本發明屬于藥物工業領域，涉及橙皮素衍生物5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素的醫藥新用途，具體涉及橙皮素衍生物5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素在治療急性肝損傷時的用途。
背景技術：
急性肝損傷(acuteliverinjury,ali)是在多種急性肝損傷因素刺激下導致肝功能突發性異常，是引起繼發性肝炎、急性肝衰竭、肝硬化、肝癌的重要始動因素，具有病因多、發病急的特點。急性肝損傷在我國的發病率呈逐年增加趨勢。為預防和治療急性肝損傷，尋找具有肝保護作用、抑制肝臟急性炎癥的肝臟保護藥物具有重要的開發意義。
5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hesperetinderivative-14，hd-14)是從蕓香科植物香橙或陳皮果實皮提取的重要成分橙皮素，經過結構改造而成。據文獻報道，橙皮素屬于二氫黃酮類化合物呈現廣泛的生物學活性，如抗炎、抗腫瘤、抗氧化及神經保護作用。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素新的藥物用途，具體涉及5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素在防治急性肝損傷時的用途。
本發明的技術方案如下：
一種橙皮素衍生物在防治急性肝損傷藥物上的應用，其特征在于：所述的橙皮素衍生物為5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素，分子式為c34h32cl2n2o6，其化學結構式如下：
所述的5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素制備的治療急性肝損傷藥物，其特征在于：該藥物由所述的5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素以及藥學上可接受的輔助劑制得。
所述的利用5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素制備的治療急性肝損傷藥物，其特征在于其劑型為注射劑、片劑、丸劑、膠囊、懸浮劑或乳劑。
本發明的有益效果為：實驗結果證實5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素可有效減輕急性肝損傷，保護肝功能，其作用機制與5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素降低炎癥因子水平有關，應用前景廣泛。
附圖說明
圖1為5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)減輕ccl4誘導的小鼠急性肝損傷模型中肝臟損傷，降低谷草轉氨酶(ast)、谷丙轉氨酶(alt)水平，提示其對肝功能的保護作用，與control組比較：*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001；與ccl4組比較：#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001；
圖2為5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)降低ccl4誘導的小鼠急性肝損傷模型中原代kupffercells(kcs)的炎癥因子水平，與control組比較：*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001；與ccl4刺激組比較：#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001；
圖3為5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)抑制體外試驗中lps(lipopolysaccharide)誘導的炎癥因子水平，與control組比較：*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001；與lps刺激組比較：#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001。
具體實施方式
實施例1：5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)減輕ccl4誘導的小鼠急性肝損傷模型中肝臟損傷，降低谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶水平，提示其對肝功能的保護作用。
c57bl/6(20-22g)小鼠適應性培養7天，進行分組：正常對照組(control)、模型組(1％ccl410ml/kg)、hd-14低劑量組low(1％ccl410ml/kg+hd-1450mg/kg)、中劑量組middle(1％ccl410ml/kg+hd-14100mg/kg)、高劑量組high(1％ccl410ml/kg+hd-14200mg/kg)、陽性對照組(水飛薊素100mg/kg)，每組10只。小鼠持續7天預防灌胃給藥低、中、高劑量的hd-14及水飛薊素，小鼠于第7天腹腔注射1％ccl410ml/kg建立急性肝損傷模型，12h后于麻醉狀態下收取血清樣本和肝組織，并根據試劑盒說明書檢測動物血清中谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶的含量(購自南京建成生物工程研究所)，he染色檢測肝臟損傷情況。
實驗結果如圖1中圖(a)顯示，正常組小鼠肝細胞排列整齊，肝組織結構完整，模型組小鼠肝小葉結構紊亂，炎性細胞局部浸潤，不同濃度的hd-14給藥組小鼠肝組織結構基本恢復正常，肝細胞大小趨于整齊排列，炎性細胞浸潤明顯減少，并呈劑量依賴性，提示hd-14具有減輕急性肝損傷時肝臟損傷的作用。圖(b，c)顯示，1％ccl4誘導模型組血清中alt、ast含量明顯升高，而不同濃度的hd-14可有效降低模型組血清alt、ast水平，并呈劑量依賴性，提示hd-14對急性肝損傷時的肝功能具有保護作用。
實施案例2：5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)降低ccl4誘導的小鼠急性肝損傷模型中原代kupffercells(kcs)的炎癥因子水平。
c57bl/6(20-22g)小鼠適應性培養7天，進行分組：正常對照組(control)、模型組(1％ccl410ml/kg)、hd-14低劑量組low(1％ccl410ml/kg+hd-1450mg/kg)、中劑量組middle(1％ccl410ml/kg+hd-14100mg/kg)、高劑量組high(1％ccl410ml/kg+hd-14200mg/kg)、陽性對照組(水飛薊素100mg/kg)，每組10只。小鼠持續7天預防灌胃給藥低、中、高劑量的hd-14及水飛薊素，小鼠于第7天腹腔注射1％ccl410ml/kg建立急性肝損傷模型，12h后于麻醉狀態下收取血清樣本，原位灌流kupffercells，提取蛋白進行westernblot，提取rna進行real-timeq-pcr，取血清樣本進行elisaassay，檢測三種炎癥因子tnf-α,il-1β和il-6的表達情況。
實驗結果如圖2中圖(a)所示，westernblot結果表明5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明顯降低小鼠急性肝損傷模型kcs中tnf-α,il-1β和il-6的蛋白水平。圖(b)，real-timeq-pcr結果表明5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明顯降低小鼠急性肝損傷模型kcs中tnf-α,il-1β和il-6的mrna水平。圖(c)，elisaassay結果表明5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明顯降低小鼠急性肝損傷模型kcs中tnf-α,il-1β和il-6的分泌。提示hd-14能明顯降低ccl4誘導的小鼠急性肝損傷模型中原代kupffercells(kcs)的炎癥因子的表達。
實施案例3：5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)抑制體外試驗中lps誘導的raw264.7細胞炎癥因子水平；
將raw264.7細胞接種于六孔板中，分別分為正常組(control)、模型組(lps1000ng/ml)、hd-14給藥組(lps1000ng/ml+hd-141,2,4,8,16μm)，每組重復3次實驗。接種密度約為0.5×105個細胞/孔，孵育12小時后，無血清培養基饑餓12小時后分別加入lps刺激及hd-14給藥,繼續培養24小時。收集細胞培養上清，并提取蛋白進行westernblot，提取rna進行real-timeq-pcr，取細胞培養上清進行elisaassay，檢測三種炎癥因子tnf-α,il-1β和il-6的表達情況。
實驗結果如圖3中圖(a)所示，westernblot結果表明5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明顯降低lps誘導raw264.7細胞中tnf-α,il-1β和il-6的蛋白水平。圖(b)，real-timeq-pcr結果表明5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明顯降低lps誘導raw264.7細胞中tnf-α,il-1β和il-6的mrna水平。圖(c)，elisaassay結果表明5-(4-氯苯乙亞胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明顯降低lps誘導raw264.7細胞中tnf-α,il-1β和il-6的分泌。提示hd-14能明顯降低lps誘導的raw264.7細胞中炎癥因子的表達。