本發(fā)明涉及一種洛鉑的新應(yīng)用，具體是涉及一種洛鉑在制備治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤藥物中的應(yīng)用。技術(shù)背景惡性滋養(yǎng)細(xì)胞瘤是胚胎滋養(yǎng)細(xì)胞惡變而來，這類腫瘤包括侵蝕性葡萄胎、絨毛膜癌和胎盤部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤，而絨毛膜癌又包括妊娠性絨癌與非妊娠性絨癌，非妊娠性絨癌少見，但可發(fā)生在縱隔腹膜后、卵巢、肺、食管、胃、肝、盆腹腔等處。滋養(yǎng)細(xì)胞病因不清，可能與營養(yǎng)不良(特別是缺少高質(zhì)量的動物蛋白飲食)、病毒感染、卵巢功能失調(diào)及卵子異常、染色體異常、免疫功能異常、人種、地理、氣候及環(huán)境影響有關(guān)。惡性滋養(yǎng)細(xì)胞瘤是少數(shù)幾種不完全依賴病理切片即可發(fā)現(xiàn)的腫瘤。瘤細(xì)胞可隨血液轉(zhuǎn)移至肺、陰道、腦、導(dǎo)致患者大咯血、陰道流血、突然失明、失語和顱內(nèi)出血而危及生命。惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤對放療不敏感，目前治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤有效治療途徑為化療為主，手術(shù)治療為輔。因此，化療藥物對治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤至關(guān)重要，決定療效的關(guān)鍵是化療藥物的選擇。但是現(xiàn)如今，治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的有效化療藥物較少，缺乏更穩(wěn)定、更安全以及治療效果更好的化療藥物。洛鉑(lobaplatin，d-19466)又名洛巴鉑，是繼順鉑、卡鉑之后由德國愛斯達(dá)制藥股份有限公司(astamedicaag)研發(fā)的第三代鉑類抗腫瘤藥物。其化學(xué)名稱為：1,2-二甲基-環(huán)丁烷-乳酸合鉑。分子式為c9h18n2o3pt，分子量為397.34。本發(fā)明申請人分別在專利申請?zhí)枮閏n201010556219.1、名稱為“一種以草酸鹽制備洛鉑三水合物的方法”和專利申請?zhí)枮閏n201010500619.0、名稱為“一種抗腫瘤藥物制劑的制備方法”的發(fā)明專利中公開了洛鉑三水合物的制備方法以及注射用洛鉑的制備方法。現(xiàn)有技術(shù)表明，洛鉑對多種動物和人腫瘤細(xì)胞株有明確的細(xì)胞毒作用，與順鉑的抑瘤作用相當(dāng)或者更好，克服了順鉑的腎毒性、消化道毒性，骨髓抑制比卡鉑輕，且與順鉑無交叉耐藥。洛鉑副作用比順鉑和卡鉑低，抗腫瘤活性強(qiáng)，毒性較小，安全，溶解度好，在水中穩(wěn)定，主要用于乳腺癌、小細(xì)胞肺癌及慢性粒細(xì)胞性白血病的治療。雖然之前的研究表明洛鉑可以用于制備治療乳腺癌、小細(xì)胞肺癌及慢性粒細(xì)胞性白血病等多種病癥，但未見利用洛鉑及其制劑對惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤方面的治療作用的專利文獻(xiàn) 和研究報(bào)道。本申請人在隨后的研究中發(fā)現(xiàn)，洛鉑及其制劑可以用于惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的治療。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供洛鉑的一種新應(yīng)用，實(shí)質(zhì)上是洛鉑在制備治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤藥物中的應(yīng)用。所述的洛鉑的有效治療量為30-60mg/m2體表面積，優(yōu)選治療量為40-50mg/m2體表面積，最優(yōu)選的治療量為40mg/m2體表面積。所述的鉑在制備治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤藥物中的應(yīng)用是將洛鉑制成凍干粉針劑、小容量注射液或大容量注射液。優(yōu)選凍干粉針劑。在應(yīng)用時(shí)，可以根據(jù)需要加入或不加入藥學(xué)上常規(guī)載體，如賦形劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、調(diào)節(jié)劑等，按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備成所需劑型。前述的洛鉑制劑給藥途徑為靜脈注射給藥。