氨氯地平或氟桂利嗪聯(lián)合氟康唑的抗真菌產(chǎn)品及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了氨氯地平或氟桂利嗪聯(lián)合氟康唑的抗真菌產(chǎn)品及其應(yīng)用，氨氯地平與氟康唑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的有效濃度配比：氟康唑：氨氯地平＝1:8(μg/ml)；氟桂利嗪與氟康唑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)有效濃度配比氟康唑：氟桂利嗪＝1:16(μg/ml)。聯(lián)合應(yīng)用時(shí)氨氯地平與氟康唑的最低抑菌濃度分別為：8μg/ml、1μg/ml；氟桂利嗪與氟康唑的最低抑菌濃度分別為：16μg/ml、1μg/m。鈣離子通道阻滯劑在臨床上廣泛應(yīng)用，其對(duì)FLC抗真菌的增效作用，可擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，并且降低FLC的最低有效濃度，降低抗真菌藥物的用藥量，從而降低藥物的不良反應(yīng)的發(fā)生。
【專利說(shuō)明】氨氯地平或氟桂利嗪聯(lián)合氟康唑的抗真菌產(chǎn)品及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及氨氯地平或氟桂利嗪聯(lián)合氟康唑的抗真菌產(chǎn) 品及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來(lái)，隨著免疫力低下人群（惡性腫瘤、艾滋病、自身免疫病等患者）的增多， 導(dǎo)管插管和器官移植等技術(shù)的開展，廣譜抗生素、皮質(zhì)激素和免疫抑制劑的廣泛使用，真 菌感染的發(fā)病率急劇上升（Odds FC. Pathogenesis of Candida infections. J Am Acad Dermatol. 1994, 31:S2-S5)。研究表明，AIDS(艾滋病）患者晚期遭受的真菌感染，其分 離菌超過(guò)三分之一表現(xiàn)出耐藥現(xiàn)象，特別是對(duì)唑類藥物，耐藥率高達(dá)65% (Saltanat H，Li HjGeng XH et al. Clinical distribution and drug resistance of Candida infection. Journal of Xingjiang Medical University 2008,31(8):1058-1060)。
[0003] 新藥研究與聯(lián)合用藥研究均是解決真菌耐藥的途徑。新藥研究周期長(zhǎng)，成本高，而 聯(lián)合用藥其前期投入少、效果顯著，受到國(guó)內(nèi)外的關(guān)注。聯(lián)合用藥研究包括兩種抗真菌藥聯(lián) 合和非抗真菌藥與抗真菌藥聯(lián)合。由于抗真菌藥物品種有限，且新的具有抗真菌作用的藥 物價(jià)格昂貴且副作用明顯，使得非抗真菌藥物與抗真菌藥物的聯(lián)合應(yīng)用研究備受關(guān)注。氟 康唑（FLC)作為安全、有效、價(jià)格低廉的唑類抗真菌藥物，臨床應(yīng)用非常廣泛，同時(shí)也導(dǎo)致 真菌耐藥率不斷上升。因此，非抗真菌藥與FLC聯(lián)合應(yīng)用對(duì)抗耐藥真菌的作用成為研究的 執(zhí)占。
[0004] 目前抗真菌的機(jī)制包括：抑制真菌細(xì)胞壁的合成；抑制真菌細(xì)胞膜主要成分麥角 甾醇的合成以及直接作用于麥角留醇的結(jié)構(gòu)，作用于真菌核酸代謝等。除此之外，從其他方 面尋找新的抗真菌途徑也成為研究者們持續(xù)關(guān)注的熱點(diǎn)。
[0005] 中國(guó)專利CN102626415A，公開了一種四環(huán)素類藥物聯(lián)合應(yīng)用氟康唑在制備抗真 菌產(chǎn)品中的應(yīng)用及其產(chǎn)品。其內(nèi)容為抗真菌類藥物氟康唑與四環(huán)素類抗菌藥物多西環(huán) 素（DOX)、米諾環(huán)素（MINO)聯(lián)合應(yīng)用可以產(chǎn)生協(xié)同抗真菌作用，非選擇性鈣通道阻滯劑貝 尼地平（BEN)、選擇性L型鈣通道阻滯劑硝苯地平（NIF)及鈣離子螯合劑乙二胺四乙酸 (EDTA)對(duì)上述兩種用藥具有增效作用。上述專利研究發(fā)現(xiàn)BEN、NIF及EDTA均能夠明顯增 強(qiáng)FLC與D0X/MIN0對(duì)白色念珠菌的聯(lián)合抗真菌作用，明顯降低FLC、MINO和DOX聯(lián)合用藥 時(shí)的最低有效濃度，增強(qiáng)FLC與D0X/MIN0的聯(lián)合作用，即三種藥物聯(lián)合對(duì)耐藥白色念珠菌 有顯著的殺傷作用。