一種增強大菱鲆免疫力的中藥組合物的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種用于提高大菱鲆免疫力的中藥組合物及其制備方法，屬于海洋魚類藥物【技術領域】。其特征是以紫錐菊、茯苓、白花蛇舌草、板藍根依一定比例配比而組成。本發明藥物應用于給予鰻弧菌疫苗基礎免疫后的大菱鲆，能夠顯著增強大菱鲆的免疫力，從而有效減少魚類的死亡，降低大菱鲆養殖的損失。
【專利說明】一種增強大菱鲆免疫力的中藥組合物
【技術領域】
[0001]本發明屬于海洋魚類藥物【技術領域】，具體涉及一種增強大菱鲆免疫力的中藥組合物及其制備方法。 【背景技術】
[0002]大菱鲆隸屬于鰈形目，鲆科，菱鲆屬，是一種冷水底棲海水魚類,原產于大西洋東北部、北海、地中海及波羅的海等海域。大菱鲆因具有肉質好，營養價值高，生長快，適合低水溫生活，養殖效益高以及深受消費者喜愛等優點而相繼成為各國開發的優質海水養殖魚類之一。雖然我國人工養殖大菱鲆要比歐洲晚4-5年，但近幾年我國大菱鲆的年產量已經達到每年2萬噸以上，年產值突破20億，是中國北方地區的主要海水養殖品種之一。然而隨著養殖規模的擴大和水體環境的惡化，各種疾病所造成的危害也逐漸為養殖戶和水產專家所重視。其中以細菌性疾病危害最為嚴重。國內外報道的大菱鲆細菌性病原中主要包括鰻弧菌(Vibrio anguillarum)、哈維氏弧菌(Vibrio harvey)、燦爛弧菌(Vibriosplendidus)、費氏弧菌(Vibrio fischeri)等多種弧菌病。弧菌病中最具有代表性的是鰻弧菌病，其毒力最強，可造成大規模的大菱鲆幼苗和成魚的死亡。
[0003]鰻弧菌是大菱鲆病原菌中危害最大的病原菌，在世界范圍內流行。鰻弧菌在自然界中分布十分廣泛，是水環境中的正常菌群，當水溫較高營養成分很豐富時，其數量會急劇增加，會引起水產動物特別是魚類的流行性疾病。鰻弧菌可導致大菱鲆成魚和魚苗的急性敗血癥，最后導致病魚的大規模死亡。其主要是通過皮膚、鰓、側線以及腸道感染魚類，感染后的大菱鲆最明顯的癥狀是體表潰爛及鰭部嚴重出血，病魚通常在2-3天內死亡。
[0004]而目前水產養殖中對魚類疾病的預防與治療主要的是使用各種化學藥物和抗生素。魚類養殖過程中長期用藥使得病菌耐藥性增強，大量抗生素的使用還會使魚類的免疫能力下降，同時水產品中殘留的藥物也嚴重影響食品的安全和人類的健康。Duff (1942)首次應用滅活的殺鮭氣單胞菌口服免疫硬頭鱒獲得成功，從而開創了疫苗在魚類應用上的新紀元。進入70年代后，各種免疫制劑被相繼研制出來，比如鰻弧菌疫苗，草魚出血病疫苗，甲魚細菌病疫苗等。目前魚類疫苗種類較多，但由于某些疫苗因其制備方法或病原菌的特殊性，導致其免疫原性較弱，免疫后保護效果不佳。因此在研制疫苗時是需要配合聞效的佐劑使用。
[0005]應用中草藥作為免疫增強劑不但可以解決化學藥物、抗生素等引發的抗(耐)藥性和養殖魚類藥殘超標等問題，而且符合發展無公害漁業、生產綠色水產品的需求。國內外很多學者研究證明，中草藥免疫增強劑可明顯增強水產動物的抗病能力。如有研究黃芪多糖，牛膝、板藍根等復方，皂角苷等對大菱鲆有增強免疫作用，但沒有針對大菱鲆的鰻弧菌疫苗應用來提高免疫力的報道。

【發明內容】

[0006]本發明的目的是提供一種增強大菱鲆免疫力的中藥組合物，及該組合物的制備方法，本發明制備的中藥組合物臨床應用效果好、成本低、純中藥制劑、無殘留，具有較好的應用前景。
[0007]本發明增強大菱鲆免疫力的中藥組合物，包括如下重量份的原料藥:紫錐菊80~120份、獲茶40~60份、白花蛇舌草30~50份、板藍根30~50份。
[0008]上述的中藥組合物用于制備用于增強大菱鲆免疫力的佐劑；
[0009]所述的佐劑為固體或液體狀態，
[0010]固體形態的制備方法，是將紫錐菊、茯苓、白花蛇舌草、板藍根，粉碎成細粉制得；
