本發明屬于中藥制劑技術領域，更具體地，本發明涉及一種防治慢性盆腔炎的中藥有效部位及其制備方法和應用。

背景技術：

菝葜為百合科植物菝葜Smilax china L.的干燥根莖。又名金剛藤，為傳統中藥，《中國藥典》2005年版一部收載菝葜具有祛風利濕，解毒散瘀的功效，用于筋骨酸痛、小便淋漓、帶下量多、疔瘡癰腫。中醫臨床除用于治療婦科疾病外，還用于治療腫瘤，并取得了很好的療效。

菝葜屬植物化學成分的研究較多，至今已從該屬植物中分離得到80余種化合物，其中主要有黃酮類、甾體皂苷類、氨基酸類、鞣質等類型化合物。其中黃酮類化合物和甾體皂苷類化合物是具有明顯抗炎藥理活性的物質。

菝葜屬植物普遍含有黃酮類化合物，現已從該屬植物中分離并鑒定了20余種黃酮類化合物，這些黃酮類化合物的基本母核為：黃酮和黃酮醇類、二氫黃酮和二氫黃酮醇類、查爾酮類、兒茶素類。黃酮類化合物也多以苷類形式存在，主要包括由槲皮素、山萘素、二氫山萘素等為苷元構成的黃酮類化合物。

迄今為止，從菝葜屬植物中分離得到30多種甾體皂苷化合物。這些甾體皂苷類化合物，按皂苷元結構不同，可分為三種類型：螺甾烷醇型(spirostanols)、異螺甾烷型(isospirostanols)和呋喃甾烷醇型(furostanols)，主要是螺甾烷醇型化合物。皂苷中所含的糖主要有4種：D-葡萄糖、D-半乳糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖，它們以不同的方式與皂苷元結合構成種類繁多的皂苷。

菝葜中的黃酮類、皂苷類和鞣質類成分具有良好的抗炎活性，而現有的有關菝葜的專利都集中在以菝葜為基礎的治療婦科炎癥的中藥有效部位，以及菝葜的有效成分的提取方法，即如何提高其中總黃酮和總皂苷的含量，并未有專利公開哪些具體的黃酮和皂苷有抗炎作用。因此，市場原有治療慢性盆腔炎(CPID)的制劑存在藥效物質基礎不明確，活性成分不明確，質量標準控制不完善，藥物穩定性難以有效控制，臨床服用劑量大等弊端。

技術實現要素：

基于此，為了克服上述現有技術的缺陷，本發明提供了一種療效確切、活性成分明確的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位及其制備方法和應用。

為了實現上述發明目的，本發明采取了以下技術方案：

一種防治慢性盆腔炎的中藥有效部位，以重量百分比計，所述中藥有效部位的含量為50-90％，其包括以下組分：落新婦苷8.37-16.11％、新落新婦苷4.52-12.55％，異落新婦苷6.97-15.90％、新異落新婦苷15.47-22.65％、黃杞苷15.66-24.97％、纖細薯蕷皂苷3.75-7.15％。

在其中一些實施例中，所述中藥有效部位包括以下組分：落新婦苷9.21-12.52％、新落新婦苷5.35-10.22％，異落新婦苷7.78-12.50％、新異落新婦苷17.28-20.45％、黃杞苷16.76-23.42％、纖細薯蕷皂苷4.25-6.68％。

在其中一些實施例中，所述中藥有效部位包括以下組分：落新婦苷12.23％、新落新婦苷6.82％，異落新婦苷10.39％、新異落新婦苷17.39％、黃杞苷17.32％、纖細薯蕷皂苷5％。

本發明還提供了上述防治慢性盆腔炎的中藥有效部位的制備方法，包括以下步驟：

(1)、將菝葜根莖粉碎為粗粉，粉碎后的藥材用60-95％乙醇回流提取2-3次，每次煮沸1-2h，提取液過濾合并，減壓濃縮至無醇味，得濃縮液；

(2)、取步驟(1)濃縮液，上大孔樹脂進行分離，20-60％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮；

(3)、取步驟(2)的濃縮液，上聚酰胺柱洗脫液進行分離，20-60％乙醇洗脫，收集洗脫液，真空干燥，得到菝葜總黃酮；

(4)、在上述提取物中加入纖細薯蕷皂苷，即得中藥有效部位，所述中藥有效部位的含量為50-90％，其包括以下組分：落新婦苷8.37-16.11％、新落新婦苷4.52-12.55％，異落新婦苷6.97-15.90％、新異落新婦苷15.47-22.65％、黃杞苷15.66-24.97％、纖細薯蕷皂苷3.75-7.15％。

