本發明涉及醫藥領域，且特別涉及一種流產藥物。

背景技術：

為消除非意愿妊娠，需要進行終止妊娠的措施。終止妊娠或人工流產的措施目前有兩類：一類是手術(人工)流產，一類是藥物流產。

其中，手術(人工)流產過程中，因為要進行宮腔操作，不可避免地會損傷生殖道。而且進行時會疼痛，體虛者可能會出現休克，若手術時的器械不凈或其他情況，容易使生殖器官感染。藥物流產由于沒有人工器械的介入，能避免生殖器損傷或感染，是很多害怕手術的女性的最佳選擇。目前常用的流產藥物為米非司酮，用于無保護性行為后72小時內；對于已建立的妊娠終止，其推薦使用的有效時間為49天內的妊娠。

但是在實際應用中，現有的終止非意愿妊娠藥物僅能在一定時期內起作用，例如在無保護性交72小時到35天這段時間，由于黃體未充分發育，米非司酮無黃體上的作用靶點，因此使用后不會產生終止妊娠的效果。在無保護性交72小時到35天這段時間，目前國內外還缺乏有效的終止妊娠的方法。同時，現有的藥物都是口服，即全身給藥方式，藥物吸收后會作用于神經內分泌中樞和外周內分泌腺，現有的多數流產藥物具有比較明顯的副作用，包括惡心、嘔吐、眩暈、疲乏、頭痛、乳房觸痛和下腹部疼痛等。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種流產藥物，旨在解決上述問題。

本發明解決其技術問題是采用以下技術方案來實現的。

本發明提出一種流產藥物，其包括蕓豆植物凝集素，蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為40-60mg/ml。

本發明提出一種流產藥物，其包括蕓豆植物凝集素、低聚糖、nacl以及ph緩沖液，蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為40-60mg/ml，低聚糖在流產藥物中的濃度為40-50mg/ml，以及nacl在流產藥物中的濃度為6-9mg/ml。

本發明實施例提供的流產藥物的有益效果是：

經發明人研究發現，蕓豆植物凝集素(yunnankidneybeanlectin，kblorphytohemagglutinin，pha)的糖結合位點有半乳糖，甘露糖和乙酰氨基葡萄糖。而半乳糖對胚胎的植入有非常重要的關系。胚胎表面和子宮內膜表面存在大量半乳糖基，如果封閉了半乳糖基，就會干擾胚胎的著床。因此蕓豆pha可利用其與半乳糖結合的特點用于終止胚胎著床，在終止10-60天的妊娠方面，尤其是在蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為40-60mg/ml時，該流產效果明顯，且對人體無毒副作用。該階段蕓豆植物凝集素可通過如下途徑發揮作用：1.作用于子宮內膜的、腺上皮及基膜，干擾胚胎著床；2.作用于胚胎滋養層及基膜；3.作用于蛻膜細胞及周圍的細胞外基質；4.在胚胎著床后階段可特異性作用于胎盤的合體滋養層。同時由于蕓豆植物凝集素是一種非免疫原性物質，使用后不會產生免疫抗-原抗體反應，不會產生免疫記憶作用，對人體無副作用。同時低聚糖、nacl以及ph緩沖液對該藥物具有優化作用，使治療效果更佳。

具體實施方式

為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。

下面對本發明實施例的一種流產藥物進行具體說明。

一種流產藥物，其包括蕓豆植物凝集素，蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為40-60mg/ml，例如蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為40mg/ml、45mg/ml、50mg/ml、55mg/ml或60mg/ml等。

本發明還提供另一種流產藥物，其包括蕓豆植物凝集素、低聚糖、nacl以及ph緩沖液，蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為40-60mg/ml，低聚糖在流產藥物中的濃度為40-50mg/ml，以及nacl在流產藥物中的濃度為6-9mg/ml。