[0011]固體形態的佐劑的另一種制備方法，是取紫錐菊、茯苓、白花蛇舌草、板藍根，加12倍量水，加熱沸騰提取2次，每次1.5小時，濾過，濾液減壓濃縮至60°C時測定相對密度為1.30~1.35，減壓干燥粉碎制得；
[0012]液體形態的制備方法:取紫錐菊、茯苓、白花蛇舌草、板藍根，加12倍量水，加熱沸騰提取2次，每次1.5小時，濾過，濾液減壓濃縮至60°C時測定相對密度為1.10~1.15，過濾制得:[0013]實際應用中，可分別根據不同情況選擇藥材細粉、提取物細粉或提取液來聯合鰻弧菌疫苗應用。可采用注射、浸泡、口服等方式給藥。
[0014]本發明的中藥組合物主要用于聯合鰻弧菌疫苗應用，以提高大菱鲆的免疫力
[0015]本發明中藥組合物選用了紫錐菊、茯苓、白花蛇舌草、板藍根四味藥材，主要用于聯合鰻弧菌疫苗以提高大菱鲆的免疫力。本發明中藥組合物和鰻弧菌疫苗聯用后，能夠增強大菱鲆的免疫力，其免疫效果較單用中藥組合物或鰻弧菌疫苗好。
【具體實施方式】
[0016]本發明中藥組合物中的紫錐菊藥材，含有多糖、黃酮、咖啡酸的衍生物、精油、多炔、烷基胺和生物堿等多種有效成分，具有免疫刺激作用，減少發炎，能對抗細菌和病毒。實驗證明紫錐菊刺激免疫系統細胞活動。當這些細胞有活性時，白血球更迅速把引起疾病的侵略者包圍，使病毒或細菌死亡，防止他們繁殖，或僅僅停止他們的活動。早在十七世紀，美國土著人就已經使用紫錐菊，他們用這種植物去治療蛇咬傷、牙齦和口腔的病、感冒、咳嗽、敗血癥、喉嚨痛、胃腸痛等多種疾病。
[0017]茯苓藥材，為多孔菌科真菌茯苓的菌核，出自《神農本草經》。古人稱茯苓為“四時神藥”，因為它的功效非常廣泛，不分四季，將它與各種藥物配伍，不管寒、溫、風、濕諸疾，都能發揮其獨特功效。茯苓味甘、淡、性平，入藥具有利水滲濕、益脾和胃、寧心安神之功用。現代醫學研究表明，茯苓能增強機體免疫功能，茯苓多糖有明顯的抗腫瘤及保肝臟作用。最新發現的功效表明，茯苓中的主要成分為茯苓聚糖，含量很高。對多種細菌有抑制作用；能降胃酸，對消化道潰瘍有預防效果；對肝損傷有明顯的保護作用；有抗腫瘤的作用；能多方面對免疫功能進行調節；能使化療所致白細胞減少加速回升；并有鎮靜的作用。
[0018]白花蛇舌草藥材，味苦、淡，性寒。主治:肺熱喘咳；咽喉腫痛；腸癰；市腫瘡瘍；毒蛇咬傷；熱淋澀痛；水腫；痢疾；腸炎；濕熱黃疸；擅長治療多種癌腫。白花蛇舌草增強免疫功能效果明顯，體外試驗表明本品內服后抗感染作用明顯，系通過刺激網狀內皮系統，增加白細胞吞噬功能以提高血清殺菌力，給藥組白細胞吞噬剛果紅的能力較對照組提高4倍。鏡檢可見網狀內皮系統顯著增生，網狀細胞增生肥大，胞漿豐富，吞噬活躍，淋巴結、脾、肝等組織中嗜銀物質呈致密化改變，顯示機體防御功能加強。能增強體液免疫功能，使小鼠脾臟中溶血空斑數顯著增加。
[0019]板藍根藥材，味苦性寒，歸心、胃、肝、膽經。功能清熱解毒，涼血利咽。主治溫毒所致的疾病，如流感、上呼吸道炎癥、流腦、腮腺炎、急性腸炎、菌痢、肝炎、顏面丹毒、熱病發斑等。藥理研究表明，板藍根對多種病毒與病菌有明顯的抑制作用，板藍根具有體外廣譜抗菌作用(包括痢疾細菌、沙門氏細菌、溶血性鏈形菌)，是抗菌消炎、止痛、退熱的傳統中草藥。其抗病毒、抗菌消炎后，同時增強了機體的免疫力。
[0020]本發明通過長期的研究，通過對大菱鲆免疫效果的檢測篩選出上述的四種組分及配比，從而促成了本發明。
[0021]下面再以具體的實施例來說明本發明制備的中藥組合物，以下實施例僅用于說明本發明，本發明并不限于此。
[0022]實施例1
[0023]處方:紫錐菊80g、茯苓40g、白花蛇舌草30g、板藍根30g [0024]制法:取上述各藥材，粉碎成細粉，過篩，分裝每袋500g，即得。
[0025]實施例2:
[0026]處方:紫錐菊500g、獲茶250g、白花蛇舌草200g、板藍根200g
[0027]制法:取上述各藥材，加13.8L水，加熱沸騰提取2次，每次1.5小時，濾過，濾液減壓濃縮至60°C時測定相對密度為1.30~1.35，減壓干燥，粉碎，分裝每袋500g，即得。
[0028]實施例3:
