發(fā)明領域

本發(fā)明涉及用于通過包括洗滌、孵育、轉(zhuǎn)導、分離、密度梯度分離、稀釋和體積調(diào)整的方法步驟處理生物流體如全血、單采血液、骨髓血液、臍帶血、血沉棕黃層或培養(yǎng)的細胞的系統(tǒng)。

發(fā)明背景

ep-b-0912250(c.fell)(其內(nèi)容通過引用并入本文)描述了用于將生物流體處理和分離成組分的系統(tǒng)，其包括用于接收待分離的生物流體和分離的組分的一組容器，以及可選的一個或多個另外的用于添加劑溶液的容器。中空離心機處理室可通過處理室與旋轉(zhuǎn)驅(qū)動單元的接合而圍繞旋轉(zhuǎn)軸旋轉(zhuǎn)。處理室具有用于待處理的生物流體和用于處理的生物流體組分的軸向入口/出口。該入口/出口進入可變體積的分離空間，其中進行生物流體的整個離心處理。處理室包括從處理室的端壁延伸的大致圓柱形壁，該大致圓柱形壁在其中限定中空處理室，其占據(jù)與旋轉(zhuǎn)軸同軸的中空開放圓柱形空間，軸向入口/出口設置在所述端壁與大致圓柱形壁同軸，以進入中空處理室。處理室在大致圓柱形壁內(nèi)包含可軸向移動的構(gòu)件，例如活塞。可變體積的分離空間由處理室的上部通過大致圓柱形壁和容納在處理室的大致圓柱形壁中的可軸向移動的構(gòu)件限定，其中可移動構(gòu)件的軸向移動改變分離空間的體積，可移動構(gòu)件在處理室內(nèi)可軸向移動，以在離心處理之前或期間通過入口使選定量的待處理的生物流體進入分離空間，并且在離心處理期間或之后通過出口從分離空間排出處理的生物流體組分。提供了用于監(jiān)視可移動構(gòu)件的位置從而控制進入的生物流體的量和分離的組分的排出的手段。該系統(tǒng)還包括分配閥配置，用于建立處理室與所選定的容器之間的選擇性連通，或用于將處理室和容器不連通。

根據(jù)ep-b-1144026，此類系統(tǒng)布置成以分離和非分離運輸模式操作，這提供了使用包括先前未設想的新應用的系統(tǒng)的更大可能性，例如造血干細胞的分離和通常的實驗室處理。

根據(jù)ep-b-0912250和ep-b-1144026的系統(tǒng)設計用于使用作為構(gòu)成封閉的無菌環(huán)境的一次性套件的一部分的處理或混合室來操作分離生物流體，并且已經(jīng)被證明對于許多分離應用、特別是對于來自供體或患者的組分的在線分離是多價的。該系統(tǒng)已由biosafesa以商標sepax商業(yè)化。

以前使用sepax系統(tǒng)主要用于處理血液和血液衍生物產(chǎn)品，其含有成體干細胞，例如來自如骨髓、臍帶血或患者動員后的外周血的血液來源的血沉棕黃層中懸浮的造血干細胞、間充質(zhì)干細胞或脂肪來源的干細胞。

迄今為止最典型的應用是血液或血液衍生物的體積減少處理。通過這樣做，血漿和大多數(shù)紅細胞被耗盡，并且基本上包含懸浮在剩余血漿中的白細胞和干細胞以及紅細胞的血沉棕黃層被收集在可選擇的體積中。根據(jù)所選擇的最終體積，可以根據(jù)用戶的需要添加更多的血漿和紅細胞。

經(jīng)常使用sepax技術的第二個應用是洗滌應用。如果在48小時內(nèi)沒有使用，干細胞濃縮產(chǎn)品通常是冷凍保存的。一旦含有干細胞的細胞產(chǎn)品需要移植，就進行解凍程序，然后推薦使用洗滌程序來消除由殘留的有毒二甲基亞砜(dmso)產(chǎn)生的移植過程中的副作用。

