本發明涉及注射液及制備方法，確切地說是具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液及其制備方法。
背景技術：
：隨著生活水平的提高，人們對衰老問題越來越重視，探索各種抗衰老的方法，已有文獻資料報道年輕的血液可以明顯改善年老小鼠的認知障礙問題、心肌肥大癥，并且增強年老小鼠的肌肉能力，說明年輕的血液中含有一些年輕因子對抗衰老有一定的作用，臍血漿比靜脈血含有更豐富的因子，臍血漿中含有豐富的造血生長因子、神經營養因子、以及一些創傷愈合相關的細胞因子，對抗衰老有一定的作用，通過探索臍血漿中對抗衰老有作用的有效的成分，對于我們臍血庫廢棄資源的利用具有重要價值，這對于提高臍血漿的利用率以及對抗衰老均有重要意義。衰老又稱老化，通常是指在正常情況下生物發育成熟后，隨年齡增加，自身機能減退，內環境穩定能力與應急能力下降，結構、組分逐步退行性變，趨向死亡，不可逆轉的現象。骨骼系統骨組織隨著年齡衰老，骨質變脆，易骨折，創傷愈合比較慢；肌肉萎縮；神經系統的傳導變慢，記憶力減退，反應降低；衰老還常伴隨心血管系統的變化，心臟體積增大，動脈血管變性。對衰老的常見病癥，心肌肥厚等研究發現，與年輕小鼠共享循環系統的老年小鼠的心肌肥厚有明顯的改善，心肌細胞減小，并伴隨分子的重構，用蛋白組學的分析發現年輕血液中gdf-11起到關鍵作用。而且在衰老小鼠體內增加gdf-11水平不但改善肌肉結構和功能特性，而且還會增加力量和耐力運動能力。這些研究說明在年輕的血液較年老的血液有很大的優勢，富含一些抗衰老的因子對衰老的過程起到延緩的作用，臍血相對于靜脈血，有較低的免疫原性，較強的增值能力，并且在臍血血漿中富含不同階段的造血生長因子，高表達多種神經營養因子，如纖維細胞生長因子(fgf-4、fgf-8、fgf-23)、膠質細胞源性神經營養因子(gdnf)、神經調節素(nrg1)等，骨生長因子(bmp-2、bmp-7)以及一些創傷愈合相關的細胞因子在臍血血漿中也表達上調。臍血漿中神經營養作用的活性蛋白成分，其含量顯著高于靜脈血漿，其中fgf-4、frizzled-3、il-3、rage在臍血漿中的含量是靜脈血漿含量的4倍以上。臍血漿中與細胞增殖、分化和胚胎發育相關的多種蛋白成分含量也顯著高于靜脈血漿，如干細胞因子和胰島素樣生長因子結合蛋白(igfbp-7)在臍血漿的含量分別是靜脈血漿的10倍、8倍，它們在促進干細胞增殖、調控細胞生長等方面有十分重要的作用。因此臍血漿相對于年輕血液有更大的優勢。對于衰老的研究，至今已有數以百計的學說，主要的幾種學說有基因程控學說、細胞突變學說、差錯災變學說、自由基學說、交聯學說、神經內分泌學說、免疫衰老學說等，自由基學說認為在生物代謝過程中，不斷產生各種自由基，這些自由基可對自身組織產生毒性作用，破壞細胞膜，并可使蛋白質羰基化和硫基丟失，從而使酶的活性下降或消失。神經內分泌學說認為，下丘腦—垂體—腎上腺是調節衰老過程的主要生物鐘，已知神經-內分泌系統調節人體早期的發育、生長和生殖、代謝功能，內分泌功能的改變會影響衰老的過程。免疫衰老學說認為，隨著個體年齡的增長，機體免疫功能下降，同時伴隨著機體老化，自身免疫性疾病的發病率也呈上升趨勢，因而認為免疫功能下降與衰老密切相關。而人體血漿中含有豐富的可以中和自由基、調節人體中主要腺體的激素，但是如何去除血漿中容易致敏的大分子物質，富集擁有這些功能的小分子，并且穩定這些活性物質的半衰期將是技術難點。技術實現要素：本發明要解決的技術問題是提供具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液及其制備方法，該注射液優勢在于可以促進動物器官快速修復衰老的器官和組織，尤其是免疫器官、生殖器官，增強機體血液循環，增強自身免疫功能，提高免疫力對抗衰老。