人面子葉提取物混懸劑及制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發明人面子葉提取物混懸劑及制備方法和應用，屬于中醫藥【技術領域】。人面子葉提取物混懸劑是通過將粉碎后的人面子葉藥材用濃度為50％～70％的乙醇提取3次后對提取液進行減壓抽濾并真空減壓回收乙醇后獲得人面子葉提取物；將人面子葉提取物進行真空干燥得到的干膏制備成水溶液后以蜂蜜為溶劑型載體，將人面子葉提取物和殼聚糖混懸于蜂蜜中，制得混懸劑。本發明還公開了人面子葉提取物混懸劑在制備治療褥瘡藥物中的應用。本發明的人面子葉提取物混懸劑具有顯著縮短傷口愈合時間，有效防止褥瘡引起的細菌感染，將傳統藥物開發成現代劑型，使用方便療效確切的優點。
【專利說明】人面子葉提取物混懸劑及制備方法和應用

【技術領域】
[0001]本發明屬于中醫藥【技術領域】，具體涉及人面子葉提取物混懸劑及制備方法和應用。

【背景技術】
[0002]褥瘡是由于長時間的壓力和組織收縮引起毛細血管阻塞和局部缺血，血液灌流的不充足和局部毒性代謝產物堆積增加了細胞死亡的機率，從而導致了皮膚及其皮下組織的潰瘍，是難以完全避免的臨床護理并發癥。據不完全統計，住院患者的褥瘡發生率為
5.1%?32.1%。褥瘡的誘發因素有年齡、主動或被動臥床休息、癱瘓、強迫體位、肢體感覺障礙、糖尿病等。
[0003]褥瘡容易引起感染，一旦惡化會給患者帶來極大的痛苦，甚至會引發敗血癥導致死亡。因缺乏起效快且療效顯著的藥物，大多數褥瘡成為臨床護理的難題。
[0004]人面子葉來源漆樹科人面子屬植物人面子Dracontomelon duperreanum Pierre的葉，《廣西本草選編》記載，“治爛瘡、褥瘡，葉，煎水外洗。”


【發明內容】

[0005]本發明的目的在于公開了人面子葉提取物混懸劑的制備方法。
[0006]本發明的第二個目的在于公開了由上述方法制備所得的人面子葉提取物混懸劑。
[0007]本發明的第三個目的在于公開了人面子葉提取物混懸劑的應用。
[0008]本發明的目的是通過以下技術方案實現的:
[0009]人面子葉提取物混懸劑的制備方法，包括下述步驟:
[0010](I)、稱取人面子葉藥材，粉碎；
[0011](2)、在人面子葉藥材中加入濃度為50%?70%的乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液；其中人面子葉藥材與乙醇的重量比為1:10;
[0012](3)、對步驟(2)中合并后的提取液減壓抽濾，50°C?70°C真空減壓回收乙醇，SP得人面子葉提取物；
[0013](4)、取步驟(3)得到的人面子葉提取物，40°C?60°C真空干燥，得到人面子葉提取物干膏；
[0014](5)、將步驟(4)得到的干膏加入蒸餾水制備成0.15g/mL水溶液；
[0015]￠)、以蜂蜜為溶劑型載體，將人面子葉提取物和殼聚糖以重量比3:1的比例混懸于蜂蜜中，制得混懸劑。
[0016]上述技術方案所述所述的制備方法，其中，步驟(I)中的人面子葉藥材粉碎后過24目篩；步驟(2)中乙醇的濃度為50%。
[0017]上述技術方案所述所述的制備方法，其中，步驟(I)中的人面子葉藥材粉碎后過24目篩；步驟(2)中乙醇的濃度為60%。
[0018]上述技術方案所述所述的制備方法，其中，步驟(I)中的人面子葉藥材粉碎后過24目篩；步驟(2)中乙醇的濃度為70%。
[0019]上述技術方案所述所述的制備方法，其中，步驟￠)中蜂蜜的重量為人面子葉提取物和殼聚糖總重量的5倍。
[0020]人面子葉提取物混懸劑，其中，所述人面子葉提取物混懸劑是通過上述技術方案所述的制備方法制備得到。
[0021]上述技術方案所述的人面子葉提取物混懸劑在制備治療褥瘡藥物中的應用。
[0022]本發明具有以下有益效果:
[0023]1、本發明指出了一定濃度范圍的人面子葉乙醇提取物比水提物具有更有效地治療褥瘡的作用。
[0024]2、本發明提供了一種人面子葉提取物混懸劑，具有顯著的縮短傷口愈合的時間，能有效防止褥瘡引起的細菌感染，將傳統藥物開發成現代劑型，使用更加方便快捷，且混懸劑療效確切，為開發一種治療褥瘡的中藥新藥奠定了基礎。