另外，已用于臨床的藥物中，很多例子表明同類藥物不一定都具有同樣 的作用。如青霉素類藥物，品種繁多，但只有部分品種，如哌拉西林具有抗銅綠假單胞菌的 作用，而大部分品種對(duì)此菌無(wú)作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的就是為了提供一種氨氯地平或氟桂利嗪聯(lián)合氟康唑的抗真菌產(chǎn)品 及其應(yīng)用。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0008] -種氨氯地平或氟桂利嗪聯(lián)合氟康唑的抗真菌產(chǎn)品，氨氯地平與氟康唑聯(lián)合應(yīng)用 時(shí)的有效濃度配比：氟康唑：氨氯地平=l:8(i!g/ml);氟桂利嗪與氟康唑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)有效 濃度配比氟康唑：氟桂利嗪=1:16 (ii g/ml)。
[0009] 聯(lián)合應(yīng)用時(shí)氨氯地平與氟康唑的最低抑菌濃度分別為：8li g/ml、l ii g/ml ;氟桂 利嗪與氟康唑的最低抑菌濃度分別為：16 y g/ml、l ii g/m。
[0010] 結(jié)果表明，大于g/ml氨氯地平與大于I y g/ml的氟康唑聯(lián)合應(yīng)用均有效；大于 16 ii g/ml氟桂利嗪與大于I ii g/ml的氟康唑聯(lián)合應(yīng)用均有效。
[0011] 所述真菌為白色念珠菌。
[0012] 上述產(chǎn)品在抗真菌中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明的有益效果：
[0014] 本發(fā)明定量評(píng)價(jià)了臨床常用的鈣離子阻滯劑（氨氯地平和氟桂利嗪）與FLC的聯(lián) 合抗真菌作用，分析了其對(duì)FLC的增敏效果，并進(jìn)行了靜態(tài)與動(dòng)態(tài)的系統(tǒng)評(píng)價(jià)。
[0015] 本發(fā)明采用耐藥白色念珠菌細(xì)胞進(jìn)行研究，利用液體定量法，測(cè)定FLC與AML和 FNZ聯(lián)合用藥時(shí)最低有效濃度，并以FICI法選擇最佳藥物組合濃度及評(píng)價(jià)藥物聯(lián)合用藥的 作用；本發(fā)明還采用時(shí)間-殺菌曲線法評(píng)價(jià)藥物聯(lián)用動(dòng)態(tài)抗真菌作用。
[0016] 本發(fā)明為臨床提供了聯(lián)合用藥作為治療耐藥真菌感染的治療方案。另外，不同類 型的鈣通道阻滯劑對(duì)氟康唑的增效作用，揭示其協(xié)同作用機(jī)制可能與細(xì)胞內(nèi)鈣離子有關(guān)， 為研究抗真菌藥物作用的新靶點(diǎn)提供思路。
[0017] 本發(fā)明表明，F(xiàn)LC與AML或FNZ聯(lián)用時(shí)，可以產(chǎn)生協(xié)同抗真菌作用。對(duì)氟康唑耐藥 的白色念珠菌菌株（MIC1P512 i! g/ml)，聯(lián)合用藥可使其最低抑菌濃度明顯降低，8 i! g/ml 的AML或16 ii g/ml的FNZ與I ii g/ml FLC合用均可以殺滅80%以上的真菌，濃度再增大， 效果更強(qiáng)。
[0018] 本發(fā)明表明，破壞細(xì)胞內(nèi)鈣平衡可能是聯(lián)合抗真菌作用的機(jī)制，為新藥的開發(fā)及 老藥新用提供可能的研究方向。
[0019] 本發(fā)明表明，鈣離子通道阻滯劑在臨床上廣泛應(yīng)用，其對(duì)FLC抗真菌的增效作用， 可擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，并且降低FLC的最低有效濃度，降低抗真菌藥物的用藥量，從而降低藥 物的不良反應(yīng)的發(fā)生。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為氟康唑聯(lián)合氨氯地平應(yīng)用時(shí)的抗真菌時(shí)間-殺菌曲線；
[0021] 圖2為氟康唑聯(lián)合氟桂利嗪應(yīng)用時(shí)的抗真菌時(shí)間-殺菌曲線。

【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0023] 實(shí)施例I FLC與CCB聯(lián)合抗真菌作用測(cè)定
[0024] 1 ?材料
[0025] I. 1藥品與試劑
[0026] 氟康唑（fluconazole, FLC)，山東誠(chéng)創(chuàng)醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；
