本發明屬于保健品領域，具體的涉及一種具有抗乳腺癌功能的含有米糠黃酮的保健品。

背景技術：

近年來女性惡性腫瘤乳腺癌的發病率持續上升,發病年輕化趨勢十分明顯，目前乳腺癌的主要治療手段有手術治療、放射治療、內分泌治療、化學藥物治療等手段，如何更有效地治療乳腺癌是目前巫待解決的問題。中藥是祖國醫學用來防治疾病的有力武器，中藥治療腫瘤強調調節與平衡的原則，恢復和增強機體內部的抗病能力，從而達到陰陽平衡治療腫瘤的目的。黃酮類化合物具有多種生物活性,包括心血管保健、抗病毒、抗菌、抗炎、鎮痛、肝保健以及抗腫瘤等活性,是目前國內外研究的熱點。大量研究表明,黃酮類化合物用于腫瘤的預防及治療，具有天然、低毒、高效的特點,具抗腫瘤機制涉及腫瘤發生、發展的各個階段。如槲皮素具抗氧化作用,可抑制相關酶的活性,降低腫瘤細胞耐藥性,誘導腫瘤細胞凋亡；水飛薊素也具抗氧化及抑制相關酶活性,可誘導細胞周期阻滯；藤黃酸可抑制細胞增殖,誘導細胞凋亡,抑制腫瘤血管生成,抑制端粒酶活性,調控相關癌癥基因/抑癌基因的表達和轉錄等。鑒于上述原因，人們把目光轉向天然抗腫瘤藥物的研發上。

技術實現要素：

本發明目的是以我國廣泛種植的禾本科糧食作物水稻的加工副產物米糠出發，制備米糠黃酮和其他中藥提取物混合，提供一種抗乳腺癌的天然保健品。

本發明采用的技術方案是：

含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

米糠黃酮50-70％，巴戟天提取物5-10％，青木香提取物5-10％，

豬苓提取物5-10％，淫羊藿提取物5-10％，柴胡提取物5-10％。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述米糠黃酮的制備方法如下：

1)纖維素酶酶解提取：料液比按質量比1:10-1:30，將米糠粉末溶于水，纖維素酶加入量為120-150u/g，進行熱水浸提，控制溫度為50-60℃，ph范圍值4.0-5.0，酶解時間為2-3h，離心，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續進行乙醇輔助提取；

2)乙醇輔助提取：料液比按質量比1:20-1:30，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分數為50-60％，提取時間為2-3h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續進行超聲浸提；

3)超聲浸提：料液比按質量比1:20-1:30，將沉淀物b溶于乙醇，乙醇體積分數為50-60％，超聲波功率為160-200w，超聲時間為20-40min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉蒸發濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進行超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得到粗米糠黃酮干粉。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述巴戟天提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的巴戟天固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取巴戟天固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得巴戟天提取物。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述青木香提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的青木香固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取青木香固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得青木香提取物。

所述的含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述豬苓提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的豬苓固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取豬苓固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得豬苓提取物。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述淫羊藿提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的淫羊藿固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取淫羊藿固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得淫羊藿提取物。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述柴胡提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的柴胡固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取柴胡固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得柴胡提取物。

本發明的有益效果是：米糠粉末是稻谷脫殼后精碾米時的副產物，但因外觀差、有異味至今未得到充分利用，且大量的米糠堆積也造成了環境的污染，本發明以米糠中提取的黃酮作為活性物質，制備抗乳腺癌保健品或藥品，提取方法簡單，不存在合成藥劑的毒副作用，中間產物及終產物均無毒，安全性高，生產成本低，既有助于醫療衛生產業的發展，又能解決環境污染的問題，因此擁有十分廣闊市場前景，適合工業生產。

本發明以米糠中提取的黃酮作為抗乳腺癌的核心功能性原料，集多味抗乳腺癌類中藥為一體，解決了傳統中藥原料單一、療效差等缺點，是一味較為理想的治療乳腺癌的中藥制劑，既符合營養學合理搭配規律，又使得所選原料之間能夠協同作用，形成具有抗乳腺癌的黃酮、中草藥混合保健品。本發明通過對人體外乳腺癌細胞的實驗研究，發現米糠黃酮的組合物對體外腫瘤細胞具有較好的抑制作用，對于乳腺癌的防治有著非常顯著的效果，可按常規制劑工藝制成各種劑型，治療乳腺癌療效顯著。

附圖說明

圖1是米糠黃酮組合物對人乳腺癌細胞株mcf-7細胞生長影響。

圖2是米糠黃酮組合物抑制mcf-7細胞集落形成的集落試驗結果。

圖3是米糠黃酮組合物抑制mcf-7細胞遷移試驗結果。

具體實施方式

實施例1含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品

(一)米糠黃酮的制備

采用纖維素酶酶解—乙醇浸提—超聲波分步法的工藝組合提取米糠黃酮，步驟如下：

1)纖維素酶酶解：將米糠去除雜質，干燥，經粉碎機粉碎，過60目篩，制成米糠粉末。料液比按質量比1:20，將米糠粉末溶于水，纖維素酶加入量為150u/g，進行熱水浸提，控制溫度為50℃，ph4.5，酶解時間為2h，4000r/min進行離心15min，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續進行乙醇輔助提取；