【專利附圖】

【附圖說明】
:
[0025]1、圖1為試驗例二中模型組皮膚組織病理切片；
[0026]2、圖2為試驗例二中水提組皮膚組織病理切片；
[0027]3、圖3為試驗例二中50%乙醇組皮膚組織病理切片；
[0028]4、圖4為試驗例二中70%乙醇組皮膚組織病理切片。

【具體實施方式】
:
[0029]為使本發明的技術方案便于理解，以下結合實施例對本發明人面子葉提取物混懸劑及制備方法和應用作進一步的說明。
[0030]實施例1:人面子葉提取物(50%乙醇提取物)的制備:
[0031]精密稱取人面子葉藥材300g，粉碎，過24目篩，加10倍量50%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，減壓抽濾，50°C?70°C真空減壓回收乙醇，即得人面子葉提取物。
[0032]實施例2:人面子葉提取物(60%乙醇提取物)的制備:
[0033]精密稱取人面子葉藥材300g，粉碎，過24目篩，加10倍量60%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，減壓抽濾，50°C?70°C真空減壓回收乙醇，即得人面子葉提取物。
[0034]實施例3:人面子葉提取物(70%乙醇提取物)的制備:
[0035]精密稱取人面子葉藥材300g，粉碎，過24目篩，加10倍量70%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，減壓抽濾，50°C?70°C真空減壓回收乙醇，即得人面子葉提取物。
[0036]實施例4:人面子葉提取物(50%乙醇提取物)干膏的制備:
[0037]取步驟I制備所得的人面子葉提取物，40°C?60°C真空干燥，即得人面子葉提取物干膏，產率為15.29%，4°C冷藏備用。
[0038]實施例5:人面子葉提取物(60%乙醇提取物)干膏的制備:
[0039]取步驟2制備所得的人面子葉提取物，40°C?60°C真空干燥，即得人面子葉提取物干膏，4°C冷藏備用。
[0040]實施例6:人面子葉提取物(70%乙醇提取物)干膏的制備:
[0041]取步驟3制備所得的人面子葉提取物，40°C?60°C真空干燥，即得人面子葉提取物干膏，產率為15.32%，4°C冷藏備用。
[0042]實施例7:人面子葉提取物(50%乙醇提取物)的混懸劑的制備:
[0043]精密稱取實施例4所得的人面子葉提取物干膏30g，加入200mL蒸餾水制備成
0.15g/mL水溶液；以蜂蜜為溶劑型載體，將9g人面子葉總醇提物和3g殼聚糖混懸于20g蜂蜜中，制成混懸劑。
[0044]實施例8:人面子葉提取物(60%乙醇提取物)的混懸劑的制備:
[0045]精密稱取實施例5所得的人面子葉提取物干膏30g，加入200mL蒸餾水制備成
0.15g/mL水溶液；以蜂蜜為溶劑型載體，將9g人面子葉總醇提物和3g殼聚糖混懸于20g蜂蜜中，制成混懸劑。
[0046]實施例9:人面子葉提取物(70%乙醇提取物)的混懸劑的制備:
[0047]精密稱取實施例6所得的人面子葉提取物干膏30g，加入200mL蒸餾水制備成
0.15g/mL水溶液；以蜂蜜為溶劑型載體，將9g人面子葉總醇提物和3g殼聚糖混懸于20g蜂蜜中，制成混懸劑。
[0048]以下結合具體試驗例對人面子葉提取物混懸劑在治療褥瘡中的有益效果作進一步的說明。
[0049]一、實驗材料
[0050]1、藥物及試劑
[0051]人面子葉(購自廣東省中藥材市場)，為漆樹科人面子屬植物人面子Dracontomelon duperreanum Pierre 的葉。
[0052]殼聚糖，由山東東營海洋奧康生物科技開發有限公司提供，批號20121210 ;天然蜂蜜，由蜜蜂園市售；0.9%氯化鈉注射液(NS，自制)；95%乙醇，由北京化工廠提供，批號20131109 ;造模實驗裝置，自制。
[0053]2、動物
[0054]清潔級SD小鼠64只，體重20 ± 2g，雄性；豚鼠60只，體重250 土 25g，雄性，清潔飼養。以上動物均來自解放軍第三零二醫院實驗動物中心(合格證SCXK-(軍)2007-004)。
[0055]二、實驗項目
[0056]采用Excel 2007建立數據庫，數據處理均以x± s表示。計量資料采用單因素方差分析，用LSD法進行組間比較，否則采用非參數秩和檢驗，計數資料采用X 2檢驗，P < 0.05表不有差異，P < 0.01表不有顯著性差異。
[0057]試驗例一:人面子葉水提取物干膏及不同濃度乙醇提取物干膏的制備:
[0058]精密稱取人面子葉藥材300g，粉碎，過24目篩，加10倍量水，提取3次，每次1.5h，合并提取液，減壓抽濾，50°C?70°C真空減壓回收溶劑，40°C?60°C真空干燥，即得水提取物干膏，產率為18.90%，4°C冷藏備用。
