色氨酸雙加氧酶(IDO1和TDO)的抑制劑和其在治療中的用途的制作方法
本發明涉及3-氨基異唑并吡啶類化合物、含有它們的藥物組合物及其作為藥物的用途，更具體地涉及它們單獨或與其它活性劑如抗癌疫苗、其它類型的免疫調節治療、放射和其他化療劑組合在癌癥治療中的用途。
發明背景
吲哚胺2,3-雙加氧酶1(IDO1)催化色氨酸轉化為犬尿氨酸的第一和速率限制步驟，并且在抑制免疫系統的廣泛的癌癥中表達(Uyttenhove等人,J.Nat.Med.2003,9,1269)。臨床腫瘤中的高IDO1表達已經顯示與廣泛的癌癥(包括肺癌、結腸直腸癌、乳腺癌、黑色素瘤和婦科癌癥)中的差的患者預后相關。鼠黑色素瘤細胞系中IDO1基因的沉默導致當植入小鼠時細胞形成腫瘤的能力降低(Zheng等人,J.Immunol.2006,177,5639)，證實IDO1作為癌癥干預的靶標。許多團隊已經開始研究IDO1的小分子抑制劑作為在癌癥患者中恢復腫瘤免疫的方法。這樣的抑制劑應當具有自身或與其它標準化學療法組合展示抗腫瘤活性的潛力。用小分子抑制劑阻斷IDO1酶的下游信號傳導還具有與其它免疫調節方法(例如抗癌疫苗施用、免疫檢查點蛋白(例如CTLA4和PD1-4s)的調節和過繼性T細胞治療(adoptive T-cell therapies)(例如CART細胞)的應用(Mautina等人,Proceedings of the AACR Annual Meeting,2014,Poster 5023))協同的潛力。早期研究使用色氨酸的衍生物例如1-甲基色氨酸(1-MT)作為IDO1的競爭性抑制劑(Cady和Sono,Arch.Biochem.Biophys.1991,291,326)，并為IDO1將是用于癌癥的藥理學干預的有吸引力的靶標的觀念提供了證明(Hou等人,Cancer Res.2007,614)。從海洋無脊椎動物分離的天然產物以比色氨酸衍生物高得多的效力抑制IDO1。迄今為止已經描述的在nM濃度具有活性的最有效的IDO1抑制劑之一是從海洋海綿中分離的exiguamine(Brastianos等人,J.Am.Chem.Soc.,2006,128,16046)。從海洋水螅蟲分離的兩種annulin在nM濃度下表現出活性，并刺激產生具有低nM效力的一系列IDO1抑制性吡喃并萘醌化合物的藥物化學項目(Pereira等人,J.Nat.Prod.2006,69,1496；Kumar等人,J.Med.Chem.2008,51,1706)。化合物庫的高通量篩選導致IDO1的羥基脒抑制劑的結構類型的發現和優化(Yue等人,J.Med.Chem.2009,52,7364)。具有針對細胞中的酶的nM效力且具有口服生物利用度的優化的羥基脒候選物目前在臨床試驗中(Newton等人,J Clin Oncol.2012,30,(Suppl；摘要2500))。另一種有效的咪唑并異吲哚類的IDO抑制劑目前也處于早期臨床試驗中(Mautina等人,Proceedings of the AACR Annual Meeting,2013)。
色氨酸2,3-雙加氧酶(TDO)是色氨酸降解途徑中的另一種關鍵酶。TDO抑制劑在治療癌癥和其它疾患中也可具有廣泛的治療效力。
本發明的一個目的是提供3-氨基異唑并吡啶化合物及其在醫藥中例如在癌癥治療中的用途，或至少為公眾提供有用的選擇。
發明簡述
在第一方面，本發明提供藥物組合物，其包含：
式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其中：
W是CR1、N或N-氧化物；
X是CR2、N或N-氧化物；
Y是CR3、N或N-氧化物；
Z是CR4、N或N-氧化物；
并且其中至少W、X、Y和Z之一是N或N-氧化物；
R1、R2、R3和R4各自獨立地選自下列基團：H、鹵代、R、-OH、-OR、-OC(O)H、-OC(O)R、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR、-OC(O)NRR、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR)2、-NO2、-NH2、-NHR、-NRR、-NHC(O)H、-NHC(O)R、-NRC(O)R、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NRR、-NRC(O)NHR、-SH、-SR、-S(O)H、-S(O)R、-SO2R、-SO2NH2、-SO2NHR、-SO2NRR、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OCF3、-OCHF2、-CN、-C≡CH、-C≡CR、-CH＝CHR、-CH＝CRR、-CR＝CHR、-CR＝CRR、-CO2H、-CO2R、-CHO、-C(O)R、-C(O)NH2、-C(O)NHR、-C(O)NRR、-CONHSO2H、-CONHSO2R、-CONRSO2R、環狀C3-C7烷基氨基、咪唑基、C1-C6烷基哌嗪基、嗎啉基和硫代嗎啉基；
或R1和R2結合在一起，或R2和R3結合在一起，或R3和R4結合在一起能夠形成飽和的或部分飽和的或完全不飽和的5-或6-元碳原子環，其任選包含1至3個選自O、N和S的雜原子，并且所述環任選獨立地被1-4個選自R的取代基取代；
各R獨立地選自下面的段落(a)和(b)中定義的任何基團：
(a)任選取代的C1-6烷基基團、任選取代的C2-6烯基基團、任選取代的C2-6炔基基團和任選取代的C3-7環烷基基團；其中所述各烷基、烯基、炔基和環烷基基團的一個或多個任選取代基各自獨立地選自下列基團：鹵代、-OH、-OR5、-OC(O)R5、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR5、-OC(O)NR5R5、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR5)2、-NO2、-NH2、-NHR5、-NR5R5、-N+(O-)R5R5、-NHC(O)H、-NHC(O)R5、-NR5C(O)R5、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR5R5、-NR5C(O)NHR5、-SH、-SR5、-S(O)H、-S(O)R5、-SO2R5、-SO2NH2、-SO2NHR5、-SO2NR5R5、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R5、-CHO、-C(O)R5、-C(O)NH2、-C(O)NHR5、-C(O)NR5R5、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R5、-C(O)NR5SO2R5、環狀C3-C7烷基氨基、咪唑基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基和氮雜環丁烷基；其中咪唑基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基和氮雜環丁烷基各自任選被一個或多個下列基團取代：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、鹵代、-OH、-OR7、-OC(O)R7、-OC(O)NH2-OC(O)NHR7、-OC(O)NR7R7、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR7)2、-NO2、-NH2、-NHR7、-NR7R7、-N+(O-)R7R7、-NHC(O)H、-NHC(O)R7、-NR7C(O)R7、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR7R7、-NR7C(O)NHR7、-SH、-SR7、-S(O)H、-S(O)R7、-SO2R7、-SO2NH2、-SO2NHR7、-SO2NR7R7、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R7、-CHO、-C(O)R7、-C(O)NH2、-C(O)NHR7、-C(O)NR7R7、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R7、-C(O)NR7SO2R7、任選取代的芳基和具有至多12個碳原子且在其環系統中具有一個或多個各自獨立選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團；并且其中所述各芳基和雜芳基基團的一個或多個任選取代基各自獨立地選自下列基團：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基或C3-7環烷基、鹵代、-OH、-OR8、-OC(O)R8、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR8、-OC(O)NR8R8、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR8)2、-NO2、-NH2、-NHR8、-NR8R8、-N+(O)R8R8、-NHC(O)H、-NHC(O)R8、-NR8C(O)R8、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR8R8、-NR8C(O)NHR8、-SH、-SR8、-S(O)H、-S(O)R8、-SO2R8、-SO2NH2、-SO2NHR8、-SO2NR8R8、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R8、-CHO、-C(O)R8、-C(O)NH2、-C(O)NHR8、-C(O)NR8R8、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R8和-C(O)NR8SO2R8；其中各R5、R7和R8獨立地選自C1-6烷基基團、C2-6烯基基團、C2-6炔基基團和C3-7環烷基基團；和
(b)任選取代的芳基和具有至多12個碳原子且在其環系統中具有一個或多個各自獨立選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團；且其中所述一個或多個任選的取代基各自獨立地選自與對于R的在上面(a)中所定義的那些相同的任選取代基；
R9和R10各自獨立地選自下面段落(a)和(b)中所定義的任何基團：
(a)H、任選取代的C1-6烷基基團、任選取代的C2-6烯基基團、任選取代的C2-6炔基基團和任選取代的C3-7環烷基基團；其中所述各烷基、烯基、炔基和環烷基的一個或多個任選取代基各自獨立地選自下列基團：鹵代、-OH、-OR11、-OC(O)R11、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR11、-OC(O)NR11R11、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR11)2、-NO2、-NH2、-NHR11、-NR11R11、-N+(O)R11R11、-NHC(O)H、-NHC(O)R11、-NR11C(O)R11、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR11R11、-NR11C(O)NHR11、-SH、-SR11、-S(O)H、-S(O)R11、-SO2R11、-SO2NH2、-SO2NHR11、-SO2NR11R11、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R11、-CHO、-C(O)R11、-C(O)NH2、-C(O)NHR11、-C(O)NR11R11、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R11、-C(O)NR11SO2R11、環狀C3-C7烷基氨基、咪唑基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基和氮雜環丁烷基；其中所述環狀C3-C7烷基氨基、咪唑基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基和氮雜環丁烷基各自任選被一個或多個下列基團取代：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、鹵代、-OH、-OR13、-OC(O)R13、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR13、-OC(O)NR13R13、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR13)2、-NO2、-NH2、-NHR13、-NR13R13-N+(O)R13R13、-NHC(O)H、-NHC(O)R13、-NR13C(O)R13、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR13R13、-NR13C(O)NHR13、-SH、-SR13、-S(O)H、-S(O)R13、-SO2R13、-SO2NH2、-SO2NHR13、-SO2NR13R13、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R13、-CHO、-C(O)R13、-C(O)NH2、-C(O)NHR13、-C(O)NR13R13、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R13和-C(O)NR13SO2R13；其中各R11和R13獨立地選自C1-6烷基基團、C2-6烯基基團、C2-6炔基基團和C3-7環烷基基團；和
(b)任選取代的芳基和具有至多12個碳原子且在其環系統中具有一個或多個各自獨立選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團；且其中所述各芳基和雜芳基的一個或多個任選取代基各自獨立地選自與對于R9和R10的在上面(a)中所定義的那些相同的任選取代基；
或
(c)R9和R10結合在一起能夠形成部分飽和的或完全不飽和的5-或6-元碳原子環，其任選包含1至3個選自O、N和S的雜原子，并且所述環能夠任選獨立地被1-5個取代基取代，所述取代基選自與對于R9和R10的在上面(a)中所定義的那些相同的任選取代基；
和藥學上可接受的載體。
在另一個方面，本發明提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其用作藥物。
在另一個方面，本發明提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其用于醫藥中。
在另一方面，本發明提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其用作治療活性物質。
在另一方面，本發明提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其用于治療溫血動物包括人的癌癥。
在另一方面，本發明提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的用途。
在另一方面，本發明提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療溫血動物包括人的癌癥的藥物中的用途。
在另一方面，本發明提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療溫血動物包括人的癌癥的藥物中的用途，其中所述治療包括施用式I化合物和一種或多種其它活性劑，所述其它活性劑選自化療劑、免疫調節劑例如抗癌疫苗、免疫檢查點蛋白的調節劑、過繼性T細胞免疫治療(例如嵌合抗原受體T細胞(CART細胞))和放射治療，并且其中所述其它活性劑在式I化合物施用之前、期間或之后施用。在某些實施方案中，所述其它活性劑包括免疫調節劑。
在另一方面，本發明提供治療溫血動物包括人的癌癥的方法，其包括向動物施用治療有效量的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一方面，本發明提供治療溫血動物包括人的癌癥的方法，其中所述方法包括向動物施用治療有效量的式I化合物或其藥學上可接受的鹽，并且其中所述方法還包括施用一種或多種其它活性劑的步驟，所述其它活性劑選自化療劑、免疫調節劑例如抗癌疫苗、免疫檢查點蛋白的調節劑、過繼性T細胞免疫治療(例如嵌合抗原受體T細胞(CART細胞))和放射治療，并且其中所述其它活性劑在式I化合物施用之前、期間或之后施用。在某些實施方案中，所述其它活性劑包括免疫調節劑。
在另一方面，本發明提供在有其需要的溫血動物包括人中抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶1(IDO1)的方法，其包括以有效抑制IDO1的量向動物施用具有IDO1抑制活性的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一方面，本發明提供在有其需要的溫血動物包括人中抑制色氨酸2,3-雙加氧酶(TDO)的方法，其包括以有效抑制TDO的量向動物施用具有TDO抑制活性的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一方面，本發明提供在有其需要的溫血動物包括人中抑制IDO1和TDO的方法，其包括以有效抑制IDO1和TDO的量向動物施用具有IDO1和TDO抑制活性的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一方面，本發明提供藥物組合產品或藥盒，其包括
(a)式I化合物或其藥學上可接受的鹽，和
(b)一種或多種選自以下的其它活性劑：化療劑和免疫調節劑例如抗癌疫苗、免疫檢查點蛋白的調節劑和過繼性T細胞免疫治療(例如嵌合抗原受體T細胞(CART細胞))。
在另一方面，本發明提供用于治療癌癥的藥物組合產品或藥盒，其包括
(a)式I化合物或其藥學上可接受的鹽，和
(b)一種或多種選自以下的其它活性劑：化療劑和免疫調節劑例如抗癌疫苗、免疫檢查點蛋白的調節劑和過繼性T細胞免疫治療(例如嵌合抗原受體T細胞(CART細胞))。
在另一方面，本發明提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其用于治療選自以下的疾患或病癥：炎性疾患、感染性疾病、中樞神經系統疾病或病癥、冠心病、慢性腎衰竭、麻醉后認知功能障礙、與雌性生殖健康有關的疾患或病癥和白內障。
在另一方面，本發明提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療選自以下的疾患或病癥：炎性疾患、感染性疾病、中樞神經系統疾病或病癥、冠心病、慢性腎衰竭、麻醉后認知功能障礙、與雌性生殖健康有關的疾患或病癥和白內障。
在另一方面，本發明提供在溫血動物包括人中治療選自以下的疾患或病癥的方法：炎性疾患、感染性疾病、中樞神經系統疾病或病癥、冠心病、慢性腎衰竭、麻醉后認知功能障礙、與雌性生殖健康有關的疾患或病癥和白內障，其中所述方法包括向動物施用治療有效量的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
可以在如上所定義的本發明的任何組合物、方法、用途和其它方面中使用的式I化合物的某些實施方案描述在下面編號的段落(1)至(30)。
(1).如上面本發明的第一方面中所定義的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
(2).式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其中W、X、Y和Z都如上面本發明的第一方面中所定義，且其中:
R1、R2、R3和R4各自獨立地選自下列基團：H、鹵代、R、-OH、-OR、-OC(O)H、-OC(O)R、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR、-OC(O)NRR、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR)2、-NO2、-NH2、-NHR、-NRR、-NHC(O)H、-NHC(O)R、-NRC(O)R、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NRR、-NRC(O)NHR、-SH、-SR、-S(O)H、-S(O)R、-SO2R、-SO2NH2、-SO2NHR、-SO2NRR、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-CN、-C≡CH、-C≡CR、-CH＝CHR、-CH＝CRR、-CR＝CHR、-CR＝CRR、-CO2H、-CO2R、-CHO、-C(O)R、-C(O)NH2、-C(O)NHR、-C(O)NRR、-CONHSO2H、-CONHSO2R、-CONRSO2R、環狀C3-C7烷基氨基、咪唑基、C1-C6烷基哌嗪基、嗎啉基和硫代嗎啉基；