由于受精卵在輸卵管完成受精后就進行早期的胚胎發育，約受精后第6-9天從輸卵管進入子宮。此時子宮內膜增厚，糖基數量增加。胚胎和子宮內膜發生對話，胚胎經過定位、黏附、穿透三個過程完成胚胎植入子宮內膜的過程。在此階段，胚胎與子宮內膜識別的作用依靠胚胎表面的糖基，因此糖基是順利完成胚胎植入的重要物質基礎。若此時胚胎或子宮內膜的任何一方糖基發生問題，胚胎就無法完成植入。胚胎表面和子宮內膜表面存在大量半乳糖基，若封閉半乳糖基，就會干擾胚胎的著床。而蕓豆植物pha的糖結合位點有半乳糖，因此，可利用蕓豆植物凝集素與半乳糖結合的特點作為終止胚胎著床的藥物。同時，蕓豆植物凝集素是一種非免疫原性物質，使用后不會產生免疫抗-原抗體反應，不會產生免疫記憶作用。從而可以重復多次使用，更為健康安全。

本發明中較佳的實施例中，蕓豆植物凝集素可以為紅蕓豆植物凝集素或白蕓豆植物凝集素，在此不做具體限定。

由于蕓豆植物凝集素在作用過程中，可根據蕓豆植物凝集素濃度的高低對靶細胞起到不同的作用，發明人發現，蕓豆植物凝集素在中濃度時可誘導細胞發生凋亡，而高濃度時可引起細胞壞死。因此，在空間維度上，蕓豆植物凝集素可作用于胚胎及胚胎發育的周圍環境；在時間維度上，在非妊娠期，圍著床期和著床后蕓豆植物凝集素都可以特異性地和胚胎、子宮內膜以及滋胚層細胞結合而發揮作用，此為蕓豆植物凝集素終止妊娠的獨特作用的基礎，即作用方式為直接的接觸并發生反應。

因此，優選地，流產藥物的劑型為凝膠劑、膏劑或溶液劑，例如流產藥物的劑型為凝膠劑，或流產藥物的劑型為膏劑，或流產藥物的劑型為溶液劑。并且優選流產藥物的給藥方式為子宮腔內給藥，具體地，采用子宮腔內注射給藥方式。使蕓豆植物凝集素流產作用最佳，同時采用子宮腔內局部給藥方式，給藥方式相對簡便。

具體地，根據時間的不同采用不同的給藥方式，流產效果更佳：

無保護或意外性交后1-9天，可采用仰臥位，對外陰進行簡單的消毒處理，用擴陰器擴開陰道，暴露子宮頸口，再用給藥管經宮頸口插入子宮腔，給藥管例如可以為9cm長，外徑為0.2cm的一次性塑料直腸給藥管。無保護或意外性交后1-9天，可注射本發明較佳實施例提供的流產藥物3-4ml用于流產。

無保護或意外性交后10-60天，可采用仰臥位或肘膝位，對外陰進行簡單的消毒處理，用擴陰器擴開陰道，暴露子宮頸口。再用給藥管經宮頸口插入子宮腔，給藥管例如可以為9cm長，外徑為0.2cm的一次性塑料直腸給藥管。無保護或意外性交后10-60天，可注射本發明較佳實施例提供的流產藥物4-6ml用于流產。

由于蕓豆植物凝集素為大分子糖蛋白，其分子量約為32kd，因此采用子宮腔內局部給藥方式后不會對神經內分泌軸的高級部分下丘腦及垂體內分泌激素產生影響。

由于給藥方式為子宮腔內給藥，因此優選地，低聚糖在流產藥物中濃度為20-50mg/ml，例如低聚糖在流產藥物中濃度為20mg/ml、23mg/ml、25mg/ml、28mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、37mg/ml、40mg/ml、45mg/ml或50mg/ml等。同時蕓豆植物凝集素具有增加婦女陰道內乳酸桿菌數量的作用，而低聚糖的添加可以有效促進陰道有益菌生長，降低給藥過程中陰道受到感染的幾率。另外，低聚糖對蛋白質也有一定的保護作用；一定濃度的低聚糖還可促進細胞的生長。因此，在配方中含有低聚糖是對人體有益無害。