本發明還提供了上述中藥有效部位在制備預防、緩解或治療慢性盆腔炎的藥物中的應用。

在其中一些實施例中，所述藥物的劑型為口服劑、外用劑、或注射劑。

與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：

1、本發明的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位制劑是以幾種菝葜黃酮化合物和皂苷按一定比例組合而成，療效確切，活性成分明確，具有清熱解毒，活血化瘀的功效，有效用于防治慢性盆腔炎，使用安全，服用方便，劑量較小，患者依從性好；

2、本發明的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位制劑是在傳統中藥菝葜制劑的基礎上，結合現代提取分離純化工藝而獲得的療效確切、活性成分明確的菝葜總黃酮和皂苷，是新一代抗慢性盆腔炎的菝葜有效部位制劑。

附圖說明

圖1為本發明試驗例1中中藥有效部位對大鼠CPID模型血常規指標變化的影響；其中，與模型對照組比較：*P<0.05，**P<0.01；

圖2為本發明試驗例1中中藥有效部位對大鼠CPID模型血液流變學指標變化的影響；其中，與模型對照組比較：*P<0.05，**P<0.01；

圖3為本發明試驗例1中中藥有效部位對CPID大鼠子宮組織解剖形態學的影響；其中，A-空白對照組、B-假手術組、C-模型對照組、D-金剛藤膠囊組、E-醋酸潑尼松組、F-菝葜總黃酮和皂苷高劑量組、G-菝葜總黃酮和皂苷中劑量組、H-菝葜總黃酮和皂苷低劑量組；

圖4為本發明試驗例1中中藥有效部位對CPID模型大鼠子宮組織病理學的影響；其中，A-空白對照組、B-假手術組、C-模型對照組、D-金剛藤膠囊組、E-醋酸潑尼松組、F-菝葜總黃酮和皂苷高劑量組、G-菝葜總黃酮和皂苷中劑量組、H-菝葜總黃酮和皂苷低劑量組；

圖5為本發明試驗例2中中藥有效部位對二甲苯所致小鼠耳腫脹及脾臟指數的影響；

圖6為本發明試驗例3中中藥有效部位對大鼠棉球肉芽腫的影響；其中，與模型對照組比較：*P<0.05，**P<0.01；與醋酸潑尼松比較：^#P<0.05，^##P<0.01。

具體實施方式

以下結合附圖和具體實施例來詳細說明本發明，以下實施例中如無特殊說明，所使用原料均來源于市售，所采用方法均為本領域技術人員公知的常規操作方法。

實施例1防治慢性盆腔炎的中藥有效部位制劑(片劑)

本實施例的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位，以重量百分比計，所述中藥有效部位包括以下組分：落新婦苷12.23％、新落新婦苷6.82％，異落新婦苷10.39％、新異落新婦苷17.39％、黃杞苷17.32％、纖細薯蕷皂苷5％。

本實施例的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)、將菝葜根莖5kg粉碎為粗粉，粉碎后的藥材用95％乙醇回流提取3次，每次煮沸1h，提取液過濾合并，減壓濃縮至無醇味，得濃縮液；

(2)、取步驟(1)濃縮液，上大孔樹脂進行分離，40％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮；

(3)、取步驟(2)濃縮液，上聚酰胺柱洗脫液進行分離，20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，噴霧干燥，得到提取物22.76g，采用HPLC進行含量測定；

(4)、在提取物中加入纖細薯蕷皂苷，即得中藥有效部位，其包括以下組分：落新婦苷12.23％、新落新婦苷6.82％，異落新婦苷10.39％、新異落新婦苷17.39％、黃杞苷17.32％、纖細薯蕷皂苷5％。

(5)、將步驟(4)得到的中藥有效部位用75％乙醇制粒，整粒，加3％硬脂酸鎂混勻，壓片；

(6)、將質量份的包衣材料、增塑劑、著色劑和蒸餾水混勻制成成膜劑濃度為5％的薄膜衣液；包薄膜衣，即得。

實施例2防治慢性盆腔炎的中藥有效部位制劑(膠囊劑)

本實施例的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位，以重量百分比計，所述中藥有效部位包括以下組分：落新婦苷8.37％、新落新婦苷4.52％，異落新婦苷15.90％、新異落新婦苷22.65％、黃杞苷15.66％、纖細薯蕷皂苷3.75％。

本實施例的防治慢性盆腔炎的有效部位制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)、將菝葜根莖5kg粉碎為粗粉，粉碎后的藥材用75％乙醇回流提取3次，每次煮沸1h，提取液過濾合并，減壓濃縮至無醇味，得濃縮液；

