一種磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球及其制備方法。所述的復(fù)合載藥微球的組成為：磁性Fe3O4為1%~89%，異煙肼為1%~80%，殼聚糖為10%~19%。其制備方法是：(1)磁性Fe3O4的制備：將含有Fe3+的化合物和含有Fe2+的化合物溶于水中，通惰性氣體，在一定溫度下，加入堿溶液，攪拌，即可得磁性Fe3O4；(2)復(fù)合載藥微球的制備：將Fe3O4和異煙肼加入殼聚糖的酸溶液中，在一定溫度下，滴加三聚磷酸鈉溶液，磁分離、冷凍干燥后即可得到所述的磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球。本發(fā)明制備的磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球具有超順磁性，粒徑小、分散均勻、生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于磁性引導(dǎo)的被動靶向治療。
【專利說明】一種磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種異煙肼載藥體系，特別是涉及一種磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球及 其制備方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 磁性納米粒子具有一些特殊性質(zhì)，如高矯頑力和超順磁性，因此在生物醫(yī)藥領(lǐng)域 中可作為載體包載藥物，使藥物具有靶向性，從而提高藥物的利用率及減少毒副作用。納米 Fe304因粒徑小、生物相容性好、靈敏度高、磁響應(yīng)強(qiáng)、毒性低、性質(zhì)穩(wěn)定、原材料易得而廣泛 米用。
[0003] 異煙肼（INH)是治療肺結(jié)核的一線藥物，是一種小分子水溶性藥物。異煙肼對結(jié) 核桿菌有高度選擇性，抗菌力強(qiáng)。異煙肼抑菌機(jī)制可能是通過抑制分枝桿菌酸的合成，使細(xì) 菌喪失耐酸性、疏水性和增殖力而死亡。由于療效佳、毒性小、價廉、口服方便，故被列為首 選抗結(jié)核藥。然而有的病人所感染的結(jié)核菌對異煙肼已經(jīng)產(chǎn)生了耐藥性，因此磁性引導(dǎo)的 靶向治療可以有效的解決異煙肼的耐藥性及毒副作用；在外加磁場作用下，將磁性載藥微 球?qū)蛱囟ǖ膮^(qū)域，并釋放藥物，從而達(dá)到靶向的目的。少量異煙肼即可在靶向部位聚集從 而使血藥濃度達(dá)到所要求的最低抑菌濃度，而其他組織中異煙肼的濃度很少，減少了其毒 副作用。
[0004] 殼聚糖（CS)是通過脫乙酰甲殼素、脫乙酰甲殼質(zhì)得到的產(chǎn)品，它是一種在自然界 廣泛存在、具有氨基和羥基基團(tuán)的天然高分子多糖，具有無毒，無抗原性，生物相容性、生物 可降解性良好、促進(jìn)細(xì)胞吸收等優(yōu)點(diǎn)。這種天然高分子的生物官能性和相容性、血液相容 性、安全性、微生物降解性等優(yōu)良性能被廣泛關(guān)注。殼聚糖具有良好的生物相容性及可降解 性，在微生物活性酶的作用下，發(fā)生水解反應(yīng)，從而使其大分子骨架結(jié)構(gòu)發(fā)生斷裂，成為小 的鏈段，并最終斷裂成穩(wěn)定的小分子產(chǎn)物，在體內(nèi)被溶菌酶降解為對人體無毒的N-乙酰氨 基葡萄糖，殼聚糖及其分解產(chǎn)物無毒。同時，殼聚糖因含有游離的氨基，在酸性條件下能結(jié) 合氫離子，從而使殼聚糖成為帶正電荷的電解質(zhì)，形成陽離子聚合物。
[0005] 目前，采用殼聚糖交聯(lián)同時負(fù)載磁性粒子和藥物制得磁性復(fù)合載藥微球的報(bào)道很 少。中國專利CN201010610928. 3公開了一種采用化學(xué)共沉淀法制備磁性殼聚糖微球的方 法，制備工藝簡單，在制備Fe304的過程中將殼聚糖包覆在Fe 304表面，從而形成磁性殼聚糖 微球。中國專利CN201210470282. 2公開了采用乳化交聯(lián)方法制備一種雷霉素/磁性羧甲 基殼聚糖納米載藥微球的方法，該方法雖制備的載藥微球靶向性強(qiáng)、緩釋性好、粒徑小，但 制備過程中采用大量有毒試劑，可能會產(chǎn)生毒副作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球， 其結(jié)構(gòu)為一種核殼結(jié)構(gòu)，以Fe 304為核，殼聚糖和異煙肼為殼，是一種具有超順磁性的殼聚 糖復(fù)合載藥微球，可用于磁性引導(dǎo)的被動靶向治療。