低聚糖可以為異麥芽低聚糖、低聚果糖、水蘇糖或棉籽糖等等。由于在凝集素的提取液中存在天然的水蘇糖或棉籽糖，因此不需要額外添加，因此本發明較佳的實施例中，低聚糖可為水蘇糖或棉籽糖中的至少一種，例如低聚糖可以為水蘇糖或棉籽糖，還可以為水蘇糖和棉籽糖中的至少一種。

進一步地，由于，給藥方式為子宮給藥，為了避免給藥過程中藥物從陰道流出，優選流產藥物的劑型為凝膠劑，即優選流產藥物還包括增稠劑，一方面由于子宮內給藥方式，需要流產藥物具有一定的流動性，另一方面為了增大特異性與胚胎，子宮內膜和滋胚層細胞結合的幾率，優選地，增稠劑在流產藥物中的濃度為4-20mg/ml，例如增稠劑在流產藥物中的濃度為4mg/ml、6mg/ml、10mg/ml、12mg/ml、15mg/ml、17mg/ml或20mg/ml。

增稠劑的種類很多，例如白芨膠等，在此不一一例舉，本發明較佳的實施例中，增稠劑選自銀耳多糖或羧甲基纖維素鈉中的至少一種。其中，銀耳多糖是擔子菌多糖類免疫增強劑，具有改善機體免疫功能及升高白細胞的作用。

進一步地，為了避免給藥過程中，孕婦感到疼痛不適，優選流產藥物還包括麻醉劑，但由于麻醉劑濃度過高，易引發副作用，濃度過低，效果不佳，因此優選麻醉劑在流產藥物中的濃度為0.2-0.8mg/ml，例如，麻醉劑在流產藥物中的濃度為0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml或0.8mg/ml等，麻醉效果佳。

麻醉劑例如可以為利多卡因，例如利多卡因peg10000。

進一步地，為了保證給藥過程中，保證子宮內細胞的正常生理活動，流產藥物中nacl的濃度為6-9mg/ml，例如，nacl在流產藥物中的濃度為6mg/ml、7mg/ml、7.5mg/ml、8mg/ml或9mg/ml等，保證細胞的正常滲透壓。

進一步地，流產藥物中的ph緩沖劑為磷酸-磷酸緩沖液、磷酸鈉緩沖液或磷酸鉀緩沖液等，用于調節子宮內部環境的ph，防止子宮內部環境變化引發的感染。其中，ph緩沖劑還可以自行配置，例如ph＝5.8的磷酸-磷酸緩沖液(1)稱取nah2po4·2h2o31.2g(或nah2po4·h2o27.6g)，加入1000ml重蒸水溶解，配置0.2mol/l的nah2po4；(2)稱取na2hpo4.12h2o71.632g(或na2hpo4·7h2o53.6g或na2hpo4·2h2o35.6g)，加入1000ml重蒸水至溶解，制得0.2mol/l的na2hpo4；(3)取92.0ml的nah2po4與8.0mlna2hpo4混合即可。

本發明提供的流產藥物，其還可以包括醫學上可接受劑量的載體，載體也為醫學上可接受的載體，例如水、酒精、防腐劑等，其中防腐劑可以有效提高流產藥物的保質期。

需要說明的是，本發明中蕓豆植物凝集素的提取純化和活性測定采用公開號為cn101508730a的中國專利文件所公開的技術進行，蛋白質含量采用通用的雙縮脲法進行測定。需特別注意的是，本發明中所需的蕓豆植物凝集素的凝集活性≧128u/mg。

以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。

實施例1

一種流產藥物，包括蕓豆植物凝集素、低聚糖、nacl和ph緩沖劑。其中，蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為45mg/ml，低聚糖在流產藥物中濃度為30mg/ml，nacl在流產藥物中的濃度為8mg/ml。