或R1和R2結合在一起，或R2和R3結合在一起，或R3和R4結合在一起能夠形成飽和的或部分飽和的或完全不飽和的5-或6-元碳原子環，其任選包含1至3個選自O、N和S的雜原子，并且所述環任選獨立地被1-4個選自R的取代基取代；
各R獨立地選自下面的段落(a)和(b)中所定義的基團：
(a)任選取代的C1-6烷基基團、任選取代的C2-6烯基基團、任選取代的C2-6炔基基團和任選取代的C3-7環烷基基團；其中所述各烷基、烯基、炔基和環烷基基團的一個或多個任選取代基各自獨立地選自下列基團：鹵代、-OH、-OR5、-OC(O)R5、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR5、-OC(O)NR5R5、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR5)2、-NO2、-NH2、-NHR5、-NR5R5、-N+(O-)R5R5、-NHC(O)H、-NHC(O)R5、-NR5C(O)R5、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR5R5、-NR5C(O)NHR5、-SH、-SR5、-S(O)H、-S(O)R5、-SO2R5、-SO2NH2、-SO2NHR5、-SO2NR5R5、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R5、-CHO、-C(O)R5、-C(O)NH2、-C(O)NHR5、-C(O)NR5R5、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R5、-C(O)NR5SO2R5、環狀C3-C7烷基氨基、咪唑基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基和氮雜環丁烷基；其中咪唑基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基和氮雜環丁烷基各自任選被一個或多個下列基團取代：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、鹵代、-OH、-OR7、-OC(O)R7、-OC(O)NH2-OC(O)NHR7、-OC(O)NR7R7、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR7)2、-NO2、-NH2、-NHR7、-NR7R7、-N+(O-)R7R7、-NHC(O)H、-NHC(O)R7、-NR7C(O)R7、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR7R7、-NR7C(O)NHR7、-SH、-SR7、-S(O)H、-S(O)R7、-SO2R7、-SO2NH2、-SO2NHR7、-SO2NR7R7、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R7、-CHO、-C(O)R7、-C(O)NH2、-C(O)NHR7、-C(O)NR7R7、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R7、-C(O)NR7SO2R7、任選取代的芳基和具有至多12個碳原子且在其環系統中具有一個或多個各自獨立選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團；并且其中所述各芳基和雜芳基基團的一個或多個任選取代基各自獨立地選自下列基團：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、鹵代、-OH、-OR8、-OC(O)R8、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR8、-OC(O)NR8R8、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR8)2、-NO2、-NH2、-NHR8、-NR8R8、-N+(O)R8R8、-NHC(O)H、-NHC(O)R8、-NR8C(O)R8、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR8R8、-NR8C(O)NHR8、-SH、-SR8、-S(O)H、-S(O)R8、-SO2R8、-SO2NH2、-SO2NHR8、-SO2NR8R8、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R8、-CHO、-C(O)R8、-C(O)NH2、-C(O)NHR8、-C(O)NR8R8、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R8和-C(O)NR8SO2R8；其中各R5、R7和R8獨立地選自C1-6烷基基團、C2-6烯基基團、C2-6炔基基團和C3-7環烷基基團；和
(b)任選取代的芳基和具有至多12個碳原子且在其環系統中具有一個或多個各自獨立選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團；并且其中各芳基和雜芳基的一個或多個任選取代基各自獨立地選自與對于R的在上面(a)中所定義的那些相同的任選取代基；
R9和R10各自獨立地選自下面段落(a)和(b)中所定義的基團：
(a)H、任選取代的C1-6烷基基團、任選取代的C2-6烯基基團、任選取代的C2-6炔基基團和任選取代的C3-7環烷基基團；其中所述各烷基、烯基、炔基和環烷基的一個或多個任選取代基各自獨立地選自下列基團：鹵代、-OH、-OR11、-OC(O)R11、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR11、-OC(O)NR11R11、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR11)2、-NO2、-NH2、-NHR11、-NR11R11、-N+(O)R11R11、-NHC(O)H、-NHC(O)R11、-NR11C(O)R11、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR11R11、-NR11C(O)NHR11、-SH、-SR11、-S(O)H、-S(O)R11、-SO2R11、-SO2NH2、-SO2NHR11、-SO2NR11R11、-CF3、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R11、-CHO、-C(O)R11、-C(O)NH2、-C(O)NHR11、-C(O)NR11R11、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R11、-C(O)NR11SO2R11、環狀C3-C7烷基氨基、咪唑基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基和氮雜環丁烷基；其中基團環狀C3-C7烷基氨基、咪唑基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基和氮雜環丁烷基各自任選被一個或多個下列基團取代：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、鹵代、-OH、-OR13、-OC(O)R13、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR13、-OC(O)NR13R13、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR13)2、-NO2、-NH2、-NHR13、-NR13R13-N+(O)R13R13、-NHC(O)H、-NHC(O)R13、-NR13C(O)R13、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR13R13、-NR13C(O)NHR13、-SH、-SR13、-S(O)H、-S(O)R13、-SO2R13、-SO2NH2、-SO2NHR13、-SO2NR13R13、-CF3、OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R13、-CHO、-C(O)R13、-C(O)NH2、-C(O)NHR13、-C(O)NR13R13、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R13和-C(O)NR13SO2R13；其中各R11和R13獨立地選自C1-6烷基基團、C2-6烯基基團、C2-6炔基基團和C3-7環烷基基團；和
(b)任選取代的芳基和具有至多12個碳原子且在其環系統中具有一個或多個各自獨立選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團；并且其中所述各芳基和雜芳基的一個或多個任選取代基各自獨立地選自與對于R9和R10的在上面(a)中所定義的那些相同的任選取代基；或
(c)R9和R10結合在一起能夠形成部分飽和的或完全不飽和的5-或6-元碳原子環，其任選包含1至3個選自O、N和S的雜原子，并且所述環能夠任選獨立地被1-5個取代基取代，所述取代基選自與對于R9和R10的在上面(a)中所定義的那些相同的任選取代基。
(3).段落(1)或(2)中定義的化合物，其中當R9和R10各自獨立地選自下列基團：任選取代的C1-6烷基基團、任選取代的C2-6烯基基團、任選取代的C2-6炔基基團和任選取代的C3-7環烷基基團時；則所述各烷基、烯基、炔基和環烷基的一個或多個任選取代基各自獨立地選自下列基團：鹵代、-OH、-OR11、-OC(O)R11、-OC(O)NH2、-OC(O)NHR11、-OC(O)NR11R11、-OP(O)(OH)2、-OP(O)(OR11)2、-NO2、-NH2、-NHR11、-NR11R11、-N+(O)R11R11、-NHC(O)H、-NHC(O)R11、-NR11C(O)R11、-NHC(O)NH2、-NHC(O)NR11R11、-NR11C(O)NHR11、-SH、-SR11、-S(O)H、-S(O)R11、-SO2R11、-SO2NH2、-SO2NHR11、-SO2NR11R11、-CF3、-CHF2、-CH2F、-OCF3、-OCHF2、-CN、-CO2H、-CO2R11、-CHO、-C(O)R11、-C(O)NH2、-C(O)NHR11、-C(O)NR11R11、-CONHSO2H、-C(O)NHSO2R11和-C(O)NR11SO2R11；其中各R11獨立地選自C1-6烷基基團、C2-6烯基基團、C2-6炔基基團和C3-7環烷基基團。
(4).如段落(1)至(3)中任一段所定義的化合物，其中Z是N或N-氧化物例如N，W是CR1，X是CR2且Y是CR3。
(5).如段落(1)至(3)中任一段所定義的化合物，其中X是N或N-氧化物例如N，W是CR1，Y是CR3且Z是CR4。
(6).如段落(1)至(3)中任一段所定義的化合物，其中X和Z都是N或N-氧化物例如N，W是CR1且Y是CR3。
(7).如段落(1)至(6)中任一段所定義的化合物，其中R1、R2、R3和R4，當存在時，各自獨立地選自H、鹵代、任選取代的C1-C6烷基、其中R是任選取代的C1-C6烷基的-O-R、任選取代的芳基例如取代的苯基和具有至多12個碳原子且在其環系統中具有一個或多個各自獨立選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團。
(8).如段落(1)至(6)中任一段所定義的化合物，其中R1、R2、R3和R4，當存在時，各自獨立地選自H、鹵代、任選取代的C1-C6烷基、其中R選自任選取代的C1-C6烷基和任選取代的芳基(例如苯基)的-O-R、其中R是任選取代的芳基的–NHR、任選取代的芳基和具有至多12個碳原子并且在其環系統具有一個或多個各自獨立地選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團。
(9).如在段落(8)中所定義的化合物，其中R1、R2、R3和R4，當存在時，各自獨立地選自H、鹵素、-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2、C1-6烷基例如甲基、取代的芳基、取代的雜芳基、其中R是任選取代的芳基的–OR和其中R是任選取代的芳基的–NHR。
(10).如在段落(8)中所定義的化合物，其中R1、R2、R3和R4中的一個或兩個，當存在時，是H，并且不是H的其它R1、R2、R3和R4獨立地選自鹵素、-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2、C1-6烷基例如甲基、取代的芳基、取代的雜芳基、其中R是任選取代的芳基的-OR和其中R是任選取代的芳基的–NHR。
(11).段落(8)至(10)中任何一段中所定義的化合物，其中R3存在并且選自鹵素、其中R是任選取代的芳基的-OR和其中R是任選取代的芳基的–NHR。
(12).在段落(4)中定義的化合物，其中Z是N或N-氧化物例如N，W是CR1，X是CR2且Y是CR3，且R3選自鹵素、其中R是任選取代的芳基的-O-R和其中R是任選取代的芳基的–NHR。
(13).在段落(4)中定義的化合物，其中Z是N或N-氧化物例如N，W是CR1,X是CR2且Y是CR3，R1是H，且R2和R3中的一個或兩個不是H，例如，R2和R3都不是H，或R2是H且R3不是H，或R3是H且R2不是H。
(14).在段落(13)中定義的化合物，其中不是H的R2和R3各自獨立地選自鹵素、任選取代的C1-C6烷基、其中R選自任選取代的C1-C6烷基和任選取代的芳基的-OR、其中R是任選取代的芳基的-NHR；任選取代的芳基例如取代的苯基和任選取代的雜芳基基團。
(15).在段落(14)中定義的化合物，其中不是H的R2和R3各自獨立地選自鹵素、-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2、C1-6烷基例如甲基、取代的芳基、取代的雜芳基、其中R是任選取代的芳基的-OR和其中R是任選取代的芳基的-NHR。
(16).如段落(1)至(6)中任一段所定義的化合物，其中R1和R2結合在一起，或R2和R3結合在一起，或R3和R4結合在一起形成飽和的或部分飽和的或完全不飽和的5-或6-元碳原子環，其任選包含1-3個選自O、N或S的雜原子并且所述環任選被1-4個獨立地選自R的取代基取代，R1、R2、R3和R4的不是環的部分的那些部分獨立地選自：H、鹵代、任選取代的C1-C6烷基、其中R是任選取代的C1-C6烷基的O-R、任選取代的芳基和具有至多12個碳原子并且在其環系統具有一個或多個各自獨立地選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團。
(17).如段落(1)至(16)中任一段所定義的化合物，其中R9和R10獨立地選自H、任選取代的C1-6烷基基團、任選取代的芳基例如取代的苯基和具有至多12個碳原子且在其環系統中具有一個或多個各自獨立選自O、N和S的雜原子的任選取代的雜芳基基團。
(18).如段落(1)至(17)中任一段所定義的化合物，其中R9和R10都是H。
(19).在段落中(4)定義的化合物，其中Z是N或N-氧化物例如N，W是CR1，X是CR2且Y是CR3，且R9和R10都是H。
(20)在段落(19)中定義的化合物，其中R1、R2和R3各自獨立地選自H、鹵素、-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2、C1-6烷基例如甲基、取代的芳基、取代的雜芳基、其中R是任選取代的芳基的-OR和其中R是任選取代的芳基的-NHR。
(21).在段落(19)中定義的化合物，其中R1、R2和R3各自獨立地選自H、鹵素、C1-6烷基例如甲基、取代的芳基和取代的雜芳基。
(22).在段落(19)中定義的化合物，其中R1、R2和R3中的一個或兩個是H，且不是H的其它R1、R2和R3獨立地選自鹵素、-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2、C1-6烷基例如甲基、取代的芳基、取代的雜芳基、其中R是任選取代的芳基的-OR和其中R是任選取代的芳基的-NHR。
(23).在段落(19)中定義的化合物，其中R1是H，且R2和R3中的一個或兩個不是H，其中不是H的R2和R3各自獨立地選自鹵素、-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2、C1-6烷基例如甲基、取代的芳基、取代的雜芳基、其中R是任選取代的芳基的-OR和其中R是任選取代的芳基的-NHR。
(24).在段落(19)至(23)中任何一段所定義的化合物，其中R3選自鹵素、其中R是任選取代的芳基的-OR和其中R是任選取代的芳基的–NHR。
(25).在段落(19)中定義的化合物，其中R1是H，且R2和R3形成飽和的或部分飽和的或完全不飽和的5-或6-元碳原子環，其任選包含1-3個選自O、N和S的雜原子，并且所述環任選被1-4個獨立選自R的取代基取代。
(26).在段落(1)中定義的化合物,其選自：
5-溴-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(1)
異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(2)
5-氯-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(3)
4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(4)
4,5,6-三甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(5)
5-溴異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(6)
6-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(7)
5-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(8)
異唑并[5,4-b]喹啉-3-胺(9)
5,6,7,8-四氫異唑并[5,4-b]喹啉-3-胺(10)
6-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(11)
異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(12)
4-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(13)
5-氟異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(14)
6-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(15)
5-碘異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(16)
異唑并[4,5-c]吡啶-3-胺(17)
N6,N6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(18)
N4,N4-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,4-二胺(19)
5-氯-N3,4,6-三甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(20)
5-氯-N3,N3,4,6-四甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(21)