[0007] 本發(fā)明的另一目的還在于提供所述的磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球的制備方法，本 發(fā)明采用離子凝膠法制備Fe 304/CS/INH復(fù)合載異煙肼微球。殼聚糖因含有游離的氨基，在 酸性條件下能離子化，使其帶正電荷，是陽離子聚合物，三聚磷酸鈉為陰離子聚合物，殼聚 糖可以與帶相反電荷的三聚磷酸鈉發(fā)生離子凝膠發(fā)應(yīng)，NH 3+和廣通過物理的靜電吸引 使殼聚糖發(fā)生交聯(lián)，避免了化學(xué)交聯(lián)中的有毒試劑，不會產(chǎn)生毒副作用，且所述的制備方法 具有簡單、條件溫和、成本低等優(yōu)點(diǎn)。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微 球，其特征在于，所述的復(fù)合載藥微球?yàn)楹藲そY(jié)構(gòu)，以Fe 304為核，殼聚糖和異煙肼為殼，交 聯(lián)的殼聚糖包覆Fe304,異煙肼均勻分散在交聯(lián)的殼聚糖長鏈之間。所述磁靶向異煙肼復(fù) 合載藥微球的組成及含量按質(zhì)量百分比：磁性Fe 304為19Γ89%，異煙肼為19Γ80%，殼聚糖為 10%?19%。
[0009] 所述磁性殼聚糖復(fù)合載藥微球的粒徑為10nnTl50nm。
[0010] 本發(fā)明還涉及所述磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球的制備方法，采用的技術(shù)方案為離 子凝膠法，即一種磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球的制備方法，具體的步驟為： (1) 磁性Fe304的制備：將含有Fe3+的化合物和含有Fe2+的化合物溶于水中，通惰性氣 體，在一定溫度下，加入堿溶液，即可得磁性Fe 304 ; (2) 復(fù)合載藥微球的制備：將Fe304和異煙肼加入殼聚糖的酸溶液中，在一定溫度下，滴 加三聚磷酸鈉溶液，磁分離、冷凍干燥后即可得到所述的磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球。
[0011] 在步驟（1)中，所述含有 Fe3+的化合物可為 Fe2(S04)3、FeCl3、Fe(N0 3)3、NH4Fe(S04)2 等中的一種或幾種；所述含有Fe2+的化合物可為FeCl2、FeS04、Fe (N03) 2、（NH4) 2Fe (S04) 2等 中的一種或幾種；優(yōu)選地，所述Fe3+和Fe2+的摩爾比為2:1~3:2 ;所述堿溶液可優(yōu)選為NaOH 或ΝΗ3 · H20 ;所述反應(yīng)溫度為50°C?90°C，反應(yīng)時間10mirT60min ;所述惰性氣體優(yōu)選為氮 氣或氬氣。
[0012] 在步驟（2)中，殼聚糖的酸溶液可為醋酸、檸檬酸、鹽酸、硫酸、硝酸等稀酸水溶液 中的一種；所述酸溶液中酸的質(zhì)量百分比濃度可為〇. 59Γ2% ;殼聚糖的濃度可為1 mg/mL 飛mg/mL;所述三聚磷酸鈉溶液的濃度為lmg/mL"10mg/mL。所述殼聚糖和三聚磷酸鈉的質(zhì) 量比為1:3~6:1 ;所述反應(yīng)溫度為10°C?40°C ;所述反應(yīng)時間10min~60min ;所述冷凍干燥 溫度為-50°C?_45°C，冷凍時間為12h?48h。
[0013] 本發(fā)明是采用離子凝膠法制備Fe304/CS/INH復(fù)合載異煙肼微球（參見圖1)，通過 物理的靜電吸引交聯(lián)，避免了化學(xué)交聯(lián)中的有毒試劑，不會產(chǎn)生毒副作用。具體包括以下優(yōu) 占· (1)化學(xué)共沉淀方法制備磁性Fe304過程簡單，制備條件溫和，F(xiàn)e30 4生物相容性好，毒 性小，成本低。