其中該制備方法優勢是將保存臍血過程中作為廢品直接廢棄處理的臍血漿進行利用，變廢為寶，制備為注射液產品。為解決上述技術問題，本發明采用如下技術手段：具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液，包括以下質量比的組分：臍血漿小分子精華液65-75％，甘露醇2-4％、山梨醇2-5％、高甲氧基果膠0.5-2％、丙二醇藻酸鹽0.5-2％、海藻糖1-2％、甘油8-10％及電解質溶液8-10％。本發明所使用的臍血漿是血液類相關血漿，提取出的臍血漿小分子精華液含有豐富的人體蛋白因子如neuritin、fgf、pdgf、scf、cxcl4等，能夠提高細胞免疫機制，促細胞分裂、促血管形成、快速修復組織損傷，及時為人體細胞補充所需蛋白因子，從而提高機體抗衰機制，增強組織和器官的修復功能，增強人體免疫力，進而達到抗衰老的目的。注射液中的甘露醇、山梨醇、高甲氧基果膠、丙二醇藻酸鹽、海藻糖、甘油及電解質溶液主要作用是維持蛋白穩定以及與體液保持相同滲透壓的作用。如有需要，可加入氫氧化鈉調節ph值，以達到更理想的效果。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液，電解質溶液，每1000ml溶液中含有氯化鈉2.34g；葡萄糖酸鈉5.02g；乳酸鈉2.24g；氯化鉀0.75g；氯化鎂0.30g。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液的制備方法，所述的臍血漿小分子精華液，由身體健康產婦的臍血漿制取而成，其制取包括以下步驟：s1.臍血的采集及保存：采集健康產婦志愿者臍帶血，放置于臍血保存袋中4℃中保存，并于48小時內對臍血進行血漿和血液的分離；s2.將新鮮血漿在4℃下4200r/min離心15min，收集上清；s3.取上清液，分到兩個離心管中，分別向其中加入1mol/lcacl2溶液0.51ml，顛倒混勻；s4.常溫常壓下靜置150min或者37℃水浴30min待凝血系統析出后在4℃下12000r/min離心30min，棄去沉淀，收集上清液；s5.用0.22μm濾器過濾，分裝；s6.分裝后加入淋巴細胞分離液，離心后分離出臍血漿和血細胞，得到所需要的臍血漿小分子精華液；s7.將所獲得的臍血漿小分子精華液與冷凍保護劑進行冷凍保存。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液的制備方法，所采用的冷凍保護液為甘油，即凍存的為甘油及臍血漿小分子精華液比例為1:7。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液的制備方法，用0.22μm濾器過濾，分裝后，在4℃下采用超濾方法除去臍血漿中大分子白蛋白，獲得小分子及多肽類的蛋白因子的臍血漿小分子精華注射液，然后將甘露醇、電解質溶液、人體白蛋白按配比加入超濾后的臍血漿小分子精華液中混勻，即得到上述臍血漿小分子精華注射液。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液的制備方法，包括以下步驟：s1.在37.5℃下將檢測合格的臍血漿精華液水浴2-3min，防止臍血漿小分子精華液中蛋白失活；s2.按如下比例加入臍血漿小分子精華液70％、甘露醇3％、山梨醇3％、高甲氧基果膠2％、丙二醇藻酸鹽2％、海藻糖2％、甘油10％及電解質溶液10％。