第三個應用由將密度梯度介質(zhì)與想要減小體積的所需產(chǎn)品混合組成。在沉淀過程中，梯度密度介質(zhì)將在離心過程中在血漿和單核細胞和淋巴細胞群體之后但在粒細胞和紅細胞之前產(chǎn)生一層。sepax技術能夠提取懸浮在不含紅細胞的介質(zhì)中的白細胞和干細胞。當供體和受體之間存在輕微或重大不相容時，這尤其適用于移植。

迄今為止使用sepax技術進行的大多數(shù)應用都集中在處理含有干細胞的血液和血液衍生物，并且其體積有限，通常比880ml低得多。此外，已知的sepax應用基本上限于對產(chǎn)品進行最常見的一種單一處理功能，例如體積濃縮或洗滌應用。sepax的另一個限制是待處理的產(chǎn)品在產(chǎn)品中都含有紅細胞，并且該設備使用光學傳感器作為確定紅細胞與活塞間隙(in-pistongap)之間的過渡的基本元件。

已知用于處理生物流體的其它系統(tǒng)，例如wo2009/072003的系統(tǒng)，其包含包括離心機滾筒和耦合樣品分離單元的樣品處理單元。這樣的系統(tǒng)可以執(zhí)行順序處理程序，但是它們的配置和操作與sepax系統(tǒng)是截然不同的，因為它們不提供用于改進具有其固有局限性的sepax系統(tǒng)的有用指導。

發(fā)明概述

本發(fā)明涉及用于通過在中空圓柱形離心處理或混合室中的包括洗滌、孵育、轉(zhuǎn)導、分離、密度梯度分離、稀釋和體積調(diào)整的工藝步驟順序處理不透明和透明的生物流體如全血、單采血液、骨髓血液、臍帶血、血沉棕黃層或培養(yǎng)的細胞的方法，其用于處理或混合生物流體和/或?qū)⑸锪黧w與試劑和/或稀釋劑混合，其中離心處理室在其大致圓柱形壁內(nèi)容納有可軸向移動的構(gòu)件，例如活塞，其可軸向移動以改變處理室內(nèi)的分離空間的體積以使生物流體進入分離空間或從分離空間輸出生物流體，其中處理室是含有生物流體和試劑和/或稀釋劑的一次性套件的一部分，一次性套件構(gòu)成封閉的無菌環(huán)境。

根據(jù)本發(fā)明，使用單個處理室作為一次性套件的一部分，進行選自洗滌、孵育、轉(zhuǎn)導、分離、密度梯度分離、稀釋和體積調(diào)整中的至少三種不同程序；根據(jù)處理室中的給定處理配置，每種程序進行一次或重復多次。每種所述程序涉及通過軸向移動可移動構(gòu)件而產(chǎn)生的進入處理室、處理室中的操作和通過軸向移動可移動構(gòu)件而產(chǎn)生的來自處理室的輸出。至少三種不同程序在處理室中依次順序鏈式進行，以構(gòu)成作為處理室及其一次性套件中的整個順序操作的不同程序的鏈式順序。所有生物流體、用于執(zhí)行所有所述至少三種不同程序所必需的試劑和/或稀釋劑包含在用于整個順序操作的單個一次性套件的封閉無菌環(huán)境中。

在一個應用中，順序進行以下程序：預洗；加入試劑并孵育；后洗。該應用例如用于將磁珠與人血細胞或干細胞結(jié)合。

在另一個應用中，順序進行以下程序：洗滌；稀釋；離心分離；稀釋；產(chǎn)品的體積調(diào)整。該應用例如用于用淋巴細胞t細胞或其他人細胞的病毒轉(zhuǎn)導。

在又一個應用中，順序進行以下程序：初步解凍；洗滌；取樣和稀釋；體積調(diào)整/提取。該應用例如用于多劑量的細胞產(chǎn)品的修復配量(reconditiondosing)。

作為說明，各種程序通常涉及以下步驟。

洗滌程序通常涉及以下步驟：用基于細胞的產(chǎn)品填充處理室，用洗滌溶液填充處理室的剩余容積，以給定的g力并在給定時間t期間旋轉(zhuǎn)，提取洗滌溶液于廢物袋中，并最終提取含有細胞的期望的最終體積于輸出收集袋中。