[0059]按照實施例1和實施例4的步驟精密稱取人面子葉藥材300g，粉碎，過24目篩，力口10倍量50%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，減壓抽濾，50°C?70°C真空減壓回收乙醇，40°C?60°C真空干燥，即得50%乙醇提取物干膏，產率為15.29%,4°C冷藏備用。
[0060]按照實施例3和實施例6的步驟精密稱取人面子葉藥材300g，粉碎，過24目篩，力口10倍量70%乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液，減壓抽濾，50°C?70°C真空減壓回收乙醇，40°C?60°C真空干燥，即得70%乙醇提取物干膏，產率為15.32%,4°C冷藏備用。
[0061]試驗例二:人面子葉不同提取物在治療褥瘡小鼠創面中的作用:
[0062]1、提取物配制、動物分組及實驗裝置:
[0063]精密稱取試驗例一中各人面子葉提取物干膏30g，加入200mL蒸餾水制備成
0.15g/mL水溶液。
[0064]清潔級SD小鼠64只，按體重隨機分為4組，每組16只。分別為模型組、水提組、50%乙醇組、70%乙醇組。
[0065]參照“張麗蕊，閻翠蘭，王玉潯，蔣艷茹，王會還，孫瑞軍，聞紅，安雅臣.血管內皮生長因子在火針治療褥瘡小鼠創面中的表達及作用[J].上海針灸雜志，2012，08:606-608”中的方法，實驗裝置由固定裝置、加壓裝置兩部分組成。固定裝置由木架與離心管組成。簡易木架，一塊約10cmX 15cm長方形木板,兩端用兩塊短板立起用釘固定，兩短板上端兩邊用兩根與長木板等長的木條釘成框架，兩木條之間用短木條隔開，每個格子正好放入加壓裝置(塑料瓶)。小鼠固定裝置，用50 mL塑料離心管64只，底部開直徑約為±1.3cm圓孔，令小鼠口鼻伸出管外，便于加壓期間呼吸進食；管口處開約3cmX0.6cm U形口，拉出小鼠右腿暴露于管外以便加壓固定；管蓋在中心處開直徑約
0.5cm圓孔，令尾部伸出管外。為防止塑料管在木板上移動，在木板上做好固定槽，嵌入塑料管用膠帶紙固定，以便加壓重心穩定。加壓裝置選用空礦泉水塑料瓶64只。分別裝入特定重量物品，用木制瓶塞，旋入擰緊4cm長木螺絲，釘帽直徑8mm，總重量47.85g。加壓時將瓶倒立，使釘帽下壓在小鼠右腿大轉子骨尖上，為使重力加壓準確穩定，將塑料瓶固定在木架上。加壓部分通過倒立的鐵釘來完成，通過計算鐵釘底面積，進而計算出木板上需加的重量，使小鼠大腿靠近膝關節處皮膚組織受到9.33kPa的壓強。
[0066]2、小鼠褥瘡模型的創建及確認:
[0067]分別于小鼠右腿股骨大轉子處用8%硫化鈉脫毛，裝進塑料管內，拉出右腿及尾巴蓋好蓋膠帶固定。再將管固定在固定裝置的木板槽內，令股骨大轉子脫毛處朝上對準加壓裝置，開始加壓計時，持續加壓12h，間斷2次，每次lh。總加壓時間10h。解壓后各組受傷小鼠群養。
[0068]肉眼觀患處水腫嚴重，表皮青紫潰破滲出，下肢腫脹粗大，小腿及爪紅腫，關節不活動，拉腿爬行，符合III?IV度褥瘡標準。模型建立48h后，每組各取I只切取患處全層組織病理檢查，結果炎細胞浸潤，組織水腫，潰瘍壞死，確認褥瘡模型創建成功。
[0069]3、提取物對小鼠褥瘡創面的作用:
[0070]褥瘡模型形成后第2天，模型組用NS清潔創面，作為對照；各給藥組先用NS清潔創面，再根據創面大小分別擦拭本試驗例步驟I制備的人面子葉提取物水溶液，每天2次。肉眼觀察病理檢查記錄治療后創面變化，15d判斷效果。于15d之后處死實驗動物，取創面組織，10%甲醛固定，常規石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察創面組織病理變化。
[0071]根據褥瘡分期標準，治愈為瘡面消失，表皮愈合；好轉為創面縮小80%，肉芽新鮮，生長好，水腫消退，滲液少；無效為瘡面縮小50%，肉芽生長不良或有膿性滲液。
[0072]結果:所有小鼠在手術后精神狀態變差，患處水腫嚴重，表皮青紫潰破滲出，關節不活動，拉腿爬行。模型組小鼠好轉很慢，皮膚轉為血黑色，沒有皮膚生長恢復的情況。
[0073]與模型組相比，水提組小鼠精神狀態好轉，生長好，水腫有所消退，經X2檢驗(見表I)，P < 0.01，說明水提取物具有較好的治療褥瘡的作用。與水提組相比，50%乙醇組、70%乙醇組給藥后，精神狀態明顯好轉，患處水腫減輕褥瘡恢復得很快，皮膚顏色由暗紅轉紅潤，創面已由表皮覆蓋，能在12d內基本痊愈，經X 2檢驗(見表I)，P < 0.05，說明50 %?70%乙醇提取物比水提物具有更好的治療褥瘡的作用，差異具有統計學意義。
[0074]表I四組小鼠褥瘡治療效果及愈合天數比較
[0075]