為使效果達到最優，采血前對產婦進行篩選檢測。為使效果達到最優，加入的淋巴細胞分離液符合臨床級別。為使效果達到最優，cacl2溶液用0.22μm濾器過濾。為使效果達到最優，超濾時所用超濾膜需達到醫用級別。本技術方案主要利用臍血漿制備此注射液，在正常情況中為保存臍血，臍血漿將成為廢品直接廢棄，我們的此種方法實現了“變廢為寶”“廢物利用”，對于臍血的廢棄資源的利用具有重要價值。本發明從采集臍血至產品的生產制備環境全過程進行臨床級別監控，以實現臍血漿注射液符合臨床標準產品。本發明制備的注射液可以促進動物器官快速修復衰老的器官和組織，尤其是免疫器官、生殖器官，增強機體血液循環，增強自身免疫功能，提高免疫力對抗衰老有十分顯著的效果。本產品與現有技術相比，具體有點有：①產品的原材料為臍血凍存的廢棄附產物，無成本價值。②產品中無血細胞成分，有效防止產品進入體內后凝血現象的發生。③本產品制備條件全過程全面質量監控，采集臍血至產品的生產制備環境全過程進行臨床級別監控，以實現臍血漿注射液符合臨床標準產品。③產品新鮮血漿在4℃下制備，因為在此溫度下能保持臍血漿中的蛋白因子的活性。⑤在生產制備過程中沒有加入任何抗生素和異源蛋白，避免了過敏反應的發生。⑥此產品對免疫器官、生殖器官的修復作用效果顯著，同時加強機體血液循環，增強自身免疫功能，提高免疫力對抗衰老有十分顯著的效果。附圖說明圖1為本發明產品實例1中衰老大鼠模型的建立及分組實驗圖。圖2為本發明中正常組大鼠(a)、注射pbs注射液(b)、注射臍血漿小分子精華注射液(c)、注射間充質干細胞注射液(d)、成人血漿注射液(e)對大鼠胸腺的治療效果圖。圖3為本發明中正常組大鼠(a)、注射pbs注射液(b)、注射臍血漿小分子精華注射液(c)、注射間充質干細胞注射液(d)、成人血漿注射液(e)對大鼠脾臟的治療效果圖。圖4為本發明中正常組大鼠(a)、注射pbs注射液(b)、注射臍血漿小分子精華注射液(c)、注射間充質干細胞注射液(d)、成人血漿注射液(e)對大鼠卵巢的治療效果圖。具體實施方式下面結合實施例，進一步說明本發明。實施例1：具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液，由以下質量分數比的組分組成，臍血漿小分子精華液65％，甘露醇2％、山梨醇2％、高甲氧基果膠0.5％、丙二醇藻酸鹽0.5％、海藻糖1％、甘油8％及電解質溶液8％組成。實施例2：具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液，由以下質量比的組分組成，臍血漿小分子精華液75％，甘露醇4％、山梨醇5％、高甲氧基果膠2％、丙二醇藻酸鹽2％、海藻糖2％、甘油10％及電解質溶液10％組成。實施例1：具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液，由以下質量比的組分組成，臍血漿小分子精華液65-75％，甘露醇2-4％、山梨醇2-5％、高甲氧基果膠0.5-2％、丙二醇藻酸鹽0.5-2％、海藻糖1-2％、甘油8-10％及電解質溶液8-10％組成。實施例3：臍血漿小分子精華液70％、甘露醇3％、山梨醇3％、高甲氧基果膠2％、丙二醇藻酸鹽2％、海藻糖2％、甘油10％及電解質溶液10％。如有需要，本產品可加入氫氧化鈉調節ph值，以達到更理想的效果。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液，電解質溶液，每1000ml溶液中含有氯化鈉2.34g；葡萄糖酸鈉5.02g；乳酸鈉2.24g；氯化鉀0.75g；氯化鎂0.30g。