技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種無污染的殺菌止血醫(yī)用敷料的制備方法。
背景技術(shù)：
在人們?nèi)粘Ｉ钪校瑹齻C傷時常發(fā)生，造成各種深度不同的創(chuàng)面，并極易造成感染，導(dǎo)致各種并發(fā)癥，因此用于該領(lǐng)域的有效的醫(yī)用敷料的研制是急需解決的問題。羊膜由于自身獨有的特性受到國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注，羊膜從細(xì)胞滋養(yǎng)層衍化而來，是胚胎雙層膜的內(nèi)層，由上皮細(xì)胞層，基底膜和無血管基質(zhì)組成，羊膜中包含多種膠原蛋白以及層粘連蛋白、纖連蛋白、糖胺聚糖、透明質(zhì)酸等。正是這些活性物質(zhì)的存在，可以促進(jìn)上皮細(xì)胞的黏附移行，誘導(dǎo)上皮分化，防止上皮凋亡，使得羊膜充當(dāng)一種“可移植的基底膜”來促進(jìn)上皮化。此外，羊膜基質(zhì)中還包含有很多生長因子，比如神經(jīng)生長因子(NGF)，肝細(xì)胞生長因子(HGF)，角質(zhì)細(xì)胞生長因子(KGF)，轉(zhuǎn)化生長因子-α(TGF-α)，轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)，表皮生長因子(EGF)，堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)等等，能夠促進(jìn)眼表上皮化、減輕炎性反應(yīng)、抑制纖維組織增生和新生血管形成。因此，近年來羊膜在眼表重建中的應(yīng)用備受矚目。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于利用羊膜與特定中草藥結(jié)合共同制備出一種有效的殺菌止血的醫(yī)用敷料，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題。
本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種無污染的殺菌止血醫(yī)用敷料的制備方法，包括以下步驟：
(1)消毒殺菌：用生理鹽水清洗羊膜后，浸泡于過氧化氫水溶液中2-3h，然后用水清洗干凈；將消毒后的羊膜浸泡于含有抗生素的水溶液2～3h；
(2)分階段真空冷凍干燥：將步驟(1)得到的羊膜置于5～10g/L的海藻酸鈉和1～5g/L透明質(zhì)酸溶液中靜置10～15h后，進(jìn)行真空冷凍干燥，先在2～5℃下預(yù)凍2～3h，然后降溫到-10～-15℃，冷凍3～5h，在繼續(xù)降溫到-20～-25℃，冷凍3～5h，在繼續(xù)降溫到-40～-50℃，冷凍7～10h，控制羊膜的水分含量在5～10％；
(3)浸漬中藥：將步驟(2)得到的羊膜浸漬在中藥提取物中，加熱使浸泡溫度在30～50℃，浸泡時間為10～15h；其中所述的中藥提取物通過以下方法制備得到：按以下質(zhì)量份取中藥藥材，大青葉8-10份、蛇床子3-5份、三七3-5份、黃芩1-5份、蒲公英1-3份、野菊花2-3份、金銀花1-3份、骨丹3-5份、七里單6-8份、乳香2-3份、沒藥5-10份、丁香2-5份、紅花1-3份、大黃3-5份、甘草3-5份、蒼術(shù)1-2份，加水煎煮1-2小時，得到的煎煮液經(jīng)超濾和納濾后，得到中藥精制液，然后加入醫(yī)用酒精和水混合，調(diào)節(jié)溶液中酒精濃度為65-70％，并加熱至60-70℃得到所述的中藥提取物；
(4)真空干燥：將步驟(3)處理后的羊膜進(jìn)行真空干燥處理，溫度為60～70℃，干燥時間2-4小時；
(5)封裝滅菌：經(jīng)過真空干燥后的羊膜進(jìn)行包裝、滅菌即可在常溫下保存。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，所述過氧化氫水溶液的濃度為2～4g/L。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，所述的抗生素選自青霉素、鏈霉素、慶大霉素中的一種或是兩種，其用量分別為50μg/mL、30μg/mL、10μg/mL；
在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(4)的真空度為0.01-0.05MPa。
本發(fā)明制備的醫(yī)用敷料可以廣泛應(yīng)用于各種不同程度的創(chuàng)面的治療，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具備以下有益效果：