5-(3-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(22)
5-(2-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(23)
5-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(24)
5-(3-氟-4-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(25)
5-(吡啶-3-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(26)
5-(吡啶-4-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(27)
2-(3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-5-基)苯酚(28)
4-(3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-5-基)苯酚(29)
5-(4-氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(30)
5-(3-氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(31)
5-(2,4-二氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(32)
5-(3,5-二氟-2-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(33)
5-(2,4-二氯苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(34)
5-(2,3,4-三氯苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(35)
5-(4-(三氟甲基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(36)
5-(3-氨基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(37)
3-(3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(38)
5-(6-氟吡啶-3-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(39)
5-(2-氯-4-(三氟甲基)苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(40)
6-甲氧基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(41)
6-氯-4-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(42)
異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(43)
5-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(44)
5,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(45)
6-甲基-4-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(46)
6-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(47)
6-異丙基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(48)
5-硝基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(49)
3-氨基-6-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(50)
4-甲氧基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(51)
5-(二氟甲氧基)-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(52)
3-氨基-6-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(53)
3-氨基-6-(二氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(54)
5-氟-6-嗎啉代異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(55)
N6-環丙基-5-氟異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(56)
5-氟-N6,N6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(57)
6-(呋喃-2-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(58)
6,7-二氫-5H-環戊二烯并[b]異唑并[4,5-e]吡啶-3-胺(59)
6,7,8,9-四氫-5H-環庚三烯并[b]異唑并[4,5-e]吡啶-3-胺(60)
6,6-二甲基-5,6,7,8-四氫異唑并[5,4-b]喹啉-3-胺(61)
7,8-二氫-5H-異唑并[5,4-b]吡喃并[3,4-e]吡啶-3-胺(62)
6-(甲硫基)異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(63)
6-甲基異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(64)
4-(甲硫基)-6-苯基異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(65)
6-氯-5-氟異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(66)
5,6-二氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(67)
6-氯-4-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(68)
5-(3-甲氧基丙-1-炔-1-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(69)
6-(4-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(70)
6-(4-氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(71)
6-(2,4-二氯苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(72)
6-(2,4-二氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(73)
6-(2-噻吩基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(74)
6-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(75)
6-(3-(二甲基氨基)丙氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(76)
6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(77)
6-(2-嗎啉代乙氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(78)
6-(甲硫基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(79)
6-(甲基磺酰基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(80)
3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-6-甲酸(81)
3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-6-甲酸甲酯(82)
6-苯氧基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(83)
6-(2-氯苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(84)
6-(3-氯苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(85)
6-(4-氯苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(86)
6-(2-(三氟甲氧基)苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(87)
6-(3-(三氟甲氧基)苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(88)
6-(4-(三氟甲氧基)苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(89)
6-(2-甲氧基苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(90)
6-(3-甲氧基苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(91)
6-(4-甲氧基苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(92)
6-(3-(三氟甲基)苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(93)
N6-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(94)
N6-(3-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(95)和
N6-(4-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(96)，
和其藥學上可接受的鹽。
(27).前面段落(1)至(26)中任何一項所定義的化合物，其中所述化合物不是5-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺。
(28).前面段落(1)至(27)中任何一項所定義的化合物，其中所述化合物是IDO1抑制劑。
(29).前面段落(1)至(27)中任何一項所定義的化合物，其中所述化合物是TDO抑制劑。
(30).前面段落(1)至(27)中任何一項所定義的化合物，其中所述化合物是IDO1抑制劑和TDO抑制劑。
某些式I化合物是新的。因此，提供這些化合物作為本發明的另一特征。例如，本發明還提供了式I化合物，其選自：
5-溴-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(1)
4,5,6-三甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(5)
5-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(8)
4-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(13)
5-氟異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(14)
6-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(15)
5-碘異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(16)
N6,N6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(18)
N4,N4-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,4-二胺(19)
5-氯-N3,4,6-三甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(20)
5-氯-N3,N3,4,6-四甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(21)
5-(3-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(22)
5-(2-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(23)
5-(3-氟-4-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(25)
5-(吡啶-3-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(26)
5-(吡啶-4-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(27)
2-(3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-5-基)苯酚(28)
4-(3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-5-基)苯酚(29)
5-(4-氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(30)
5-(3-氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(31)
5-(2,4-二氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(32)
5-(3,5-二氟-2-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(33)
5-(2,4-二氯苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(34)
5-(2,3,4-三氯苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(35)
5-(4-(三氟甲基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(36)
5-(3-氨基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(37)
3-(3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(38)
5-(6-氟吡啶-3-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(39)
5-(2-氯-4-(三氟甲基)苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(40)
6-氯-4-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(42)
異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(43)
5-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(44)
5,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(45)
6-甲基-4-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(46)
6-異丙基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(48)
5-硝基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(49)
3-氨基-6-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(50)
4-甲氧基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(51)
5-(二氟甲氧基)-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(52)
3-氨基-6-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(53)
3-氨基-6-(二氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(54)
5-氟-6-嗎啉代異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(55)
N6-環丙基-5-氟異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(56)
5-氟-N6,N6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(57)
6-(呋喃-2-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(58)
6,7,8,9-四氫-5H-環庚三烯并[b]異唑并[4,5-e]吡啶-3-胺(60)
6,6-二甲基-5,6,7,8-四氫異唑并[5,4-b]喹啉-3-胺(61)
7,8-二氫-5H-異唑并[5,4-b]吡喃并[3,4-e]吡啶-3-胺(62)
6-(甲硫基)異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(63)
4-(甲硫基)-6-苯基異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(65)
6-氯-5-氟異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(66)
5,6-二氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(67)
6-氯-4-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(68)
5-(3-甲氧基丙-1-炔-1-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(69)
6-(4-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(70)
6-(4-氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(71)
6-(2,4-二氯苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(72)
6-(2,4-二氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(73)
6-(2-噻吩基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(74)
6-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(75)