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液的制備方法，所述的臍血漿小分子精華液，由身體健康產婦的臍血漿制取而成，其制取包括以下步驟：s1.臍血的采集及保存：采集健康產婦志愿者臍帶血，放置于臍血保存袋中4℃中保存，并于48小時內對臍血進行血漿和血液的分離；s2.將新鮮血漿在4℃下4200r/min離心15min，收集上清；s3.取上清液，分到兩個離心管中，分別向其中加入1mol/lcacl2溶液0.51ml，顛倒混勻；s4.常溫常壓下靜置150min或者37℃水浴30min待凝血系統析出后在4℃下12000r/min離心30min，棄去沉淀，收集上清液；s5.用0.22μm濾器過濾，分裝；s6.分裝后加入淋巴細胞分離液，離心后分離出臍血漿和血細胞，得到所需要的臍血漿小分子精華液；s7.將所獲得的臍血漿小分子精華液與冷凍保護劑進行冷凍保存。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液的制備方法，所采用的冷凍保護液為甘油，即凍存的為甘油及臍血漿小分子精華液混合物比例為1:7。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液的制備方法，用0.22μm濾器過濾，分裝后，在4℃下采用超濾方法除去臍血漿中大分子白蛋白，獲得小分子及多肽類的蛋白因子的臍血漿小分子精華注射液，然后將甘露醇、電解質溶液、人體白蛋白按配比加入超濾后的臍血漿小分子精華液中混勻，即得到上述臍血漿小分子精華注射液。具有抗衰及器官修復功效的臍血漿注射液的制備方法，包括以下步驟：s1.在37.5℃下將檢測合格的臍血漿精華液水浴2-3min，防止臍血漿小分子精華液中蛋白失活；s2.按如下比例加入臍血漿小分子精華液70％、甘露醇3％、山梨醇3％、高甲氧基果膠2％、丙二醇藻酸鹽2％、海藻糖2％、甘油10％及電解質溶液10％。為使效果達到最優，采血前對產婦進行篩選檢測。為使效果達到最優，加入的淋巴細胞分離液符合臨床級別。為使效果達到最優，cacl2溶液用0.22μm濾器過濾。為使效果達到最優，超濾時所用超濾膜需達到醫用級別。對比實驗：實驗內容：實施例3的本注射液產品與pbs注射液、間充質干細胞注射液、成人血漿注射液對大鼠衰老模型尾靜脈輸注的動物實驗。實驗測定內容：一、外部特征：大鼠毛發、體重、抓握能力、皮脂厚度及活躍度。二、切片觀察：衰老大鼠脾臟、胸腺及卵巢的切片觀察。實驗步驟：參見圖1可知：1.分組及大鼠衰老模型的建立：取6-8周齡sd雌性大鼠40只，隨機分出8只設置為正常組，剩余32只大鼠建立衰老模型，即頸部皮下注射d-半乳糖0.125g/kg，每日一次連續42天，正常組不做處理，正常喂食連續42天。2.注射本發明產品注射液及相關對照注射液從衰老大鼠建模結束開始即第43天，正常組大鼠注射0.8ml電解質溶液，每周兩次，連續4周，作為空白對照組；32只衰老大鼠隨機分成4組，每組8只，分別注射0.8mlpbs注射液、注射0.8ml臍血漿發明產品注射液、注射0.8ml間充質干細胞注射液、注射0.8ml成人血漿注射液，每周兩次，連續4周。其中pbs注射液作為衰老大鼠空白對照組；間充質干細胞注射液作為陽性對照組。3.對大鼠衰老指標外部特征的觀測分別對大鼠毛發、體重、抓握能力、皮脂厚度及活躍度觀測如表1所示。表1五組大鼠實驗結束后外觀特征正常組pbs組產品組msc組成人血漿組毛發正常枯黃正常正常枯黃體重(平均)286±5g259±7g276±4g279±6g253±8g抓握能力20±2s5±1s17±2s16±1s6±2s皮脂厚度3.1±0.5mm2.2±0.6mm2.8±0.3mm2.9±0.5mm2.1±0.6mm活躍度正常較低正常正常較低4.