孵育程序通常涉及以下步驟：用基于細胞的產(chǎn)品填充處理室，用孵育珠填充處理室，以規(guī)則的時間間隔通過處理室的雙向混合進行孵育，并最后提取并收集孵育的產(chǎn)品于收集袋中。

轉(zhuǎn)導程序通常涉及以下步驟：用基于細胞的產(chǎn)品填充處理室中的細胞產(chǎn)品，用生物病毒填充處理室，以給定的g力并在給定時間t期間旋轉(zhuǎn)進行轉(zhuǎn)導，提取轉(zhuǎn)導的產(chǎn)品于輸出收集袋中。

分離程序通常涉及以下步驟：用基于細胞的產(chǎn)品填充處理室，通過在給定的g力并在給定時間t期間旋轉(zhuǎn)將產(chǎn)品分離成組分，從室中提取出不需要的組分于廢物袋中和含有細胞的組分層于輸出收集袋中。

密度梯度程序通常涉及以下步驟：用梯度密度介質(zhì)填充旋轉(zhuǎn)處理室，用基于細胞的產(chǎn)品緩慢填充旋轉(zhuǎn)處理室，通過在給定的g力并在給定時間t期間旋轉(zhuǎn)將溶液分離成組分，從室中提取出不需要的組分于廢物袋中和含有細胞的組分層和部分梯度密度介質(zhì)于輸出收集袋中。

濃縮程序通常涉及以下步驟：用基于細胞的產(chǎn)品填充處理室，通過在給定的g力并在給定時間t期間離心濃縮細胞，從室中提取出不需要的組分于廢物袋中和通過收集壓實的細胞于輸出收集袋中。

稀釋程序通常涉及以下步驟：如果需要實現(xiàn)所需的最終細胞濃度，則表征初始的基于細胞的產(chǎn)品；用基于細胞的產(chǎn)品填充處理室；基于所需的體積或細胞濃度稀釋比，繼續(xù)用預先計算的鹽水溶液體積填充處理室，或用于將細胞懸浮在介質(zhì)和滋養(yǎng)溶液中；處理室以規(guī)則的時間間隔雙向混合，以便在處理室填充和從處理室提取流體期間混合稀釋或懸浮的細胞溶液；從室中提取出稀釋的細胞溶液于輸出收集袋中。替代處理選擇是基于所需的稀釋比例將計算出的鹽水或介質(zhì)溶液的體積填充到處理室中，然后從室中提取出含有細胞產(chǎn)品的鹽水或介質(zhì)溶液于輸出收集袋中。

體積調(diào)整程序通常涉及以下步驟：用基于細胞的產(chǎn)品或預稀釋溶液填充處理室，選擇所需輸出體積和劑量的數(shù)量，通過自動切換到不同的袋子、或者在每個劑量之后暫停并要求用戶選擇應該提取下一劑量的目的袋子從處理室中提取多個劑量。

處理室通常包括可移動活塞，并且通過紅外傳感器監(jiān)測活塞(或其他可移動構(gòu)件)的位置。

在一個整個順序操作的處理室中處理的液體體積可以高達處理室的最大處理體積的十六倍。例如，一個整個順序操作的體積可以是處理室的最大處理體積的四倍、八倍或十六倍，其可以由上述處理室中的分離空間的最大體積表示。

處理室有利地與兩個外部夾緊閥相關聯(lián)，該兩個外部夾緊閥控制一次性套件的管道用于選擇兩個生物添加劑，用于在不需要用戶干預的情況下切換一次性套件的袋子。

用于執(zhí)行本發(fā)明方法的系統(tǒng)通常包括容納一次性組件的中空離心或混合處理室的機柜，例如根據(jù)已知的sepax技術。

鏈式進行不同程序的本發(fā)明方法的一個優(yōu)點是它可以處理比以前可能的更大的體積，例如高達4升，而先前處理的體積至多880ml。因此克服了先前提出的sepax技術的體積限制。