本發(fā)明洛鉑及注射用洛鉑可以是上市藥品，也可以按照專利申請?zhí)朿n201010556219.1或cn201010500619.0中的方法來進(jìn)行制備。洛鉑是最新的第三代鉑類化療藥，與順鉑(第一代)、卡鉑(第二代)相比，對惡性腫瘤的治療效果相當(dāng)或更好，且對人體毒性更小，副作用最小，更為安全。洛鉑抗瘤譜廣泛，對多個(gè)癌種有效。洛鉑對治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤具有顯著的療效，其副作用小，臨床用藥更為安全。本申請人進(jìn)一步的試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，洛鉑確可用于制備治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的藥物。具體實(shí)施方式為了使本領(lǐng)域普通技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明，以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明洛鉑在治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞瘤藥物中的實(shí)驗(yàn)研究。需要說明的是：以下實(shí)施例僅為闡釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例1：洛鉑體外抗滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞的活性研究1.1材料及試劑1.1.1藥物名稱和來源：洛鉑為白色凍干粉，海南長安國際制藥有限公司；卡鉑為白色粉末，昆明貴研藥業(yè)有限公司；5-氟尿嘧啶，西安海欣制藥有限公司；順鉑為黃色粉末，江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司。配制方法：以上藥物均用無血清培養(yǎng)基配成相應(yīng)濃度。1.1.2細(xì)胞株人滋養(yǎng)細(xì)胞瘤jeg-3細(xì)胞和jar細(xì)胞，購自中科院動物研究所計(jì)劃生育生殖生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，按照所提供的說明書培養(yǎng)。1.1.3試劑及儀器dmem/f12(1:1)培養(yǎng)基、胎牛血清(美國gibco公司)、青霉素(100u/l)、鏈霉素(100μg/ml)、0.25％胰蛋白酶co2孵箱、elx800型酶標(biāo)儀(美國bio-tek公司)。1.2研究方法1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)以含10％胎牛血清、100u/l青霉素和100μg/ml鏈霉素的dmem/f12(1:1)培養(yǎng)基，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中常規(guī)傳代培養(yǎng)jeg-3細(xì)胞和jar細(xì)胞，2-3天消化傳代一次(0.25％胰酶含edta)。1.2.2細(xì)胞抑制率測定取對數(shù)生長期jeg-3細(xì)胞和jar細(xì)胞，用0.25％的胰酶消化后收集，細(xì)胞計(jì)數(shù)調(diào)整細(xì)胞濃度。按每孔6×104個(gè)細(xì)胞接種于24空板上，每處設(shè)置三個(gè)復(fù)孔。于5％co2、37℃孵育12小時(shí)，藥物分別設(shè)5-7個(gè)濃度，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，連續(xù)作用18小時(shí)后，每孔加入mtt溶液(5mg/ml)100μl，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。終止培養(yǎng)，小心吸去上清，每孔加入400μl二甲基亞砜(dmso)，置于搖床上低速振蕩30min，使結(jié)晶物充分溶解。以酶標(biāo)儀在493nm波長處測定光密度(od)。空白對照以新鮮無血清培養(yǎng)基替換。計(jì)算藥物抑制率及半數(shù)抑制濃度(ic50)：藥物抑制率(％)＝(空白對照od－用藥od)/空白對照od×100％半數(shù)抑制濃度(ic50)：指被抑制一半時(shí)抑制劑的濃度，即凋亡細(xì)胞與全部細(xì)胞數(shù)之比等于50％時(shí)所對應(yīng)的濃度。誘導(dǎo)能力越強(qiáng)，該數(shù)值越低。