(2)、取步驟(1)濃縮液，上大孔樹脂進行分離，60％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮；

(3)、取步驟(2)濃縮液，上聚酰胺柱洗脫液進行分離，20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，噴霧干燥，得到提取物20.46g，采用HPLC進行含量測定；

(4)、在提取物中加入纖細薯蕷皂苷，即得中藥有效部位；其包括以下組分：落新婦苷8.37％、新落新婦苷4.52％，異落新婦苷15.90％、新異落新婦苷22.65％、黃杞苷15.66％、纖細薯蕷皂苷3.75％；

(5)、將步驟(4)得到的中藥有效部位用75％乙醇制粒，整粒；

(6)、按常規方法制成膠囊劑，即得。

實施例3防治慢性盆腔炎的中藥有效部位制劑(注射劑)

本實施例的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位，以重量百分比計，所述中藥有效部位包括以下組分：落新婦苷16.11％、新落新婦苷12.55％，異落新婦苷6.97％、新異落新婦苷15.47％、黃杞苷24.97％、纖細薯蕷皂苷7.15％。

本實施例的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)、將菝葜根莖5kg粉碎為粗粉，粉碎后的藥材用95％乙醇回流提取3次，每次煮沸1h，提取液過濾合并，減壓濃縮至無醇味，得濃縮液；

(2)、取步驟(1)濃縮液，上大孔樹脂進行分離，40％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮；

(3)、取步驟(2)濃縮液，上聚酰胺柱洗脫液進行分離，20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，噴霧干燥，得到提取物22.76g，采用HPLC進行含量測定；

(4)、在提取物中加入纖細薯蕷皂苷，即得中藥有效部位；其包括以下組分：落新婦苷16.11％、新落新婦苷12.55％，異落新婦苷6.97％、新異落新婦苷15.47％、黃杞苷24.97％、纖細薯蕷皂苷7.15％；

(5)、將步驟(4)得到的中藥有效部位加滅菌水溶解混勻，調pH值至6.0；過0.22微米濾膜，滅菌灌裝即得。

實施例4防治慢性盆腔炎的中藥有效部位制劑(顆粒劑)

本實施例的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位，以重量百分比計，所述中藥有效部位包括以下組分：落新婦苷9.21％、新落新婦苷5.35％，異落新婦苷12.50％、新異落新婦苷20.45％、黃杞苷16.76％、纖細薯蕷皂苷4.25％。

本實施例的防治慢性盆腔炎的中藥有效部位制劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)、將菝葜根莖5kg粉碎為粗粉，粉碎后的藥材用95％乙醇回流提取3次，每次煮沸1h，提取液過濾合并，減壓濃縮至無醇味，得濃縮液；

(2)、取步驟(1)濃縮液，上大孔樹脂進行分離，40％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮；

(3)、取步驟(2)濃縮液，上聚酰胺柱洗脫液進行分離，20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，噴霧干燥，得到提取物22.76g，采用HPLC進行含量測定；

(4)、在提取物中加入纖細薯蕷皂苷，即得中藥有效部位；其包括以下組分：落新婦苷9.21％、新落新婦苷5.35％，異落新婦苷12.50％、新異落新婦苷20.45％、黃杞苷16.76％、纖細薯蕷皂苷4.25％；

(5)、將步驟(4)得到的中藥有效部位用75％乙醇制粒，整粒；

(6)、按常規方法制成顆粒劑，即得。

試驗例1本發明的中藥有效部位治療大鼠慢性盆腔炎的藥效學研究

1.1實驗方法

SD雌性大鼠，3％戊巴比妥鈉30mg·kg^-1靜脈麻醉后，剪去下腹正中毛，酒精棉球消毒，于下腹部正中切口2cm，暴露子宮，用0.1ml注射器配0.2ml注射器的針頭，于子宮分岔處進針入子宮腔內，向右側子宮腔緩慢推注25％苯酚膠漿0.06ml制作慢性盆腔炎(CPID)大鼠模型。假手術處理組除不注射苯酚膠漿，其余操作同上。