此外，已經(jīng)有可能將處理擴展到所有類型的白細胞(血小板、單核細胞、淋巴細胞、粒細胞)，而先前的處理基本上限于干細胞和紅細胞。這是通過使用具有設計用于在處理透明流體時準確測量活塞位置的算法的紅外傳感器替代先前用于紅細胞的光學傳感器而實現(xiàn)的。

sepax系統(tǒng)有利地由兩個夾緊閥完成，用于(通過軟件)自動選擇兩種生物添加劑(例如病毒)，用于填裝(priming)室和隨后用介質(zhì)溶液切換以用于再懸浮，用于切換袋而無需用戶干預。

本發(fā)明的第一個應用由孵育組成，其用于將磁珠與人血細胞或干細胞(如淋巴細胞t細胞、b細胞或造血干細胞)結(jié)合。第二個應用是轉(zhuǎn)導，病毒通過轉(zhuǎn)導將外來遺傳物質(zhì)插入人血細胞或干細胞。第三個應用是指修復生物流體以實現(xiàn)可重現(xiàn)的血細胞或干細胞的濃度和體積。

附圖概述

將參考附圖通過示例進一步描述本發(fā)明，其中：

圖1a是本發(fā)明的第一個應用的流程圖；

圖1b是第一個應用的完整圖。

圖2a是本發(fā)明的第二個應用的流程圖；

圖2b是第二個應用的完整圖。

圖3a是本發(fā)明的第三個應用的流程圖；和

圖3b是第三個應用的完整圖。

圖4是用于容納用于執(zhí)行根據(jù)本發(fā)明的方法的設備的處理室的機柜的透視圖。

圖5是可用于進行給定應用的根據(jù)本發(fā)明的方法中的一次性套件(kit或set)的圖。

發(fā)明詳述

應用1：將磁珠與人血細胞或干細胞結(jié)合

第一個應用涉及人血細胞或干細胞(如淋巴細胞t細胞、淋巴細胞b細胞或造血干細胞)與磁珠的混合。

本應用說明了順序進行以下程序：洗滌、稀釋、孵育和洗滌。

第一階段是預處理基于細胞的產(chǎn)品，通常來自用于收集外周血干細胞的單采血液程序，很少也來自骨髓采集，以便去除不必要的元件，例如人血小板、聚集物、凝塊、細胞碎片，還可以通過添加生物營養(yǎng)物來水化細胞。如果產(chǎn)品先前是冷凍保存的，也應通過該階段去除冷凍保護劑溶液如二甲基亞砜。

然后，第二步涉及向預處理的生物產(chǎn)品中加入一定劑量的試劑，如磁珠或著色介質(zhì)，或一定劑量的染料。

第三步涉及溶液的孵育。該步的目的是將磁珠結(jié)合到目標細胞，或使活化的細胞著色以使其對光動力學處理高度敏感，或通過不同機制將其他溶液與目標細胞結(jié)合。在該階段期間，可以在分離室中在環(huán)境溫度下、在給定的時間內(nèi)進行孵育，通常開始于10分鐘至2小時，典型的時間為30分鐘，同時不斷混合溶液。也可以在受控的溫度、時間和血袋中經(jīng)由裝置例如在wo2014/181158a1中描述的并且由biosafesa以商標smart-max商業(yè)化的裝置中進行恒定混合而完成。這樣的裝置用于在受控溫度下混合包含在柔性儲存袋中的生物樣品，所述柔性儲存袋可以用于除了儲存之外用于收集、冷凍儲存或運輸生物樣品。

最后，最后一步是除去過量試劑的另一洗滌步驟，例如未連接到目標細胞的未結(jié)合磁珠，以避免不正確選擇或計數(shù)目標細胞，或通過介質(zhì)交換來停止著色過程，或通過上清液然后將細胞懸浮于新鮮介質(zhì)中去除其他溶液。

完成所有這些步驟并且所有這些步驟都是在自動化系統(tǒng)和無菌環(huán)境下順序進行的，例如使用上述的sepax技術。

圖1a和1b中示出了該第一個應用。如圖1a所示，該方法的應用包括預洗步驟10，然后加入試劑20并孵育30。通過循環(huán)40重復n次加入試劑20并孵育30。然后將最終孵育的產(chǎn)品進行后洗步驟50。