[0029]處方:紫錐菊12kg、茯苓6kg、白花蛇舌草5kg、板藍根5kg
[0030]制法:取上述各藥材，加336L水，加熱沸騰提取2次，每次1.5小時，濾過，濾液減壓濃縮至60°C時測定相對密度為1.10~1.15，過濾，灌裝，每瓶500ml，即得。
[0031 ] 本發明中藥組合物對基礎免疫鰻弧菌疫苗后的大菱鲆的免疫效果比較
[0032](I)實驗動物
[0033]選取大菱鲆300尾，平均分成5組。大菱鲆體長為7.5-9.5cm,體重8.0±1.5g。實驗前在水泥池中暫養2周后置于定制的直徑1.0m的圓形玻璃鋼桶中,流水養殖。養殖用水為淡水與地下海水勾兌，恒溫18土 1°C，鹽度32，pH8.0。每日清污2次，投喂3次，日投餌量占體質量的1.5%。
[0034](2)實驗藥物
[0035]本發明中藥:取實施例2中的藥粉，取Ig加水150ml溶解；
[0036]鰻弧菌疫苗:采用市售的鰻弧菌疫苗(經過無菌檢驗和安全性檢驗為合格疫苗)。
[0037](3)實驗內容
[0038]免疫試驗:實驗中對大菱鲆隨機分成5組，每組60尾魚，采用浸泡法進行免疫，分別為本發明藥物組、鰻弧菌疫苗組、本發明藥物+鰻弧菌疫苗組、黃芪多糖+鰻弧菌疫苗組和海水組。先將各組以對應藥物浸泡lOmin，然后排掉，加入疫苗進行浸泡30min(疫苗濃度IX 108CFU/ml，無疫苗組第二次以海水浸泡，以海水組為對照)。
[0039]攻毒感染與免疫相對保護率試驗:將每組受免魚隨機分成3小組，每組20尾，分別于免疫的第7、15、30d后，用鰻弧菌MN進行浸泡攻毒，攻毒用菌濃度根據LD50的結果。解剖死亡的大菱鲆并進行病原菌分離和鑒定，以確認死亡是否由于感染病原菌所引起。攻毒后14天逐日記錄死亡情況，計算免疫相對保護率(RPS)。
[0040]實驗組數據采用SPSS 12.0軟件進行統計分析。
[0041](3)實驗結果
[0042]①免疫7天攻毒后各組的累積死亡率及RPS
[0043]于免疫第7天進行第一次攻毒，采用浸泡攻毒的方式。攻毒所用鰻弧菌的濃度為15倍LD5tl劑量，感染12天，記錄各組每天累積死亡率,并計算RPS。結果見表1。
[0044]表1大菱鲆免疫7天后各組死亡率和RPS
[0045]
【權利要求】
1.一種中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物包含有如下重量份的原料藥:紫維菊80~120份、獲茶40~60份、白花蛇舌草30~50份、板藍根30~50份。
2.權利要求1所述中藥組合物在制備用于增強大菱鲆免疫力佐劑中的應用。
3.一種用于增強大菱鲆免疫力的佐劑，其特征在于，所述的佐劑是用權利要求1所述的中藥組合物制備的。
4.如權利要求3所述的佐劑，其特征在于，所述的佐劑為固體粉末形態，是將權利要求1所述中藥組合物中的紫錐菊、茯苓、白花蛇舌草、板藍根，粉碎成細粉制得的。
5.如權利要求3所述的佐劑，其特征在于，所述的佐劑為固體形態，是將權利要求1所述中藥組合物中的紫錐菊、茯苓、白花蛇舌草、板藍根加12倍量水，加熱沸騰提取2次，每次`1.5小時，濾過，濾液減壓濃縮至60°C時測定相對密度為1.30~1.35，減壓干燥粉碎制得的。
6.如權利要求3所述的佐劑，其特征在于，所述的佐劑為液體形態，是將權利要求1的所述中藥組合物中的紫錐菊、茯苓、白花蛇舌草、板藍根加12倍量水，加熱沸騰提取2次，每次1.5小時，濾過，濾液減壓濃縮至60°C時測定相對密度為1.10~1.15，過濾制得的。
7.一種提高大菱鲆免疫力的制劑，其特征在于，所述的制劑是權利要求3所述的佐劑與鰻弧菌疫苗聯合制備的。
【文檔編號】A61K36/748GK103919889SQ201410181408
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月30日 優先權日:2014年4月30日
【發明者】秦志華, 王峰, 姜令緒, 王仁杰 申請人:青島農業大學