[0014] (2)制備的復(fù)合載藥微球粒徑小，分散性好，載藥量高，緩釋性能好。
[0015] (3)殼聚糖作為載體具有生物相容性而且本身及降解產(chǎn)物都無毒，能提高藥物的 緩釋性同時殼聚糖載藥微球又具有靶向性。
[0016] (4)使用的三聚磷酸鈉是無毒的陰離子交聯(lián)劑且具有生物相容性。
[0017] (5)本發(fā)明為異煙肼在肺結(jié)核病治療中提供了高效、低毒、減少病人的耐藥性等優(yōu) 點(diǎn)。所述的復(fù)合載藥微球在外加磁場的引導(dǎo)下通過靜脈注射途徑選擇性地到達(dá)并定位于靶 向區(qū)釋放藥物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0018] 圖1為離子凝膠法制備Fe304/CS/INH復(fù)合載藥微球的示意圖。
[0019] 圖2為實(shí)施例1中制備的Fe304/CS/INH復(fù)合載藥微球的透射電鏡圖。
[0020] 圖3為實(shí)施例2中制備的Fe304和Fe30 4/CS/INH復(fù)合載藥微球的磁滯曲線圖。
[0021] 圖4為實(shí)施例3中Fe304、INH、CS和Fe 304/CS/INH復(fù)合載藥微球的紅外光譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0023] 實(shí)施例1 準(zhǔn)確稱取六水合三氯化鐵2. 97g,七水合硫酸亞鐵1. 529g溶于50 mL去離子水中，攪 拌溶解，加入三口燒瓶中，密封，攪拌，通入N2，加熱到80°C然后緩慢加入10 ml氨水，持續(xù) 攪拌，反應(yīng)30min后，冷卻到室溫，用去離子水清洗三次，用乙醇清洗三次，磁分離后冷凍干 燥，得磁性Fe 304。準(zhǔn)確稱量0. 03g的Fe304加入到濃度為2mg/mL的殼聚糖溶液中，加入異煙 肼〇. lg，攪拌，滴加濃度為1. 5mg/mL的三聚磷酸鈉溶液，攪拌反應(yīng)lOmin，用去離子水洗三 次，磁分離后冷凍干燥，得到Fe30 4/CS/INH復(fù)合載藥微球。透射電鏡觀察（參見圖2)，TEM 圖如圖2所示，結(jié)果顯示Fe304/CS/INH復(fù)合載藥微球的粒徑為10nm-50nm。
[0024] 實(shí)施例2 準(zhǔn)確稱取九水合硝酸鐵4. 444g,四水合氯化亞鐵1. 095g溶于50mL去離子水中，攪拌 溶解，加入三口燒瓶中，密封，攪拌，通入氬氣，加熱到80°C然后緩慢加入10 ml氨水，持續(xù) 攪拌，反應(yīng)30min后，冷卻到室溫，用去離子水清洗三次，用乙醇清洗三次，磁分離后冷凍干 燥，得磁性Fe 304。準(zhǔn)確稱量0. 03g的Fe304加入到濃度為4mg/mL的殼聚糖溶液中，加入異 煙肼0. lg，攪拌，滴加濃度為3mg/mL的三聚磷酸鈉溶液，攪拌反應(yīng)20min，用去離子水洗三 次，磁分離后冷凍干燥，得到Fe 304/CS/INH復(fù)合載藥微球。在超導(dǎo)量子磁強(qiáng)計(jì)下測Fe304和 Fe304/CS/INH復(fù)合載藥微球的磁性大?。▍⒁妶D3)。磁滯曲線如圖3所示，結(jié)果顯示磁 性Fe 304的飽和磁化強(qiáng)度為76. 462emu/g，F(xiàn)e304/CS/INH復(fù)合載藥微球的飽和磁化強(qiáng)度為 47.436 emu/g〇
[0025] 實(shí)施例3 準(zhǔn)確稱取 NH4Fe(S04)2 2. 948g，（NH4)2Fe(S04)2 1.562 g 溶于 50mL 去離子水中，攪拌溶 解，加入三口燒瓶中，密封，攪拌，通入氬氣，加熱到90°C然后緩慢加入10 ml的NaOH，持續(xù) 攪拌，反應(yīng)60min后，冷卻到室溫，用去離子水清洗三次，用乙醇清洗3次，磁分離后冷凍 干燥，得磁性Fe 304。準(zhǔn)確稱量0. 03g的Fe304加入到濃度為6mg/mL的殼聚糖溶液中，加入 異煙肼〇. lg，攪拌，滴加濃度為5mg/mL的三聚磷酸鈉溶液，攪拌反應(yīng)60min，用去離子水 洗三次，磁分離后冷凍干燥，得到Fe 304/CS/INH復(fù)合載藥微球。Fe304、INH、CS和Fe 304/CS/ INH復(fù)合載藥微球的紅外光譜圖（參見圖4)。結(jié)果顯示Fe304/CS/INH復(fù)合載藥微球中在 3425CHT 1 (-0H)、1640CHT1 (C=0)、1551CHT1 (N-H)和 1075CHT1 (C-0-C)峰波數(shù)和 CS、INH 相比都 向低波數(shù)移動，F(xiàn)e304/CS/INH復(fù)合載藥微球中在589(^^-0)和Fe 304相比波數(shù)向高波數(shù) 移動，這表明Fe304、CS和INH在交聯(lián)時發(fā)生了相互作用。