6-(3-(二甲基氨基)丙氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(76)
6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(77)
6-(2-嗎啉代乙氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(78)
6-(甲硫基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(79)
6-(甲基磺酰基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(80)
3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-6-甲酸(81)
3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-6-甲酸甲酯(82)
6-苯氧基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(83)
6-(2-氯苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(84)
6-(3-氯苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(85)
6-(4-氯苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(86)
6-(2-(三氟甲氧基)苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(87)
6-(3-(三氟甲氧基)苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(88)
6-(4-(三氟甲氧基)苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(89)
6-(2-甲氧基苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(90)
6-(3-甲氧基苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(91)
6-(4-甲氧基苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(92)
6-(3-(三氟甲基)苯氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(93)
N6-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(94)
N6-(3-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(95)
N6-(4-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(96)，
和其藥學上可接受的鹽.
本發明的其它方面可以包括本文公開的實施方案的適當組合。此外，如本領域技術人員將理解的，本發明的一個方面的特征和優選實施方案也將涉及本發明的其它方面。
雖然本發明廣泛地如上所定義，但是本發明不限于此，并且還包括以下描述提供示例的實施方案。現在將更詳細地描述本發明。
附圖說明
圖1顯示C57/BI小鼠處理后0至16天的腫瘤體積，所述小鼠用被轉染以表達hIDO1的Lewis肺癌細胞sc接種，隨后當腫瘤可觸知時，用化合物3每天以75mg/kg ip或sc進行處理。每隔一天測量腫瘤直到達到人道倫理終點。腫瘤體積以mm3表示。每組N＝7。*表示通過重復測量單因素Anova的顯著性。
圖2顯示在用150mg/kg化合物3處理后0.25小時、1小時、2小時、4小時、6小時和24小時通過分析HPLC確定的具有16天皮下GL-261-hIDO1腫瘤(腫瘤大小15-20mm)的小鼠的血漿和腫瘤中的K:T比例，每個時間點n＝3。DMSO處理后0.25小時、1小時、2小時、4小時、6小時和24小時從3只小鼠收集的DMSO溶媒對照組(黑色，n＝21)。*和**表示與DMSO對照相比的通過單因素ANOVA和Sidak多重比較的顯著性(分別為p<0.05,p<0.01)。
圖3顯示用以下物質處理的具有sc GL261-hIDO1腫瘤的小鼠的研究的至人道倫理終點的存活：溶媒(A)；每日以75mg/kg(B)IP的化合物3，在腫瘤植入后8天開始；針對抗-PD1(上部：腫瘤移植后第8天、第11天和第14天，250μg/小鼠IP)或抗-CTLA4(底部：腫瘤植入后6天1mg/小鼠IP)的抗免疫檢查點抗體(C)；或化合物3加免疫檢查點抗體的組合(D)。P值表示與溶媒存活曲線相比通過Log-rank分析的顯著差異。彩色箭頭表示給藥方案。
發明的詳細說明
定義
如本文所用，術語“放射治療”是指使用來自x射線、γ射線、中子、質子和其它源的高能輻射來殺死癌細胞和收縮腫瘤。放射可以來自身體外部的機器(外部束放射治療)，或者其可以來自放置在身體中靠近癌細胞的放射性材料(內部放射治療)。系統放射治療使用放射性物質，例如放射性標記的單克隆抗體，其在血液中行進到整個身體的組織。術語放射和放射治療具有相同的含義。
應當認識到，本發明的某些化合物可以以一種或多種不同的對映異構體或非對映異構體形式存在。應當理解，對映體或非對映體形式包括在本發明的上述方面中。
在整個說明書中使用的術語鹵代或鹵素基團被認為是指氟、氯、溴或碘基團。
應當理解，當如上定義的式I的變量任選地被一個或多個咪唑基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基和氮雜環丁烷基基團取代時，與該相關變量的連接可以通過這些基團的可用的氮或碳環原子之一進行。
應當理解，術語“雜芳基”包括單環和雙環環系統，除非上下文另有要求。
應當理解，術語“芳基”是指芳族烴，例如苯基或萘基。
應當理解，當基團為“任選取代的”時，這意味著該基團可以是(a)未取代的或(b)被所定義的取代基取代。
應當理解，在整個說明書中提及C1-C6烷基或C2-C6烯基基團時，這些基團可以是未分支的或支鏈的。例如，C1-C6烷基的提及旨在將包括叔丁基(Me)3C-基團。
表述“治療癌癥”和“癌癥的治療”包括產生一種或多種抗癌效果的方法，所述抗癌效果包括但不限于抗腫瘤效果、響應率、疾病進展時間和總生存率。“抗腫瘤”效果包括但不限于抑制腫瘤生長、腫瘤生長延遲、腫瘤消退、腫瘤收縮、停止治療時腫瘤再生長的時間增加和疾病進展的減緩。
“治療有效量”是指當施用于受試者用于治療癌癥時足以實現癌癥治療的化合物的量。“有效量”將取決于待治療的癌癥、待施用的化合物、所治療的癌癥的嚴重性、受試者的年齡和相對健康、施用途徑和形式、治療是單一療法還是聯合治療、主治醫師的判斷和其他因素。
“藥學上可接受的”是指其可用于制備藥物組合物，所述藥物組合物通常是安全的、無毒的，并且既不是生物學上也不是其它不期望的，并且包括其是獸醫以及人類藥學用途可接受的。
化合物的“藥學上可接受的鹽”是指如本文所定義的藥學上可接受的并且具有母體化合物所需的藥理活性的鹽。此類鹽包括：
(a)與無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成鹽；或與有機酸如乙酸、甲磺酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸等形成的酸加成鹽；和
(b)當存在于母體化合物中的酸性質子被金屬離子例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子置換時形成的鹽；或與有機或無機堿配位形成的鹽。可接受的有機堿包括乙醇胺、二乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺等。可接受的無機堿包括氫氧化鋁、氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉和氫氧化鈉。
“溫血動物”是指哺乳類的任何成員，包括但不限于人、非人靈長類動物例如黑猩猩和其他猿和猴種、農場動物例如牛、馬、綿羊、山羊和豬；家養動物例如兔、狗和貓；實驗室動物，包括嚙齒動物例如大鼠、小鼠和豚鼠等。
本發明的化合物及其制備方法
如上所定義，廣義上，本發明涉及含有通式I化合物的藥物組合物，以及這些化合物在治療、特別是癌癥治療中的用途。已經發現式I化合物是吲哚胺2,3-雙加氧酶1(IDO1)和/或色氨酸2,3-雙加氧酶(TDO)的抑制劑。因此，預期本發明的化合物可單獨或與其它活性劑組合用于癌癥治療，所述其它活性劑例如例如抗癌疫苗、免疫檢查點蛋白的調節劑、過繼性T細胞免疫治療(例如嵌合抗原受體T細胞(CART細胞))、放射治療和其他化療劑。還預期式I化合物可用于治療癌癥以外的其它各種疾患，如下文的本發明治療方法部分中更詳細描述的。
下文參考方法1至8描述了用于制備式I化合物和化合物的藥學上可接受的鹽的某些方法。
合成流程
某些式I化合物可以通過在堿例如叔丁醇鉀、碳酸鉀或碳酸銫的存在下，使適當取代的鹵代氰基吡啶與乙酰氧肟酸反應來制備(方法1)。一系列溶劑可用于該反應，包括DMF、對二氧六環和N-甲基嗎啉。
方法1
具有烷基氨基取代基和/或芳基氨基取代基的化合物可以通過用胺和/或苯胺置換活化的鹵素原子來制備(方法2)。
方法2
在環外氨基上含有烷基取代的化合物可以通過伯胺與原甲酸三烷基酯反應，隨后用合適的還原劑如硼氫化鈉還原來制備(方法3)。
方法3
這些化合物也可以通過在還原胺化方法中使伯胺與烷基醛反應，然后與還原劑如氰基硼氫化鈉反應制備(方法4)。
方法4
帶有懸掛的芳基或雜芳基(Het)取代基的化合物可以通過在Suzuki偶聯反應中，在鈀催化下，使適當取代的含鹵素或三氟甲磺酸酯的底物與合適的芳基或雜芳基硼酸或酯反應(方法5)。
方法5
帶有懸掛的芳基或雜芳基(Het)取代基的化合物也可以通過以下方法制備：
用適當取代的含鹵素或三氟甲磺酸酯的化學中間體和合適的芳基或雜芳基硼酸或酯進行鈀催化的Suzuki偶聯反應，然后將所得芳基或雜芳基化產物修飾成最終產物(方法6)。
方法6
含有烷基和/或芳基醚連接的取代基的化合物可以通過在堿例如鈉或氫化鈉或碳酸銫的存在下用醇和/或酚置換活化的鹵素原子來制備(方法7)。
方法7
含有硫烷基和/或硫芳基醚連接的取代基的化合物可以通過在堿例如鈉或氫化鈉或碳酸銫存在下，通過硫醇和/或苯硫酚置換活化的鹵素原子來制備，或通過與硫醇或苯硫酚的金屬鹽直接反應制備。所得的硫烷基或苯硫酚衍生物可以用合適的氧化劑如過氧化氫、過酸、金屬絡合物和氧雜吖丙啶(oxaziridines)氧化成其相應的亞砜或砜衍生物(方法8)。
方法8
本領域技術人員將理解，通過使用與上述類似的方法，也可以制備式I的其它化合物。
本發明的治療方法
本發明的式I化合物可以是IDO1或TDO的抑制劑或者IDO1和TDO兩者的抑制劑。為IDO1或TDO的抑制劑的化合物和為IDO1和TDO的雙重抑制劑的化合物預期可用于癌癥治療。因此，在某些實施方案中，本發明提供了通過向需要這種治療的受試者施用治療有效量的式I化合物或含有式I化合物的藥物組合物來治療溫血動物(包括人)中的癌癥的方法。
在本發明的具體方面，預期式I化合物可用于恢復癌癥患者的腫瘤免疫。本發明的化合物可以單獨使用，或與其它癌癥療法包括化療劑、放射和/或免疫調節劑組合使用。
免疫調節劑包括但不限于抗癌疫苗、調節免疫檢查點蛋白的活性劑(例如CTLA4和PD1-4s)和過繼性T細胞療法(例如CART)。因此，式I化合物可以單獨施用或與一種或多種其它此類療法組合施用，根據待治療的特定疾患同時或依次施用。
在具體實施方案中，式I化合物可以與一種或多種選自易普利姆瑪(Ipilimumab，一種CTLA4的抑制劑)、Nivolumab和Lambrolizumab(兩者都為PD-1抑制劑)的免疫治療組合施用。
可以與式I化合物組合施用的其它化療劑包括但不限于在第14版的Merck Index(2006)(其通過引用并入本文)中列于癌癥化療藥物方案中的化合物，例如天冬酰胺酶、博來霉素、卡鉑、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉑、門冬酰胺酶(colaspase)、環磷酰胺、阿糖胞苷、達卡巴嗪、更生霉素、柔紅霉素、多柔比星(阿霉素)、表柔比星、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、六甲蜜胺、羥基脲、異環磷酰胺、伊立替康、亞葉酸(leucovorin)、洛莫司汀、氮芥、6-巰基嘌呤、美司鈉、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、米托蒽醌、潑尼松龍、潑尼松、丙卡巴肼、雷洛昔芬、鏈佐星、他莫昔芬、硫鳥嘌呤、拓撲替康、長春堿、長春新堿和長春地辛。
可以與式I化合物組合施用的另外的抗增殖劑包括但不限于BCNU、CCNU、DTIC和放線菌素D。其它抗增殖劑包括但不限于公認的用于治療Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics(第11版),編輯Molinoff等人,McGraw-Hill出版,第1225-1287頁(2006)(將其引入文中作為參考)中的腫瘤性疾病的那些化合物，如氨魯米特、L-天冬酰胺酶、硫唑嘌呤、5-氮雜胞苷克拉屈濱、白消安、己烯雌酚、2′,2′-二氟脫氧胞苷、多西紫杉醇、赤羥基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)、乙炔基雌二醇、5-氟脫氧尿苷、5-氟脫氧尿苷一磷酸、磷酸氟達拉濱、氟甲睪酮、氟他胺、己酸羥孕酮、伊達比星、干擾素、醋酸甲羥孕酮、醋酸甲地孕酮、美法侖、米托坦、紫杉醇、噴司他丁、N-膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸(PALA)、普卡霉素、司莫司汀、替尼泊苷、丙酸睪酮、噻替派、三甲基三聚氰胺、尿苷和長春瑞濱。
可以與式I化合物組合施用的另外的抗增殖劑包括但不限于其它分子靶向劑，其通過干擾癌發生和腫瘤生長所需的特定靶分子阻斷癌細胞的生長。實例包括小分子蛋白和脂質激酶抑制劑、單克隆抗體、分子靶向人源化單克隆抗體和單克隆抗體藥物綴合物。此類抑制劑的例子包括：利妥昔單抗、曲妥珠單抗、阿侖單抗、托西莫單抗-I131、西妥昔單抗、替伊莫單抗(Ibritumomab tiuxetan)、貝伐單抗、帕尼單抗、奧法木單抗(Ofatumumab)、易普利姆瑪、Brentuximab vedotin、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、Ado-曲妥單抗emtansine、雷莫蘆單抗(Ramucirumab)、Obinutuzumab、Nivolumab、Lambrolizumab、Dinutuximab、伊馬替尼、吉非替尼、厄洛替尼、索拉非尼、達沙替尼、舒尼替尼、拉帕替尼(Lapatinib)、尼洛替尼、帕唑帕尼、克里唑替尼(Crizotinib)、魯索利替尼(Ruxolitinib)、凡德他尼(Vandetanib)、威羅非尼(Vemurafenib)、阿西替尼(Axitinib)、波舒替尼(Bosutinib)、Cabozantinib、Ponatinib、Regorafenib、Tofacitinib、阿法替尼、達拉菲尼(Dabrafenib)、依魯替尼(Ibrutinib)和曲美替尼(Trametinib)。
多種癌癥可以通過本發明的化合物治療。可根據本發明治療的癌癥包括但不限于：結腸直腸癌、乳腺癌、黑色素瘤、生殖器官、呼吸道、腦、消化道、泌尿道、眼、肝、皮膚、頭頸、甲狀腺、甲狀旁腺的癌癥及其遠處轉移。那些疾病還包括淋巴瘤、肉瘤和白血病。
乳腺癌的實例包括但不限于浸潤性導管癌、浸潤性小葉癌、原位導管癌和原位小葉癌。
呼吸道癌的實例包括但不限于小細胞和非小細胞肺癌、以及支氣管腺瘤和胸膜肺母細胞瘤。
腦癌的實例包括但不限于腦干和眼球下(hypophthalmic)神經膠質瘤、小腦和大腦星形細胞瘤、成神經管細胞瘤、室管膜瘤以及神經外胚層和松果體腫瘤。
雄性生殖器官的腫瘤包括但不限于前列腺癌和睪丸癌。
雌性生殖器官的腫瘤包括但不限于子宮內膜癌、宮頸癌、卵巢癌、陰道癌和外陰癌以及子宮肉瘤。
消化道的腫瘤包括但不限于肛門癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、膽囊癌、胃癌、胰腺癌、直腸癌、小腸癌和唾液腺癌。
泌尿道的腫瘤包括但不限于膀胱癌、陰莖癌、腎癌、腎盂癌、輸尿管癌和尿道癌。
眼癌包括但不限于眼內黑色素瘤和視網膜母細胞瘤。
肝癌的實例包括但不限于肝細胞癌(具有或不具有纖維板層變體的肝細胞癌)、膽管癌(肝內膽管癌)和混合的肝細胞膽管癌。
皮膚癌包括但不限于鱗狀細胞癌、卡波西肉瘤、惡性黑色素瘤、梅克爾(Merkel)細胞皮膚癌和非黑色素瘤皮膚癌。
頭頸癌包括但不限于喉/下咽/鼻咽/口咽癌、以及唇和口腔癌。淋巴瘤包括但不限于AIDS相關淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、霍奇金病和中樞神經系統淋巴瘤。
肉瘤包括但不限于軟組織肉瘤、骨肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、淋巴肉瘤和橫紋肌肉瘤。白血病包括但不限于急性骨髓性白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、慢性骨髓性白血病和毛細胞白血病。
這些疾病在人類中已經被很好地表征，但在其他溫血動物中也存在類似的病因，并且可以通過本發明的化合物治療。
本領域技術人員將理解，特定的治療方法將采用選擇的施用途徑，所述施用途徑又取決于多種因素，所有這些因素在施用治療劑時都是常規的。本領域技術人員還將理解的是，本領域技術人員使用常規處理測試可以確定最佳治療過程，即治療方式和在給定的天數內給予的本發明化合物的每日劑量數。
治療劑量可能在每天1mg至30g的范圍內。對于任何特定患者選擇的具體劑量水平將取決于多種因素，包括所使用的具體化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、施用時間、施用途徑和排泄率、藥物組合和正在進行治療的疾患的嚴重性。
作為IDO1抑制劑的某些式I化合物也可抑制IDO2。為IDO1和IDO2的雙重抑制劑的化合物也預期可用于癌癥治療。因此，在另一方面，本發明提供了抑制有需要的溫血動物(包括人)中IDO1和IDO2的方法，其包括以有效抑制IDO1和IDO2的量向動物施用式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
已經報道，為IDO(IDO1和IDO2)和/或TDO的抑制劑的化合物不僅可以在治療癌癥中具有功效，而且在治療一系列其它疾病或疾患中具有功效，例如在PCT國際公開WO 2015/082499以及其中提及的科學文獻中所討論，所有這些文獻通過引用并入本文。例如，此類化合物可用于治療炎性疾患、感染性疾病、中樞神經系統疾病或病癥、冠心病、慢性腎衰竭、麻醉后認知功能障礙、與雌性生殖健康有關的疾患或病癥和白內障。因此，本發明的式I化合物也可用于治療此類疾病或疾患。
可以由式I化合物治療的炎性疾患的實例包括與免疫B細胞、T細胞、樹突細胞、自然殺傷細胞、巨噬細胞和/或嗜中性粒細胞調節異常有關的疾患。
可以由式I化合物治療的感染性疾病的實例包括細菌感染、病毒感染例如腸道感染、丙型肝炎、敗血癥和敗血癥誘發的低血壓。
可以由式I化合物治療的中樞神經系統疾病或病癥的實例包括肌萎縮性側索硬化(AML)、亨廷頓病、阿爾茨海默病、疼痛、包括情感障礙如抑郁癥的精神障礙、多發性硬化、帕金森氏病和HIV相關的神經認知下降。
可以由式I化合物治療的與雌性生殖健康相關的疾病或病癥的實例是子宮內膜異位癥和與雌性生殖健康有關的疾患包括避孕和墮胎。
本發明的藥物組合物
本發明包括包含一種或多種本發明式I化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。
藥學上可接受的賦形劑、輔助劑、載體、緩沖劑或穩定劑應當是無毒的，并且不應干擾活性成分的功效。載體或其它物質的確切性質將取決于施用途徑。
化合物可以以劑量單位制劑口服、局部、胃腸外、通過吸入或噴霧或直腸施用。術語“通過注射施用”包括靜脈內、肌內、皮下和腸胃外注射以及輸注技術的使用。一種或多種化合物可以與一種或多種無毒的藥學上可接受的載體以及如果需要的話其它活性成分聯合存在。