實施例2

一種流產藥物，包括蕓豆植物凝集素、低聚糖、nacl和ph緩沖劑。其中，蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為40mg/ml，低聚糖在流產藥物中濃度為45mg/ml，nacl在流產藥物中的濃度為9mg/ml。

實施例3

一種流產藥物，包括蕓豆植物凝集素、低聚糖、nacl、麻醉劑和ph緩沖劑。其中，蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為60mg/ml，低聚糖在流產藥物中濃度為28mg/ml，nacl在流產藥物中的濃度為8mg/ml，麻醉劑在流產藥物中的濃度為0.7mg/ml，麻醉劑為利多卡因peg10000。

實施例4

一種流產藥物，包括蕓豆植物凝集素、低聚糖、增稠劑、nacl和ph緩沖劑。其中，蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為45mg/ml，低聚糖在流產藥物中濃度為35mg/ml，nacl在流產藥物中的濃度為8mg/ml，增稠劑在流產藥物中的濃度為15mg/ml，增稠劑為羧甲基纖維素鈉。

實施例5

一種流產藥物，包括蕓豆植物凝集素、低聚糖、增稠劑、麻醉劑、nacl和ph緩沖劑。其中，蕓豆植物凝集素在流產藥物中的濃度為40mg/ml，低聚糖在流產藥物中濃度為30mg/ml，nacl在流產藥物中的濃度為7mg/ml，增稠劑在流產藥物中的濃度為10mg/ml，增稠劑為羧甲基纖維素鈉。麻醉劑在流產藥物中的濃度為0.3mg/ml，麻醉劑為利多卡因peg10000。

試驗例

(1)動物試驗

①蕓豆植物凝集素的急性毒性試驗

取18-22g昆明白小鼠80只，雌雄各半，雌雄分別測定腹腔注射紅蕓豆pha的半數致死量(ld50)。各設5個紅蕓豆pha劑量組，每組8只，按0.4ml/只給藥。單次腹腔注射，觀察7d，結果表明：雌雄不同性別小鼠的對pha的耐受性不同。雌鼠ld50為725.07mg/kg，ld50的95％的可信區間為(639.65-827.14)mg/kg，ld0為440mg/kg，ld100為1074mg/kg；雄鼠ld50為535.45mg/kg，ld50的95％的可信區間為(480.96-598.81)mg/kg，ld0為350mg/kg，ld100為783.64mg/kg。剖檢部分死亡小鼠無異樣，存活小鼠體重、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等均未見明顯異常。

②蕓豆pha子宮給藥對小鼠的影響

本實驗考察高濃度蕓豆pha對小鼠的影響。準備48只未孕雌鼠，隨機分為6個組，每組8只。(1)50mg組：每只小鼠進行單側子宮注射50mg/0.5ml蕓豆pha；(2)20mg組：每只小鼠進行單側子宮注射20mg/0.2ml蕓豆pha；(3)10mg組：每只小鼠進行單側子宮注射10mg/0.1ml蕓豆pha；(4)5mg組：每只小鼠進行單側子宮注射5mg/0.05ml蕓豆pha；(5)生理鹽水組：每只小鼠進行單側子宮注射0.5ml生理鹽水；以上各組實驗的小鼠，手術后觀察各組小鼠的死亡情況。結果見表1。

表1子宮注射不同濃度蕓豆pha的小鼠的死亡率

由表1可以看出，單側子宮注射5、10mg蕓豆pha和生理鹽水，小鼠的死亡率都為0，單側子宮注射20mg蕓豆pha的小鼠死亡率也僅為12.5％，而單側子宮注射50mg蕓豆pha的小鼠死亡率為37.5％。這表明單側子宮注射≤10mg的蕓豆pha，不會引起小鼠死亡。