將造模成功的SD大鼠隨機分為6組(n＝10)，分別為：(1)菝葜總黃酮和皂苷(即實施例1中獲得的中藥有效部位，下同)高劑量組(82.62mg·kg^-1/d，2ml)；(2)菝葜總黃酮和皂苷中劑量組(41.3mg·kg^-1/d，2ml)；(3)菝葜總黃酮和皂苷低劑量組(20.65mg·kg^-1/d，2ml)；(4)金剛藤膠囊組(JGT，16.2g/kg/d，2ml)；(5)醋酸潑尼松組(0.0054g/kg/d，2ml)；(6)模型對照組(0.9％生理鹽水，2ml)；假手術處理的大鼠(0.9％生理鹽水，2ml)。另外空白對照組(0.9％生理鹽水，2ml)不作任何處理。造模1周后開始給藥，連續給藥14d。于第15d，以3％戊巴比妥鈉腹腔麻醉大鼠后，腹主動脈采血，進行血常規、血液流變學檢測；肉眼觀察大鼠子宮造模側解剖形態的變化；摘取左、右側子宮，分別稱質量，計算子宮腫脹率及腫脹抑制率；取右側造模子宮浸泡于福爾馬林中，HE常規染色，光學顯微鏡下觀察大鼠子宮的病理變化程度。

1.2.實驗結果

1.2.1本發明的中藥有效部位對苯酚膠漿所致大鼠CPID模型子宮腫脹率的影響

與空白對照組比，模型組大鼠子宮注射苯酚膠漿后子宮腫脹度顯著升高。與模型對照組比較，菝葜總黃酮和皂苷的高、中、低劑量能明顯降低大鼠CPID模型子宮腫脹率(P<0.01)；且高、中劑量組的效果優于金剛藤膠囊組與西藥陽性對照醋酸潑尼松組(表1)。

表1菝葜總黃酮和皂苷對苯酚膠漿所致大鼠CPID模型子宮腫脹率的影響

注：與模型對照組比較：*P<0.05，**P<0.01；

1.2.2本發明的中藥有效部位對苯酚膠漿所致大鼠CPID模型血常規和血液流變學指標的影響

血常規結果表明：與空白對照組及假手術組相比，模型組大鼠的白細胞數、淋巴細胞數及中性粒細胞均顯著升高(P<0.01)，菝葜總黃酮和皂苷各個劑量組均能顯著降低大鼠血液中的炎癥細胞數，并呈劑量依賴關系。菝葜總黃酮和皂苷高劑量組的效果要優于金剛藤膠囊組與醋酸潑尼松組，且中劑量組也優于金剛藤膠囊組。(圖1)

血液流變學結果表明：與空白對照組及假手術組相比，模型組大鼠的血液粘度要明顯升高(P<0.01)，給予菝葜總黃酮和皂苷各個劑量組治療后，大鼠的血液粘度均有不同程度的降低，并且呈劑量依賴關系(P<0.01)。金剛藤膠囊組與醋酸潑尼松組也能降低大鼠的血液粘度，但是菝葜總黃酮和皂苷高中劑量組的效果要優于金剛藤膠囊組與醋酸潑尼松組。大鼠血液流變學結果顯示：菝葜總黃酮和皂苷各個劑量組均能明顯降低大鼠的血液粘度，較好改善CPID大鼠模型的血瘀狀態。(圖2)

1.2.3本發明的中藥有效部位對CPID模型大鼠子宮解剖形態學的影響

子宮形態學結果表明：與空白對照組及假手術組相比，模型組大鼠子宮明顯腫脹，盆腔結締組織粘連嚴重，菝葜總黃酮和皂苷各個劑量組均能降低造模導致的子宮腫脹、以及與盆腔結締組織的粘連。并且三個劑量組均優于金剛藤膠囊組與醋酸潑尼松組(圖3)。

1.2.4本發明的中藥有效部位對CPID模型大鼠子宮組織病理學的影響

光學顯微鏡下觀察顯示：空白對照組腔壁各層結構清晰，上皮細胞排列有序，內膜無充血、水腫(圖4A)；假手術組腔壁各層結構完整、清晰，空腔呈單層柱狀，慢性炎癥細胞少數散在或灶性且僅在黏膜固有層內，內膜輕微充血、水腫(圖4B)；模型對照組腔壁結構紊亂，黏膜固有層變薄或消失，全層分界不清，黏膜上皮細胞密集增生，上皮細胞部分變性壞死、脫落、呈分支乳頭狀，全層可見大量慢性炎癥細胞浸潤，內膜充血、水腫(圖4C)；菝葜總黃酮高(圖4F)、中(圖4G)、低劑量組(圖4H)均能非常顯著地改善子宮組織病變癥狀，減少慢性炎癥細胞浸潤，改善充血、水腫和宮壁的各層結構，給予菝葜總黃酮和皂苷治療后，子宮大部分腺體結構清晰完整，且增生不明顯。金剛藤膠囊組改善子宮病理狀態的效果要優于醋酸潑尼松組，但其改善均不如菝葜總黃酮高、中劑量組明顯。