用于口服使用的組合物可以根據本領域已知的用于制備藥物組合物的任何合適的方法制備。此類組合物可以含有一種或多種選自稀釋劑、甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑的物質，以提供可口的制劑。片劑含有活性成分以及適合制備片劑的無毒的藥學上可接受的賦形劑。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；制粒和崩解劑，例如玉米淀粉或藻酸；和粘合劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。片劑可以是未包衣的，或者它們可以通過已知技術包衣，以延遲在胃腸道中的崩解和吸附，從而在更長的時間內提供持續的作用。例如，可以使用時間延遲材料，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。這些化合物也可以制備為固體快速釋放的形式。
口服使用的制劑也可以作為硬明膠膠囊存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或作為軟明膠膠囊存在，其中活性成分與水或油介質例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。
水性混懸劑含有活性物質以及適于制備水性混懸劑的賦形劑。此類賦形劑是助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯樹膠；分散劑或潤濕劑可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或縮合產物或具有脂肪酸的氧化烯，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產物，例如十七碳亞乙基氧基鯨蠟醇(heptadecaethylene oxycetanol)，或環氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產物，例如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯，或環氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產物，例如聚乙烯失水山梨醇單油酸酯。水性混懸劑還可以含有一種或多種防腐劑例如對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑例如蔗糖或糖精。
適于通過加入水制備水性混懸劑的可分散粉末和顆粒提供與分散或潤濕劑、助懸劑和一種或多種防腐劑混合的活性成分。合適的分散或潤濕劑和助懸劑由上面已經提到的那些舉例說明。還可以存在另外的賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。
所述化合物還可以是非水性液體制劑的形式，例如油性混懸劑，其可以通過將活性成分懸浮在植物油(例如落花生油(arachis oil)、橄欖油、芝麻油或花生油(peanut oil))中或懸浮在礦物油如液體石蠟來配制。油性混懸劑可以含有增稠劑例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可以加入甜味劑如上述的那些，以及矯味劑，以提供可口的口服制劑。這些組合物可以通過加入抗氧化劑如抗壞血酸來保存。
本發明的藥物組合物也可以是水包油乳劑的形式。油相可以是植物油例如橄欖油或落花生油，或礦物油例如液體石蠟或這些的混合物。合適的乳化劑可以是天然存在的樹膠，例如阿拉伯樹膠或黃蓍膠，天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂，和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如脫水山梨醇單油酸酯，所述偏酯與環氧乙烷的縮合產物，例如聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯。乳劑還可以含有甜味劑和矯味劑。
糖漿和酏劑可以用甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制。此類制劑還可以含有緩和劑、防腐劑和矯味劑和著色劑。
所述化合物也可以以用于直腸給藥的栓劑的形式施用。這些組合物可以通過將藥物與合適的非刺激性賦形劑混合來制備，所述賦形劑在常溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，因此將在直腸中熔化以釋放藥物。這樣的材料包括可可脂和聚乙二醇。
實施例
以下實施例是本發明的化合物及其制備方法的代表。然而，本發明的范圍不限于這些實施例。
合成程序(procedures)
未明確描述的起始材料可商購獲得，或其合成已描述于化學文獻中，或所述材料可通過本領域技術人員已知的方法制備。通過1H NMR波譜、APCI電離質譜、熔點和燃燒或HRMS分析表征示例性化合物。通過HPLC分析測定示例性化合物的純度，發現對于所有化合物，純度>95％。
硅膠60(SiO2)(0.040-0.063mm)用于所有柱色譜。
縮寫
NMR 核磁共振
ESI 電噴霧電離
APCI 大氣壓化學電離
HPLC 高效液相色譜
LCMS 液相色譜-質譜
HRMS 高分辨質譜
mp 熔點
DMF 二甲基甲酰胺
EtOAc 乙酸乙酯
DCM 二氯甲烷
MeOH 甲醇
THF 四氫呋喃
HOAc 乙酸
dppf 2-(二苯基膦基)二茂鐵
EDCI 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽
TEA 三乙胺
方法1.代表性實施例
5-溴-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(1)
在氮氣氣氛下，向乙酰氧肟酸(0.61g,8.13mmol)的干燥DMF(10mL)溶液中加入叔丁醇鉀(0.91g,8.14mmol)。將反應混合物在20℃攪拌2hr。然后加入5-溴-2-氯-4,6-二甲基煙腈(1.00g,4.07mmol)并將得到的混合物在20℃攪拌24hr，然后用H2O(150ml)稀釋并攪拌1hr。將得到的白色沉淀過濾并用水洗滌。將濾液用EtOAc(30mL x3)萃取。將合并的有機流分干燥(Na2SO4)，并將溶劑在真空下蒸發，得到另外的材料。將所述分離的固體和萃取的材料合并，在SiO2上色譜分離，采用0-50％梯度的石油醚/EtOAc洗脫。將柱純化的產物從DCM/石油醚中重結晶，得到5-溴-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(1)(0.68g,69％)，為白色固體,mp(DCM/石油醚)208-211℃,1H NMR[(CD3)2SO]δ6.24(s,2H,NH2),2.66(6H,2x CH3),LCMS[M+H]＝242和244.C8H8BrN3O的計算值:C,36.7；H,3.3；N,17.4；實測值C,36.9；H,3.2,N,17.4％.
類似地制備下述化合物:
異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(2)
其由2-氯煙腈在1,2-二甲氧基乙烷中以48％產率制備；
5-氯-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(3)
其由2,5-二氯-4,6-二甲基煙腈以75％產率制備；mp(DCM/石油醚)214-216℃.1H NMR[(CD3)2SO]δ6.25(bs,2H,NH2),2.64(s,3H,CH3),2.61(s,3H,CH3)；LCMS[M+H]＝198；HPLC 99.8％；C8H8ClN3O的分析計算值:C,48.6；H,4.1；N,21.4；實測值C,48.8；H,3.9,N,21.4％.
4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(4)
其由2-氯-4,6-二甲基煙腈以40％產率制備；mp(DCM/石油醚)156-158℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ6.98(s,1H),6.09(bs,2H,NH2),2.57(d,J＝0.6Hz,3H,CH3),2.48(s,3H,CH3)；HPLC 99.9％；C8H9N3O的分析計算值:C,58.9；H,5.6；N,25.5；實測值C,59.0；H,5.6；N,25.9％.
4,5,6-三甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(5)
其由2-氯-4,5,6-三甲基煙腈以39％產率制備；mp(DCM/石油醚)204-207℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ6.04(bs,2H,NH2),2.44(s,6H,2x CH3),2.14(s,3H,CH3)；HPLC 99.9％；C9H11N3O的分析計算值:C,61.0；H,6.3；N,23.7；實測值C,61.0；H,6.3；N,23.7％.
5-溴異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(6)
其由5-溴-2-氯煙腈以60％產率制備；mp(DCM/石油醚)231-234℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.63((d,J＝2.3Hz,1H),8.55(d,J＝2.3Hz,1H),6.71(bs,2H,NH2)；HPLC 99.6％；LCMS[M+H]214和216；C6H4BrN3O的分析計算值:C,33.7；H,1.9；N,19.6；實測值C,33.9；H,1.7；N,19.5％.
6-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(7)
其由2-氯-6-甲基煙腈以40％產率制備；mp(DCM/石油醚)224-226℃；HPLC 100％；LCMS[M+H]＝150；C7H7N3O的分析計算值:C,56.4；H,4.7；N,28.2；實測值C；56.6；H,4.5；N,28.2％.
5-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(8)
其由2,5-二氯煙腈以79％產率制備；mp(DCM/石油醚)257-260℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.57(d,J＝2.4Hz,1H),8.42(d,J＝2.5Hz,1H),6.72(s,2H,NH2),HPLC 99.9％；LCMS[M+H]＝170；C6H4ClN3O的分析計算值；C,42.5；H,2.4；N,24.8；實測值C,42.6；H,2.2；N,24.6％.
異唑并[5,4-b]喹啉-3-胺(9)
其由2-氯喹啉-3-腈以72％產率制備；mp(DCM/石油醚)261-263℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.93(s,1H),8.16(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.99(d,J＝8.6Hz,1H),7.87(ddd,J＝8.5,6.8,1.4Hz,1H),7.59(ddd,J＝8.1,6.8,1.1Hz,1H),6.89(s,2H,NH2).HPLC 99.6％；C10H7N3O的分析計算值；C,64.9；H,3.8；N,22.7；C,65.0；H,3.7；N,22.7％.
5,6,7,8-四氫異唑并[5,4-b]喹啉-3-胺(10)
其由2-氯-5,6,7,8-四氫喹啉-3-腈以61％產率制備；mp(DCM/MeOH)236-239℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.92(s,1H),6.46(bs,2H,NH2),2.88(t,J＝6.4Hz,2H),2.83(t,J＝6.2Hz,2H),1.87-1.74(m,4H)；HPLC 100％；LCMS[M+H]＝190；C10H11N3O的分析計算值:C,63.5；H,5.9；N,22.2；實測值C,63.6；H,5.9,N,22.2％.
6-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(11)
其由2,6-二氯煙腈以2％產率制備；mp(DCM/MeOH)238-241℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),6.76(bs,2H,NH2)；LCMS[M+H]＝170；HPLC 99.9％,C6H4ClNO3的分析計算值:C,42.5；H,2.4；N,24.8；實測值C,42.7；H,2.3；N,24.7％.
異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(12)
其由4-氯嘧啶-5-腈在1,4-二氧六環中以15％產率制備；mp(DCM/石油醚)>295℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.29(s,1H),9.08(s,1H),7.00(bs,2H,NH2)；LCMS[M+H]＝137；HPLC 96.0％；C5H4N4O的分析計算值；C,44.1；H,3.0；N,41.2；實測值C,44.3；H,2.9；N,40.9％.
4-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(13)
其由2-氯-4-苯基煙腈在1,2-二甲氧基乙烷中以26.6％產率制備；mp(DCM/石油醚)196-199℃；LCMS[M+H]＝212；HPLC 99.7％；C12H9N3O的分析計算值:C,68.2；H,4.3；N,19.9；實測值C,68.4；H,4.2；N,20.0％.
5-氟異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(14)
其由2-氯-5-氟煙腈在1,2-二甲氧基乙烷中以45％產率制備；mp(DCM/石油醚)223-226℃；LCMS[M+H]＝154；HPLC 99.8％；C6H4FN3O的分析計算值:C,47.1；H,2.6；N,27.4實測值C,47.3；H,2.5N,27.7％.
6-苯基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(15)
其由2-氯-6-苯基煙腈以48％產率制備；mp(DCM/石油醚)236-238℃；LCMS[M+H]＝212；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.36(d,J＝8.1Hz,1H),8.17-8.14(m,2H),7.97(d,J＝8.27Hz,1H)；7.56-7.48 9(m,3H),6.65(s,2H,NH2)；HPLC 100％；C12H9N3O的分析計算值:C,68.2；H,4.3；N,19.9；實測值C,68.3；H,4.2；N,19.8％.
5-碘異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(16)
其由2-氯-5-碘煙腈以35％產率制備；mp(DCM/MeOH)243-246℃；LCMS[M+H]＝262；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.69(2xd,J＝2.1Hz,2H),6.68(bs,2H,NH2)；HPLC 99.9％；C6H4IN3O的分析計算值:C,27.6；H,1.5；N；16.1；實測值C,27.7；H,1.6；N,16.0％.
異唑并[4,5-c]吡啶-3-胺(17)
其由4-氯煙腈以11％產率制備；mp(DCM/MeOH)189-192℃；LCMS[M+H]＝136；HPLC 99.7％.HRMS(ESI+)C6H6N3O的計算值136.0505；實測值136.0502.
6-氯-4-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(42)
其由2,6-二氯-4-甲基煙腈制備,mp 225-228℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.28(s,1H),6.33(br s,2H,NH2),2.63(s,3H,CH3)；HPLC 99.3％；LCMS實測值:[M+H]＝184,186.
異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(43)
其由6-氨基-2-氯煙腈制備,mp 205-208℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.71(d,J＝8.8Hz,1H),6.70(br s,2H,NH2),6.31(d,J＝8.8Hz,1H),6.08(br s,2H,NH2)；HPLC 99.0％；LCMS實測值:[M+H]＝151.
5-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(44)
其由5-甲基-2-氯煙酸鹽制備,mp 232-234℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.35(d,J＝1.2Hz,1H),8.07(d,J＝1.2Hz,1H),6.57(br s,2H,NH2),2.39(s,3H,CH3)；HPLC 96.4％.LCMS實測值:[M+H]＝150.
5,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(45)
其由2-氯-5,6-二甲基煙腈制備,mp 263-266℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.95(s,1H),6.47(br s,2H,NH2),2.49(s,3H,CH3),2.31(s,3H,CH3)；HPLC 99.1％；LCMS實測值:[M+H]＝164.
6-甲基-4-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(46)
其由2-氯-6-甲基-4-(三氟甲基)煙腈制備,mp 112-114℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.70(s,1H),6.07(br s,2H,NH2),2.68(s,3H,CH3)；HPLC 97.7％.LCMS實測值:[M+H]＝218.
6-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(47)
其由2-氯-6-(三氟甲基)煙腈以31％產率制備,mp(DCM/MeOH)226-228℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.60(d,J＝7.90Hz,1H),7.90(d,J＝7.90Hz,1H),6.93(brs 2H)；C7H4F3N3O的分析計算值:C,41.4,H,2.0；N,20.7；實測值C,41.4,H,1.8；N,20.5％.
6-異丙基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(48)
其由2-氯-6-異丙基煙腈以79％產率制備,mp(DCM/石油醚)165-168°；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.18(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),6.53(brs,2H),3.11(sp,J＝6.9Hz,1H),1.25(d,J＝6.9Hz,6H)；C9H11N3O的分析計算值:C,61.0；H,6.3N,23.7；實測值C,61.2；H,6.4；N,23.5％
5-硝基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(49)
其由5-硝基-2-氯煙腈制備,mp>290℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.37(d,J＝2.8Hz,1H),9.27(d,J＝2.8Hz,1H),7.06(br s,2H,NH2)；HPLC 99.8％.LCMS實測值:[M+H]＝181.