(1)經(jīng)過長期試驗研究，發(fā)現(xiàn)采用分階段的真空冷凍干燥技術(shù)，將羊膜在逐級降低的溫度下冷凍干燥，階梯式降溫，能夠最大程度的保留了其膠原和活性因子成分，使得羊膜的組成沒有受到破壞，經(jīng)檢測，所制得的醫(yī)用敷料含有Ⅰ型膠原290.1±1.0μg/mg、Ⅲ型膠原356.8±2.0μg/mg，Ⅳ型膠原47.1±1.0μg/mg，肝細(xì)胞生長因子71.2±1.0μg/mg，堿性成纖維細(xì)胞生長因子56.1±1.0μg/mg；而新鮮羊膜中含Ⅰ型膠原303.5±5.3μg/mg，Ⅲ型膠原384.2±4.5μg/mg，Ⅳ型膠原53.6±1.7μg/mg，肝細(xì)胞生長因子89.9±3.2μg/mg，堿性成纖維細(xì)胞生長因子71.1±1.0μg/mg。
(2)通過浸漬本發(fā)明的特定中藥配方，使得得到的羊膜敷料能夠更有效的止血止痛、促進(jìn)愈合，并且對人體無副作用，使用安全。
(3)本發(fā)明的制備方法簡單易行，成本低，無污染。
具體實施方式
以下結(jié)合實例對本發(fā)明技術(shù)方案及其效果作進(jìn)一步的說明。
實施例1
(1)消毒殺菌：用生理鹽水清洗羊膜后，浸泡于2g/L過氧化氫水溶液中2h，然后用水清洗干凈；將消毒后的羊膜浸泡于含有50μg/mL青霉素的水溶液3h；
(2)分階段真空冷凍干燥：將步驟(1)得到的羊膜置于8g/L的海藻酸鈉和5g/L透明質(zhì)酸溶液中靜置10h后，進(jìn)行真空冷凍干燥，先在3℃下預(yù)凍3h，然后降溫到-10℃，冷凍5h，在繼續(xù)降溫到-20℃，冷凍5h，在繼續(xù)降溫到-50℃，冷凍8h，控制羊膜的水分含量在7％；
(3)浸漬中藥：將步驟(2)得到的羊膜浸漬在中藥提取物中，加熱使浸泡溫度在30℃，浸泡時間為15h；其中所述的中藥提取物通過以下方法制備得到：按以下質(zhì)量份取中藥藥材，大青葉10份、蛇床子3份、三七4份、黃芩2份、蒲公英2份、野菊花2份、金銀花2份、骨丹3份、七里單6份、乳香2份、沒藥6份、丁香3份、紅花2份、大黃3份、甘草3份、蒼術(shù)1份，加水煎煮2小時，得到的煎煮液經(jīng)超濾和納濾后，得到中藥精制液，然后加入醫(yī)用酒精和水混合，調(diào)節(jié)溶液中酒精濃度為70％，并加熱至60℃得到所述的中藥提取物；
(4)真空干燥：將步驟(3)處理后的羊膜進(jìn)行真空干燥處理，真空度為0.02MPa，溫度為70℃，干燥時間2小時；
(5)封裝滅菌：經(jīng)過真空干燥后的羊膜進(jìn)行包裝、滅菌即可在常溫下保存。
經(jīng)檢測，所制得的醫(yī)用敷料含有Ⅰ型膠原290.1μg/mg、Ⅲ型膠原356.8μg/mg，Ⅳ型膠原47.1μg/mg，肝細(xì)胞生長因子71.2μg/mg，堿性成纖維細(xì)胞生長因子56.1μg/mg，與新鮮羊膜的成分較為接近，說明上述制備方法基本沒有對羊膜的成分造成破壞，極大程度的保持了其原貌。
將制得的醫(yī)用敷料用于創(chuàng)面，測試其對創(chuàng)面愈合的影響(率，時間)。選用動物的深I(lǐng)I度皮膚燙傷模型作為評價敷料對創(chuàng)面愈合影響的動物模型。
將雄性Wistar大鼠隨機分組，包括自然愈合組、市售常規(guī)醫(yī)用敷料組、本發(fā)明醫(yī)用敷料組，各組觀察時相點為傷后3、7、14、21d，每組每時相點10只動物。將大鼠麻醉成功后用80℃水浴燙15秒造成大鼠背部10％深I(lǐng)I度皮膚燙傷(病檢切片證實)，傷后經(jīng)腹腔給予5ml生理鹽水。除自然愈合組外，各組分別用相應(yīng)敷料覆蓋創(chuàng)面。傷后各確定時相點測創(chuàng)面愈合率，先將創(chuàng)面描記在半透明紙上，再以此為模板，將質(zhì)地均勻的硬紙片剪成同樣大小，然后用天平稱重，以硬紙片重量間接地表示創(chuàng)面面積大小。按下式計算創(chuàng)面愈合率：創(chuàng)面愈合率(％)＝(原始創(chuàng)面面積一未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積。病理檢查，了解創(chuàng)面愈合質(zhì)量，并根據(jù)創(chuàng)面愈合情況確定愈合時間。試驗結(jié)果顯示，本發(fā)明醫(yī)用敷料組，在創(chuàng)面恢復(fù)時間上和創(chuàng)面愈合率兩方面都優(yōu)于自然愈合組、市售常規(guī)醫(yī)用敷料組。
本發(fā)明并非限定于所述特定的實施例及說明，并且不脫離在權(quán)利要求范圍中所請求的本發(fā)明的要點，本發(fā)明所屬的技術(shù)領(lǐng)域具有通常知識的人員均可進(jìn)行各種變形，并且所述變形所屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。