如圖1b中所示：

·預洗步驟10涉及洗滌通常來自單采血液程序的基于細胞的產(chǎn)品，如果適用則去除血小板和去除dmso。將產(chǎn)品重新懸浮至給定體積以使細胞不太過濃縮并防止細胞脫水。

·加入試劑步驟20涉及加入具體體積的磁珠和/或細胞染色劑或活化試劑，

·在孵育步驟30中，在(例如sepax系統(tǒng)的)離心處理和分離室內(nèi)或外的具體時間期間將細胞與添加的試劑混合。如果在外進行，則將細胞袋放在像smart-max這樣的設備上用于混合和溫度控制。

·若適用，后洗步驟50用于去除試劑(例如珠)

應用2：淋巴細胞t細胞的病毒轉(zhuǎn)導

第二個應用涉及通過添加病毒的淋巴細胞t細胞或其它人細胞如造血干細胞的轉(zhuǎn)導。

本應用說明了順序進行以下程序：洗滌、稀釋、轉(zhuǎn)導、稀釋、體積調(diào)整。

第一階段是通過執(zhí)行洗滌程序來預處理基于細胞的產(chǎn)品，其通常來自用于收集外周血干細胞的單采血液程序或來自細胞培養(yǎng)過程的擴增細胞，以去除不需要的元件，例如人血小板、聚集物、凝塊、細胞碎片。一旦不需要的元件去除，細胞也通過添加生物營養(yǎng)物再水化，并且可以懸浮在固定的所需體積中。如果先前已經(jīng)培養(yǎng)了細胞，也應去除培養(yǎng)基培養(yǎng)物，如果產(chǎn)品先前是冷凍保存的，也應去除二甲基亞砜。

然后，第二階段由將含有后來用于轉(zhuǎn)導的病毒的溶液稀釋在階段1中預處理的生物產(chǎn)品組成。在這種情況下，通常將含有病毒的溶液引入含有細胞的離心室內(nèi)。

第三階段由1200至1700g的高速旋轉(zhuǎn)組成，以將細胞從懸浮介質(zhì)中分離出來，使其與病毒緊密接觸以起始轉(zhuǎn)導過程。通過在高g力下旋轉(zhuǎn)，t淋巴細胞將與介質(zhì)分離并粘附到離心室的外表面。同時，插入腔室的病毒將擴散到分離室中的流體中，而緊密接觸將起始t淋巴細胞與病毒的轉(zhuǎn)導過程。

然后，在高速旋轉(zhuǎn)過程結(jié)束時，將溶液用培養(yǎng)基溶液或鹽水溶液稀釋，以達到所需的最終體積。

最后，如果需要多次使用劑量以供以后使用，整個溶液可以分至一個或幾個溶液袋。

圖2a和2b中示出了該第二個應用。如圖2a所示，該方法的應用包括洗滌步驟60，接著稀釋70和高速旋轉(zhuǎn)操作80，然后是稀釋90，以及任選的分裝步驟100，用于將產(chǎn)品分至n個袋子。

如圖2b中所示：

·洗滌步驟60用洗脫緩沖液洗滌通常來自單采血液程序或細胞培養(yǎng)物的基于細胞的產(chǎn)品。

·在稀釋步驟70中，將具體體積的病毒加入到sepax系統(tǒng)分離室內(nèi)的細胞中。

·然后，通過高g力和長旋轉(zhuǎn)持續(xù)時間在sepax離心處理室中進行高速旋轉(zhuǎn)步驟80，以使病毒與細胞緊密接觸。

·在稀釋步驟90中，添加培養(yǎng)基以達到目標體積。

·在分裝步驟100中，將總體積分至n個較小的袋子。這需要手動介入改變袋子和打開/關閉夾具。

應用3：修復配量(冷凍后，包括用于患者輸注的準確配量)