③不同濃度的蕓豆pha對小鼠胚胎發育的影響

取6-10周齡雌鼠經皮下注射7.5-10iu的孕馬血清促性腺激素(pmsg)，間隔48h后腹腔注射同樣劑量的人絨毛膜促性腺激素(hcg)，注射hcg后與雄鼠合籠，次日上午檢查陰栓，有栓者為見栓第1d。在見栓的第2d取2-細胞胚胎，平均分為相應的10組，然后將胚胎分別移入培養液小滴中，置于37℃，5％co2，95％空氣，飽和濕度的co2培養箱中培養72-96h，每24h取出觀察一次，96h后記錄每組的發育情況。重復實驗5次。結果如表2所示：

表2不同濃度的蕓豆pha對小鼠2-細胞胚胎體外培養的影響(72h)

注:同一列中實驗組與對照組比較，a:b，p<0.05；a:c，p<0.01；孵化囊胚(％)＝孵化囊胚數/囊胚數。

從表2可以看出，純化50μg/ml組中的胚胎形成囊胚的比率(86.0％)最高，純化50μg/ml和粗提200μg/ml組的胚胎發育到囊胚的比率與對照組相比有顯著差異(p<0.05)，都明顯高于對照組。純化100μg/ml、粗提100μg/ml組的胚胎發育到囊胚的比率都比對照組高，但是差異不顯著。并且純化50、100μg/ml和粗提100、200μg/ml組中胚胎形成孵化囊胚的比率均顯著高于對照組(p<0.05)。而含1000μg/ml蕓豆pha的試驗組中，只有極少數的胚胎能發育到桑葚胚，絕大多數胚胎都停滯在2-細胞和4-細胞時期了，在含2000和5000μg/ml蕓豆pha的試驗組，胚胎基本完全停滯或在2-細胞時期退化。在含5000μg/ml粗提蕓豆pha培養液中，細胞膜破裂并死亡；在含1000μg/ml粗提蕓豆pha培養液中的2-細胞胚胎，發育停滯在2-細胞期，細胞質膨脹，并出現空泡化。

④反復采用蕓豆pha流產對小鼠隨后胚胎發育的影響

取雌性昆明小白鼠，做超排處理后合籠，見栓小鼠為實驗組，在其合籠見栓后第14天，手術法從單側子宮角注入0.05ml(5mg)的蕓豆植物凝集素終止妊娠。然后讓流產的小鼠休息恢復10天，然后以同樣的方法讓小鼠第二次流產。兩次流產之后，小鼠休息恢復十天，再次合籠，使其受孕，并觀察其再次受生產的子代。本實驗組按時成功完成連續兩次受孕、流產、再受孕的雌鼠共7只。同時，取7只與實驗組相同周齡的，未做過實驗的雌鼠作為對照組，同時期合籠使其受孕，并生產子代。連續觀察記錄8周(即子代性成熟)子代的情況，包括子代的數量，性別比例，體重變化、身長尾長的變化、耳郭分離時間、門齒萌出時間、雙眼睜開時間等。實驗結果表明：與對照組比較，重復流產不影響小鼠再次妊娠，但是小鼠的平均產仔數稍許降低，幼崽生長速度稍快于對照組，其他各項指標均無明顯差異。

⑤對終止小鼠早中期妊娠的作用

取6-10周齡雌鼠經皮下注射7.5-10iu的pmsg，間隔48h后腹腔注射同樣劑量的hcg，注射hcg后與雄鼠合籠，次日上午檢查陰栓，見栓當天為妊娠第1d，見栓第二天為妊娠第2d，以此類推。80只隨機準備的妊娠雌鼠分為：(1)妊娠第1d組；(2)妊娠第3d組；(3)妊娠第5d組；(4)妊娠第7d組；(5)妊娠第8d組；(6)妊娠第9d組；(7)妊娠第10d組；(8)妊娠第11d組。以上處理方式中，第(1)和(2)組屬于著床前期；第(3)組屬于著床期；第(4)，(5)，(6)組屬于妊娠早期；第(7)和(8)組屬于妊娠中期。小鼠麻醉后俯臥固定，于背部靠后皮膚中線開一縱口，再于兩側子宮上方背部切開肌肉，一側子宮牽出后于離子宮頸分叉最近的位置進行結扎，結扎時避開血管只結扎子宮體。另一側子宮牽出后于子宮角(靠近輸卵管端)進行子宮注射，注射時緩慢注入。每組5只蕓豆pha處理小鼠：一側子宮結扎，另一側子宮注射0.1ml(10mg)的pha；另外5只小鼠一側子宮結扎，另一側子宮注射0.1ml生理鹽水，為對照組。