結論：本發明實施例1的中藥有效部位能顯著減低CPID大鼠的血液粘度，增強血液流動性，改善子宮組織缺血血瘀的狀況；能顯著降低CPID大鼠血液的白細胞數，其中淋巴細胞數及中性粒細胞數降低明顯，說明本發明實施例1的中藥有效部位有良好的治療CPID大鼠造模后引起的炎癥反應；能減輕CPID大鼠子宮與盆腔結締組織間的粘連，降低子宮組織的水腫，減輕子宮內膜的增生，顯著改善子宮組織的病變癥狀，減少慢性炎癥細胞浸潤，及子宮內膜上皮細胞的脫落。說明本發明實施例1的中藥有效部位具有非常好的治療CPID的效果。

試驗例2本發明的中藥有效部位對二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型的影響

2.1實驗方法

將70只雌性昆明小鼠隨機分為5組，每組14只。菝葜總黃酮和皂苷的高、中、低劑量組均分別灌胃給予120mg·kg^-1，59.71mg·kg^-1，29.85mg·kg^-1菝葜總黃酮和皂苷(即本發明實施例1的中藥有效部位，下同)；金剛藤膠囊組灌胃給予小鼠23.4g·kg^-1藥物；醋酸潑尼松組給予7.8mg·kg^-1的醋酸潑尼松。模型對照組給予等體積生理鹽水。1次/d，連續給藥3d后，制作二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型，觀察造模后各組小鼠左、右耳朵片質量變化，計算耳腫脹度；小鼠處死后，腹部正中切開，立即摘取脾臟稱其質量，計算臟器指數。

2.2實驗結果

與模型對照組比較，菝葜總黃酮和皂苷高、中、低劑量組對二甲苯所致小鼠耳腫脹均有明顯抑制作用(P<0.01)，且呈劑量依賴關系，并且高中劑量效果明顯優于金剛藤膠囊組，尤其是高劑量組，其抑制效果與西藥陽性對照組相當。

與模型對照組比較，各個給藥組對脾臟腫大均有抑制作用(P<0.05)；而菝葜總黃酮和皂苷各個劑量組的抑制作用呈劑量依賴關系。菝葜總黃酮和皂苷高中劑量組均優于金剛藤膠囊組，低劑量組與金剛藤膠囊組效果相當，但均不如醋酸潑尼松效果好(圖5)。

結論：本發明實施例1的中藥有效部位能顯著降低二甲苯誘導的小鼠耳廓腫脹及脾臟的腫大，說明其具有非常好的抗急性炎癥的作用。

試驗例3本發明的中藥有效部位對大鼠棉球肉芽腫模型的影響

3.1實驗方法

將50只雌性SD大鼠隨機分為5組，每組10只。菝葜總黃酮和皂苷高、中、低劑量組均分別灌胃給82.62mg·kg^-1，41.3mg·kg^-1，20.65mg·kg^-1菝葜總黃酮和皂苷(本發明實施例1的中藥有效部位，下同)；金剛藤膠囊組灌胃給予大鼠16.2g·kg^-1藥物；醋酸潑尼松組給予5.4mg·kg^-1的醋酸潑尼松。模型對照組給予等體積生理鹽水。制作大鼠棉球肉芽腫模型，連續給藥7d，1次/d。于給藥后第8d，3％戊巴比妥鈉腹腔麻醉，從原切口將棉球連同周圍增生的結締組織一起取出，剔除脂肪組織，恒溫干燥箱60℃放置24h后，用電子天平精密稱質量，計算肉芽凈重。

3.2實驗結果

與模型對照組比較，菝葜總黃酮和皂苷各劑量組均能明顯降低大鼠棉球肉芽腫的增生(P<0.05)。具有良好的抗慢性炎癥作用。菝葜總黃酮和皂苷對棉球致肉芽腫的抑制效果呈劑量依賴關系，高劑量組效果最好(P<0.01)。并且高中劑量效果明顯優于金剛藤膠囊組，尤其是高劑量組，其抑制效果與西藥陽性對照組相當(圖6)。

結論：本發明實施例1的中藥有效部位能顯著降低棉球引起的大鼠肉芽腫大小，說明其具有非常好的抗慢性炎癥的作用。

從試驗例1～3可知，本發明的中藥有效部位具有清熱解毒，活血化瘀的功效，有效用于治療CPID，使用安全，服用方便，劑量較小，患者依從性好，本發明為CPID患者提供了一種化學成分明確，療效確切的新型有效部位制劑。

以上所述實施例僅表達了本發明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發明的保護范圍。因此，本發明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。