本應用說明了順序進行以下步驟：洗滌、分離、稀釋、體積調(diào)整。

通常，在標準的自體移植設置中，在預處理患者中進行單采血液程序。由于患者的預處理而富集血液細胞和造血干細胞的外周血在患者進行化學療法或放射治療期間被冷凍保存。一旦患者已完成治療，患者細胞在被移植之前被解凍和修復。

第三個應用是可重復的自動化方法，用于從冷凍保存的單采血液溶液開始獲得具有相同血細胞或干細胞濃度的多個劑量的細胞產(chǎn)品。

第一階段涉及在受控溫度和混合環(huán)境下解凍細胞產(chǎn)品，例如使用wo2014/181158a1中描述并且由biosafesa以商標smart-max商業(yè)化的裝置。這樣的裝置用于在受控溫度下混合包含在柔性儲存袋中的生物樣品，所述柔性儲存袋可以用于除了儲存之外用于收集、冷凍儲存或運輸生物樣品。

然后，第二階段由進行洗滌程序組成，其將消除冷凍保護劑溶液、在冷凍保存過程中形成的聚集物或者甚至凝塊。

然后，第三個階段由取一個樣本來測量細胞濃度組成。通過細胞濃度計算所需的等級(tierce)技術(如細胞計數(shù)器或流式細胞儀)分析樣本。一旦計算了細胞的實際密度，就可以在自動sepax平臺上調(diào)整稀釋因子，以達到所需的細胞濃度。前兩個步驟允許獨立于收集過程或患者而獲得可重現(xiàn)和均勻的細胞濃度。

一旦獲得了目標細胞的濃度，sepax系統(tǒng)允許用戶選擇應分到每個袋子上的體積，或包含總細胞溶液的袋子數(shù)量。通過這樣做，可以實現(xiàn)固定數(shù)量的袋子或每袋的體積劑量，全部含有相同的細胞濃度。

圖3a和3b中示出了該第三個應用。如圖3a所示，該方法的應用包括解凍步驟110，接著洗滌120，采樣130和稀釋140。第一提取步驟150將xml提取到袋子，經(jīng)由循環(huán)160重復n次，第二提取步驟170提取yml到質(zhì)量控制袋，該步驟通過循環(huán)180重復m次，通常僅一次。

如圖3b中所示：

·解凍操作110用于解凍細胞產(chǎn)品。

·在洗滌操作120中，除去冷凍保護劑。

·在采樣操作130中，洗滌的細胞被提取到輸出袋中進行采樣。此操作需要手動取樣的步驟。

·在稀釋步驟140中，調(diào)整用于患者配量的細胞濃度。

·第一提取步驟150將給定體積的細胞提取到轉(zhuǎn)移袋以用于準確的患者配量。這需要手動介入改變袋子和打開/關閉夾具。

·第二個提取步驟170制備最后m個袋子用于質(zhì)量控制(無菌度測試)。通常m＝1。

圖4是用于容納用于進行本發(fā)明的設備的處理室的機柜200的透視圖，所述設備是根據(jù)ep-b-0912250和ep-b1144026的系統(tǒng)的一部分，其內(nèi)容是在此通過引用并入本文。如圖所示，機柜200具有前部，其具有向上突出的部分圓柱形殼體210，其頂部具有用于容納系統(tǒng)的大致圓柱形的離心處理室(未示出)內(nèi)的擺動閉合件220。在其凸出的前部，部分圓柱形殼體210具有用于觀察插入的圓柱形處理室及其內(nèi)容物的窗口215。在機柜200的后部是向上延伸的柱(示出部分剖視)，用于懸掛一次性套件的袋子。另外，在機柜200的后部還有用于根據(jù)集成軟件顯示處理協(xié)議的參數(shù)的顯示屏240。機柜200的側(cè)面250是平坦的，并且這些平坦側(cè)面250中的至少一個設置有兩個夾緊閥260，其具有用于容納與機殼200相關聯(lián)的一次性套件的管道的槽270，該管道通向支撐在機柜側(cè)面250上的一次性套件的兩個袋。夾緊閥260上方是用于引導管道的突出部265。這兩個夾緊閥260可以布置成通過與機殼200相關聯(lián)的軟件自動選擇兩個生物添加劑，例如病毒，用于填裝處理室，并隨后用介質(zhì)溶液切換用于重新懸浮，從而實現(xiàn)切換袋而無需用戶干預。