以上每組小鼠，到妊娠第20d時進行剖腹產，觀察比較兩側子宮的形態，分別記錄兩側子宮的正常胎兒及死胎數。

實驗結果用卡方檢驗及方差分析進行統計學處理。實驗組結果見表3。

表3不同妊娠期單側子宮注射蕓豆pha對小鼠胚胎發育的影響

注：同一列中a:b，p<0.05；b:c，p<0.05；a:c，p<0.01。

由表3可以看出，小鼠從妊娠第1-11d，注射蕓豆pha的一側子宮產仔數和產仔率均為0。經方差分析(p＝0.01<0.05)表明子宮結扎組、子宮注射蕓豆pha組及注射生理鹽水組的小鼠產仔率之間存在顯著差異。而結扎組及注射生理鹽水組均有懷孕及產仔的情況。實驗結果表明，在小鼠的不同妊娠期(1-11d)，進行子宮注射蕓豆pha可產生100％的妊娠終止作用。而對照組子宮注射生理鹽水組的小鼠隨著妊娠期的增長，產仔率增加。

(2)臨床試驗

試驗對象：趙某某，女，24歲，無生產經歷。

末次月經為2015年2月17日，出現早孕反應后于4月3日在昆明市圣愛中醫館進行了第一次下腹部b超檢查。結果顯示：后位子宮，大小約8.4*6.2*5.1cm，子宮內探及一大小約為1.4*1.0孕囊。其內可見卵黃囊及胎芽組織，胎芽長約0.6cm，可見原始心管搏動。雙側附件區未見明顯異常回聲。根據上述事實及檢測結果推測妊娠天數為55-60天。2015年4月8日上午對試驗者進行常規外陰及陰道消毒，然后采取仰臥體位臥床，擴陰器擴張陰道，宮頸鉗固定子宮頸口側邊，采用9cm長，外徑為0.2cm的一次性塑料直腸給藥管經宮頸口插入子宮腔，緩慢推入4ml總劑量為20mg的rkbl生理鹽水，給藥時間是9:40。注射后即退出給藥管。試驗者臥床休息。注射后43min，試驗者感覺下腹部墜痛后服用布洛芬緩釋膠囊1粒，12:30腹痛消失，但還有墜脹感。測量血壓為95/70mmhg，體溫正常。2015年4月10日上午9:50陰道給予米索前列醇片3片計60mg。12：45分孕囊排出，之前出血約10ml。孕囊大小為：4.5*4.0*1.2cm，并可見一小胎體。23:00再次肌肉注射同上劑量的止血敏及縮宮素。體溫血壓正常。出血量觀察：從4月10日有出血跡象到17日，一共出血8天，總共出血量為130-145ml。次月月經推遲到40天后來臨，隨后恢復正常。

綜上，本發明較佳的實施例提供的一種流產藥物，其可終止1-60天內妊娠，解決目前早期意外妊娠無任何方法全過程有效可用的問題，尤其覆蓋現有藥物和手術方法對4-35天妊娠終止的一個無為期或無效期。同時可縮短現有藥物或手術處理后的恢復時間，對女性的傷害小。且不會產生相應的抗體，即不會影響該藥物的再次使用；其次不會影響生殖內分泌中樞。最后給藥方式為局部給藥，相對簡便。

以上所描述的實施例是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。本發明的實施例的詳細描述并非旨在限制要求保護的本發明的范圍，而是僅僅表示本發明的選定實施例?；诒景l明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。