3-氨基-6-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(50)
其由6-氯-5-氰基-2-(三氟甲基)煙酸乙酯制備,mp 177-180℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.95(s,1H),7.08(br s,2H,NH2),4.40(q,J＝8.0Hz,2H,OCH2).1.34(t,J＝8.0Hz,3H,CH3)；HPLC 99.1％.LCMS實測值:[M+H]＝276.
4-甲氧基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(51)
其由2-氯-4-甲氧基煙腈制備,mp 241-243℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.35(d,J＝5.9Hz,1H),6.91(d,J＝5.9Hz,1H),6.17(br s,2H,NH2),3.99(s,3H)；HPLC 97.6％.LCMS實測值:[M+H]＝166.
5-(二氟甲氧基)-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(52)
其由2-氯-5-(二氟甲氧基)-4,6-二甲基煙腈制備,mp 151-153℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.05(t,J＝74Hz,1H),6.23(br s,2H,NH2),2.54(s,3H),2.51(s,3H)；HPLC 99.7％.LCMS實測值:[M+H]＝230.
3-氨基-6-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(53)
其由6-氯-5-氰基-2-甲基煙酸乙酯制備,mp 178-180℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.86(s,1H),6.81(br s,2H,NH2),4.35(q,J＝7.2Hz,2H,OCH2),2.80(s,3H,CH3),1.36(t,J＝7.2Hz,3H,CH3)；HPLC 99.6％.LCMS實測值:[M+H]＝222.
3-氨基-6-(二氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(54)
其由6-氯-5-氰基-2-(二氟甲基)煙酸乙酯制備,mp 158-160℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.05(s,1H),7.59(t,J＝53Hz,1H),7.04(br s,2H,NH2),4.39(q,J＝6.8Hz,2H,OCH2),1.37(t,J＝6.8Hz,3H,CH3)；HPLC 99.1％.LCMS實測值:[M+H]＝258.
5-氟-6-嗎啉代異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(55)
其由2-氯-5-氟-6-嗎啉代煙腈制備,mp 168-170℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.86(d,J＝12.8Hz,1H),6.33(br s,2H,NH2),3.72(br s,4H,CH2O),3.51(br s,4H,CH2N)；HPLC 98.0％.LCMS實測值:[M+H]＝239.
N6-環丙基-5-氟異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(56)
其由2-氯-6-(環丙基氨基)-5-氟煙腈制備,mp 182-184℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.66(d,J＝12.9Hz,1H),7.63(br s,1H,NH),6.14(br,2H,NH2),2.75(m,1H,CHN),0.73(m,2H,CH2),0.56(m,2H,CH2)；HPLC 99.4％.LCMS實測值:[M+H]＝209.
5-氟-N6,N6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(57)
其由2-氯-6-(二甲基氨基)-5-氟煙腈制備,mp 186-189℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.74(d,J＝13.2Hz,1H),5.76(br,2H,NH2),3.11(s,6H,NMe2)；HPLC 96.2％.LCMS實測值:[M+H]＝197.
6-(呋喃-2-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(58)
其由2-氯-6-(呋喃-2-基)煙腈制備,mp 269-272℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.31(d,J＝8.4Hz,1H),7.93(d,J＝1.2Hz,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(d,J＝3.2Hz,1H),6.72(dd,J＝3.2,1.2Hz,1H),6.64(br s,2H,NH2).HPLC 98.7％.LCMS實測值:[M+H]＝202.
6,7-二氫-5H-環戊二烯并[b]異唑并[4,5-e]吡啶-3-胺(59)
其由2-氯-6,7-二氫-5H-環戊二烯并[b]吡啶-3-腈制備,mp 217-220℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.99(s,1H),6.47(br s,2H,NH2),2.94(m,4H),2.13(m,2H)；HPLC 99.4％.LCMS實測值:[M+H]＝176.
6,7,8,9-四氫-5H-環庚三烯并[b]異唑并[4,5-e]吡啶-3-胺(60)
其由2-氯-6,7,8,9-四氫-5H-環庚三烯并[b]吡啶-3-腈制備,mp 210-212℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.94(s,1H),6.47(br s,2H,NH2),3.02(d,J＝4.0Hz,2H),2.87(d,J＝4.1Hz,2H),1.83(m,2H),1.61(m,4H)；HPLC 96.6％.LCMS實測值:[M+H]＝204.
6,6-二甲基-5,6,7,8-四氫異唑并[5,4-b]喹啉-3-胺(61)
其由2-氯-6,6-二甲基-5,6,7,8-四氫喹啉-3-腈制備,mp 203-205℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.90(s,1H),6.49(br s,2H,NH2),2.62(s,2H),2.06(t,J＝6.9Hz,2H),1.65(t,J＝6.9Hz,2H),0.97(s,6H)；HPLC 99.1％.LCMS實測值:[M+H]＝218.
7,8-二氫-5H-異唑并[5,4-b]吡喃并[3,4-e]吡啶-3-胺(62)
其由2-氯-7,8-二氫-5H-吡喃并[4,3-b]吡啶-3-腈制備,mp 248-250℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.94(s,1H),6.57(br s,2H,NH2),4.81(s,2H),4.00(m,2H),2.97(m,2H)；HPLC 97.8％.LCMS實測值:[M+H]＝192.
6-(甲硫基)異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(63)
其由4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-腈制備,mp>310℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.05(s,1H),6.92(br s,2H,NH2),2.56(s,3H,SCH3)；HPLC 99.9％.LCMS實測值:[M+H]＝183.
6-甲基異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(64)
其由4-氯2-甲基嘧啶-5-腈制備,mp 180-182℃；1H NMR(CD3OD)δ9.10(s,1H),2.78(s,3H,CH3)；HPLC 97.9％.LCMS實測值:[M+H]＝151.
4-(甲硫基)-6-苯基異唑并[5,4-d]嘧啶-3-胺(65)
其由4-氯-6-(甲硫基)-2-苯基嘧啶-5-腈制備,mp 230-233℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.48(m,2H),7.57(m,3H),6.37(br s,2H,NH2),2.84(s,3H,SCH3)；HPLC 98.3％.LCMS實測值:[M+H]＝259.
6-氯-5-氟異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(66)
在20℃向乙酰氧肟酸(589mg,7.85mmol)的N-甲基嗎啉(10mL)溶液中加入干燥K2CO3(1.08g,7.83mmol)并將混合物在該溫度攪拌1hr。將該混合物在冰中冷卻，并加入2,6-二氯-5-氟煙腈(1.00g,5.24mmol)，并使反應混合物緩慢升溫至20℃并在該溫度攪拌3天。然后將反應混合物用H2O稀釋并用K2CO3堿化,萃取至EtOAc中并干燥(Na2SO4)。蒸發溶劑得到半固體,將其色譜分離(SiO2/X4/EtOAc,0-20％)。合并具有正確質量的流分，并蒸發溶劑。將得到的殘留物用DCM和MeOH研磨，得到(66)(2.0mg,0.2％產率),mp 243-245℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.32(d,J＝7.6Hz,1H),6.77(brs,2H)；HPLC 99.4％；C6H3ClFN3O.0.25MeOH的分析計算值:C,38.38,H,2.06；N,21.49；實測值C,38.32；H,1.85,N,21.54％.
5,6-二氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(67)
由2,5,6-三氯煙腈和乙酰氧肟酸在N-甲基嗎啉中在室溫3天，得到67(3％產率)。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.58(s,1H),6.82(brs,2H),HPLC 96.5％,LCMS[M+H]＝204/206.
6-氯-4-(三氟甲基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(68)
將純凈的2,6-二氯-4-(三氟甲基)煙腈(102mg,0.42mmol)和乙酰氧肟酸(315mg 4.2mmol)混合物加熱至120℃反應20hr。然后將冷卻的反應混合物用H2O稀釋，用K2CO3堿化，萃取至EtOAc中，并將溶液干燥(Na2SO4)。蒸發溶劑并色譜分離殘留物(SiO2/石油醚/EtOAc 0-20％)，得到68(4.0mg,4％產率),1H NMR[(CD3)2SO]δ7.95(d,J＝0.6Hz,1H),6.24(brs,2H),HPLC 99.5％,LCMS[M+H]＝238.
5-(3-甲氧基丙-1-炔-1-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(69)
將2-氯-5-碘煙腈(277mg,1.05mmol)、CuI(19.8mg,0.104mmol)和PdCl2(PPh3)2(44mg,0.022mmol)的DMF(6.0ml)和Et3N(6.0ml)溶液在N2下在密封管中脫氣，然后加入甲基炔丙基醚(1.1ml,910mg,13mmol)，并將反應混合物在20℃攪拌2hr。然后將反應混合物用H2O稀釋，萃取至EtOAc中并干燥(Na2SO4)。蒸發溶劑并用SiO2/石油醚/EtOAc(0-10％)色譜分離殘留物，得到2-氯-5-(3-甲氧基丙-1-炔-1-基)煙腈(103mg,47.4％)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.80(d,J＝2.3Hz,1H),8.67(d,J＝2.3Hz,1H),4.39(s,2H),3.59(s,3H),LCMS[M+H]＝207.用20％石油醚/EtOAc進一步洗脫得到雙加成的產物
2,5-雙((3-甲氧基丙-1-炔-1-基)氧基)煙腈(100mg,40％).1H NMR[(CD3)2SO]δ8.90(d,J＝2.1Hz,1H),8.56(d,J＝2.1Hz,1H),4.49(s,2H),4.40(s,2H),3.39(s,3H),3.35(s,3H),LCMS[M+H]＝241.
2-氯-5-(3-甲氧基丙-1-炔-1-基)煙腈在DMF中與乙酰氧肟酸和KOtBu的類似的閉環以24％產率得到69,mp(DCM/石油醚)183-186℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.61(d,J＝2.1Hz,1H),8.42(d,J＝2.1Hz,1H),6.70(brs,2H),4.37(s,2H),3.37(s,3H)；HPLC 99.9％；LCMS[M+H]＝204,C9H9N3O2的分析計算值:C,59.1,H,4.5,N,20.7；實測值C,59.2,H,4.3；N,20.7％.
方法2.代表性實施例
N6,N6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(18)
向6-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺的THF(15ml)溶液中加入40％二甲基胺的水溶液(2mL)。將反應混合物在20℃攪拌4天。在真空下除去過量溶劑，并將得到的沉淀過濾并收集固體。用EtOAc(20mL x3)萃取濾液得到另外的材料。將合并的產物在SiO2上色譜分離，采用0-75％梯度的石油醚/EtOAc洗脫，得到N6,N6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,6-二胺(18)(81mg；77％)，為白色固體；mp(DCM/石油醚)238-241℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ7.85(d,J＝8.8Hz,1H),6.57(d,J＝8.8Hz,1H),1.13(s,2H,NH2)；3.09[s,6H,N(CH3)2].LCMS[M+H]＝179；HPLC 99.7％；C8H10N4O的分析計算值:C,53.9；H,5.7；N,31.4；實測值C,54.1；H,5.6；N,31.5％.
類似地制備以下化合物
N4,N4-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3,4-二胺(19)
其由4-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺以74％產率制備,mp(DCM/MeOH)218-220℃；LCMS[M+H]＝179；HPLC 99.9％.HRMS(ESI+)C7H11N4O的計算值179.0927；實測值179.0926.
方法2.其它實施例
一般實驗程序
向A(1.0eq)的DMSO溶液中加入B(2.0eq)和KF(3.0eq)，并將得到的混合物在微波反應器中在150℃加熱2小時。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。將殘留物通過制備TLC(CH2Cl2/MeOH＝20/1)純化，得到需要的產物。
采用上述方法制備下面的化合物：
方法3.代表性實施例
5-氯-N3,4,6-三甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(20)
將5-氯-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(0.21mg,1.05mmol)的原甲酸三甲酯(3mL)混合物回流20hr。在真空下除去過量的原甲酸三甲酯，然后將殘留物溶解在乙醇(10mL)中，并用NaBH4(284mg,7.7mmol)處理，并將混合物在20℃攪拌3hr，然后在50℃攪拌20hr。將反應混合物濃縮，并將殘留物在H2O(50mL)中攪拌。將得到的沉淀過濾，并再用水洗滌。將收集的固體通過柱色譜法在SiO2上純化，采用梯度的0-40％石油醚/EtOAc洗脫。從DCM/石油醚、然后石油醚/EtOAc、最終MeOH/H2O中重結晶，得到產物5-氯-N3,4,6-三甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(20)(50mg,22.5％)；mp 167-170℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ6.53[(q,J＝4.4Hz 1H,NH(CH3)],2.82(d,J＝4.9Hz,3H,NCH3)；2.62(s,3H,CH3),2.60(s,3H,CH3)；LCMS[M+H]＝212.5；HPLC 97.5％；C9H10ClN3O的分析計算值:C,51.1；H,4.8；N,19.8；實測值C,51.0；H,4.5；N,19.9％.
方法4.代表性實施例
5-氯-N3,N3,4,6-四甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(21)
向5-氯-4,6-二甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(0.10g,0.506mmol)的HOAc(5mL)混懸液中加入多聚甲醛(0.65g,7.2mmol)和NaBH3CN(0.45g,7.2mmol)。將反應混合物加熱至100℃反應2hr，冷卻并用aq K2CO3堿化。將得到的沉淀過濾，用H2O洗滌，并在SiO2上色譜分離，采用梯度的0-75％石油醚/DCM洗脫，得到5-氯-N3,N3,4,6-四甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(21)(45mg；39％)；mp(DCM/石油醚)112-113℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ2.90[s,6H,N(CH3)2],2.65(s,3H,CH3),2.63(s,3H,CH3)；LCMS[M+H]＝226.5；HPLC 98.3％；C10H12ClN3O的分析計算值:C,53.2；H,5.4；N,18.6；實測值C,53.1；H,5.3；N,18.5％.
