本發明涉及一種山核桃仁鞣質葉酸修飾納米粒的制備方法。
背景技術：
納米粒是20世紀90年代初發展起來的新一代亞微粒給藥系統，已經成為藥物新劑型研究中非常活躍的領域。目前研究已由傳統的表面未經修飾納米粒子逐漸轉變為具有多功能的復合納米粒子。葉酸(FA)常被用來作為腫瘤靶向分子，具有無毒、穩定和免疫原性弱等優勢。葉酸與葉酸受體(FR)結合力強并且對腫瘤細胞具有很高的選擇性。藥物通過與葉酸偶聯可提高藥物對腫瘤細胞的靶向性，降低對正常細胞的毒性。研究表明，山核桃仁中鞣質成分具有顯著的抗腫瘤作用。但由于穩定性較差，影響了它的應用。為了開發適合于臨床應用的山核桃仁鞣質制劑，本實驗以脂質納米粒為載體，采用FA-PEG對其表面修飾構建腫瘤靶向給藥系統，具有重要的理論意義和應用價值。
技術實現要素：
本發明提出一種山核桃仁鞣質葉酸修飾納米粒的制備方法。
一種山核桃仁鞣質葉酸修飾納米粒的制備方法，其特征在于包括以下制備步驟：
（1）取葉酸(FA)65．8mg溶于5mL二甲基亞砜(DMSO)，攪拌下加入二環己基碳二亞胺(DCC)62mg和三乙胺(TEA)120μL攪拌均勻再加入400mgH2NPEG-NH2(n(FA)∶n(H2N-PEG-NH2)∶n(DCC)∶n(TEA)＝1∶0．8∶2∶5)，室溫下避光反應24h，減壓回收三乙胺后過0．45μm有機濾膜，即得FA-PEGNH2粗品；
（2）取FA-PEG-NH2粗品加入45mL冷氯仿混勻，過濾除去未反應的FA及副產物FA-PEG-FA旋轉蒸發除去有機溶劑氯仿，去離子水透析48h去除DMSO，經冷凍干燥后得FA-PEG-NH2；
（3）稱取卵磷脂200mg、膽固醇50mg和FA-PEG-NH2100mL用適量的無水乙醇溶解，溶液加入到250mL圓底燒瓶中減壓旋轉蒸發去除乙醇，在燒瓶壁上形成一層均勻的薄膜；
（4）加入適量蒸餾水和山核桃仁鞣質16mg，旋轉洗膜15min，將洗液置于25mL的燒杯中磁力攪拌1.5-2.5h，然后超聲5min，冷凍干燥，即得山核桃仁鞣質FA-PEG修飾納米粒。
如權利要求1所述一種山核桃仁鞣質葉酸修飾納米粒的制備方法，其特征在于：所述步驟（4）的攪拌時間為2h。
利用如權利要求1所述一種山核桃仁鞣質納米粒方法制備山核桃仁鞣質普通納米粒的方法，其特征在于，包括以下制備步驟：稱取卵磷脂200mg、膽固醇50mg用適量的無水乙醇溶解，溶液加入到250mL的容量瓶中進行減壓旋轉蒸發除去乙醇使其成膜，加入適量的生理鹽水和山核桃仁鞣質16mg旋轉洗膜15min，將洗液置于25mL的燒杯中磁力攪拌2h，然后超聲2-10min，冷凍干燥，即得山核桃仁鞣質普通納米粒。
利用如權利要求1所述一種山核桃仁鞣質納米粒方法制備山核桃仁鞣質普通納米粒的方法，其特征在于：所述超聲時間為5分鐘。
本發明所述方法制備的山核桃仁鞣質葉酸修飾納米粒平均粒徑為166.8nm；包封率為74.5％，粒子呈大小均勻的球形；放置50d納米粒粒徑和包封率變化輕微，具有很好的穩定性；葉酸-PEG 修飾納米粒小鼠尾靜脈注射后0.25，1和4h 腫瘤分布分別為20.8％，36.5％和50.2％，具備明顯的腫瘤靶向作用。
具體實施方式
實施例1。
一種山核桃仁鞣質葉酸修飾納米粒的制備方法，其特征在于包括以下制備步驟：
（1）取葉酸(FA)65．8mg溶于5mL二甲基亞砜(DMSO)，攪拌下加入二環己基碳二亞胺(DCC)62mg和三乙胺(TEA)120μL攪拌均勻再加入400mgH2NPEG-NH2(n(FA)∶n(H2N-PEG-NH2)∶n(DCC)∶n(TEA)＝1∶0．8∶2∶5)，室溫下避光反應24h，減壓回收三乙胺后過0．45μm有機濾膜，即得FA-PEGNH2粗品；
（2）取FA-PEG-NH2粗品加入45mL冷氯仿混勻，過濾除去未反應的FA及副產物FA-PEG-FA旋轉蒸發除去有機溶劑氯仿，去離子水透析48h去除DMSO，經冷凍干燥后得FA-PEG-NH2；
（3）稱取卵磷脂200mg、膽固醇50mg和FA-PEG-NH2100mL用適量的無水乙醇溶解，溶液加入到250mL圓底燒瓶中減壓旋轉蒸發去除乙醇，在燒瓶壁上形成一層均勻的薄膜；
（4）加入適量蒸餾水和山核桃仁鞣質16mg，旋轉洗膜15min，將洗液置于25mL的燒杯中磁力攪拌1.5-2.5h，然后超聲5min，冷凍干燥，即得山核桃仁鞣質FA-PEG修飾納米粒。
實施例2。
一種山核桃仁鞣質葉酸修飾納米粒的制備方法，其特征在于包括以下制備步驟：
（1）取葉酸(FA)65．8mg溶于5mL二甲基亞砜(DMSO)，攪拌下加入二環己基碳二亞胺(DCC)62mg和三乙胺(TEA)120μL攪拌均勻再加入400mgH2NPEG-NH2(n(FA)∶n(H2N-PEG-NH2)∶n(DCC)∶n(TEA)＝1∶0．8∶2∶5)，室溫下避光反應24h，減壓回收三乙胺后過0．45μm有機濾膜，即得FA-PEGNH2粗品；
（2）取FA-PEG-NH2粗品加入45mL冷氯仿混勻，過濾除去未反應的FA及副產物FA-PEG-FA旋轉蒸發除去有機溶劑氯仿，去離子水透析48h去除DMSO，經冷凍干燥后得FA-PEG-NH2；
（3）稱取卵磷脂200mg、膽固醇50mg和FA-PEG-NH2100mL用適量的無水乙醇溶解，溶液加入到250mL圓底燒瓶中減壓旋轉蒸發去除乙醇，在燒瓶壁上形成一層均勻的薄膜；
（4）加入適量蒸餾水和山核桃仁鞣質16mg，旋轉洗膜15min，將洗液置于25mL2h，然后超聲5min，冷凍干燥，即得山核桃仁鞣質FA-PEG修飾納米粒；
（5）稱取卵磷脂200mg、膽固醇50mg用適量的無水乙醇溶解，溶液加入到250mL的容量瓶中進行減壓旋轉蒸發除去乙醇使其成膜，加入適量的生理鹽水和山核桃仁鞣質16mg旋轉洗膜15min，將洗液置于25mL的燒杯中磁力攪拌2h，然后超聲2-10min，冷凍干燥，即得山核桃仁鞣質普通納米粒，所述超聲時間為5分鐘。