1.3試驗(yàn)結(jié)果不同劑量的洛鉑、順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶單用時(shí)能明顯抑制體外滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤jeg-3細(xì)胞和jar細(xì)胞的增殖，其中洛鉑劑量為20-40mg/m2時(shí)，抑制率程遞增趨勢且遞增幅度明顯；洛鉑劑量為40-60mg/m2時(shí)，抑制率緩慢遞增，當(dāng)洛鉑劑量為70mg/m2時(shí)，其抑制率保持平穩(wěn)，不再增長。洛鉑劑量為20mg/m2時(shí)，藥物濃度太低，抑制作用弱于順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶。洛鉑劑量為30-70mg/m2時(shí)，抑制作用顯著優(yōu)于順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶。具體結(jié)果見表1和表2：表1洛鉑、順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶對體外滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤jeg-3細(xì)胞和jar細(xì)胞抑制率(％)結(jié)果順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶為最佳抑制濃度。表2洛鉑、順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶對體外滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤jeg-3細(xì)胞和jar細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(ic50)結(jié)果細(xì)胞株jeg-3細(xì)胞jar細(xì)胞藥物名稱半數(shù)抑制濃度(μm)半數(shù)抑制濃度(μm)5-氟尿嘧啶21.720.8卡鉑80.480.5順鉑20.318.2洛鉑15.716.11.4實(shí)驗(yàn)結(jié)論不同劑量洛鉑、順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶單用時(shí)均對體外滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤jeg-3細(xì)胞和jar細(xì)胞的增殖和生長有抑制作用，抑制作用具有明顯的劑量依賴關(guān)系。其中洛鉑劑量為20-40mg/m2時(shí)，抑制率程遞增趨勢且遞增幅度明顯；洛鉑劑量為40-60mg/m2時(shí)，抑制率緩慢遞增，當(dāng)洛鉑劑量為70mg/m2時(shí)，其抑制率保持平穩(wěn)，不再增長。洛鉑劑量為30-70mg/m2時(shí)，抑制作用顯著優(yōu)于順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶，在此給藥劑量范圍內(nèi)的洛鉑均具有顯著 的抗體外滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤jeg-3細(xì)胞和jar細(xì)胞增殖作用。洛鉑劑量為20mg/m2時(shí)，藥物濃度太低，抑制作用弱于順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶。因此，洛鉑抑制滋養(yǎng)細(xì)胞瘤優(yōu)選劑量為30-60mg/m2，最優(yōu)選劑量為40mg/m2。試施例2：洛鉑對滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的體內(nèi)療效研究2.1材料和試劑：2.1.1藥物名稱和來源：洛鉑為白色凍干粉，海南長安國際制藥有限公司；卡鉑為白色粉末，昆明貴研藥業(yè)有限公司；5-氟尿嘧啶，西安海欣制藥有限公司；順鉑為黃色粉末，江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司。2.1.2實(shí)驗(yàn)動物和細(xì)胞scidbeige雌性小鼠(3-5周齡，體質(zhì)量16-20g)，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司；人滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞株jar，購自美國標(biāo)準(zhǔn)生物品收藏中心(atcc)、慢病毒空載體gv208，元件順序：ubi-mcs-egfp，真核抗性：嘌呤霉素，熒光標(biāo)記：egfp，購自吉凱基因，上海；polybrene購自上海吉凱公司。