì)胞，觀察PLGA改型載生物因子微球骨替代材料釋放的生物活性因子在體外條件下是否具有促進(jìn)成骨細(xì)胞的前體細(xì)胞增殖的作用。如圖5所示結(jié)果表明，在24小時(shí)和48小時(shí)，用浸提液處理的細(xì)胞增殖情況均優(yōu)于對照組，尤其是在48小時(shí)，細(xì)胞增殖是對照組的1.2倍。用實(shí)施例2和實(shí)施例3制備的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，在48小時(shí)細(xì)胞增殖均為對照組的1.15倍。
[0051 ] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任 何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于:所述方法包括以下步驟: 步驟1，制備載藥殼聚糖微球:將1500~2000重量份羧甲基殼聚糖溶于酸性溶液中形成第一溶液；將I~2重量份人重組脂聯(lián)素和I~2重量份人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白在酸性溶液中溶解形成第二溶液；將第一溶液和第二溶液溶于含I~3wt%斯盤80的液體石蠟中，于室溫下攪拌均勻形成乳液；將交聯(lián)劑緩慢滴入上述乳液中，通過攪拌使交聯(lián)充分完成；依次用石油醚、異丙醇和雙蒸水反復(fù)洗滌交聯(lián)后的產(chǎn)物，凍干后即得載藥殼聚糖微球； 步驟2，選用小牛關(guān)節(jié)頭或脛骨的骨骺端作為骨原料，經(jīng)去離子水充分蕩洗后利用改性劑對骨原料行改性，使骨基質(zhì)的Ca/P原子比降至1.66~1.5 ;然后在800°C~1100°C溫度條件下煅燒改性后的骨原料以徹底去除骨材料的免疫抗原性，獲得改性煅燒骨粉； 步驟3，將5~8重量份聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氧六環(huán)中，加入2~6重量份所述改性煅燒骨粉，充分?jǐn)嚢韬蠹尤隝~5重量份載藥殼聚糖微球并充分?jǐn)噭颍谷肫矫笾欣鋬鲞^夜，凍干后即得PLGA改型載生物因子微球骨替代材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于:步驟1，制備載藥殼聚糖微球:將1750重量份羧甲基殼聚糖溶于酸性溶液中形成第一溶液；將I重量份人重組脂聯(lián)素和I重量份人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白在酸性溶液中溶解形成第二溶液；將第一溶液和第二溶液溶于含2wt%斯盤-80的液體石蠟中，于室溫下攪拌均勻形成乳液；將交聯(lián)劑緩慢滴入上述乳液中，通過攪拌使交聯(lián)充分完成；依次用石油醚、異丙醇和雙蒸水反復(fù)洗滌交聯(lián)后的產(chǎn)物，凍干后即得載藥殼聚糖微球。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于:步驟3，將4重量份聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氧六環(huán)中，加入6重量份改性煅燒骨粉，充分?jǐn)嚢韬蠹尤?重量份載藥殼聚糖微球并充分?jǐn)噭颍谷肫矫笾杏赺20°C冷凍過夜，凍干72h后即得PLGA改型載生物因子微球骨替代材料。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于，所述改性煅燒骨粉的骨基質(zhì)晶相羥基磷灰石:β -磷酸三鈣=1:3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于，所述酸性溶液是體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于，所述改性劑選自磷酸氫二銨、磷酸二氫銨和磷酸中的一種或幾種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于，所述交聯(lián)劑為三磷酸鈉水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于，所述三磷酸鈉水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的PLGA改型載生物因子微球骨替代材料的制備方法，其特征在于，所述人重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白為rhBMP-2。
【文檔編號(hào)】A61L27/18GK103933610SQ201410136635
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月4日
【發(fā)明者】唐志輝, 毋育偉, 李箐 申請人:北京大學(xué)口腔醫(yī)院