[0027] 氨氯地平（minocycline, AML)，美侖生物有限公司；
[0028] 氟桂利嗪（flunarizine hydrochloride, FNZ)，中國(guó)食品藥品檢定研究院；
[0029] 科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基，鄭州博賽生物工程有限公司；
[0030] TTC-沙保羅瓊脂，杭州天和微生物試劑有限公司；
[0031] 氫氧化鈉，國(guó)營(yíng)山東單縣有機(jī)化工廠,批號(hào)940420 ;
[0032] 磷酸二氫鉀，上海新寶精細(xì)化工廠，批號(hào)200602132 ;
[0033] 二甲基亞砜（DMSO)，天津市廣成化學(xué)試劑有限公司；
[0034] RPMI 1640原料藥粉，美國(guó)GIBCO公司；
[0035] 3-(N-嗎啉代）丙磺酸（MOPS)，濟(jì)南朋遠(yuǎn)生物技術(shù)有限公司；
[0036] 甲萘醌（Menadione)，美國(guó) Sigma 公司；
[0037] XTT (二甲氧唑黃），南京旋光科技有限公司；
[0038] 乳酸林格氏液（復(fù)方氯化鈉溶液），山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司；
[0039] 丙酮，上海振興化工一廠，批號(hào)200209510 ;
[0040] XTT(3,3'-[l-(苯氨酰基）-3,4_四氮唑]-二（4-甲氧基-6-硝基）苯磺酸鈉）-甲 萘醌溶液的配制：取XTT粉末0. 0500g，溶解于IOOrnl已滅菌的林格氏液配成0. 5mg/ml的 溶液，用0.22 濾膜濾過(guò)滅菌；加入IOiU的lOmmol/L的甲萘醌丙酮溶液（取甲萘醌 0. 0860g溶解于5ml丙酮），使其終濃度為I ii mol/L，搖勻，2°C?8°C避光保存。
[0041] 藥物溶液：氟康唑用無(wú)菌蒸餾水溶解，其他藥物用二甲基亞砜溶解，分別配成 2560 ii g/ml的儲(chǔ)備液，過(guò)濾（0. 22 ii m)分裝。所有藥液于-20°C冰箱保存，備用。
[0042] PBS (磷酸鹽緩沖液）：用北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司的PBS磷酸鹽緩沖劑 (粉劑），小包裝一袋溶于IL蒸餾水中，即配成0. 01M，PH7. 4的PBS磷酸鹽緩沖液，121 °C高 溫高壓濕熱滅菌20min，冷卻備用。
[0043] RPMI (Roswell Park Memorial Institute) 1640 液體培養(yǎng)液：取 RPMI 1640 (含 L-谷氨酰胺，不含碳酸氫鈉）粉末2. 08g，加入10 %葡萄糖溶液40ml (含糖終濃度2%)及 M0PS(3-(N-嗎啉基）丙磺酸）粉6. 906g，加蒸餾水至200ml，混合均勻后在22°C用lmol/L 的NaOH溶液調(diào)pH為7. 0±0. 1，臨用前用0. 22 ii m混合纖維膜過(guò)濾滅菌。
[0044] 1.2 儀器
[0045]

【權(quán)利要求】
1. 一種氨氯地平聯(lián)合氟康唑的抗真菌產(chǎn)品，其特征在于，氨氯地平與氟康唑聯(lián)合應(yīng)用 時(shí)的有效濃度配比：氟康唑：氨氯地平=1:8〇 g/ml)。
2. 如權(quán)利要求1所述的抗真菌產(chǎn)品，其特征在于，聯(lián)合應(yīng)用時(shí)氨氯地平與氟康唑的最 低抑菌濃度分別為：8 ii g/ml、l y g/ml。
3. -種氟桂利嗪聯(lián)合氟康唑的抗真菌產(chǎn)品，其特征在于，氟桂利嗪與氟康唑聯(lián)合應(yīng)用 時(shí)有效濃度配比氟康唑：氟桂利嗪=1:16 (ii g/ml)。
4. 如權(quán)利要求3所述的抗真菌產(chǎn)品，其特征在于，氟桂利嗪與氟康唑的最低抑菌濃度 分別為：16 ii g/ml、l y g/m。
5. 如權(quán)利要求1-4所述抗真菌產(chǎn)品，其特征在于，所述真菌為白色念珠菌。
6. 如權(quán)利要求1-5任一所述的產(chǎn)品在抗真菌中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P31/10GK104382901SQ201410682301
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年11月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月24日
【發(fā)明者】孫淑娟, 劉書源, 劉衛(wèi)國(guó), 時(shí)海燕, 時(shí)銀萍 申請(qǐng)人:山東省千佛山醫(yī)院