方法5.代表性實施例
5-(3-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(22)
將5-溴異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(0.16g,0.76mmol)、(3-甲氧基苯基)硼酸(0.23g,152mmol)和2M K2HPO4(3mL)在1,4-二氧六環(6mL)中的混合物用N2脫氣。加入PdCl2(dppf)(50mg,9％mol)，并將反應混合物在70℃攪拌加熱過夜。在真空下蒸發二氧六環，并將殘留物在水和EtOAc之間分配。將合并的有機萃取物干燥(Na2SO4)并蒸發溶劑。將殘留物在硅膠上色譜分離，采用0-30％的石油醚/EtOAc梯度洗脫，得到5-(3-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(22)(66mg,36％),mp(EtOAc/石油醚)200-202℃,1H NMR[(CD3)2SO]δ8.83(d,J＝2.3Hz,1H),8.59(d,J＝2.3Hz,1H),7.45(t,J＝8.1Hz,1H),7.28-7.26(m,2H),7.02-7.03(m,1H),7.00-6.99(m,1H),6.68(s,2H,NH2),3.85(s,3H,OCH3),LCMS[M+H]＝242,HPLC:98.2％,C13H11N3O2的分析計算值:C,64.7；H,4.6；N,17.4；實測值C,64.7；H,4.6,N,17.4％
類似地制備下述化合物:
5-(2-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(23)
其由(2-甲氧基苯基)硼酸以19％產率制備；mp(DCM/石油醚)191-193℃；HPLC 98.6％:HRMS(ESI+)C13H12N3O2的計算值242.0924；實測值242.0928.
5-苯基異唑并[5，4-b]吡啶-3-胺(24)
其由5-溴異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺和苯基硼酸以13％產率制備；mp(DCM/MeOH)249-252℃；LCMS[M+H]＝212；HPLC 99.3％.C7H9N3O.1/4 H2O的分析計算值；C,67.5；H,4.4；N,19.7；實測值；C,67.4；H,4.2；N,19.8％
5-(3-氟-4-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(25)
其由(3-氟-4-甲氧基苯基)硼酸以18％產率制備；mp(DCM/MeOH)258-261℃；LCMS[M+H]＝260；HPLC 99.6％；C13H10FN3O的分析計算值:C,60.2；H,4.0；N,16.2；實測值C,60.1；H,3.8；N,16.2％.
5-(吡啶-3-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(26)
其由3-吡啶基硼酸以6％產率制備；mp(MeOH)239-242℃；HPLC 98.8％；HRMS(ESI+)C11H9N4O的計算值213.0771；實測值213.0779.
5-(吡啶-4-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(27)
其由4-吡啶基硼酸以6％產率制備；mp(DCM/MeOH)291-294℃；HPLC 98.6％；HRMS(ESI+)；C11H9N4O的計算值213.0771；實測值213.0774.
2-(3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-5-基)苯酚(28)
其由(2-羥基苯基)硼酸以4％產率制備；mp(MeOH/H2O)208-211℃；HPLC 95.7％；HRMS(ESI+)C12H10N3O2的計算值228.0768；實測值228.0771.
4-(3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-5-基)苯酚(29)
其由(4-羥基苯基)硼酸以4％產率制備；mp(MeOH)272-275℃；HPLC 99.6％.HRMS(ESI+)C12H10N3O2的計算值228.0768；實測值228.0763.
5-(4-氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(30)
其由(4-氟苯基)硼酸以16％產率制備；mp(MeOH)235-238℃；HPLC 99.6％；C12H8FN3O的分析計算值:C,62.9；H,3.5；N,18.3；實測值C,62.3；H,3.4；N,18.3％.
5-(3-氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(31)
其由(3-氟苯基)硼酸以38％產率制備；mp(MeOH)233-236℃；HPLC 98.4％；C12H8FN3O的分析計算值:C,62.9；H,3.5；N,18.3；實測值C,62.5；H,3.5；N,18.1％.
5-(2,4-二氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(32)
其由(2,4-二氟苯基)硼酸以18％產率制備；mp(MeOH)258-261℃；HPLC 99.5％；C12H7F2N3O的分析計算值:C,58.3；H,2.8；N,17.0；實測值C,58.2；H,2.7；N,16.9％.
5-(3,5-二氟-2-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(33)
其由(3,5-二氟-2-甲氧基苯基)硼酸以5％產率制備；mp(MeOH)210-211℃；HPLC 99％；HRMS(ESI+)C13H10F2N3O2的計算值278.0737；實測值278.0736.
5-(2,4-二氯苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(34)
其由(2,4-二氯苯基)硼酸以5％產率制備；mp(石油醚/EtOAc)233-236℃；HPLC 97％；C12H7Cl2N3O的分析計算值；C 51.4；H,2.5；N,15.0；實測值C,51.3；H,2.6；N,14.8％.
5-(2,3,4-三氯苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(35)
其由(2,3,4-三氯苯基)硼酸以3％產率制備；mp(DCM/MeOH)250-153℃；HPLC 97.5％LCMS[M+H]314和316.HRMS(ESI+)C12H7Cl3N3O的計算值313.9648；實測值313.9649.
5-(4-(三氟甲基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(36)
其由(4-三氟甲基苯基)硼酸以17％產率制備；mp(MeOH)267-270℃；HPLC 99.9％；LCMS(M+H)281；C13H8F3N3O的分析計算值:C,55.9；H,3.0；N,15.0；實測值C,55.8；H,2.8；N,15.0％.
5-(3-氨基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(37)
其由(3-氨基苯基)硼酸以83％產率制備；mp(MeOH/H2O)220-221℃；HPLC 96.0％；LCMS(M+H)227；C12H10N4O的分析計算值:C,63.7；H,4.5；N,24.8；C,64,H,4.5；N,24.5％.
3-(3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-5-基)苯甲酸甲酯(38)
其由(3-(甲氧基羰基)苯基)硼酸以28％產率制備；mp(MeOH)221-223℃；HPLC 98.2％；LCMS(M+H)270；C14H11N3O3的分析計算值:C,62.4；H,4.1；N,15.6；實測值C,62.1；H,4.1；N,15.6％.
5-(6-氟吡啶-3-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(39)
其由(6-氟吡啶-3-基)硼酸以37％產率制備；mp(MeOH)278-281℃；HPLC 99.4％；HRMS(ESI+)C11H8FN4O的計算值231.0677；實測值231.0680.
5-(2-氯-4-(三氟甲基)苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(40)
其由(2-氯-4-(三氟甲基)苯基)硼酸以8.2％產率制備；mp(MeOH)195-198℃；LCMS[M+H]＝314；HPLC 98.5％；C13H7ClF3N3O的分析計算值:C,49.2；H,2.2；N,13.4；實測值C,49.7；H,2.1；N,13.3％.
方法6.代表性程序和其它實施例
6-(4-甲氧基苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(70)
將2,6-二氯煙酸(1.0g,5.21mmol)、4-甲氧基苯基硼酸(0.96g,1.15mmol,1.2eq)K2CO3(2.5g,3.5eq)的二甲氧基乙烷(6ml)、EtOH(6ml)和H2O(6ml)混合物用N2脫氣，然后加入Pd(dppf)Cl2(180mg)，并將反應混合物在N2下回流2hr。將混合物蒸發至干，并將得到的固體在EtOAc中攪拌并過濾。將收集的固體溶解在小量的水中，并將溶液小心地用2M HCl酸化。將得到的沉淀過濾，并將母液用EtOAc進一步萃取并干燥(Na2SO4)。蒸發溶劑得到另外的材料。將兩份固體合并，并從MeOH/DCM中重結晶，得到2-氯-6-(4-甲氧基苯基)煙酸(196mg,16％)；1H NMR[(CD3)2SO]δ13.62(br,1H,CO2H),8.25(d,J＝8.1Hz,1H),8.09(d,J＝8.9Hz,2H),8.03(s,J＝8.1Hz,1H),7.09(d,J＝8.9Hz,2H),3.84(s,3H,OCH3)。其沒有進一步純化即直接使用。
將具有微量DMF的2-氯-6-(4-甲氧基苯基)煙酸(196mg,0.74mmol)和SOCl2(10ml)的混合物回流2h。在真空下除去過量的SOCl2，并將得到的殘留物溶解在干燥1,4-二氧六環中，并在冰中冷卻。加入NH3水溶液(10ml)，并將溶液在室溫攪拌20h。在真空下除去溶劑，并將得到的沉淀過濾，用水洗滌并干燥，得到2-氯-6-(4-甲氧基苯基)煙酰胺(153mg 78％)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.05(d,J＝8.6Hz,2H),8.01(brs,1H),7.98-7.91(m,2H),7.73(brs,1H),7.07(d,J＝8.6Hz,2H),3.83(s,3H)。其沒有進一步純化即直接使用。
將2-氯-6-(4-甲氧基苯基)煙酰胺(153mg,0.58mmol)在甲苯(3mL)和POCl3(0.5ml)的混合物中回流1hr。將反應混合物冷卻至20℃，并小心地用aq.K2CO3堿化，并用EtOAc萃取，然后干燥(Na2SO4)。蒸發溶劑并色譜分離殘留物(SiO2/0-20％石油醚/EtOAc)，得到2-氯-6-(4-甲氧基苯基)煙腈(120mg,84％)；1H NMR(CDCl3)δ8.03(d,J＝9.0Hz,2H),7.96(d,J＝8.2Hz,1H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.01(d,J＝9.0Hz,2H),3.89(s,3H).其沒有進一步純化即使用。
根據一般方法1采用乙酰氧肟酸和KOtBu在DMF中使2-氯-6-(4-甲氧基苯基)煙腈閉環，以57％產率得到(70)，mp(DCM/MeOH)249-252℃,1H NMR[(CD3)2SO]δ8.29(d,J＝8.2Hz,1H),8.12(brd,J＝9.0Hz,2H),7.90(d,J＝8.2Hz,1H),7.08(brd,J＝9.0Hz,2H),6.60(s,2H,NH2),3.84(s,3H,OCH3)；HPLC 96.4％；LCMS[M+H]＝242.5；C13H11N3O2的分析計算值:C,64.7；H,4.6,N,17.4；實測值C,64.4；H,4.4；N,17.4％.
6-(4-氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(71)
2,6-二氯煙酸與(4-氟苯基)硼酸進行類似的Suzuki偶聯，以49％產率得到2-氯-6-(4-氟氟苯基)煙酸；1H NMR[(CD3)2SO]δ13.72(br s,1H),8.31(d,J＝8.1Hz,1H),8.19(br dd,J＝9.0,5.5Hz,1H),8.10(d,J＝8.1Hz,1H),7.38(t,J＝8.9Hz,1H),其沒有進一步純化即直接使用。
2-氯-6-(4-氟苯基)煙酸與亞硫酰氯反應，隨后與aq.NH3反應，得到2-氯-6-(4-氟苯基)煙酰胺；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.17-8.13(m,2H),8.05-8.36(m,2H),7.98(d,J＝7.9Hz,1H),7.67(br s,1H),7.38-7.34(m,2H)。將其在POCl3/甲苯中回流，經兩步以83％產率得到2-氯-6-(4-氟苯基)煙腈；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.55(d,J＝8.2Hz,1H),8.26-8.21(m,3H),7.43-7.37(m,2H).
2-氯-6-(4-氟苯基)煙腈與乙酰氧肟酸和KOtBu在DMF中反應以21％產率得到(71)，MP(DCM/石油醚)265-268℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.35(d,J＝8.2Hz,1H),8.22(dd,J＝9.0,5.5Hz,2H),7.96(d,J＝8.2Hz,1H),7.37(t,J＝8.0Hz,2H),6.65(s,2H)；HPLC 99.8％；C12H8FN3O的分析計算值；C,61.7；H,3.7；N,18.0；實測值C,61.8；H,3.6；N,18.1％.
6-(2,4-二氯苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(72)
2,6-二氯煙酸與(2,4-二氯苯基)硼酸進行類似的Suzuki偶聯，隨后用亞硫酰氯和NH3水溶液處理，得到2-氯-6-(2,4-二氯苯基)煙酰胺。其與POCl3/甲苯在回流下反應，以15％總產率得到2-氯-6-(2,4-二氯苯基)煙腈；1H NMR[(CD3)2SOδ8.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(d,J＝8.1Hz,1H),7.85(d,J＝2.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H)；LCMS[M+H]＝279.
2-氯-6-(2,4-二氯苯基)煙腈與乙酰氧肟酸和KOtBu在DMF中反應，以41％產率得到(72)，mp(DCM/石油醚)231-233℃；1H NMR[(CD3)2SOδ8.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(d,J＝2.0Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.73(s,2H)；HPLC 99.3％；C12H7Cl2N3O的分析計算值:C,51.5；H,2.5；N,15.0；實測值:C,51.6；H,2.4；N,15.1％
6-(2,4-二氟苯基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(73)
2,6-二氯煙酸與(2,4-二氟苯基)硼酸進行類似的Suzuki偶聯，隨后與亞硫酰氯/NH3水溶液反應，得到2-氯-6-(2,4-二氟苯基)煙酰胺，將該材料與POCl3/甲苯在回流下反應，以19％產率得到2-氯-6-(2,4-二氟苯基)煙腈；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.57(d,J＝8.1Hz,1H),8.08-7.99(m,2H),7.50(ddd,J＝11.8,9.2,2.5Hz,1H),7.34-7.29(m,1H).