切片觀察：對實驗中sd大鼠的胸腺、脾臟及卵巢的進行he染色石蠟切片觀察，如附圖圖2、圖3、圖4所示。圖2(放大倍數為10×10)所示，臍血漿小分子精華注射液對衰老大鼠胸腺的修復作用；圖a為正常對照；圖b為注射pbs衰老模型組；圖c為臍血漿小分子精華注射液治療組；圖d為msc陽性治療組；圖e為成人血漿組；圖中正常組對照組(a)中胸腺皮質較厚，其髓質體積較小，胸腺小葉分化明顯，并且界限清楚；注射pbs衰老模型組(b)及成人血漿組(e)其胸腺皮質明顯變薄，并且髓質體積逐漸增大，胸腺小葉較少，同時界限不清；臍血漿小分子精華注射液(c)治療組及msc治療組(d)介于二者之間，與衰老組比較，有顯著改善，接近正常組的組織結構，胸腺小葉內皮質，髓質分界清晰，皮質厚度明顯增加圖3(放大倍數為10×10)所示，臍血漿小分子精華注射液對衰老大鼠脾臟的修復作用；圖a為正常對照；圖b為注射pbs衰老模型組；圖c為臍血漿小分子精華注射液治療組；圖d為msc陽性治療組；圖e為成人血漿組。圖中正常對照組(a)脾小結大小均勻，白髓較多，白髓和紅髓界限分明；pbs衰老模型組(b)及成人血漿組(e)脾臟白髓比例相對較少，并且白髓和紅髓界限不清晰，其特點符合衰老大鼠脾臟的組織學特征；臍血漿小分子精華注射液治療組(c)及msc治療組(d)大鼠白髓區明顯擴大，并且白髓和紅髓界限十分清晰，說明其衰老病理損傷明顯改善。圖4(放大倍數為10×4)所示，具臍血漿小分子精華注射液對衰老大鼠卵巢的修復作用；圖a為正常對照；圖b為注射pbs衰老模型組；圖c為臍血漿小分子精華注射液治療組；圖d為msc陽性治療組；圖e為成人血漿組。圖中正常對照組(a)卵巢組織鏡下可見多個黃體及不同發育階段的卵泡，并且成熟卵泡較多；pbs衰老模型組(b)及成人血漿組(e)鏡下卵泡及黃體數目減少，并呈現卵泡發育受阻，成熟卵泡較少；臍血漿小分子精華注射液治療組(c)及msc治療組(d)鏡下可見多個黃體及不同發育階段的卵泡，并且卵泡內呈多層顆粒細胞，治療效果顯著。綜上所述，這種具有抗衰及胸腺、卵巢、脾臟等組織損傷修復功效的臍血漿小分子精華注射液能夠明顯改善衰老大鼠器官的衰老特征，并且可以修復其免疫器官及生殖器官衰老的狀態。本技術方案主要利用臍血漿制備此注射液，在正常情況中為保存臍血，臍血漿將成為廢品直接廢棄，我們的此種方法實現了“變廢為寶”“廢物利用”，對于臍血的廢棄資源的利用具有重要價值。本發明從采集臍血至產品的生產制備環境全過程進行臨床級別監控，以實現臍血漿注射液符合臨床標準產品。本發明制備的注射液可以促進動物器官快速修復衰老的器官和組織，尤其是免疫器官、生殖器官，增強機體血液循環，增強自身免疫功能，提高免疫力對抗衰老有十分顯著的效果。本產品與現有技術相比，具體有點有：④產品的原材料為臍血凍存的廢棄附產物，無成本價值。⑤產品中無血細胞成分，有效防止產品進入體內后凝血現象的發生。③本產品制備條件全過程全面質量監控，采集臍血至產品的生產制備環境全過程進行臨床級別監控，以實現臍血漿注射液符合臨床標準產品。④本產品新鮮血漿在4℃下制備，因為在此溫度下能更好的保持臍血漿中的蛋白因子的活性。⑤在生產制備過程中沒有加入任何抗生素和異源蛋白，避免了過敏反應的發生。⑥此產品對免疫器官、生殖器官的修復作用效果顯著，同時加強機體血液循環，增強自身免疫功能，提高免疫力對抗衰老有十分顯著的效果。由于以上所述僅為本發明的具體實施方式，但本發明的保護不限于此，任何本
技術領域：
的技術人員所能想到本技術方案技術特征的等同的變化或替代，都涵蓋在本發明的保護范圍之內。當前第1頁12