2.1.3試劑及儀器dmem/f12(1:1)培養(yǎng)基、胎牛血清(美國gibco公司)、青霉素(100u/l)、鏈霉素(100μg/ml)、0.5％胰酶倒置顯微鏡、co2孵箱、移液管、吸耳球、酒精燈。2.2試驗(yàn)方法2.2.1細(xì)胞培養(yǎng)jar細(xì)胞接種于含10％胎牛血清、100u/l鏈霉素和100μg/ml青霉素的dmem培養(yǎng)液中，在37℃、飽和濕度的5％co2孵箱中傳代培養(yǎng)。2.2.2注射用細(xì)胞懸液的制備選擇對數(shù)生長期細(xì)胞接種于6孔板培養(yǎng)皿，37℃、5％co2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，將適量病毒顆粒和polybrene加入3ml培養(yǎng)基，終濃度為6～8μg/ml，輕吹混勻，加入培養(yǎng)皿。24h后更換新鮮的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)48h；每隔2天更換2μg/ml嘌呤霉素藥物的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。待抗性細(xì)胞長滿后，0.5％胰酶消化，含10％血清的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，水平離心機(jī)1000r/min離心5min，滅菌pbs重懸細(xì)胞，輕柔涮洗3次，無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，再次離心后，根據(jù)細(xì)胞數(shù)目加入無血清培養(yǎng)基，配置2.5×107/ml細(xì)胞懸液。2.2.3模型建立及給藥scidbeige雌性小鼠背部皮下注射200μl細(xì)胞懸液，待瘤體積生長至100～300mm3之 間后，將動物隨機(jī)分為生理鹽水對照組(ns組)、5-氟尿嘧啶、順鉑組、卡鉑組和洛鉑組。每組5只，5-氟尿嘧啶組每日靜脈注射5-氟尿嘧啶10mg/kg，2次/周，連續(xù)兩周。順鉑組每日靜脈注射順鉑5mg/kg，1次/周，連續(xù)兩周。卡鉑組每日同一時(shí)間靜脈注射卡鉑100mg/m2體表面積，1次/周，連續(xù)兩周；洛鉑組按不同給藥劑量每日同一時(shí)間靜脈注射洛鉑(見下表)，1次/周，連續(xù)兩周。對照組每日同一時(shí)間靜脈注射ns5ml。每周測2-3次瘤體積，稱鼠重，記錄數(shù)據(jù)。計(jì)算腫瘤體積(tv)、相對腫瘤體積(rtv)和抑瘤率(ir)。腫瘤體積(tv)＝1/2×a(長徑)×b2(寬徑)相對腫瘤體積(rtv)＝vt/v0(式中v0為分組給藥時(shí)測得的腫瘤體積，vt為每次測量時(shí)的腫瘤體積)抑瘤率(ir)％＝(1-5-氟尿嘧啶組或洛鉑組或順鉑組或卡鉑組平均瘤重/ns組平均瘤重)×100％2.2.4試驗(yàn)結(jié)果5-氟尿嘧啶、順鉑、卡鉑和不同劑量的洛鉑單用時(shí)均對滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤有治療效果，能明顯抑制滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的生長；其中洛鉑劑量為20-40mg/m2時(shí)，抑瘤率程遞增趨勢且遞增幅度明顯；洛鉑劑量為40-60mg/m2時(shí)，抑瘤率緩慢遞增，當(dāng)洛鉑劑量為70mg/m2時(shí)，其抑瘤率保持平穩(wěn)，不再增長。洛鉑劑量為20mg/m2時(shí)，藥物濃度太低，對滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的治療效果弱于順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶。洛鉑劑量為30-70mg/m2時(shí)，對滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的治療效果顯著優(yōu)于順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶。此外，洛鉑給藥劑量為70mg/m2體表面積時(shí)，由于給藥濃度最高，一只小鼠出現(xiàn)精神不振和嘔吐癥狀。表15-氟尿嘧啶、順鉑、卡鉑和不同劑量洛鉑對滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤jar細(xì)胞生長抑制療效注：d0：第一次給藥時(shí)間；dn：第一次給藥后20天；順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶為最佳給藥濃度。