2-氯-6-(2,4-二氟苯基)煙腈與乙酰氧肟酸和KOtBu在DMF中反應，以74％產率得到(73)，mp(DCM/石油醚)235-238℃；1H NMR[(CD3)2SOδ8.39(d,J＝8.1Hz,1H),8.04(dt,J＝8.9,6.7Hz,1H),7.76(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H),7.45(ddd,J＝11.7,9.3,2.5Hz,1H),7.31-7.26(m,1H),6.71(s,2H)；HPLC 97.8％.
6-(2-噻吩基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(74)
2,6-二氯煙酸與2-噻吩基硼酸進行類似的Suzuki偶聯，隨后如上所述修飾產物，得到(74),mp 241-244℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.28(d,J＝8.2Hz,1H),7.96(dd,J＝3.7,1.1Hz,1H),7.90(d,J＝8.2Hz,1H),7.76(dd,J＝5.0,1.1Hz,1H),7.22(dd,J＝5.0,3.7Hz,1H),6.6(br s,2H).HPLC 99.2％；LCMS[M+H]＝218.
6-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(75)
2,6-二氯煙酸與(1-甲基-1H-吡唑-5-基)硼酸進行類似的Suzuki偶聯，隨后如上所述進行產物修飾，得到(75)；1H NMR[CD3OD]δ
8.29(d,J＝8.2Hz,1H),7.72(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝2.1Hz,1H),6.89(d,J＝2.1Hz,1H),4.27(s,3H)；HPLC 97％；ESI+實測值216.0872,C10H9N5O要求216.0880.
方法7.代表性實施例
在20℃，向通過將鈉(129mg,5.6mmol)加至干燥MeOH(3mL)中形成的溶液中，加入6-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(16mg,0.09mmol)，并將溶液在20℃攪拌20hr。然后將反應混合物蒸發至干，并將得到的殘留物在H2O(10mL)中攪拌，得到白色沉淀，將其過濾，用H2O洗滌并在100℃干燥，得到6-甲氧基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(41)(7mg,46％),mp(H2O),213-215℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.10(d,J＝8.5Hz,1H),6.75(d,J＝8.5Hz,1H),6.42(bs,2H,NH2),3.91,(s,3H,OCH3),HPLC 99.8％；HRMS(ESI+)C7H8N3O2的計算值166.0611；實測值166.0606.
方法7其它實施例
6-(3-(二甲基氨基)丙氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(76)
其由6-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺和N,N-二甲基氨基丙醇以33％產率類似地制備,mp(DCM/石油醚)164-166℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.09(d,J＝8.5Hz,1H),6.73(d,J＝8.5Hz,1H),6.41(brs,2H),4.32(t,J＝6.6Hz,2H),2.35(t,J＝7.1Hz,2H),2.14(s,6H),1.86(p,J＝6.8Hz,1H)；HPLC 99.7％；HRMS(ESI+)C11H17N4O2[M+H]的計算值237.1346,實測值237.1346.
6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(77)
其由6-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺和N,N-二甲基氨基乙醇以43％產率類似地制備,mp DCM/石油醚)168-170℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.09(d,J＝8.5Hz,1H),6.73(d,J＝8.5Hz,1H),6.42(brs,2H),4.38(t,J＝5.8Hz,2H),2.63(t,J＝5.8Hz,2H),2.20(s,6H)；HPLC 99.9％；HRMS(ESI+)C10H15N4O2[M+H]的計算值223.1190,實測值223.1197.
6-(2-嗎啉代乙氧基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(78)
其由6-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺和2-嗎啉代乙醇以24％產率類似地制備,mp(DCM/石油醚)151-153℃；1H NMR[CD3)2SO]δ8.10(d,J＝8.5Hz,1H),6.75(d,J＝8.5Hz,1H),6.42(brs 2H),4.42(brm,2H),3.56(brm,4H),2.70(brm,2H),2.40(brm,4H)；HPLC 99.9％；HRMS(ESI+)C12H17N4O3[M+H]的計算值265.1295,實測值265.1295.
一般方法:
在0℃向B(2.0eq)的DMF溶液中加入NaH(60％在礦物油中的分散體,1.9eq)，并將反應混合物在室溫攪拌30min。然后加入A(1.0eq)，并將得到的混合物在90℃攪拌6-16h(通過TLC監測)。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，并用水和鹽水洗滌。將有機層用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮，得到粗產物，將其通過柱色譜法在硅膠上純化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得到希望的產物。
通過該一般方法制備下面的化合物C：
方法8.代表性程序
6-(甲硫基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(79)和6-(甲基磺酰基)異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(80)
使6-氯異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺與3當量的硫甲醇鈉在DMF中在室溫反應18h，以68％產率得到(79)，mp(DCM/MeOH)230-233℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.07(d,J＝8.2Hz,1H),7.24(d,J＝8.2Hz,1H),6.53(brs,2H),2.56(s,CH3)；HPLC 99.3％；HRMS(ESI+)C7H8N3OS[M+H]的計算值182.0383；實測值182.0380.
向(79)(18mg,0.1mmol)的THF(3.0mL)溶液中加入過乙酸(0.5mL 32％在乙酸中的溶液)，并將反應混合物在20℃攪拌30hr。在20℃蒸發溶劑，并將殘留物用H2O稀釋，用K2CO3堿化，萃取至EtOAc中并用Na2SO4干燥。蒸發溶劑并使殘留物從DCM/石油醚中結晶，得到(80)(19mg,89％產率),mp(DCM/石油醚)231-234℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.65(d,J＝7.9Hz,1H),8.04(d,J＝7.94Hz,1H),6.96(brs,2H),3.35(s,CH3)；HPLC 98.5％；LCMS實測值[M+H]＝214.
3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-6-甲酸(81)
在0℃，將6-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(48mg,0.32mmol)溶解在濃H2SO4(5mL)中，然后加入CrO3(160mg,1.6mmol)，并在20℃持續攪拌20hr。然后使混合物在冰中攪拌，并將得到的沉淀過濾，用H2O洗滌，然后用石油醚/DCM的1:1混合物洗滌，然后在烘箱中干燥，得到81(8.0mg,14％)；1H NMR[(CD3)2SO]δ12.78(br,1H),8.45(d,J＝7.9Hz,1H),8.02(d,J＝7.9Hz,1H),6.81(brs,2H).HPLC 96％.LCMS實測值[M+H]＝178.
3-氨基異唑并[5,4-b]吡啶-6-甲酸甲酯(82)
在0℃，將6-甲基異唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(248mg,1.66mmol)溶解在冷卻的濃H2SO4(10ml)中，然后加入CrO3(350mg,3.5mmol)，并將混合物在20℃攪拌3天。冷卻至0℃后，加入MeOH(1ml)，并在20℃連續攪拌20hr。將混合物用水稀釋，萃取至EtOAc中。將合并的萃取物干燥(Na2SO4)，并蒸發溶劑，然后用HPLC分離殘留物，得到82(44mg),1H NMR[(CD3)2SO]δ8.48(d,J＝8.0Hz,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),6.84(brs,2H),3.92(s,3H)C8H7N3O3的分析計算值:C,49.7；H,3.6；N,21.7；實測值C,49.8；H,3.5；N,21.8％.HPLC 99.6％.
IDO1活性的酶測定
從用pREP4和pQE9-IDO質粒轉化的大腸桿菌EC538菌株的培養物中表達和純化重組人IDO1(rhIDO1)。將反應混合物置于含有50mM磷酸鹽緩沖液、10mM抗壞血酸、10μM亞甲基藍、100μg/mL過氧化氫酶、80μM TRP、0.01％Tween 20(v/v)和rhIDO1(15μL)(終濃度為9nM)的384孔微孔板中，總體積為30μL測定培養基。將板在37℃下孵育30分鐘，通過加入哌啶(200mM)終止酶促反應，并在65℃下加熱20分鐘。在λex400nm和λem500nm處讀取熒光強度。將測試化合物溶解于100％DMSO中，并在添加rhIDO1之前在測定培養基中預稀釋。IDO1抑制(％)計算為
所有實驗一式三份進行，統計分析在Prism v5(Graphpad Software,Inc.,La Jolla,CA,USA)中進行。
用于IDO1抑制的基于細胞的測定
為了測定細胞IDO1活性的抑制，將轉染以表達人IDO1(LLTC-hIDO1)或鼠(LLTC-mIDO1)的Lewis肺癌細胞在37℃、5％CO2下與測試化合物培養24小時。然后將來自各孔的培養物上清液轉移到新鮮的平底96孔板中，與三氯乙酸(10％終濃度)混合，并在60℃下孵育20分鐘。然后將板離心(在2500g下10分鐘)，然后將上清液轉移并與4-(二甲基氨基)苯甲醛(20mg/mL，在乙酸中)在新板中1:1混合。在480nm處讀取每個孔的吸光度，并計算抑制50％細胞酶活性的濃度。
使用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)比色法測定相同實驗中每個孔中細胞的活力。除去用于測定IDO1抑制的上清液后，將細胞與MTT(500μg/mL)一起溫育直到觀察到晶體形成。將板以2500g離心15分鐘，然后棄去所有孔中的上清液。加入DMSO(100μL/孔)以溶解晶體，然后在570nm測量每個孔中的吸光度。每個孔中的細胞活力表示為未處理對照的百分比。除非另有說明，對于所有實驗，使用一式三份培養物。
測定結果如下表所示。
化合物活性
活性IC50范圍:A；<1μM,B；1-10μM,C；10-100μM,D；>100μM
用于TDO抑制的基于細胞的測定
對于細胞TDO的抑制測定，轉染以過表達全長人TDO的GL261細胞在37℃、5％CO2下與測試化合物一起培養24小時。然后將來自各孔的培養物上清液轉移到新鮮的平底96孔板中，并且如上對于IDO1測定所述測定犬尿氨酸含量，并計算抑制50％細胞酶活性的濃度。
使用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)比色法測定相同實驗中每個孔中細胞的活力。
測定結果如下表所示。
化合物活性
活性IC50范圍:A；<1μM,B；1-10μM,C；10-100μM,D；>100μM
腫瘤生長抑制的測定
將腫瘤皮下植入同基因C57BI/6小鼠，當腫瘤大小達到約3×3mm時分配到不同的治療組。將化合物溶于DMSO中，每日ip或sc注射給藥體積為50ml的劑量。每隔一天測量腫瘤，并監測小鼠，直到達到人道倫理終點。
對于化合物3，研究結果顯示的圖1中，使用已經轉染以產生人IDO1的Lewis Lung TC癌細胞系。腫瘤體積以mm3表示。每組N＝7。*表示重復測量單因素Anova的顯著性。
犬尿氨酸與色氨酸比值(K：T)的變化的測定。
具有16天皮下GL-261-hIDO1腫瘤(腫瘤大小15-20mm)的小鼠的血漿和腫瘤中的K：T比值通過分析HPLC在用150mg/kg化合物3處理后0.25h、1h、2h、4h、6h和24h測定，每個時間點n＝3。在DMSO處理后0.25h、1h、2h、4h、6h和24h，從3只小鼠收集DMSO溶媒對照組(n＝21)。*和**表示與DMSO對照相比，通過單因素ANOVA和Sidak多重比較的顯著性(分別為p<0.05，p<0.01)。
本研究的結果如圖2所示。
與免疫檢查點阻斷組合的協同作用的測定。
圖3顯示了用下列物質處理的具有sc GL261-hIDO1腫瘤的小鼠的研究的至人道倫理終點的存活：溶媒(A)；化合物3，75mg/kg(B)IP每日，腫瘤植入后8天開始；針對抗-PD1(頂部：腫瘤植入后第8、11和14天，250μg/小鼠IP)或抗CTLA4(底部：腫瘤植入后6天，1mg/小鼠IP)的抗免疫檢查點抗體(C)；或化合物3+免疫檢查點抗體的組合(D)。P值表示與溶媒存活曲線相比，通過對數秩(Log-rank)分析的顯著差異。彩色箭頭表示給藥方案。
本研究的結果如圖3所示。
如本文所使用，“包括”與“含有”、“包含”或“特征在于”同義，并且是包容性的或開放式的，并且不排除另外的未被引用的要素或方法步驟。如本文所用，“由...組成”排除所述權利要求要素中未指定的任何要素、步驟或成分。如本文所使用的，“基本上由...組成”不排除不會實質上影響權利要求的基本和新特性的材料或步驟。在本文的各情況中，任何術語“包括”、“基本上由...組成”和“由...組成”可以用其他兩個術語中的任何一個來代替。
當本文公開一組材料、組合物、組分或化合物時，應當理解，這些組的所有個體成員及其所有亞組被分別地公開。當本文使用馬庫什組或其他分組時，該組的所有個體成員以及組中可能的所有組合和子組合意圖被單獨包含在本公開中。除非另有說明，本文描述或示例的組分的每種配方或組合均可用于實施本發明。無論何時在說明書中給出范圍，例如溫度范圍、時間范圍或組成范圍，所有中間范圍和子范圍以及包括在所給出的范圍內的所有個體值意圖被包括在本公開中。在本公開和權利要求中，“和/或”是附加地或替代地。而且，單數術語的任何使用也包括復數形式。
本文引用的所有參考文獻以沒有與本說明書的公開不一致的程度通過引用整體并入本文。本文提供的一些參考文獻通過引用并入本文，以提供關于原料、其它原料、其它試劑、其它合成方法、其它分析方法、其它生物材料、其它細胞和本發明的其它用途的來源的細節。本文使用的所有標題僅為方便起見。本說明書中提到的所有專利和出版物都指示本發明所屬領域技術人員的水平，并且通過引用并入本文，其程度如同每個單獨的出版物、專利或專利申請被具體和單獨指出而并入本文作為參考。本文引用的參考文獻通過引用整體并入本文以指示其出版或提交日時的技術狀態，并且如果需要，可以在本文中使用該信息來排除現有技術中的具體實施方案。
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