圖5示意性地示出了用于根據(jù)本發(fā)明的方法中的一次性套件(set或kit)的布局，以進行所有三個所述應用。一次性套件包括離心處理室300，其包含限定室300中具有可變體積的處理空間320的可移動構(gòu)件或活塞310。室300經(jīng)由管路330連接到五通閥340。閥340的一個出口通過管路350連接，該管路350分支出以連接到用于鹽水溶液或其它溶液的輸入尖狀物(inputspike)304，以及連接到用于鹽水溶液或各種其它產(chǎn)品的袋394a和304b。閥340的另一出口通過管路360連接到廢物袋303。閥340的第三出口經(jīng)由管路370和過濾器372連接到輸入尖狀物301，用于連接血袋或其他生物流體袋。閥340的第四出口通過管路380連接到一組輸出尖狀物302，并分支出到收集袋305。管路380還通向采樣端口382和采樣枕384。

各種管路配有夾緊閥352，該夾緊閥352可以在一次性套件被設置時手動啟動，或者一些可在使用期間自動操作，參見例如圖4的磁力操作夾緊閥260。

所描述的套件或一次性套件形成封閉的無菌環(huán)境，甚至與連接到尖狀物301、302和304的袋子。

珠洗滌

對于珠洗滌應用，一個或兩個單采血液單元可以經(jīng)由輸入尖狀物301連接到套件。然后單采血液單元通過輸入過濾器372過濾，用于去除任何碎片、凝塊和任何不需要的殘留物。

預洗步驟由洗滌細胞組成，并且為此，洗滌溶液如鹽水溶液nacl使用尖狀物304連接或填充于一個可用袋304a中。一旦預洗步驟完成，廢液被重新定向于廢物袋303中，而細胞保留在室300中。

然后第二步驟由在處理室300中加入包括磁珠的試劑組成，其已填充于第二可用袋304b中。然后在室300內(nèi)進行孵育步驟。

最后，通過泵送與預洗步驟中相同的鹽水溶液來完成后洗步驟，最后將帶有磁珠的孵育細胞提取于收集袋305中，或者于由尖狀物302連接的任何定制袋中。

轉(zhuǎn)導

病毒轉(zhuǎn)導應用的第一步由以下組成：將單采血液單元與輸入尖狀物301連接，將鹽水溶液與尖狀物304連接，將含有病毒的溶液加入袋304a中，將用于細胞營養(yǎng)的介質(zhì)加入袋304b中，最后通過尖狀物302連接多達三個袋子的多個輸出袋。

第一步由以下組成：通過在1中輸入袋泵送單采血液單元，然后通過由尖狀物304連接的鹽水溶液洗滌，然后將細胞保留在室300中，并將病毒溶液(來自袋304a)加入到室300中，以高旋轉(zhuǎn)力離心溶液，然后將溶液懸浮在來自袋304b的介質(zhì)中，最后將溶液于連接到尖狀物302的最多三個袋子中分成等同或不同的體積。

修復和配量

本應用首先解凍冷凍保存的血液單元。然后將解凍的血液溶液袋連接到輸入尖狀物301，并將溶液泵入室300。然后，預先連接的鹽水溶液通過尖狀物304連接，或者可用袋403a用于洗滌室300中的單采血液單元。一旦細胞洗滌完成，將室300中的部分或全部細胞溶液提取于收集袋305中，隨后通過采樣端口382采集用于測量細胞濃度的樣本。然后，可將體積再次泵入室300內(nèi)，用來自連接到尖狀物304或可用袋304a的袋的鹽水溶液稀釋，然后分至連接在輸出尖狀物302上的幾個袋中。

該套件任選地在需要將樣本取出于層流之外的情況下包括具有采樣枕頭384的冷凍制備管路，并且在最終溶液需要加入用于進一步冷凍的冷凍保護劑溶液的情況下，在管道路徑386中包括dmso耐受劑(resistant)。