療效[例(%)]
組別動物數愈合天數 -
_η--__無效
模型組16---16
水提組1614.6±1.28 (50.0%)6(37.5%)2(12.5%)
50%乙醇組169.3±2.813(81.25%)3(18.75)O
70?乙醇組_16_8.8±1.5_14(87.5%)_2(12.5%)_O_
[0076]注:經X2 檢驗 X 2 = 9.23，P < 0.01 或 0.05。
[0077]創面皮膚組織病理檢查結果如圖1?4所示，其中圖1為模型組皮膚組織病理切片，圖2為水提組皮膚組織病理切片，圖3為50%乙醇組皮膚組織病理切片，圖4為70%乙醇組皮膚組織病理切片；圖1?4表明:光鏡下可見模型組的皮膚創面含大量炎癥細胞的壞死組織，其皮下組織也有大量炎癥細胞和少量的成纖維細胞，并可見血管充血；水提組可見含壞死組織的痂皮脫落，上皮開始向創面生長，其下組織中有一些新生血管和成纖維細胞；50%乙醇組、70%乙醇組上皮開始向創面生長，其下可見較多的新生血管和成纖維細胞，無水腫，炎癥反應輕微，其下組織中僅有少量的炎癥細胞，此兩組的病理結果優于水提組。
[0078]綜上所述，在治療褥瘡小鼠創面中，50%?70%乙醇提取物比水提物具有更好的治療作用，差異具統計學意義。
[0079]試驗例三:人面子葉提取物混懸劑的制備及藥效學評價:
[0080]1、樣品制備、動物分組:
[0081]將上述試驗例一中的50%、70%乙醇提取物干膏研成粉末，混合得總醇提物，分兩部分，分別用于配制水溶液和制備混懸劑。
[0082]精密稱取醇提物30g，加入200mL蒸餾水制備成0.15g/mL水溶液。以蜂蜜為溶劑型載體，將9g人面子葉總醇提物和3g殼聚糖混懸于20g蜂蜜中，制成混懸劑。
[0083]雄性豚鼠60只，按體重隨機分為3組，每組20只。分別為模型組、醇提組、混懸劑組。
[0084]2、豚鼠褥瘡模型的創建及確認:
[0085]參照“周衛，徐國娟，李楠.復方車前草軟膏治療褥瘡的實驗研究[J].中國藥業，2006，19:29-30”中的方法，分別對豚鼠進行麻醉、皮膚消毒，以俯臥位固定，在靠近背部脊柱的左側切開一長約3cm的口子，植人經高壓滅菌的4.0cmX 2.5cmX0.05cm不銹鋼鋼板，縫合切口，并包扎傷口，用繃帶固定。豚鼠術后單籠喂養，觀察Id。24 h后用
4.0cmX 2.25cmXl.0cm磁鐵壓迫創面(5h/d)，休息12h循環I次，總壓迫時間1h0將動物單獨分籠，喂養及管理條件一致。
[0086]肉眼觀患處水腫嚴重，表皮青紫潰破滲出，符合III?IV度褥瘡標準。模型建立48h后，每組各取I只切取患處全層組織病理檢查，結果炎細胞浸潤，組織水腫，潰瘍壞死，確認褥瘡模型創建成功。
[0087]3、混懸劑對豚鼠褥瘡創面的藥效學評價:
[0088]褥瘡模型形成后第3天，模型組用NS清潔創面，碘伏消毒，作為對照；醇提組先用NS清潔創面，碘伏消毒，再根據創面大小擦拭制備的人面子葉醇提物水溶液，每天2次。混懸劑組先用NS清潔創面，碘伏消毒，再根據創面大小涂抹制備的混懸劑，每天換藥一次。創面首先以無菌凡士林油紗布覆蓋，再覆蓋消毒紗布，膠布固定。肉眼觀察記錄治療后創面變化,15d判斷效果。
[0089]根據褥瘡分期標準，治愈為瘡面消失，表皮愈合；好轉為創面縮小80%，肉芽新鮮，生長好，水腫消退，滲液少；無效為瘡面縮小50%，肉芽生長不良或有膿性滲液。
[0090]結果:所有豚鼠術后患處水腫嚴重，表皮青紫潰破滲出，褥瘡基本處在III期~IV期。模型組精神狀態變差，食欲下降，皮膚轉為血黑色，15d內沒有皮膚生長恢復的情況。用醇提物、混懸劑治療后，肉芽組織生長較快，腐敗組織較少，III期以下的褥瘡恢復較快，皮膚顏色變為紅潤，很快恢復生長，且動物精神狀態明顯好于模型組，能在1d內基本痊愈；IV期褥瘡也在12d內基本恢復。
[0091]與模型組相比，醇提組、混懸劑組豚鼠生長好，水腫有所消退，經X2檢驗(見表2)，P < 0.01，說明醇提組、混懸劑組具有較好的治療褥瘡的作用。醇提組與混懸劑組比較，褥瘡創面恢復均較快，經X 2檢驗(見表2)，P > 0.05，說明醇提組與混懸劑組具有相同的治療褥瘡的作用，差異無統計學意義。
[0092]表2三組豚鼠褥瘡治療效果及愈合天數比較
[0093]