2.3試驗(yàn)結(jié)論5-氟尿嘧啶、順鉑、卡鉑和不同劑量的洛鉑單獨(dú)給藥時(shí)均對滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤有顯著的治療效果，能明顯抑制滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的生長；其中洛鉑劑量為20-40mg/m2時(shí)，抑瘤率程遞增趨勢且遞增幅度明顯；洛鉑劑量為40-60mg/m2時(shí)，抑瘤率緩慢遞增，當(dāng)洛鉑劑量為70mg/m2時(shí)，其抑瘤率保持平穩(wěn)，不再增長。洛鉑劑量為20mg/m2時(shí)，藥物濃度太低，對滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的治療效果弱于順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶。洛鉑劑量為30-70mg/m2時(shí)，對滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的治療效果顯著優(yōu)于順鉑、卡鉑和5-氟尿嘧啶，但是洛鉑給藥劑量為70mg/m2體表面積時(shí)，藥物濃度過高，毒副作用明顯，因此，本發(fā)明優(yōu)選洛鉑劑量為30-60mg/m2時(shí)，為治療滋養(yǎng)細(xì)胞瘤有效治療量；最優(yōu)選洛鉑給藥劑量為40mg/m2體表面積。實(shí)施例3：洛鉑治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的臨床試驗(yàn)3.1病例選擇：通過臨床上惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的典型癥狀診斷，再結(jié)合hcg(人絨毛膜促性腺激素)檢測、b超及ct等多項(xiàng)檢查確診，篩選出明確診斷為惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的患者15例，根據(jù)uicctnm分期，處于ⅲ期5例，ⅳ期10例。所有患者kps評分大于60。將15例患者隨機(jī)分為兩組，治療組8例，全為女性，年齡26-45歲，平均34.3歲，處于ⅲ期2例，ⅳ期6例；對照組6例，全為女性，年齡23-47歲，平均35.9歲，處于ⅲ期3例，ⅳ期4例。兩組在年齡、性別、病程、病情方面均具有可比性。治療前患者肝腎功能、血常規(guī)正常，預(yù)計(jì)生存大于3個(gè)月。3.2治療方法：對照組給予注射選5-氟尿嘧啶26mg/kg·d與更生霉素6mg/kg·d聯(lián)合應(yīng)用，各加入5％g.s500ml中靜滴，5天一次，順鉑靜脈滴注3mg/kg，一周一次，療程3周，為一周期，2周期記錄試驗(yàn)結(jié)果。治療組靜脈滴注洛鉑40mg/m2，一周一次，療程3周，為一周期，2周期記錄試驗(yàn)結(jié)果。3.3判定方法：療效按recist評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評定：完全緩解(cr)，部分緩解(pr)，穩(wěn)定(sd)，進(jìn)展(pd)和無變化(nc)。以cr+pr計(jì)算有效率(rr)，以cr+pr+sd計(jì)算疾病控制率(dcr)。生活質(zhì)量評定以kps評分為標(biāo)準(zhǔn)，治療后評分上升10分以上為提高，10分以內(nèi)為 穩(wěn)定，減少10分以上為降低。3.4結(jié)果3.4.1近期療效：治療組7例中有效率(cr+pr)為87.5％，疾病控制率(cr+pr+sd)為100.0％；對照組有效率(cr+pr)為71.4％，疾病控制率(cr+pr+sd)為85.7％；治療組近期療效優(yōu)于對照組。兩組近期療效比較見表1。表1兩組患者近期療效比較組別例數(shù)crprsdpdrr(％)dcr(％)治療組8341087.5100.0對照組7321171.485.73.4.2近期生活質(zhì)量：治療組中有6例(75.0％)患者生活質(zhì)量得到改善，對照組中生活質(zhì)量改善為4例(57.1％)，治療組患者生活質(zhì)量優(yōu)于對照組。兩組患者近期生活質(zhì)量比較見表二。表2兩組患者近期生活質(zhì)量比較組別例數(shù)改善(％)穩(wěn)定(％)下降(％)治療組86(75.0％)2(25.0％)0(0％)對照組74(57.1％)2(28.6％)1(14.3％)3.4.3討論：從上述結(jié)果可知，治療組的療效和患者的生活質(zhì)量均優(yōu)于對照組，洛鉑作為治療惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤藥物優(yōu)于5-氟尿嘧啶、順鉑與更生霉素聯(lián)合用藥。說明洛鉑對惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤具有良好的療效和潛在的治療價(jià)值。當(dāng)前第1頁12