【權(quán)利要求】
1. 一種磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球，其特征在于，所述的復(fù)合載藥微球?yàn)楹藲そY(jié)構(gòu)，以 Fe304為核，殼聚糖和異煙肼為殼，交聯(lián)的殼聚糖包覆Fe30 4，異煙肼均勻分散在交聯(lián)的殼聚 糖長鏈之間；其組成及含量按質(zhì)量百分比為：磁性Fe30 4為19Γ89%，異煙肼為19Γ80%，殼聚 糖為 109Γ19%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球，其特征在于，所述磁靶向異煙 肼復(fù)合載藥微球的粒徑為10nnTl50nm。
3. 權(quán)利要求1所述的磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球的制備方法，其特征在于，所述的方 法包括以下步驟： A. 磁性Fe304的制備：將含有Fe3+的化合物和含有Fe2+的化合物溶于水中，通惰性氣 體，在一定溫度下，加入堿溶液，即可得磁性Fe 304 ; B. 復(fù)合載藥微球的制備：將Fe304和異煙肼加入殼聚糖的酸溶液中，在一定溫度下，滴 加三聚磷酸鈉溶液，磁分離、冷凍干燥后即可得到所述的磁靶向異煙肼復(fù)合載藥微球。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟A中，所述含有Fe3+的化合物為 Fe2 (S04) 3、FeCl3、Fe (N03) 3、NH4Fe (S04) 2 中的一種或幾種；所述含有 Fe2+ 的化合物為 FeCl2、 FeS04、Fe (N03) 2、（NH4) 2Fe (S04) 2 中的一種或幾種；所述 Fe3+ 和 Fe2+ 的摩爾比為 2:1?3: 2。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟A中，所述堿溶液為NaOH或 NH3 · H20。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟A中，所述反應(yīng)溫度為 50°C ?90°C，反應(yīng)時間 10mirT60min。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟B中，所述的酸溶液為醋酸、檸檬 酸、鹽酸、硫酸或硝酸的水溶液；所述酸溶液中酸的質(zhì)量百分比濃度為0. 59Γ2%。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟B中，殼聚糖的濃度為1 mg/mL 飛mg/mL ;所述三聚磷酸鈉溶液的濃度為lmg/mL"10mg/mL ;所述殼聚糖和三聚磷酸鈉的質(zhì) 量比為1:3飛：1。
9. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟B中，所述反應(yīng)溫度為 10°C?40°C ;所述反應(yīng)時間為10mirT60min。
10. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟B中，所述冷凍干燥溫度 為-50°C?_45°C，冷凍時間為12h?48h。
【文檔編號】A61K47/36GK104146962SQ201410358546
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月26日
【發(fā)明者】馬振葉, 張俠, 秦紅, 王春梅, 張亮 申請人:南京師范大學(xué)