【權利要求】
1.人面子葉提取物混懸劑的制備方法，包括下述步驟: (1)、稱取人面子葉藥材，粉碎； (2)、在人面子葉藥材中加入濃度為50%?70%的乙醇，提取3次，每次1.5h，合并提取液；其中人面子葉藥材與乙醇的重量比為1:10 ; (3)、對步驟(2)中合并后的提取液減壓抽濾，50°C?70°C真空減壓回收乙醇，即得人面子葉提取物； (4)、取步驟(3)得到的人面子葉提取物，40°C?60°C真空干燥，得到人面子葉提取物干膏； (5)、將步驟(4)得到的干膏加入蒸餾水制備成0.15g/mL水溶液； (6)、以蜂蜜為溶劑型載體，將人面子葉提取物和殼聚糖以重量比3:1的比例混懸于蜂蜜中，制得混懸劑。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(I)中的人面子葉藥材粉碎后過24目篩；步驟⑵中乙醇的濃度為50%。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(I)中的人面子葉藥材粉碎后過24目篩；步驟⑵中乙醇的濃度為60%。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(I)中的人面子葉藥材粉碎后過24目篩；步驟⑵中乙醇的濃度為70%。
5.根據權利要求1?4所述的制備方法，其特征在于:步驟(6)中蜂蜜的重量為人面子葉提取物和殼聚糖總重量的5倍。
6.人面子葉提取物混懸劑，其特征在于:所述人面子葉提取物混懸劑是通過權利要求5所述的制備方法制備得到。
7.人面子葉提取物混懸劑，其特征在于:所述人面子葉提取物混懸劑是通過權利要求1?4所述的制備方法制備得到。
8.權利要求6或7所述的人面子葉提取物混懸劑在制備治療褥瘡藥物中的應用。
【文檔編號】A61P17/02GK104173396SQ201410361022
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年7月25日 優先權日:2014年7月25日
【發明者】趙艷玲, 肖小河, 王伽伯, 劉書顯, 陳哲, 鄭全福 申請人:中國人民解放軍第三0二醫院