2)乙醇輔助提取：料液比按按質量比1：20，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分數為60％，提取時間為3h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續進行超聲提取；

3)超聲浸提：料液比按質量比1:20，將沉淀物b溶于乙醇，乙醇體積分數為60％，超聲波功率為180w，超聲時間為30min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉蒸發濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進行超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得到粗米糠黃酮干粉。

(二)巴戟天提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的巴戟天固體粉末；按質量比1:10比例稱取巴戟天固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得巴戟天提取物。

(三)青木香提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的青木香固體粉末；按質量比1:10比例稱取青木香固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得青木香提取物。

(四)豬苓提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的豬苓固體粉末；按質量比1:10比例稱取豬苓固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得豬苓提取物。

(五)淫羊藿提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的淫羊藿固體粉末；按質量比1:10比例稱取淫羊藿固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得淫羊藿提取物。

(六)柴胡提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的柴胡固體粉末；按質量比1:10比例稱取柴胡固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得柴胡提取物。

(七)含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品組合物(簡稱米糠黃酮組合物)

由以下原料按重量百分比組成：

米糠黃酮60％，巴戟天提取物10％，青木香提取物5％，

豬苓提取物10％，淫羊藿提取物10％，柴胡提取物5％。

(八)mtt實驗

本實施例使用人乳腺癌細胞株mcf-7細胞，采用mtt法檢測米糠黃酮組合物體外抗癌活性，實驗步驟如下：

1)取對數生長期的乳腺癌癌細胞系(mcf-7)細胞接種于96孔板，過夜培養使其貼壁；

2)米糠黃酮組合物的濃度(12.5、25和50mg/ml)；

3)在24h后加入mtt(5mg/ml)；

4)然后將96孔板放在37℃恒溫培養箱中繼續培養4h；

5)處理結束后，將mtt吸出，加入150μl的dmso，使甲瓚晶體完全溶解；

6)通過測量每個孔在490nm處的吸光度值來評估mcf-7細胞的增值；結果如圖1所示。

如圖1所示，不同濃度的米糠黃酮組合物(12.5、25和50mg/ml)分別孵育mcf-7細胞24h，然后利用mtt比色法檢測。結果顯示，處理乳腺癌細胞一段時間后，濃度為25和50mg/ml的米糠黃酮組合物均表現出顯著的抑制作用，濃度為50mg/ml組抑制率在24h后達到了71％，結果表明，米糠黃酮組合物在體外可抑制人乳腺癌細胞生長。

(九)集落形成實驗

不同的處理組的乳腺癌細胞以每孔1000個細胞的密度接種于孔板上，培養過夜使其貼壁。分別加入25和50mg/ml的米糠黃酮組合物培養10d，吸出培養基，每孔用pbs仔細洗兩次。使用甲醇將集落固定20min，然后用0.5％結晶紫染色15min，用清水沖洗并拍照，結果如圖2所示。

如圖2所示，米糠黃酮組合物抑制乳腺癌細胞集落形成的集落試驗結果。米糠黃酮組合物孵育mcf-7細胞一段時間后，集落數量與對照組相比明顯降低。24小時后濃度為25mg/ml時能夠顯著減少乳腺癌細胞形成的集落，濃度為50mg/ml時集落的減少極顯著。

(十)transwell實驗

腫瘤細胞遷移實驗采用直徑為6.5mm的transwell小室，其中內孔大小為8.0μm。將mcf-7細胞血清饑餓24h，然后使用胰蛋白酶消化，計數，并用無血清dmem培養基重懸。大約1×10⁵細胞被接種到上層小室，下層小室加入含有10％胎牛血清的dmem培養基。細胞放在37℃培養24h。培養后，上層小室內表面的細胞被遷移。將穿過小室的細胞固定和染色并在顯微鏡下統計。每個實驗組做三個平行取其平均值，結果如圖3所示。

由圖3可見，腫瘤細胞的一個重要特點是他們具有入侵和遷移到遠端器官的能力，這是幾乎所有癌癥死亡的主要原因，利用transwell實驗分析米糠黃酮組合物對mcf-7細胞的遷移影響。如圖3所示，與對照組相比，米糠黃酮組合物處理組mcf-7細胞跨膜遷移的數量大幅下降，結果顯示米糠黃酮組合物可以顯著抑制mcf-7細胞遷移。

實施例2含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品

含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

米糠黃酮70％，巴戟天提取物5％，青木香提取物5％，

豬苓提取物5％，淫羊藿提取物5％，柴胡提取物10％。

實施例3含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品

含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

米糠黃酮50％，巴戟天提取物10％，青木香提取物10％，

豬苓提取物10％，淫羊藿提取物10％，柴胡提取物10％。